抗hpvl2蛋白的廣譜中和單克隆抗體或其抗原結合片段及它們的用途【專利摘要】本發(fā)明涉及能夠結合人乳頭瘤病毒(HPV)的L2蛋白并能夠中和多個型別的HPV的廣譜中和單克隆抗體及其抗原結合片段，以及編碼它們的序列，產生它們的細胞株，和應用它們進行診斷、預防或治療的方法和用途。本發(fā)明還涉及所述廣譜中和單克隆抗體所針對的表位肽，包含此類表位肽的載體蛋白，以及此類表位肽和載體蛋白的用途。【專利說明】抗HPVL2蛋白的廣譜中和單克隆抗體或其抗原結合片段及它們的用途【
技術領域：
】[0001]本發(fā)明涉及分子病毒學和免疫學領域。具體而言，本發(fā)明涉及能夠結合人乳頭瘤病毒(HPV)的L2蛋白并能夠中和多個型別的HPV的廣譜中和單克隆抗體及其抗原結合片段，以及編碼它們的序列，產生它們的細胞株，和應用它們進行診斷、預防或治療的方法和用途。本發(fā)明還涉及所述廣譜中和單克隆抗體所針對的表位肽，包含此類表位肽的載體蛋白，以及此類表位肽和載體蛋白的用途?！?br>背景技術：
】[0002]人乳頭瘤病毒(HPV)是一種無包膜病毒，它由病毒衣殼以及包裹在衣殼內的約8kbDNA構成。HPV的病毒衣殼是由主要衣殼蛋白LI和次要衣殼蛋白L2組成的直徑為50-55nm的正二十面體顆粒。目前已經發(fā)現(xiàn)了100多種型別的HPV，其中，根據(jù)其與腫瘤發(fā)生的關系可以分為兩類:低危型HPV—一包括HPV6和HPV11，其致癌風險低，主要引起尖銳濕疣；高危型HPV—一包括HPV16、18、31、33、35、39、45、52、58、59等，其是導致包括女性宮頸癌在內的多種腫瘤疾病的主要原因(CliffordGM,SmithJS,PlummerM,etal.BrJCancer,2003,88(1):63_73)?，F(xiàn)有的研究結果表明，可以通過預防HPV感染來預防宮頸癌等疾病的發(fā)生。[0003]HPV的疫苗研究發(fā)現(xiàn)，體外表達的HPVLI蛋白能自組裝成病毒樣顆粒(VLP)，其結構與天然HPV高度相似，保留了天然病毒的絕大多數(shù)中和表位，可誘導高滴度的中和抗體。因此，現(xiàn)有的以及正在研發(fā)的HPV疫苗多以病毒樣顆粒為主要疫苗成分。然而，研究發(fā)現(xiàn)，HPVVLP主要誘導針對同型HPV的中和抗體，產生針對同型HPV的保護性免疫，而僅在一些同源性高的型別之間存在交叉保護(GiroglouT,SappM，F(xiàn)liggeC，etal.Vaccine.2001;19(13-14):1783-93；OrozcoJJ,CarterJJ,KoutskyLA.JVirol[J].2005;79(15):9503-14;FleuryMJ,TouzeA,MaurelMC,etal.ProteinSc1.2009.18(7):1425-1438)。[0004]目前，擴大疫苗的保護范圍的主要方法是增加疫苗的價數(shù)，開發(fā)多價疫苗。然而，隨著疫苗價數(shù)的增加，不但加大了制備的難度，從而使疫苗的成本急劇增加，而且給疫苗的安全性帶來極大的挑戰(zhàn)。此外，多價疫苗之間可能存在著相互間的免疫干擾，使得各價疫苗難以充分發(fā)揮其誘導免疫的功能。因此，還需要研究一種制備方法簡單，成本低并且能夠產生針對多個型別的保護的HPV疫苗。[0005]在疫苗研究中，單克隆抗體是疫苗抗原質控的重要工具，抗體水平是評價疫苗效果的標準，而且，抗體及其表位(尤其是中和抗體對應的中和表位)以及相應的中和機制也是疫苗研發(fā)的重要指針。進一步，在應用研究中，中和抗體，特別是廣譜中和抗體，在HPV的診斷，預防和治療上也將具有特別的優(yōu)勢。然而，現(xiàn)有研究表明，HPVLI蛋白所誘導的抗體大多為型別特異性中和抗體，極少有跨型別的廣譜中和抗體的報道。最近的研究發(fā)現(xiàn)，HPVL2蛋白上存在大量的廣譜表位，能夠誘導機體產生跨型別的交叉保護抗體。因此，本領域需要更多的針對L2蛋白的廣譜中和抗體，以對L2蛋白上的表位進行檢測與評價(從而鑒定有價值的廣譜表位)，并將該抗體及其對應的表位應用于HPV的診斷，預防和治療中。【
發(fā)明內容】[0006]本發(fā)明提供了能夠結合人乳頭瘤病毒(HPV)的L2蛋白并能夠中和多個型別的HPV的廣譜中和單克隆抗體及其抗原結合片段，以及編碼它們的序列，產生它們的細胞株，和應用它們進行診斷、預防或治療的方法和用途。本發(fā)明還涉及所述廣譜中和單克隆抗體所針對的表位肽，包含此類表位肽的載體蛋白，以及此類表位肽和載體蛋白的用途。[0007]在本發(fā)明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術名詞具有本領域技術人員所通常理解的含義。并且，本文中所用的細胞培養(yǎng)、分子遺傳學、核酸化學、免疫學實驗室操作步驟均為相應領域內廣泛使用的常規(guī)步驟。同時，為了更好地理解本發(fā)明，下面提供相關術語的定義和解釋。[0008]如本文中所使用的，術語“HPVL2蛋白”是指，人乳頭瘤病毒(HPV)的次要衣殼蛋白(L2蛋白)，其是本領域公知的。在本申請中，當提及HPV的L2蛋白時，其主要涉及選自以下11種型別的HPV的L2蛋白:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。然而，本領域技術人員理解，術語“HPVL2蛋白”還可以包括其他型別的HPV的L2蛋白。[0009]在本申請中，為了方便起見，當描述HPVL2蛋白的氨基酸序列時，除非上下文特別指出，否則，參照HPV16L2蛋白的氨基酸序列進行描述。例如，表述“HPVL2蛋白的第21-30位氨基酸殘基”是指，HPV16L2蛋白的第21-30位氨基酸殘基。然而，如本文中所使用的，術語“HPVL2蛋白”意欲包括所有型別的HPV(特別是上述11種型別)的L2蛋白。因此，表述“HPVL2蛋白的第21-30位氨基酸殘基”不僅包括HPV16L2蛋白的第21-30位氨基酸殘基，而且包括其他型別的HPVL2蛋白中的相應序列片段。[0010]如本文中所使用的，當提及HPV16L2蛋白的氨基酸序列時，其使用NCBI數(shù)據(jù)登錄號:AAD33258.1所示的序列來進行描述。例如，表述“HPV16L2蛋白的第21-30位氨基酸殘基”中的第21-30位氨基酸殘基是指，AAD33258.1所對應的多肽的第21-30位氨基酸殘基。然而，本領域技術人員理解，在HPV16L2蛋白的氨基酸序列中，可天然產生或人工引入突變或變異(包括但不限于置換，缺失和/或添加)，而不影響其生物學功能。因此，在本發(fā)明中，術語“HPV16L2蛋白”應包括所有此類序列，包括例如AAD33258.1所示的序列以及其天然或人工的變體。并且，當描述HPV16L2蛋白的序列片段時，其不僅包括AAD33258.1的序列片段，還包括其天然或人工變體中的相應序列片段。例如，表述“HPV16L2蛋白的第21-30位氨基酸殘基”包括，AAD33258.1的第21-30位氨基酸殘基，以及其變體(天然或人工)中的相應片段。根據(jù)本發(fā)明，表述“相應序列片段”或“相應片段”是指，當對序列進行最優(yōu)比對時，即當序列進行比對以獲得最高百分數(shù)同一性時，進行比較的序列中位于等同位置的片段。[0011]如本文中所使用的，術語“HPV16C50L2蛋白”是指，缺失了C端50個氨基酸殘基的HPV16L2蛋白。[0012]如本文中所使用的，術語“HPVLI蛋白”是指，人乳頭瘤病毒(HPV)的LI蛋白，其是本領域公知的(參見，例如NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫序列號:DQ469930.1)。在本申請中，當提及HPV的LI蛋白或VLP時，其主要涉及選自以下11種型別的HPV的LI蛋白或VLP:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。然而，本領域技術人員理解，術語“HPVLI蛋白”還可以包括其他型別的HPV的LI蛋白。[0013]在本申請中，為了方便起見，當描述HPVLI蛋白的氨基酸序列時，除非上下文特別指出，否則，參照HPV16LI蛋白的氨基酸序列進行描述。例如，表述“HPVLI蛋白的第127-128位氨基酸殘基”是指，HPV16L1蛋白的第127-128位氨基酸殘基。然而，如本文中所使用的，術語“HPVLI蛋白”意欲包括所有型別的HPV(特別是上述11種型別)的LI蛋白。因此，表述“HPVLI蛋白的第127-128位氨基酸殘基”不僅包括HPV16L1蛋白的第127-128位氨基酸殘基，而且包括其他型別的HPVLI蛋白中的相應序列片段。[0014]如本文中所使用的，當提及HPV16LI蛋白的氨基酸序列時，參照SEQIDNO:55的氨基酸序列來進行描述。例如，表述“HPV16LI蛋白的第127-128位氨基酸殘基”是指，SEQIDN0:55所示氨基酸序列的第127-128位氨基酸殘基。然而，本領域技術人員理解，在HPV16LI蛋白的氨基酸序列中，可天然產生或人工引入突變或變異(包括但不限于，置換，缺失和/或添加)，而不影響其生物學功能。因此，在本發(fā)明中，術語“HPV16LI蛋白”應包括所有此類序列，包括例如SEQIDNO:55所示的序列以及其天然或人工的變體。并且，當描述HPV16LI蛋白的序列片段時，其不僅包括SEQIDNO:55的序列片段，還包括SEQIDNO:55的天然或人工變體中的相應序列片段。例如，表述“HPV16LI蛋白的第127-128位氨基酸殘基”包括，SEQIDN0:55的第127-128位氨基酸殘基，以及其變體(天然或人工)中的相應片段。根據(jù)本發(fā)明，表述“相應序列片段”或“相應片段”是指，當對序列進行最優(yōu)比對時，即當序列進行比對以獲得最高百分數(shù)同一性時，進行比較的序列中位于等同位置的片段。[0015]如本文中所使用的，術語“HBcore蛋白”是指，乙型肝炎病毒(HBV)的核心抗原蛋白，其是本領域公知的(參見，例如NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫序列號:AAF82721.1)。[0016]如本文中所使用的，當提及HBcore蛋白的氨基酸序列時，其使用NCBI數(shù)據(jù)登錄號:AAF82721.1所示的序列來進行描述。例如，表述“HBcore的第79-81位氨基酸殘基”是指，AAF82721.1所對應的多肽的第79-81位氨基酸殘基。然而，本領域技術人員理解，在HBcore的氨基酸序列中，可天然產生或人工引入突變或變異(包括但不限于，置換，缺失和/或添加)，而不影響其生物學功能。因此，在本發(fā)明中，術語“HBcore”應包括所有此類序列，包括例如AAF82721.1所對應的序列以及其天然或人工的變體。并且，當描述HBcore的序列片段時，其不僅包括AAF82721.1的序列片段，還包括其天然或人工變體中的相應序列片段。例如，表述“HBcore蛋白的第79-81位氨基酸殘基”包括，AAF82721.1的第79-81位氨基酸殘基，以及其變體(天然或人工)中的相應片段。根據(jù)本發(fā)明，表述“相應序列片段”或“相應片段”是指，當對序列進行最優(yōu)比對時，即當序列進行比對以獲得最高百分數(shù)同一性時，進行比較的序列中位于等同位置的片段。[0017]如本文中所使用的，術語“抗體”是指，是指通常由兩對多肽鏈(每對具有一條“輕”(L)鏈和一條“重”(H)鏈)組成的免疫球蛋白分子?？贵w輕鏈可分類為K和λ輕鏈。重鏈可分類為μ、δ、Y、α或ε,并且分別將抗體的同種型定義為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內，可變區(qū)和恒定區(qū)通過大約12或更多個氨基酸的“J”區(qū)連接，重鏈還包含大約3個或更多個氨基酸的“D”區(qū)。各重鏈由重鏈可變區(qū)(Vh)和重鏈恒定區(qū)(Ch)組成。重鏈恒定區(qū)由3個結構域((^、(^和^^)組成。各輕鏈由輕鏈可變區(qū)(VJ和輕鏈恒定區(qū)(Cl)組成。輕鏈恒定區(qū)由一個結構域Q組成?？贵w的恒定區(qū)可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子，包括免疫系統(tǒng)的各種細胞(例如，效應細胞)和經典補體系統(tǒng)的第一組分(Clq)的結合。Vh和'區(qū)還可被細分為具有高變性的區(qū)域(稱為互補決定區(qū)(CDR))，其間散布有較保守的稱為構架區(qū)(FR)的區(qū)域。各Vl由按下列順序:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4從氨基末端至羧基末端排列的3個⑶R和4個FR組成。各重鏈/輕鏈對的可變區(qū)(Vh和Vl)分別形成抗體結合部位。氨基酸至各區(qū)域或結構域的分配遵循KabatSequencesofProteinsofImmunologicalInterest(NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1987and1991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917;Chothia等人(1989)Nature342:878-883的定義。術語“抗體”不受任何特定的產生抗體的方法限制。例如，其包括，特別地，重組抗體、單克隆抗體和多克隆抗體?？贵w可以是不同同種型的抗體，例如，IgG(例如，IgGl,IgG2，IgG3或IgG4亞型)，IgAl,IgA2，IgD,IgE或IgM抗體。[0018]如本文中所使用的，術語抗體的“抗原結合片段”是指包含全長抗體的片段的多肽，其保持特異性結合全長抗體所結合的相同抗原的能力，和/或與全長抗體競爭對抗原的特異性結合，其也被稱為“抗原結合部分”。通常參見，F(xiàn)undamentalImmunology,Ch.7(Paul,ff.,ed.,第2版，RavenPress,N.Y.(1989),其以其全文通過引用合并入本文，用于所有目的?？赏ㄟ^重組DNA技術或通過完整抗體的酶促或化學斷裂產生抗體的抗原結合片段。在一些情況下，抗原結合片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb和互補決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(例如，scFv)、嵌合抗體、雙抗體(diabody)和這樣的多肽，其包含足以賦予多肽特異性抗原結合能力的抗體的至少一部分。[0019]如本文中所使用的，術語“Fd片段”意指由VdPChI結構域組成的抗體片段；術語“Fv片段”意指由抗體的單臂的\和Vh結構域組成的抗體片段；術語“dAb片段”意指由Vh結構域組成的抗體片段(Ward等人，Nature341:544-546(1989));術語“Fab片段”意指由\、VH、(^和ChI結構域組成的抗體片段；術語“F(ab’)2片段”意指包含通過鉸鏈區(qū)上的二硫橋連接的兩個Fab片段的抗體片段。[0020]在一些情況下，抗體的抗原結合片段是單鏈抗體(例如，scFv)，其中\(zhòng)和Vh結構域通過使其能夠產生為單個多肽鏈的連接體配對形成單價分子(參見，例如,Bird等人,Science242:423-426(1988)和Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883(1988))。此類scFv分子可具有一般結構=NH2-Vf接頭-Vh-COOH或NH2-Vh-接頭-'-C00H。合適的現(xiàn)有技術接頭由重復的GGGGS氨基酸序列或其變體組成。例如，可使用具有氨基酸序列(GGGGS)4的接頭，但也可使用其變體(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448)。可用于本發(fā)明的其他接頭由Alfthan等人(1995)，ProteinEng.8:725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.1mmunol.31:94-106，Hu等人(1996)，CancerRes.56:3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001),CancerTmmunol.描述。[0021]在一些情況下，抗體的抗原結合片段是雙抗體，即，雙價抗體，其中V1^P\結構域在單個多肽鏈上表達，但使用太短的連接體以致不允許在相同鏈的兩個結構域之間配對，從而迫使結構域與另一條鏈的互補結構域配對并且產生兩個抗原結合部位(參見，例如，HolligerP.等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448(1993),和PoljakR.J.等人，Structure2:1121-1123(1994))。[0022]可使用本領域技術人員已知的常規(guī)技術(例如，重組DNA技術或酶促或化學斷裂法)從給定的抗體(例如本發(fā)明提供的單克隆抗體14H6)獲得抗體的抗原結合片段(例如，上述抗體片段)，并且以與用于完整抗體的方式相同的方式就特異性篩選抗體的抗原結合片段。[0023]在本文中，除非上下文明確指出，否則當提及術語“抗體”時，其不僅包括完整抗體，而且包括抗體的抗原結合片段。[0024]如本文中所使用的，術語“單抗”和“單克隆抗體”是指，來自一群高度同源的抗體分子中的一個抗體或抗體的一個片斷，也即除可能自發(fā)出現(xiàn)的自然突變外，一群完全相同的抗體分子。單抗對抗原上的單一表位具有高特異性。多克隆抗體是相對于單克隆抗體而言的，其通常包含至少2種或更多種的不同抗體，這些不同的抗體通常識別抗原上的不同表位。單克隆抗體通常可采用Kohler等首次報道的雜交瘤技術獲得(Nature,256:495,1975)，但也可采用重組DNA技術獲得(如參見U.S.P4，816，567)。[0025]如本文中所使用的，以編號提及的單克隆抗體與從相同編號的雜交瘤獲得的單克隆抗體相同。例如，單克隆抗體14H6是與從雜交瘤細胞株14H6或其亞克隆或后代細胞獲得的抗體相同的抗體。[0026]如本文中所使用的，術語“嵌合抗體”是指這樣的抗體，其輕鏈或/和重鏈的一部分源自一個抗體(其可以源自某一特定物種或屬于某一特定抗體類或亞類)，且輕鏈或/和重鏈的另一部分源自另一個抗體(其可以源自相同或不同的物種或屬于相同或不同的抗體類或亞類)，但無論如何，其仍保留對目標抗原的結合活性(U.S.P4，816，567toCabillyetal.;Morrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,81:68516855(1984))。[0027]如本文中所使用的，術語“人源化抗體”是指，人源免疫球蛋白(受體抗體)的全部或部分CDR區(qū)被一非人源抗體(供體抗體)的CDR區(qū)替換后得到的抗體或抗體片段，其中的供體抗體可以是具有預期特異性、親和性或反應性的非人源(例如，小鼠、大鼠或兔)抗體。此外，受體抗體的構架區(qū)(FR)的一些氨基酸殘基也可被相應的非人源抗體的氨基酸殘基替換，或被其他抗體的氨基酸殘基替換，以進一步完善或優(yōu)化抗體的性能。關于人源化抗體的更多詳細內容，可參見例如，Jonesetal.,Nature,321:522525(1986);Reichmannetal.,Nature,332:323329(1988);Presta,Curr.0p.Struct.Biol.,2:593596(1992);和Clark,Tmmunol.Today21:397402(2000)。[0028]如本文中所使用的，“中和抗體”是指，能清除或顯著降低目標病毒的毒力(例如，感染細胞的能力)的抗體或抗體片段。[0029]如本文中所使用的，術語“表位”是指，抗原上被免疫球蛋白或抗體特異性結合的部位?！氨砦弧痹诒绢I域內也稱為“抗原決定簇”。表位或抗原決定簇通常由分子的化學活性表面基團例如氨基酸或碳水化合物或糖側鏈組成并且通常具有特定的三維結構特征以及特定的電荷特征。例如，表位通常以獨特的空間構象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15個連續(xù)或非連續(xù)的氨基酸，其可以是“線性的”或“構象的”。參見，例如，EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology,第66卷，G.E.Morris,Ed.(1996)。在線性表位中，蛋白質與相互作用分子(例如抗體)之間的所有相互作用的點沿著蛋白質的一級氨基酸序列線性存在。在構象表位中，相互作用的點跨越彼此分開的蛋白質氨基酸殘基而存在。[0030]如本文中所使用的，術語“表位肽”是指，抗原上能夠用作表位的肽段。在一些情況下，單獨的表位肽即能夠被針對所述表位的抗體特異性識別/結合。在另一些情況下，可能需要將表位肽與載體蛋白融合，以便表位肽能夠被特異性抗體識別。如本文中所使用的，術語“載體蛋白”是指這樣的蛋白，其可以充當表位肽的載體，即，其可以在特定位置處插入表位肽，以便該表位肽能夠呈現(xiàn)出來，從而該表位肽能夠被抗體或免疫系統(tǒng)識別。此類載體蛋白是本領域技術人員熟知的，包括例如，HPVLI蛋白(可以將表位肽插入在所述蛋白的第127-128位氨基酸之間或在第423-424位氨基酸之間，參見Slupetzky,K.等ChimericpapiIlomavirus-1ikeparticlesexpressingaforeignepitopeoncapsidsurfaceloops[J].JGenVirol,2001,82:2799-2804；Varsani,A.等Chimerichumanpapillomavirustype16(HPV-16)LIparticlespresentingthecommonneutralizingepitopefortheL2minorcapsidproteinofHPV-6andHPV-16[J].JVirol,2003,77:8386-8393)，HBV核心抗原(可以用表位肽替換所述蛋白的第79-81位氨基酸，參見Koletzki,D.，etal.HBVcoreparticlesallowtheinsertionandsurfaceexposureoftheentirepotentiallyprotectiveregionofPuumalahantavirusnucleocapsidprotein[J].BiolChem,1999，380:325_333)，CRM197蛋白(可以將表位肽連接至該蛋白或其片段的N末端或C末端)。任選地，可以在表位肽與載體蛋白之間使用連接體(例如柔性或剛性連接體)，以促進二者各自的折疊。[0031]在本發(fā)明中，CRM197(Cross-ReactingMaterials197)是指，白喉毒素(DT)的一種無毒突變體(Uchida,T.，K.M,Pappenheimer,Jr.，R.Gregory,etal.,J.Biol.Chem.1973.248:3838-3844)，其與編碼DT的野生型基因相比存在單個核苷酸突變，導致第52位的氨基酸殘基由Gly變?yōu)镚lu(G.Giannini,R.Rappuoli,G.Rattietal.,NucleicAcidsResearch.1984.12:4063-4070)。[0032]可使用本領域技術人`員已知的常規(guī)技術，就與相同表位的結合競爭性篩選抗體。例如，可進行競爭和交叉競爭研究，以獲得彼此競爭或交叉競爭與抗原(例如，HPVL2蛋白)的結合的抗體?；谒鼈兊慕徊娓偁巵慝@得結合相同表位的抗體的高通量方法描述于國際專利申請WO03/48731中。因此，可使用本領域技術人員已知的常規(guī)技術，獲得與本發(fā)明的單克隆抗體(例如，單克隆抗體14H6)競爭結合L2蛋白上的相同表位的抗體及其抗原結合片段(即，抗原結合部分)。[0033]如本文中所使用的，術語“分離的”或“被分離的”指的是，從天然狀態(tài)下經人工手段獲得的。如果自然界中出現(xiàn)某一種“分離”的物質或成分，那么可能是其所處的天然環(huán)境發(fā)生了改變，或從天然環(huán)境下分離出該物質，或二者情況均有發(fā)生。例如，某一活體動物體內天然存在某種未被分離的多聚核苷酸或多肽，而從這種天然狀態(tài)下分離出來的高純度的相同的多聚核苷酸或多肽即稱之為分離的。術語“分離的”或“被分離的”不排除混有人工或合成的物質，也不排除存在不影響物質活性的其它不純物質。[0034]如本文中所使用的，術語“大腸桿菌表達系統(tǒng)”是指由大腸桿菌(菌株)與載體組成的表達系統(tǒng)，其中大腸桿菌(菌株)來源于市場上可得到的菌株，例如但不限于:GI698，ER2566，BL21(DE3)，B834(DE3)，BLR(DE3)。[0035]如本文中所使用的，術語“載體(vector)”是指，可將多聚核苷酸插入其中的一種核酸運載工具。當載體能使插入的多核苷酸編碼的蛋白獲得表達時，載體稱為表達載體。載體可以通過轉化，轉導或者轉染導入宿主細胞，使其攜帶的遺傳物質元件在宿主細胞中獲得表達。載體是本領域技術人員公知的，包括但不限于:質粒；噬菌粒；柯斯質粒；人工染色體，例如酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或Pl來源的人工染色體(PAC);噬菌體如λ噬菌體或Μ13噬菌體及動物病毒等。可用作載體的動物病毒包括但不限于，逆轉錄酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相關病毒、皰疫病毒(如單純皰疫病毒)、痘病毒、桿狀病毒、乳頭瘤病毒、乳頭多瘤空泡病毒(如SV40)。一種載體可以含有多種控制表達的元件，包括但不限于，啟動子序列、轉錄起始序列、增強子序列、選擇元件及報告基因。另外，載體還可含有復制起始位點。[0036]如本文中所使用的，術語“宿主細胞”是指，可用于導入載體的細胞，其包括但不限于，如大腸桿菌或枯草菌等的原核細胞，如酵母細胞或曲霉菌等的真菌細胞，如S2果蠅細胞或Sf9等的昆蟲細胞，或者如纖維原細胞，CHO細胞，COS細胞，NSO細胞，HeLa細胞，BHK細胞，HEK293細胞或人細胞等的動物細胞。[0037]如本文中所使用的，術語“同一性”用于指兩個多肽之間或兩個核酸之間序列的匹配情況。當兩個進行比較的序列中的某個位置都被相同的堿基或氨基酸單體亞單元占據(jù)時(例如，兩個DNA分子的每一個中的某個位置都被腺嘌呤占據(jù)，或兩個多肽的每一個中的某個位置都被賴氨酸占據(jù))，那么各分子在該位置上是同一的。兩個序列之間的“百分數(shù)同一性”是由這兩個序列共有的匹配位置數(shù)目除以進行比較的位置數(shù)目XlOO的函數(shù)。例如,如果兩個序列的10個位置中有6個匹配，那么這兩個序列具有60%的同一性。例如，DNA序列CTGACT和CAGGTT共有50%的同一性(總共6個位置中有3個位置匹配)。通常，在將兩個序列比對以產生最大同一性時進行比較。這樣的比對可通過使用，例如，可通過計算機程序例如Align程序(DNAstar,Inc.)方便地進行的Needleman等人(1970)J.Mol.Biol.48:443-453的方法來實現(xiàn)。還可使用已整合入ALIGN程序(版本2.0)的E.Meyers和ff.Miller(Comput.ApplBiosc1.,4:11-17(1988))的算法，使用PAMl20權重殘基表(weightresiduetable)、12的缺口長度罰分和4的缺口罰分來測定兩個氨基酸序列之間的百分數(shù)同一'I"生。此外，可使用已整合入GCG軟件包(可在www.gcg.com上獲得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(JMoIBiol.48:444-453(1970))算法，使用Blossum62矩陣或PAM250矩陣以及16、14、12、10、8、6或4的缺口權重(gapweight)和1、2、3、4、5或6的長度權重來測定兩個氨基酸序列之間的百分數(shù)同一性。[0038]如本文中使用的，術語“保守置換”意指不會不利地影響或改變包含氨基酸序列的蛋白/多肽的必要特性的氨基酸置換。例如，可通過本領域內已知的標準技術例如定點誘變和PCR介導的誘變引入保守置換。保守氨基酸置換包括用具有相似側鏈的氨基酸殘基替代氨基酸殘基的置換，例如用在物理學上或功能上與相應的氨基酸殘基相似(例如具有相似大小、形狀、電荷、化學性質，包括形成共價鍵或氫鍵的能力等)的殘基進行的置換。已在本領域內定義了具有相似側鏈的氨基酸殘基的家族。這些家族包括具有堿性側鏈(例如，賴氨酸、精氨酸和組氨酸)、酸性側鏈(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電荷的極性側鏈(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非極性側鏈(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支側鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香族側鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。因此，優(yōu)選用來自相同側鏈家族的另一個氨基酸殘基替代相應的氨基酸殘基。鑒定氨基酸保守置換的方法在本領域內是熟知的(參見,例如，Brummell等人，Biochem.32:1180-1187(1993);Kobayashi等人ProteinEng.12(10):879-884(1999);和Burks等人Proc.NatlAcad.SetUSA94:412-417(1997)，其通過引用并入本文)。[0039]如本文中使用的，術語“免疫原性(immunogenicity)”是指,能夠刺激機體形成特異抗體或致敏淋巴細胞的能力。其既指，抗原能刺激特定的免疫細胞，使免疫細胞活化、增殖、分化，最終產生免疫效應物質如抗體和致敏淋巴細胞的特性，也指抗原刺激機體后，機體免疫系統(tǒng)能形成抗體或致敏T淋巴細胞的特異性免疫應答。免疫原性是抗原最重要的性質，一種抗原能否成功地誘導宿主產生免疫應答取決于三方面的因素:抗原的性質、宿主的反應性和免疫方式。[0040]如本文中使用的，術語“特異性結合”是指，兩分子間的非隨機的結合反應，如抗體和其所針對的抗原之間的反應。在某些實施方式中，特異性結合某抗原的抗體(或對某抗原具有特異性的抗體)是指，抗體以小于大約10_5m，例如小于大約10_6M、10_7M、10_8M、10_9M或IO^10M或更小的親和力(Kd)結合該抗原。[0041]如本文中所使用的，術語“KD”是指特定抗體-抗原相互作用的解離平衡常數(shù)，其用于描述抗體與抗原之間的結合親和力。平衡解離常數(shù)越小，抗體-抗原結合越緊密，抗體與抗原之間的親和力越高。通常,抗體(例如,本發(fā)明的單克隆抗體14H6)以小于大約10_5M，例如小于大約10_6M、10_7M、10_8M、10_9M或KTkiM或更小的解離平衡常數(shù)(Kd)結合抗原(例如，L2蛋白)，例如，如使用表面等離子體共振術(SPR)在BIAC0RE儀中測定的。[0042]如本文中所使用的，術語“廣譜”是指，本發(fā)明的單克隆抗體能夠中和多種型別(例如,至少3種，例如至少4種，至少5種，至少6種，至少7種，至少8種，至少9種，至少10種，或11種型別)的HPV。例如，本發(fā)明的單克隆抗體14H6能夠中和下列11種型別的HPV:HPV6、HPVlUHPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。由廣譜(中和)單克隆抗體所識別的L2蛋白的表位被稱為“廣譜(中和)表位”。[0043]如本文中所使用的，術語“單克隆抗體”和“單抗”具有相同的含義且可互換使用；術語“多克隆抗體”和“多抗”具有相同的含義且可互換使用；術語“多肽”和“蛋白質”具有相同的含義且可互換使用。并且在本發(fā)明中，氨基酸通常用本領域公知的單字母和三字母縮寫來表示。例如，丙氨酸可用A或Ala表示。[0044]如本文中所使用的，術語“雜交瘤”和“雜交瘤細胞株”可互換使用，并且當提及術語“雜交瘤”和“雜交瘤細胞株”時，其還包括雜交瘤的亞克隆和后代細胞。例如，當提及雜交瘤細胞株14H6時，其還指雜交瘤細胞株14H6的亞克隆和后代細胞。[0045]如本文中所使用的，術語“藥學上可接受的載體和/或賦形劑”是指在藥理學和/或生理學上與受試者和活性成分相容的載體和/或賦形劑，其是本領域公知的(參見例如Remington’sPharmaceuticalSciences.EditedbyGennaroAR,19thed.Pennsylvania:MackPublishingCompany,1995),并且包括但不限于:pH調節(jié)劑，表面活性劑，佐劑，離子強度增強劑。例如，pH調節(jié)劑包括但不限于磷酸鹽緩沖液；表面活性劑包括但不限于陽離子，陰離子或者非離子型表面活性劑，例如Tween-80;離子強度增強劑包括但不限于氯化鈉。[0046]如本文中所使用的，術語“佐劑”是指非特異性免疫增強劑，當其與抗原一起或預先遞送入機體時，其可增強機體對抗原的免疫應答或改變免疫應答類型。佐劑有很多種，包括但不限于鋁佐劑(例如氫氧化鋁)、弗氏佐劑(例如完全弗氏佐劑和不完全弗氏佐劑)、短小棒狀桿菌、脂多糖、細胞因子等。弗氏佐劑是目前動物試驗中最常用的佐劑。氫氧化鋁佐劑則在臨床實驗中使用較多。[0047]如本文中所使用的，術語“HPVVLP”是指，由體外表達的HPVLI蛋白自組裝形成的病毒樣顆粒。[0048]如本文中所使用的，術語“HPV假病毒”是指，利用HPVVLP可非特異性包裝核酸的特性，通過在細胞內表達HPV的LI和L2蛋白，且包裹細胞內的游離體病毒DNA或外源導入的報告質粒，而形成的HPV假病毒(Yeager,M.D,Aste-Amezaga,M.etal(2000)Virology(278)570一7)。用于形成假病毒的方法包括例如，重組病毒表達系統(tǒng)法及多質粒共轉染方法。本發(fā)明中所指的HPV假病毒主要包括11個型別的HPV假病毒，分別是HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58、HPV59假病毒。[0049]如本文中所使用的，術語“有效量”是指足以獲得或至少部分獲得期望的效果的量。例如，預防疾病(例如HPV感染或與HPV感染相關的疾病)有效量是指，足以預防，阻止，或延遲疾病(例如HPV感染或與HPV感染相關的疾病)的發(fā)生的量；治療疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并發(fā)癥的量。測定這樣的有效量完全在本領域技術人員的能力范圍之內。例如，對于治療用途有效的量將取決于待治療的疾病的嚴重度、患者自己的免疫系統(tǒng)的總體狀態(tài)、患者的一般情況例如年齡，體重和性別，藥物的施用方式，以及同時施用的其他治療等等。[0050]因此，在一個方面，本發(fā)明提供了能夠特異性結合HPVL2蛋白并且能夠中和多個型別的HPV的單克隆抗體及其抗原結合片段，其中，所述單克隆抗體包括:[0051]包含氨基酸序列為SEQIDNO:5-7的⑶R的重鏈可變區(qū)(VH);和/或[0052]包含氨基酸序列為SEQIDN0:8_10的⑶R的輕鏈可變區(qū)(VL)。[0053]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體包括，如SEQIDNO:2所示的VH。[0054]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體包括，如SEQIDNO:4所示的VL。[0055]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體包括:[0056]包含氨基酸序列為SEQIDNO:5-7的CDR的VH，和包含氨基酸序列為SEQIDNO:8-10的CDR的VL0[0057]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體包括:如SEQIDNO:2所示的VH，和如SEQIDNO:4所示的VL0[0058]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體是由雜交瘤細胞株14H6產生的單克隆抗體，所述雜交瘤細胞株14H6保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏號CCTCC—C201268。[0059]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述單克隆抗體或其抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb、互補決定區(qū)片段、單鏈抗體(例如，scFv)、人源化抗體、嵌合抗體或雙抗體。[0060]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體以小于大約10_5M，例如小于大約10-6Μ、10-7Μ、10-8Μ、I(T9M或I(T10M或更小的Kd結合HPV的L2蛋白。[0061]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述L2蛋白是源自HPV16的L2蛋白。[0062]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體包括非-CDR區(qū)，且所述非-CDR區(qū)來自不是鼠類的物種，例如來自人抗體。[0063]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體是中和抗體，其能夠中和至少3種，例如至少4種，至少5種，至少6種，至少7種，至少8種，至少9種，至少10種，或11種型別的HPV。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的單克隆抗體能夠中和下列11種型別的HPV:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。[0064]在另一個方面，本發(fā)明提供了能夠特異性結合HPVL2蛋白并且能夠中和多個型別的HPV的單克隆抗體及其抗原結合片段，其能夠阻斷所述L2蛋白與由雜交瘤細胞株14H6產生的單克隆抗體的結合的至少50%，優(yōu)選至少60%，優(yōu)選至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少90%，優(yōu)選至少95%或優(yōu)選至少99%，所述雜交瘤細胞株14H6保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏號CCTCC-C201268。[0065]此類單抗所識別的表位與單抗14H6識別的表位相同，或者在空間上存在重疊，從而此類單抗能夠降低單抗14H6與HPV的L2蛋白的結合至少50%，優(yōu)選至少60%，優(yōu)選至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少90%，優(yōu)選至少95%或優(yōu)選至少99%。[0066]可以米用常規(guī)方法如Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,EdHarlowandDavidLane(1988)中描述的方法,測定某一待測單抗降低某一已知單抗結合HPVL2蛋白的能力。一個示例性的方法包括:先把抗原預包被在微孔板上，然后把系列稀釋的未標記的待測抗體以及特定濃度的經標記的已知單抗共同加入上述預包被后的微孔板中進行孵育，然后在洗滌后測定在不同稀釋度的待測抗體下，已知抗體結合到板上的數(shù)量。待測抗體競爭已知抗體結合抗原的能力越強，已知抗體結合抗原的能力就越弱，結合到板上的已知抗體就越少。通常，將抗原預包被在96孔微孔板上，并利用放射標記法或酶標記法測定待測單抗阻斷經標記的已知單抗的能力。[0067]可以米用Kohler等在Nature256:495(1975)中報道的雜交瘤制備方法來制備單抗。首先用免疫原(必要時候添加佐劑)免疫注射小鼠或其它合適的宿主動物。免疫原或佐劑的注射方式通常為皮下多點注射或腹腔注射。將免疫原預先偶聯(lián)到某些已知蛋白(如血清白蛋白)上，可能會有助于增強抗原在宿主內的免疫原性。佐劑可以利用弗氏佐劑或MPL-TDM等。動物在接受免疫后，體內會產生分泌特異性結合免疫原的抗體的淋巴細胞。收集目的淋巴細胞，并用合適的融合劑(如PEG)將其與骨髓瘤細胞融合，從而獲得雜交瘤細胞(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103,AcademicPress,1996)。[0068]將上述制備的雜交瘤細胞接種到合適的培養(yǎng)基中進行生長，所述培養(yǎng)基中含有一種或多種能夠抑制未融合的、母體骨髓瘤細胞生長的物質。例如，對于缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸轉移酶(HGPRT或HPRT)的母體骨髓瘤細胞，在培養(yǎng)基中添加次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶(HAT培養(yǎng)基)等物質將可以抑制HGPRT-缺陷細胞的生長。[0069]優(yōu)選的骨髓瘤細胞應該具有融合率高，抗體分泌能力穩(wěn)定，對HAT培養(yǎng)基敏感等能力。其中，骨髓瘤細胞首選鼠源骨髓瘤，如M0P-21和MC-1l小鼠腫瘤衍生株(THESalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,Calif.USA),以及SP-2/0或X63_Ag8_653細胞株(AmericanTypeCultureCollection,Rockville,Md.USA)o另外，還可以利用人骨髓瘤和人鼠異源骨髓瘤細胞株制備人單抗(Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984);Brodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)。[0070]雜交瘤細胞生長的培養(yǎng)基用于檢測針對特異抗原的單抗的產生?？梢允褂孟铝蟹椒▉頊y定雜交瘤細胞產生的單抗的結合特異性:免疫沉淀或體外結合試驗，如放射免疫試驗(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。例如，利用Munson等在Anal.Biochem.107:220(1980)中描述的Scatchard分析法可測定單抗的親和力。[0071]在確定雜交瘤產生的抗體的特異性、親和力和反應性之后，目的細胞株可以通過Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103,AcademicPress,1996描述的有限稀釋法進行亞克隆化。合適的培養(yǎng)基可以是DMEM或RPM1-1640等。另外，雜交瘤細胞還可以腹水瘤的形式在動物體內生長。[0072]利用傳統(tǒng)的免疫球蛋白純化方法，如蛋白A瓊脂糖凝膠、羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析等，可以將亞克隆細胞分泌的單抗從細胞培養(yǎng)液、腹水或血清中分離出來。[0073]還可以通過基因工程重組技術獲得單克隆抗體。利用特異性結合單抗重鏈和輕鏈基因的核酸引物進行PCR擴增，可以從雜交瘤細胞中分離得到編碼單抗重鏈和輕鏈基因的DNA分子。將所得的DNA分子插入表達載體內，然后轉染宿主細胞(如E.coli細胞、COS細胞、CHO細胞、或其它不產生免疫球蛋白的骨髓瘤細胞)，并在合適的條件下進行培養(yǎng)，可以獲得重組表達的目標抗體。[0074]本發(fā)明還提供了分離的核酸分子，其編碼本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段。此類核酸分子可以從雜交瘤細胞中分離得到，也可以利用基因工程重組技術或化學合成方法獲得。[0075]在一個方面，本發(fā)明提供了分離的核酸分子，其包含能夠編碼抗體重鏈可變區(qū)的核酸序列，其中所述抗體重鏈可變`區(qū)包含，氨基酸序列為SEQIDNO:5-7的⑶R。[0076]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述抗體重鏈可變區(qū)具有SEQIDN0:2所示的氨基酸序列。[0077]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述核酸分子具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。[0078]在另一個方面，本發(fā)明提供了分離的核酸分子，其包含能夠編碼抗體輕鏈可變區(qū)的核酸序列，其中所述抗體輕鏈可變區(qū)包含，氨基酸序列為SEQIDN0:8-10的⑶R。[0079]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述抗體輕鏈可變區(qū)具有SEQIDN0:4所示的氨基酸序列。[0080]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述核酸分子具有SEQIDN0:3所示的核苷酸序列。[0081]在另一個方面，本發(fā)明提供了一種載體，其包含本發(fā)明的分離的核酸分子。本發(fā)明的載體可以是克隆載體，也可以是表達載體。[0082]在一個優(yōu)選實施方案中,本發(fā)明的載體是例如質粒,粘粒,曬菌體，柯斯質粒等等。[0083]在另一個方面，還提供了包含本發(fā)明的分離的核酸分子或載體的宿主細胞。此類宿主細胞包括但不限于,原核細胞例如大腸桿菌細胞，以及真核細胞例如酵母細胞，昆蟲細胞，植物細胞和動物細胞(如哺乳動物細胞，例如小鼠細胞、人細胞等)。本發(fā)明的細胞還可以是細胞系，例如293T細胞。[0084]在另一個方面，還提供了制備本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段的方法，其包括，在合適的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細胞，和從細胞培養(yǎng)物中回收本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段。[0085]在另一個方面，本發(fā)明提供了雜交瘤細胞株14H6，其保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏號CCTCC-C201268。[0086]如本申請所證實的，單克隆抗體14H6的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示(其示例性核苷酸序列如SEQIDNO:1所示)，且輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示(其示例性核苷酸序列如SEQIDN0:3所示)。[0087]單克隆抗體14H6重鏈的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分別為SEQIDNO:5-7；輕鏈的⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列分別為SEQIDN0:8_10。[0088]在另一個方面，本發(fā)明提供了一種試劑盒，其包括本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段還包括可檢測的標記。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述試劑盒還包括第二抗體，其特異性識別本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段。優(yōu)選地，所述第二抗體還包括可檢測的標記。此類可檢測的標記時本領域技術人員熟知的，包括但不限于，放射性同位素，熒光物質，發(fā)光物質，有色物質和酶(例如辣根過氧化物酶)等。[0089]在另一個方面，本發(fā)明提供了檢測HPVL2蛋白在樣品中的存在或其水平的方法，其包括使用本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段還包括可檢測的標記。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述方法還包括，使用攜帶可檢測的標記的第二抗體來檢測本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段。所述方法可以用于診斷目的，或者非診斷目的(例如，所述樣品是細胞樣品，而非來自患者的樣品)。[0090]在另一個方面，本發(fā)明提供了診斷受試者是否感染了HPV的方法，其包括:使用本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段檢測HPVL2蛋白在來自所述受試者的樣品中的存在。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段還包括可檢測的標記。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述方法還包括，使用攜帶可檢測的標記的第二抗體來檢測本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段。[0091]在另一個方面，提供了本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段在制備試劑盒中的用途，所述試劑盒用于檢測HPVL2蛋白在樣品中的存在或其水平，或用于診斷受試者是否感染了HPV。[0092]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述L2蛋白是源自HPV16的L2蛋白。[0093]在另一個方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段，以及藥學上可接受的載體和/或賦形劑。[0094]在另一個方面，本發(fā)明提供了用于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)的方法，其包括，給有此需要的受試者施用預防或治療有效量的本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段，或者本發(fā)明的藥物組合物。[0095]在另一個方面，提供了本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)。[0096]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HPV選自:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。[0097]在另一個方面，本發(fā)明提供了用于中和樣品中HPV的毒力的方法，其包括，將包含HPV的樣品與本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段接觸。在另一個方面，提供了本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結合片段用于制備藥物的用途，所述藥物用于中和樣品中HPV的毒力。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HPV選自:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。[0098]在另一個方面，本發(fā)明還提供了一種分離的表位肽，其由HPVL2蛋白的10—30個連續(xù)氨基酸殘基組成，且包含HPVL2蛋白的第21—30位氨基酸殘基。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HPVL2蛋白是HPV16L2蛋白。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HPVL2蛋白的第21—30位氨基酸殘基如SEQIDNO:31所示。[0099]在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的表位肽由L2蛋白的不多于30個的連續(xù)氨基酸殘基組成，例如，其由30個，29個，28個，27個，26個，25個，24個，23個，22個，21個，20個，19個，18個，17個，16個，15個，14個，13個，12個，11個或10個的連續(xù)氨基酸殘基組成。例如，本發(fā)明的表位肽具有選自SEQIDN0:13、36、38、40、42、44、46、48、50和52所示的氨基酸序列。[0100]特別地，本發(fā)明的該表位肽，不需要載體蛋白，即能夠被單克隆抗體14H6特異性識別/結合。然而，優(yōu)選地，可以將本發(fā)明的表位肽與載體蛋白融合，以增強表位肽的免疫原性，使得表位肽能夠被機體的免疫系統(tǒng)識別，并誘導廣譜中和抗體的產生。[0101]因此，在一個方面，本發(fā)明還提供了一種重組蛋白，其包含本發(fā)明的分離的表位肽和載體蛋白，并且不是天然存在的蛋白或其片段。在所述重組蛋白中，所述表位肽可以連接至載體蛋白的N末端或C末端，插入載體蛋白的內部，或替換載體蛋白的部分氨基酸序列，視所使用的具體載體蛋白而定。此外，任選地，所述表位肽通過連接體(剛性或柔性連接體，例如(GGGGS)3)與載體蛋白相連接。本發(fā)明的重組蛋白不受其產生方式的限定，例如，其可以通過基因工程方法(重組技術)產生，也可以通過化學合成方法產生。[0102]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述載體蛋白選自CRM197蛋白或其片段、HPVLI蛋白和HBV核心抗原。[0103]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述載體蛋白是CRM197蛋白或其片段，并且將本發(fā)明的表位肽，任選地通過連接體，連接至CRM197蛋白或其片段的N末端或C末端。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述CRM197蛋白的片段是CRM389或CRMA，其序列分別如SEQIDNO:105或119所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述連接體的氨基酸序列如SEQIDN0:166所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的重組蛋白具有選自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:93,95、97、99、101、103、107、109、111、113、115、117、121、123、125、127、129和131。[0104]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述載體蛋白是HPVLI蛋白，并且將本發(fā)明的表位肽插入至所述LI蛋白的第127-128位氨基酸殘基之間，或第423-424位氨基酸殘基之間。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的重組蛋白具有選自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:57,59、61、63、65、67、69、71、73和75。[0105]在一個優(yōu)選的實施方案中，所述載體蛋白是HBV核心抗原，并且用本發(fā)明的表位肽替換所述HBV核心抗原的第79-81位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽與HBV核心抗原通過連接體連接。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的重組蛋白具有選自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:79、81、83、85、87和89。[0106]在另一個方面，本發(fā)明還提供了一種分離的核酸分子，其包含編碼本發(fā)明的表位肽或重組蛋白的核苷酸序列。在另一個方面，本發(fā)明還提供了一種載體，其包含如上所述的分離的核酸分子。本發(fā)明的載體可以是克隆載體，也可以是表達載體。在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的載體是例如質粒，粘粒，噬菌體，柯斯質粒等等。[0107]在另一個方面，還提供了包含如上所述的分離的核酸分子或載體的宿主細胞。此類宿主細胞包括但不限于，原核細胞例如大腸桿菌細胞，以及真核細胞例如酵母細胞，昆蟲細胞，植物細胞和動物細胞(如哺乳動物細胞，例如小鼠細胞、人細胞等)。本發(fā)明的細胞還可以是細胞系，例如293T細胞。[0108]在另一個方面，還提供了制備本發(fā)明的重組蛋白的方法，其包括，在合適的條件下培養(yǎng)如上所述的宿主細胞，和從細胞培養(yǎng)物中回收本發(fā)明的重組蛋白。[0109]在另一個方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的重組蛋白，以及藥學上可接受的載體和/或賦形劑。[0110]在另一個方面，本發(fā)明提供了用于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)的方法，其包括，給有此需要的受試者施用預防或治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物或重組蛋白。[0111]在另一個方面，提供了本發(fā)明的重組蛋白在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)。[0112]在另一個方面，本發(fā)明提供了用于在受試者體內誘發(fā)能夠中和至少2個型別的HPV的中和抗體的方法，其包括給有此需要的受試者施用有效量的本發(fā)明的藥物組合物或重組蛋白。[0113]在另一個方面，提供了本發(fā)明的重組蛋白在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于在受試者體內誘發(fā)能夠中和至少2個型別的HPV的中和抗體。[0114]在另一個方面，提供了一種藥物組合物，其包含如上文所述的含有本發(fā)明的表位肽的載體蛋白，以及藥學上可接受的載體和/或賦形劑。[0115]在另一個方面，本發(fā)明提供了用于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)的方法，其包括，給有此需要的受試者施用預防或治療有效量的本發(fā)明的載體蛋白，或者本發(fā)明的藥物組合物。[0116]在另一個方面，提供了本發(fā)明的表位肽或者載體蛋白在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)。[0117]發(fā)明的有益效果[0118]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的單克隆抗體及其抗原結合片段具有顯著的有利方面。特別地，本發(fā)明的單克隆抗體及其抗原結合片段能夠廣譜地中和多種型別(多達11種)的HPV,從而對于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)具有特別顯著的優(yōu)勢。[0119]此外，本發(fā)明還提供了能夠被本發(fā)明的廣譜中和單克隆抗體識別的表位肽和含有所述表位肽的載體蛋白。此類表位肽和載體蛋白因含有“廣譜”表位，而能夠誘導機體產生抗多種型別的HPV的中和抗體，因此，對于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)具有特別顯著的優(yōu)勢。[0120]下面將結合附圖和實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將理解，下列附圖和實施例僅用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的范圍的限定。根據(jù)附圖和優(yōu)選實施方案的下列詳細描述，本發(fā)明的各種目的和有利方面對于本領域技術人員來說將變得顯然?！緦＠綀D】【附圖說明】[0121]圖1顯示HPV16C50L2蛋白的SDS-PAGE檢測結果。泳道1:蛋白分子量標記；泳道2:HPV16C50L2蛋白。SDS-PAGE檢測結果顯示，HPV16C50L2蛋白的純度在90%以上。[0122]圖2顯示抗體14H6的SDS-PAGE檢測結果。泳道1:蛋白分子量標記；泳道2:抗體14H6。SDS-PAGE檢測結果顯示，抗體14H6的純度在95%以上。[0123]圖3顯示蛋白質印跡分析的檢測結果，其顯示了HPV16C50L2蛋白與抗體14H6的特異性結合。泳道1:HPV16C50L2蛋白；泳道2:蛋白分子量標記。[0124]圖4顯示抗體14H6與HPV16C50L2蛋白的N端7段多肽(P1-P7)的反應性的ELISA檢測。其中，橫坐標表示所使用的多肽，縱坐標表示1glO(14H6抗體對多肽的抗體滴度)，16L2表示用作陽性對照的HPV16C50L2蛋白。結果顯示，抗體14H6對P3和16L2具有相似的反應性，而不與其他多肽發(fā)生反應。這表明，抗體14H6所識別的表位位于P3上。[0125]圖5顯示分別以HPV16LI蛋白，乙肝病毒核心抗原(HBVcoreAg，或簡稱HBcore蛋白)或白喉毒素無毒突變體CRM197為基礎的、包含L2蛋白的表位肽的重組載體蛋白的克隆設計。在本發(fā)明中，使用了HPV16L2蛋白的9種表位肽:[0126]L2A,HPV16L2的aa21_aa30(aa表示氨基酸，其置于數(shù)字η前面時，表示第η位氨基酸(例如，aa21表示第21位氨基酸)；置于數(shù)字η之后時，表示多肽長度為η個氨基酸(下同))，10肽;[0127]L2B,HPV16L2的aa20_aa31，12肽;[0128]L2C,HPV16L2的aal9_aa32，14肽；[0129]L2D,HPV16L2的aal8_aa33，16肽；[0130]L2E,HPV16L2的aal7_aa34，18肽;[0131]L2F,HPV16L2的aal6_aa35，20肽；[0132]L2G,HPV16L2的aal5_aa36，22肽；[0133]L2I,HPV16L2的aal3_aa38，26肽；[0134]L2K,HPV16L2的aall_aa40，30肽。[0135]圖5A:以HPV16LI蛋白作為蛋白載體，并且可使用下列2個插入位置中的任一個。第一個插入位置為HPV16L1蛋白的aal27-aal28之間(SP，目標多肽的N端與HPV16L1蛋白的aal27的C端融合，且目標多肽的C端與HPV16L1蛋白的aal28的N端融合，下同)。根據(jù)所使用的表位肽(L2B，L2C，L2D，L2E和L2F)，將獲得的重組蛋白分別命名為HPV16L1-DE-L2B，HPV16L1-DE-L2C,HPV16L1-DE-L2D,HPV16L1-DE-L2E和HPV16L1-DE-L2F。第二個插入位置為HPV16LI蛋白的aa423-aa424之間。類似地，根據(jù)所使用的表位肽，將獲得的重組蛋白分別命名為HPV16L1-a4-L2B等。[0136]圖5Β:以HBcore蛋白作為蛋白載體,插入位置為aa78_82(即，目標多肽的N端與HBcore蛋白的aa78的C端融合,且目標多肽的C端與HBVcore蛋白的aa82的N端融合,相當于用目標多肽替換HBcore蛋白的aa79_81)。此外，為了促進目標多肽和載體蛋白的正確折疊，在目標多肽與載體蛋白之間添加連接體。類似地，根據(jù)所使用的表位肽，將獲得的重組蛋白分別命名為HBcore-L2A等。[0137]圖5C:以CRM197或其片段(B卩，CRM389或CRMA)作為蛋白載體，將目的多肽通過連接體(Linker)連接至蛋白載體的C端。其中，CRM389是指包含CRM197的第1-389位氨基酸殘基(aal-389)的多肽；CRMA是指包含CRM197的第1-190位氨基酸殘基(aal_190)的多肽；Linker是指連接體，其氨基酸序列為GGGGSGGGGSGGGGS。類似地，根據(jù)所使用的表位肽和蛋白載體，將獲得的重組蛋白分別命名為CRM197-L2A等；CRM389_L2A等；和CRMA-L2A坐寸ο[0138]圖6顯示通過蛋白質印跡分析,使用抗體14H6或單抗21A5(單抗21A5(本實驗室制備)特異性抗HPV16LI蛋白)檢測圖5A中的重組蛋白的結果。其中，各泳道所使用的蛋白樣品如下:泳道1:HPV16L1-DE-L2B;泳道2:HPV16L1-DE_L2C;泳道3:HPV16L1-DE_L2D;泳道4:HPV16L1-DE-L2E;泳道5:HPV16L1-DE_L2F;泳道6:HPV16L1蛋白；泳道7:HPV16C50L2蛋白；泳道8:HPV16Ll-a4-L2B;泳道9:HPV16L1-a4-L2C;泳道10:HPV16L1_a4-L2D；泳道ll:HPV16Ll-a4-L2E;泳道12:HPV16L1_a4-L2F。結果顯示，圖5A所構建的重組蛋白均能與單抗21A5反應；并且，圖5A所構建的重組蛋白均能與單抗14H6反應。[0139]結果顯示，圖5A所構建的重組蛋白均能與單抗21A5反應；并且，圖5A所構建的重組蛋白均能與單抗14H6反應。[0140]圖7顯示經純化的圖5A所構建的重組蛋白的SDS-PAGE檢測結果。其中，各泳道所使用的蛋白樣品如下:泳道1:蛋白分子量標記；泳道2:HPV16L1-DE-L2B；泳道3:HPV16L1-DE-L2C；泳道4:HPV16L1-DE_L2D；泳道5:HPV16L1-DE_L2E；泳道6:HPV16L1-DE-L2F;泳道7:HPV16L1_4_L2B;泳道8:HPV16L1_a4-L2C;泳道9:HPV16Ll-a4-L2D;泳道10:HPV16L1-4_L2E;泳道11:HPV16L1_a4-L2F，泳道12:蛋白分子量標記。檢測結果顯示，經純化的10個重組蛋白的純度均在95%左右。[0141]圖8顯示使用透射電鏡觀察圖5A所構建的重組蛋白的結果。其中，圖8A為HPV16L1-DE-L2B，圖8B為HPV16L1-DE-L2C，圖8C為HPV16L1-DE-L2D，圖8D為HPV16L1-DE-L2E，圖8E為HPV16L1-DE-L2F，圖8F為HPV16L1-a4-L2B，圖8G為HPV16Ll-a4-L2C,圖8H為HPV16L1-a4-L2D，圖81為HPV16L1-a4-L2E，圖8J為HPVLl-a4-L2F，圖8K為HPV16的VLP。結果顯示，以HPV16L1-DE為蛋白載體所構建的5個重組蛋白均能形成均一的直徑約為50nm的顆粒；以HPV16L1-a4為蛋白載體所構建的5個重組蛋白中，HPV16L1-a4-L2B可形成直徑為20nm的顆粒，HPV16L1-a4-L2C可形成直徑為40nm的松散顆粒，而HPV16L1-a4-L2D,HPV16L1-a4-L2E和HPV16L1-a4-L2F均可形成直徑約5nm的小殼粒。[0142]圖9顯示各抗體對圖5A所構建的重組蛋白的反應性的ELISA檢測結果。其中，使用3種抗體(針對HPV16LI蛋白的單抗PDl和8A9，以及針對HPV16L2蛋白的單抗14H6，其中抗體PDl和8A9由廈門大學國家傳染病診斷試劑與疫苗工程研究中心篩選得到)對各蛋白進行ELISA檢測，并且HPV16VLP和HPV16C50L2用作對照。結果顯示，各重組蛋白對單抗PDl和8A9的反應性與HPV16VLP相當；并且，各重組蛋白對單抗14H6的反應性與HPV16C50L2相當。[0143]圖10顯示通過ELISA檢測用圖5A所構建的重組蛋白(5μg和0.5μg)免疫小鼠后獲得的血清對HPV16C50L2蛋白的抗體滴度的結果。檢測結果表明，用圖5A所構建的重組蛋白免疫小鼠后，所產生的血清針對HPV16C50L2蛋白的抗體滴度均在IO5左右，與用HPV16C50L2蛋白單獨免疫后的結果相當。這表明，圖5A所構建的重組蛋白與HPV16C50L2蛋白的免疫原性相當。[0144]圖11顯示通過假病毒中和實驗檢測用圖5A所構建的重組蛋白免疫小鼠后獲得的血清的中和滴度。PsV，假病毒。結果表明，用圖5A所構建的重組蛋白免疫小鼠后，所獲得的血清不僅能中和HPV16的假病毒，而且對HPV11、18、45和58假病毒具有交叉中和作用。這表明，用圖5A所構建的重組蛋白免疫小鼠后，小鼠獲得了廣譜的中和保護作用。[0145]圖12顯示經純化的圖5B所構建的重組蛋白的SDS-PAGE檢測結果(上圖框)以及用抗體14H6進行的蛋白質印跡分析的檢測結果(下圖框)。其中，各泳道所使用的蛋白樣品如下:泳道1:蛋白分子量標記j}dt2:HBcore-L2Aj}dt3:HBcore-L2Bj}dt4:HBcore-L2C；泳道5:HBcore-L2D;泳道6:HBcore_L2E;泳道7:HBcore_L2F。[0146]SDS-PAGE檢測結果顯示，經純化的圖5B所構建的重組蛋白的純度在80%以上。蛋白質印跡分析的檢測結果顯示，除HBcore-L2A外，圖5B所構建的重組蛋白均能與單抗14H6反應。[0147]圖13顯示圖5B所構建的重組蛋白的電鏡觀察結果。其中圖13A-13G所使用的樣品如下:圖13A=HBcore；圖13B:HBcore_L2A；圖13C:HBcore_L2B；圖13D:HBcore_L2C；圖13E:HBcore-L2D;圖13F:HBcore_L2E;圖13G:HBcore_L2F。電鏡結果顯示，圖5B所構建的6個重組蛋白均能夠形成直徑為40nm的顆粒。[0148]圖14顯示單抗14H6與圖5B所構建的重組蛋白的反應性的ELISA檢測結果。以HBcore和HPV16C50L2分別作為陰性`與陽性對照。檢測結果表明，各重組蛋白對單抗14H6的反應性與HPV16C50L2相當。[0149]圖15顯示通過ELISA檢測用圖5B所構建的重組蛋白(5μg和0.5μg)免疫小鼠后獲得的血清對HPV16C50L2蛋白的抗體滴度的結果。檢測結果表明，用圖5B所構建的重組蛋白免疫小鼠后，產生的針對HPV16L2蛋白的血清抗體滴度均在IO5左右，與用HPV16C50L2蛋白單獨免疫后的結果相當。這表明，圖5B所構建的重組蛋白與HPV16C50L2蛋白的免疫原性相當。[0150]圖16顯示通過假病毒中和實驗檢測用圖5B所構建的重組蛋白免疫小鼠后獲得的血清的中和滴度。檢測結果表明，用圖5B所構建的重組蛋白免疫小鼠后，所獲得的血清不僅能中和HPV16的假病毒，而且對HPV18假病毒具有一定的交叉中和作用。這表明，用圖5B所構建的重組蛋白免疫小鼠后，小鼠獲得了廣譜的中和保護作用。[0151]圖17顯示經純化的圖5C所構建的重組蛋白的SDS-PAGE檢測結果(上圖框)以及用抗體14H6進行的蛋白質印跡分析的檢測結果(下圖框)。其中，各泳道所使用的蛋白樣品如下:泳道I:CRM197-L2A;泳道2:CRM197-L2C;泳道3:CRM197-L2E;泳道4:CRM197-L2G；泳道5:CRM197-L2I;泳道6:CRM197_L2K;泳道7:CRM389-L2A;泳道8:CRM389_L2C;泳道9:CRM389-L2E;泳道10:CRM389_L2G，泳道11:CRM389-L2I;泳道12:CRM389-L2K;泳道13:CRMA-L2A;泳道14:CRMA-L2C;泳道15:CRMA-L2E;泳道16:CRMA-L2G;泳道17:CRMA-L2I；泳道18:CRMA-L2K;泳道19:蛋白分子量標記。[0152]SDS-PAGE檢測結果顯示，經純化的圖5C所構建的重組蛋白的純度在80%以上。蛋白質印跡分析的檢測結果顯示，除了CRM197-L2A、CRM389-L2A、CRMA-L2A外，圖5C所構建的重組蛋白均能與單抗14H6反應。[0153]圖18顯示單抗14H6與圖5C所構建的重組蛋白的反應性的ELISA檢測結果。以CRM197蛋白和HPV16C50L2蛋白分別作為陰性與陽性對照。檢測結果表明，各重組蛋白對單抗14H6的反應性與HPV16C50L2相當。[0154]圖19顯示通過ELISA檢測用圖5C所構建的重組蛋白(5μg和0.5μg)免疫小鼠后獲得的血清對HPV16C50L2蛋白的抗體滴度的結果。。檢測結果顯示，用基于CRMA的重組蛋白免疫小鼠后，所產生的針對HPV16L2蛋白的血清抗體滴度最高，接近IO6;而用基于CRM197或CRM389的重組蛋白免疫小鼠后，所產生的針對HPV16L2蛋白的血清抗體滴度稍低，為大約IO4。[0155]圖20顯示通過假病毒中和實驗檢測用圖5C所構建的重組蛋白免疫小鼠后獲得的血清對各個型別的假病毒的中和滴度。檢測結果顯示，用圖5C所構建的重組蛋白免疫小鼠后，所獲得的血清不僅能中和HPV16的假病毒(中和滴度均為IO3左右)，而且對HPV11U8、45、52、59具有交叉中和作用。這表明，用圖5C所構建的重組蛋白免疫小鼠后，小鼠獲得了廣譜的中和保護作用。[0156]序列信息[0157]本發(fā)明涉及的序列的信息提供于下面的表1中。[0158]【權利要求】1.能夠特異性結合HPVL2蛋白并且能夠中和多個型別的HPV的單克隆抗體及其抗原結合片段，其中，所述單克隆抗體包括:包含氨基酸序列為SEQIDNO:5-7的⑶R的重鏈可變區(qū)(VH);和/或包含氨基酸序列為SEQIDNO:8-10的⑶R的輕鏈可變區(qū)(VL)。2.權利要求1的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述的單克隆抗體包括，如SEQIDNO:2所示的VH，和/或，如SEQIDNO:4所示的VL。3.權利要求1或2的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述單克隆抗體或其抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb、互補決定區(qū)片段、單鏈抗體(例如，scFv)、人源化抗體、嵌合抗體或雙抗體。4.權利要求1-3任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述的單克隆抗體以小于大約10-5Μ，例如小于大約10-6Μ、10-7Μ、10-8Μ、10-9Μ或ΙΟ,Μ或更小的Kd結合HPV的L2蛋白。5.權利要求1-4任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述L2蛋白是HPV16的L2蛋白。6.權利要求1-5任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述的單克隆抗體包括非-CDR區(qū)，且所述非-CDR區(qū)來自不是鼠類的物種，例如來自人抗體。7.權利要求1-6任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述的單克隆抗體是中和抗體，其能夠中和至少3種，例如至少4種，至少5種，至少6種，至少7種，至少8種，至少9種，至少10種，或11種型別的HPV;例如，所述的單克隆抗體能夠中和下列11種型別的HPV:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。8.權利要求1-7任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述的單克隆抗體是由雜交瘤細胞株14H6產生的單克隆抗體，所述雜交瘤細胞株14H6保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏號CCTCC-C201268。9.能夠特異性結合HPVL2蛋白并且能夠中和多個型別的HPV的單克隆抗體及其抗原結合片段，其能夠阻斷所述L2蛋白與由雜交瘤細胞株14H6產生的單克隆抗體的結合的至少50%，優(yōu)選至少60%，優(yōu)選至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少90%，優(yōu)選至少95%或優(yōu)選至少99%，所述雜交瘤細胞株14H6保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏號CCTCC—C201268。10.分離的核酸分子，其包含能夠編碼抗體重鏈可變區(qū)的核酸序列，其中所述抗體重鏈可變區(qū)包含，氨基酸序列為SEQIDNO:5-7的⑶R；例如，所述抗體重鏈可變區(qū)具有SEQIDN0:2所示的氨基酸序列；例如，所述核酸分子具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。11.分離的核酸分子，其包含能夠編碼抗體輕鏈可變區(qū)的核酸序列，其中所述抗體輕鏈可變區(qū)包含，氨基酸序列為SEQIDNO:8-10的⑶R；例如，所述抗體輕鏈可變區(qū)具有SEQIDN0:4所示的氨基酸序列；例如，所述核酸分子具有SEQIDN0:3所示的核苷酸序列。12.—種載體,其包含權利要求10和/或11的分離的核酸分子。13.一種宿主細胞，其包含權利要求10和/或11的分離的核酸分子，或權利要求12的載體。14.制備權利要求1-8任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段的方法，其包括，在合適的條件下培養(yǎng)權利要求13的宿主細胞，和從細胞培養(yǎng)物中回收所述單克隆抗體或其抗原結合片段。15.雜交瘤細胞株14H6，其保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，且具有保藏號CCTCC—C201268。16.試劑盒，其包括權利要求1-9任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段；例如，所述單克隆抗體或其抗原結合片段還包括可檢測的標記，例如放射性同位素，熒光物質，發(fā)光物質，有色物質和酶；例如，所述試劑盒還包括第二抗體，其特異性識別所述單克隆抗體或其抗原結合片段；任選地，所述第二抗體還包括可檢測的標記，例如放射性同位素，熒光物質，發(fā)光物質，有色物質和酶。17.用于檢測HPVL2蛋白在樣品中的存在或其水平的方法，其包括使用權利要求1-9任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段；例如，所述單克隆抗體或其抗原結合片段還包括可檢測的標記，例如放射性同位素，熒光物質，發(fā)光物質，有色物質和酶；例如，所述方法還包括，使用攜帶可檢測的標記(例如放射性同位素，熒光物質，發(fā)光物質，有色物質和酶)的第二抗體來檢測所述單克隆抗體或其抗原結合片段。18.權利要求1-9任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段在制備試劑盒中的用途，所述試劑盒用于檢測HPVL2蛋白在樣品中的存在或其水平，或用于診斷受試者是否感染了HPV。19.一種藥物組合物，其`包含權利要求1-9任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段，以及藥學上可接受的載體和/或賦形劑。20.用于中和樣品中HPV的毒力的方法，其包括，將包含HPV的樣品與權利要求1-9任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段接觸。21.權利要求1-9任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段用于制備藥物的用途，所述藥物用于中和樣品中HPV的毒力。22.權利要求1-9任一項的單克隆抗體或其抗原結合片段在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)。23.權利要求20的方法或權利要求21或22的用途，其中，所述HPV選自:HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV58和HPV59。24.—種分離的表位肽，其由HPVL2蛋白的10—30個(例如，30個，29個，28個，27個，26個，25個，24個，23個，22個，21個，20個，19個，18個，17個，16個，15個，14個，13個，12個，11個或10個)連續(xù)氨基酸殘基組成，且包含HPVL2蛋白的第21—30位氨基酸殘基。25.權利要求24的表位肽，其中，所述HPVL2蛋白是HPV16L2蛋白。26.權利要求24或25的表位肽，其中，所述HPVL2蛋白的第21—30位氨基酸殘基如SEQIDNO:31所示。27.權利要求24-26任一項的表位肽，其中所述表位肽具有選自SEQIDNO:13,36,38,.40、42、44、46、48、50和52所示的氨基酸序列。28.—種重組蛋白，其包含權利要求24-27任一項的分離的表位肽和載體蛋白，并且不是天然存在的蛋白或其片段，其中，例如，所述表位肽通過連接體(剛性或柔性連接體，例如(GGGGS)3)與載體蛋白相連接；例如，所述載體蛋白選自CRM197蛋白或其片段、HPVLI蛋白和HBV核心抗原。29.權利要求28的重組蛋白，其中，例如，所述載體蛋白是CRM197蛋白或其片段，并且所述表位肽，任選地通過連接體，連接至CRM197蛋白或其片段的N末端或C末端；例如，所述CRM197蛋白的片段是CRM389或CRMA，其序列分別如SEQIDNO:105或119所示；例如，所述連接體的氨基酸序列如SEQIDNO:166所示；例如，所述重組蛋白具有選自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:93、95、97、99、101、103、.107、109、111、113、115、117、121、123、125、127、129和131。30.權利要求28的重組蛋白，其中，例如，所述載體蛋白是HPVLI蛋白，并且將所述表位肽插入至所述LI蛋白的第.127-128位氨基酸殘基之間，或第423-424位氨基酸殘基之間；例如，所述重組蛋白具有選自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:57、59、61、63、65、67、69、.71,73和75。31.權利要求28的重組蛋白，其中，例如，所述載體蛋白是HBV核心抗原，并且用所述表位肽替換所述HBV核心抗原的第.79-81位氨基酸；優(yōu)選地，所述表位肽與HBV核心抗原通過連接體連接；例如，所述重組蛋白具有選自下列的氨基酸序列:SEQIDNO:79、81、83、85、87和89。32.—種分離的核酸分子,其包含編碼權利要求24-27任一項的表位肽或權利要求.28-31任一項的重組蛋白的核苷酸序列。33.一種載體,其包含權利要求32的分離的核酸分子。34.一種宿主細胞，其包含權利要求32的分離的核酸分子或權利要求33的載體。35.制備權利要求28-31任一項的重組蛋白的方法，其包括，在合適的條件下培養(yǎng)權利要求34的宿主細胞，和從細胞培養(yǎng)物中回收所述重組蛋白。36.一種藥物組合物，其包含權利要求28-31任一項的重組蛋白，以及藥學上可接受的載體和/或賦形劑。37.權利要求28-31任一項的重組蛋白在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于預防或治療受試者的HPV感染或與HPV感染相關的疾病(例如宮頸癌)。38.權利要求28-31任一項的重組蛋白在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于在受試者體內誘發(fā)能夠中和至少2個型別的HPV的中和抗體?！疚臋n編號】C12P21/02GK103483446SQ201210190279【公開日】2014年1月1日申請日期:2012年6月8日優(yōu)先權日:2012年6月8日【發(fā)明者】李少偉,王大寧,肖潔瓊,魏旻希,吳坤寶,張軍,夏寧邵申請人:廈門大學,廈門萬泰滄海生物技術有限公司