實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè)方法及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明以群體遺傳學(xué)理論為依據(jù)，通過(guò)種間轉(zhuǎn)移擴(kuò)增法從小鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)中篩選出長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)，然后經(jīng)過(guò)分級(jí)篩選、優(yōu)化組合，最終優(yōu)選出了適于長(zhǎng)爪沙鼠遺傳檢測(cè)的微衛(wèi)星位點(diǎn)，建立了適用于長(zhǎng)爪沙鼠遺傳檢測(cè)的方法。本發(fā)明還采用篩選出的微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)國(guó)內(nèi)的長(zhǎng)爪沙鼠群體進(jìn)行了群體內(nèi)遺傳變異和群體間遺傳差異分析。
【專(zhuān)利說(shuō)明】實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè)方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量檢測(cè)方法及其應(yīng)用，具體為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè)方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]長(zhǎng)爪沙鼠(Meriones unguiculatus)屬于卩齒齒目、沙鼠屬(Gerbillus)動(dòng)物，又名黃耗子、砂耗子、長(zhǎng)爪沙土鼠、蒙古沙鼠(Mongolian gerbil)等，是源自我國(guó)的實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物。由于長(zhǎng)爪沙鼠許多特殊的生物學(xué)特性，在許多方面可作為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的動(dòng)物模型，并極具發(fā)展?jié)摿?，具有重要開(kāi)發(fā)價(jià)值，是當(dāng)今實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)發(fā)展最為迅速的領(lǐng)域之一。目前長(zhǎng)爪沙鼠已在腦缺血、腦神經(jīng)、寄生蟲(chóng)病、微生物、生殖、內(nèi)分泌、營(yíng)養(yǎng)、代謝及藥理、腫瘤等研究中廣泛應(yīng)用。
[0003]在我國(guó)，長(zhǎng)爪沙鼠的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化始于1978年和1985年，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心和首都醫(yī)科大學(xué)分別從野外捕獲沙鼠進(jìn)行馴化研究，成功的培育了兩個(gè)封閉群群體，并對(duì)其生物學(xué)特性、染色體組型等進(jìn)行了研究，在長(zhǎng)爪沙鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究方面奠定了較好的基礎(chǔ)。目前我國(guó)有四個(gè)較大的長(zhǎng)爪沙鼠封閉群，分別分布在北京(首都醫(yī)科大學(xué))、杭州(浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)、大連(大連醫(yī)科大學(xué))和廣州(廣州醫(yī)學(xué)院)，這些生產(chǎn)單位的長(zhǎng)爪沙鼠在國(guó)內(nèi)得到廣泛應(yīng)用。在群體遺傳學(xué)方面，杜小燕等[1]從小鼠的微衛(wèi)星位點(diǎn)擴(kuò)增沙鼠基因組DNA獲得長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)，并對(duì)首都醫(yī)科大學(xué)長(zhǎng)爪沙鼠群體、野生長(zhǎng)爪沙鼠群體和浙江長(zhǎng)爪沙鼠群體進(jìn)行了群體遺傳結(jié)構(gòu)對(duì)比分析，表明首都醫(yī)科大學(xué)群體變異程度比以前要高，雖然低于兩個(gè)野生群體，但差異不是很大。丁賢明等[2]用17個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記對(duì)Z:ZCLA長(zhǎng)爪沙鼠封閉群、野生群和近交系進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果表明Z:ZCLA封閉群和野生群都表現(xiàn)為中度多態(tài)，Z:ZCLA封閉群較野生群稍低；3個(gè)長(zhǎng)爪沙鼠近交系品系基本符合近交系的要求，微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)適用于近交系長(zhǎng)爪沙鼠的遺傳檢測(cè)。劉月環(huán)等M用已知的9個(gè)微衛(wèi)星對(duì)浙江省沙鼠群 體進(jìn)行了遺傳多樣性分析，結(jié)果表明該群體處于不平衡狀態(tài)。孫賀娟等[4]用篩選的28個(gè)生化基因位點(diǎn)對(duì)浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心群體和首都醫(yī)科大學(xué)群體進(jìn)行了群體遺傳結(jié)構(gòu)對(duì)比分析，表明兩群體內(nèi)均未出現(xiàn)明顯的遺傳分化現(xiàn)象，但群體均偏離了哈迪-溫伯格平衡；而兩群體間并未出現(xiàn)明顯的遺傳分化。國(guó)外有關(guān)長(zhǎng)爪沙鼠的群體遺傳方面的研究報(bào)道也比較少，Neumann K等[5]通過(guò)用克隆方法找到的9個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)野生長(zhǎng)爪沙鼠和人工飼養(yǎng)的長(zhǎng)爪沙鼠進(jìn)行了多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)人工飼養(yǎng)群體的遺傳多態(tài)性較低。Yoshda等[6]比較了長(zhǎng)爪沙鼠與人及大鼠編碼肝、胰及血白蛋白cDNA序列的差異。Shimizu等m通過(guò)乳酸脫氫酶和堿性磷酸酶的電泳分析表明在毛色表型之間無(wú)遺傳多態(tài)性。Okumura等M用23個(gè)蛋白酶位點(diǎn)研究了日本培育及保種的4個(gè)品系(MGS/Sea、Mon/JmsGbs、KML和Hos)的生化基因位點(diǎn)及遺傳變異性，結(jié)果除在肝酸性磷酸酶(Acp2)位點(diǎn)有多態(tài)性外，其它位點(diǎn)均未見(jiàn)多態(tài)性，表明在日本實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠的群體內(nèi)和群體間缺乏遺傳多樣性。
[0004]長(zhǎng)期以來(lái)，人們一直注重研究長(zhǎng)爪沙鼠的保種、生物學(xué)特性、遺傳結(jié)構(gòu)和開(kāi)發(fā)應(yīng)用，而對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠的標(biāo)準(zhǔn)化，尤其是遺傳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究不夠。目前國(guó)家尚沒(méi)出臺(tái)長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，各地方也沒(méi)有成熟的長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量地方標(biāo)準(zhǔn)。因此，研究建立長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè)方法和遺傳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)就顯得尤為迫切。
[0005]長(zhǎng)爪沙鼠的遺傳質(zhì)量對(duì)醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性及科學(xué)性有重要影響，而遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)是評(píng)價(jià)和保證實(shí)驗(yàn)用長(zhǎng)爪沙鼠質(zhì)量不可或缺的措施。因此，在長(zhǎng)爪沙鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化過(guò)程中遺傳檢測(cè)是極其重要的。遺傳檢測(cè)的目的是為了證實(shí)各品種品系應(yīng)具有的遺傳特性，以及是否發(fā)生遺傳突變和遺傳污染等，以確保被監(jiān)測(cè)的樣品符合該品種品系的要求。由于品系特性易受許多因素的影響而發(fā)生變化，并可直接影響試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，使用遺傳污染的動(dòng)物所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，往往導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論，因此對(duì)我國(guó)的長(zhǎng)爪沙鼠群體進(jìn)行遺傳檢測(cè)具有重要意義。遺傳檢測(cè)的方法較多，有生物化學(xué)標(biāo)記基因檢測(cè)法、免疫學(xué)性狀標(biāo)記基因檢測(cè)法、DNA多態(tài)性法等。其中微衛(wèi)星DNA檢測(cè)法是DNA多態(tài)性法的一種，由于具有很多的優(yōu)點(diǎn)，是近幾年來(lái)發(fā)展較快的一種檢測(cè)方法。
[0006]微衛(wèi)星(Microsatellite)，又稱(chēng)簡(jiǎn)單序列重復(fù)(Simplesequence repeats，SSR)，是指以少數(shù)幾個(gè)核苷酸(一般為2~6個(gè))為重復(fù)單位組成的簡(jiǎn)單多次串聯(lián)重復(fù)序列[9]。在真核生物中大約每隔10-50kb就存在I個(gè)微衛(wèi)星_，且它們廣泛存在于染色體幾乎所有區(qū)域[11]。微衛(wèi)星標(biāo)記按其核心單位的堿基數(shù)可分為單、2、3、4、5、6核苷酸微衛(wèi)星。人和動(dòng)物的微衛(wèi)星重復(fù)單位較為常見(jiàn)的是(TG)n和(CT)n[12];按微衛(wèi)星自身結(jié)構(gòu)，Webertl3]將微衛(wèi)星分為完全、不完全和復(fù)合微衛(wèi)星:完全型微衛(wèi)星是由不中斷的重復(fù)單位串聯(lián)而成；不完全微衛(wèi)星是指重復(fù)單位間有3個(gè)以下的非重復(fù)堿基間隔，且兩間隔間重復(fù)單位連續(xù)重復(fù)數(shù)不低于3 ;復(fù)合微衛(wèi)星是指由幾類(lèi)串聯(lián)重復(fù)單位構(gòu)成，中間有3個(gè)以下堿基間隔，且重復(fù)單位連續(xù)重復(fù)數(shù)不低于5。微衛(wèi)星標(biāo)記由核心序列和兩側(cè)保守的側(cè)翼序列構(gòu)成，保守的側(cè)翼序列使微衛(wèi)星特異地定位于染色體某一區(qū)域，核心序列重復(fù)數(shù)的差異則形成微衛(wèi)星的高度多態(tài)性。利用微衛(wèi)星DNA側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，由于重復(fù)次數(shù)的不同形成片段長(zhǎng)度不同，經(jīng)電泳分離，成像表現(xiàn)出不同的電泳帶型。
[0007]微衛(wèi)星DNA具有豐富的多態(tài)性、遺傳連鎖不平衡現(xiàn)象、數(shù)量多分布均勻、易檢測(cè)、重復(fù)性好、省時(shí)，適于自動(dòng)化分析和在相關(guān)物種之間具有保守性等特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的研究中。主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:(I)構(gòu)建基因圖譜微衛(wèi)星是一種共顯性標(biāo)記，其遺傳分析過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)化，不僅利于作圖群體間標(biāo)記轉(zhuǎn)換[14]，而且也便于從遺傳圖譜向物理圖譜過(guò)渡[15]。(2)制作DNA指紋圖，微衛(wèi)星最早應(yīng)用之一就是制作DNA指紋圖來(lái)進(jìn)行個(gè)體、品種(系)鑒定。(3)定位功能基因和數(shù)量性狀基因座(QTL)利用微衛(wèi)星與某些功能基因或QTL間的連鎖關(guān)系，可將一些功能基因或QTL定位在染色體上或連鎖群中，這方面的研究在家畜(禽)中已有一些利用。(4)進(jìn)行血緣鑒定和血緣控制，在育種中，系譜記錄是十分重要的，最早用于血型和血液蛋白多態(tài)性分析，但因多態(tài)性不夠豐富而讓位于DNA指紋技術(shù)。(5)用于群體遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)及起源的研究，Nei等_(1994)認(rèn)為，用微衛(wèi)星估計(jì)親緣關(guān)系較近的群體間的遺傳距離、繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)時(shí)，比其它的遺傳標(biāo)記技術(shù)更精確和聞效。
[0008] 鑒于上述微衛(wèi)星標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)，以及國(guó)內(nèi)外鮮于報(bào)道的有關(guān)長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)，在GenBank和EMBL等國(guó)際知名的大型生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)中目前還查不到長(zhǎng)爪沙鼠的基因組相關(guān)的序列，能查到的微衛(wèi)星位點(diǎn)僅有9個(gè)，且該9個(gè)位點(diǎn)在人工飼養(yǎng)群體中的多態(tài)性較差，因此目前長(zhǎng)爪沙鼠可用的微衛(wèi)星位點(diǎn)相當(dāng)有限。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是建立長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè)方法，進(jìn)而有助于長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立，從而規(guī)范長(zhǎng)爪沙鼠的生產(chǎn)和應(yīng)用。對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠的群體遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行全面、客觀(guān)、公正的評(píng)價(jià)，查清長(zhǎng)爪沙鼠的遺傳概貌、特點(diǎn)，為實(shí)現(xiàn)我國(guó)長(zhǎng)爪沙鼠的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化和資源保存，為提出長(zhǎng)爪沙鼠質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)技術(shù)規(guī)范奠定基礎(chǔ)。遺傳質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)建立，也將進(jìn)一步豐富和完善我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，為我國(guó)制定動(dòng)物源性生物技術(shù)藥物的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)規(guī)范提供支撐。
[0010]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明以群體遺傳學(xué)理論為依據(jù)，在匯集國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行篩選、組合與優(yōu)化，建立了適用于封閉群長(zhǎng)爪沙鼠遺傳檢測(cè)的方法，并運(yùn)用篩選出的微衛(wèi)星位點(diǎn)組合對(duì)國(guó)內(nèi)幾個(gè)長(zhǎng)爪沙鼠群體進(jìn)行遺傳多樣性分析。
[0011]—方面,本發(fā)明參考相關(guān)文獻(xiàn)從GenBank中共挑選出536個(gè)小鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)，進(jìn)行引物合成。首先摸索并進(jìn)一步優(yōu)化這些位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增條件；536個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)中經(jīng)過(guò)條件優(yōu)化后，獲得313個(gè)擴(kuò)增條帶清晰明亮、少或無(wú)雜帶的位點(diǎn)，將這些位點(diǎn)克隆測(cè)序后獲得129個(gè)長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)，以及微衛(wèi)星位點(diǎn)大小。在多態(tài)性篩選方面，本實(shí)驗(yàn)選用1.5%的瓊脂糖電泳篩選初步確定等位基因數(shù)目。匯集本實(shí)驗(yàn)室篩選的129個(gè)長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)和已經(jīng)報(bào)道的7個(gè)長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)，共計(jì)136個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)(DXMU39、DXMitl7、D19Mit21、D19Mitll、D19Mit9、D19Mit2、D19Mitl、D18Mit45、D18Mit49、D17Mitl3、D17Mit38、D17Mit42、D16Mit26、D16Mit7、D15Mit34、D15Mitl7、D14Mit6、D14Mit92、DllMit4、DllMit35、DllMit36、DllMit42、DllMitl28、DllMit263、D10Mit66、DlOMit86、D9Mit70、D9Mit55、D9Mit47、D9Mit6、D8Mitl84、D8Mit56、D8Mit35、D8Mit24、D7Mit26、D7Mit33、D7Mit46、D7Mit71、D7Mit227、D7Mit333、D7Ndsl、D6Mit5、D6Mit37、D6Mit52、D6Mit85、D6Mitl39、D5Mit9、D5Mit25、D5Mit34、D4Mitl、D4Mit5、D4Mit7、D3Mit258、D3Mitl30、D3Mit221、D3Mitll7、D3Mitl7、D2Mit76、D2Mit231、D2Mit425、D2Mit525、DlMit428、DlMit432、DlMitll9、DlMit65、D16Mitl70、D12Mitl35、D9Mit323、D9Mit253、D15Mit9、D16Mitl00、D17Mit27、D17Mitl94、DllMit242、D10Mit266、D8Mit46、D7Mitl45、D6Mit339、D4Mit54、D5Mit31、D13M8、D12Mit201、DllMitl63、D17Mitl23、D2Mit22、D2Mitl、D3Mit56、D3Mitl56、D4Mitl23、D6Mit9、D9Mitl20、D10Mit223、DllMitl20、DllMit65、D13Mit246、D14Mitl6、D15Mitl23、D15Mitl24、D17Mit36、DlMitll2、D2Mitl6.1、D3MitlO、D3Mit215、D5Mit367、D6Mit23、D7Mit39、D7Mit76、D8Mit83、D10Mit20、DllMit5、D8Mitl70、DlMit362、D3Mit268、D6Mitl02、D7Mitl90、D8Mitl70、D13Mitl、D13Mit3、D13Mitl71、D16Mitl21、D13Mit216、D15Mit267、D16Mitl08、D16Mitl32、D17Mitl43、D17Mitl94、D17Mit226、D6Mitl02 和 D10Mit90 ;AF200942、AF200943、AF200944、AF200946、AF200945、AF200941和AF200947)。根據(jù)位點(diǎn)的等位基因數(shù)、多態(tài)性和分布情況，從136個(gè)位點(diǎn)中選擇出多態(tài)性大于 3 的 39 個(gè)位點(diǎn)(AF200942、AF200943、AF200944、AF200946、AF200945、AF200941、AF200947、D 16Mit7、D 16Mit26、DlMit362、D8Mitl84、D7Mit33、D6Mit37、D5Mit31、D12Mit201、D2Mit22、D15Mitl24、DllMit36、D7Mit71、D2Mit76、D3Mitl30 、D19Mitl、DllMit35、D17Mit38、DXMitl7、D8Mit56、D10Mit66、D13Mitl、D3Mitl7、D15Mitl7、DllMit42、D17Mitl3、D19Mit9、DllMit4、D4Mit5、D3Mit56、D15Mit267、D6Mit9、D7Mit39)。這些位點(diǎn)均勻分布在染色體上，等位基因數(shù)平均3.7個(gè)。本發(fā)明篩選出的微衛(wèi)星位點(diǎn)信息含量高，分布廣泛，呈高度多態(tài)性，適合封閉群長(zhǎng)爪沙鼠遺傳檢測(cè)。
[0012]另一方面，本發(fā)明利用篩選出的39個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)分析已知的封閉群長(zhǎng)爪沙鼠群體-浙江封閉群長(zhǎng)爪沙鼠群體(ZF)、首都醫(yī)科大學(xué)長(zhǎng)爪沙鼠群體(CMU)和西北野生長(zhǎng)爪沙鼠群體(NW)，利用短串聯(lián)重復(fù)(STR)掃描技術(shù)得到該3個(gè)群體在39個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)上的基因型，錄入數(shù)據(jù)，運(yùn)用Popgene3.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。利用觀(guān)察等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、香隆指數(shù)、觀(guān)察雜合度、有效雜合度等指標(biāo)分析該群體的群體內(nèi)遺傳變異，分析時(shí)使用的位點(diǎn)數(shù)依次減少，最后找出能夠反映該長(zhǎng)爪沙鼠群體遺傳結(jié)構(gòu)的最少使用位點(diǎn)數(shù)量。結(jié)果顯示:運(yùn)用28個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)各群體的分析結(jié)果與39個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的分析結(jié)果沒(méi)有顯著性差異P > 0.05，據(jù)此確定對(duì)封閉群做遺傳檢測(cè)所需要的最少微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)目是 28 個(gè)(AF200942、AF200943、AF200944、AF200946、AF200945、AF200941、AF200947、D16Mit7、D16Mit26、DlMit362、D8Mitl84、D7Mit33、D6Mit37、D5Mit31、D12Mit201、D2Mit22、D15Mitl24、DllMit36、D7Mit71、D2Mit76、D3Mitl30、D19Mitl、DllMit35、D17Mit38、DXMitl7、D8Mit56、D10Mit66、D13Mitl)。
[0013]第三方面，本發(fā)明采用篩選出的28個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)分析國(guó)內(nèi)首都醫(yī)科大學(xué)長(zhǎng)爪沙鼠群體(CMU)、西北野生長(zhǎng)爪沙鼠群體(NW)、浙江封閉群長(zhǎng)爪沙鼠群體(ZF)、大連醫(yī)科大學(xué)長(zhǎng)爪沙鼠群體(DL)和廣州醫(yī)學(xué)院長(zhǎng)爪沙鼠群體(GZ)，利用STR掃描技術(shù)得到該5個(gè)群體在28個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)上的基因型，錄入數(shù)據(jù)，運(yùn)用Popgene3.2軟件，分別進(jìn)行了群體內(nèi)遺傳變異和群體間遺傳差異分析。群體內(nèi)遺傳變異選用平均觀(guān)察等位基因數(shù)、平均有效雜合度、平均觀(guān)察雜合度、香隆指數(shù)4個(gè)分析指標(biāo)。群體間遺傳差異采用奈氏標(biāo)準(zhǔn)遺傳距離(Nei’sstandard genetic distance, DS)、群體間遺傳分化系數(shù)Rst、分子方差分析(Analysisof Molecular Variance，AMQVA)。結(jié)果顯示五個(gè)群體的平均有效雜合度分別是0.6239、
0.6671,0.4185,0.4592,0.3972，表明首醫(yī)長(zhǎng)爪沙鼠群體、西北野生長(zhǎng)爪沙鼠群體兩個(gè)群體均具有較高的群內(nèi)遺傳變異，而浙江封閉群長(zhǎng)爪沙鼠群體、大連醫(yī)科大學(xué)長(zhǎng)爪沙鼠群體和廣州醫(yī)學(xué)院長(zhǎng)爪沙鼠群體三個(gè)群體的群內(nèi)變異較低，五個(gè)群體的變異程度為廣州醫(yī)學(xué)院長(zhǎng)爪沙鼠群體<浙江封閉群長(zhǎng)爪沙鼠群體<大連醫(yī)科大學(xué)長(zhǎng)爪沙鼠群體<首醫(yī)長(zhǎng)爪沙鼠群體<西北野生長(zhǎng)爪沙鼠群體。根據(jù)群體間遺傳分化系數(shù)Rst和奈氏標(biāo)準(zhǔn)遺傳距離得到的親緣關(guān)系鄰接樹(shù)可以看出廣州醫(yī)學(xué)院長(zhǎng)爪沙鼠群體與其它群體的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1為長(zhǎng)爪沙鼠基因組DNA0.8%瓊脂糖電泳圖， 1-10:為動(dòng)物編號(hào)。
[0015]圖2為位點(diǎn)D11MU4測(cè)序結(jié)果圖。
[0016]圖3為12只長(zhǎng)爪沙鼠在A(yíng)F200941座位瓊脂糖凝膠電泳圖，M為50bp Marker, 1-12為動(dòng)物編號(hào)。
[0017]圖4為純合子波形，主波大小172bp。
[0018]圖5為雜合子波形，第一個(gè)主波大小171bp，第二個(gè)主波大小183bp。
[0019]圖6為浙江封閉群長(zhǎng)爪沙鼠基因組DNA0.8%瓊脂糖電泳圖。[0020]圖7為AF200941位點(diǎn)在西北野生長(zhǎng)爪沙鼠群體的擴(kuò)增條帶圖片，M為50bpMarker, 1-20為動(dòng)物編號(hào)。
[0021]圖8為AF200941位點(diǎn)在西北野生長(zhǎng)爪沙鼠群體STR掃描結(jié)果帶圖片。
[0022]圖9為浙江封閉群長(zhǎng)爪沙鼠基因組DNA0.8%瓊脂糖電泳圖。
[0023]圖10為D2MU22位點(diǎn)擴(kuò)增條帶圖片，M為50bp Marker, 1-10為動(dòng)物編號(hào)。
[0024]圖11為D17MU38位點(diǎn)擴(kuò)增條帶圖片，M為50bp Marker, 1-12為動(dòng)物編號(hào)。
[0025]圖12為D7MU71位點(diǎn)擴(kuò)增條帶圖片，M為50bp Marker, 1-12為動(dòng)物編號(hào)。
[0026]圖13為D2MU22位點(diǎn)STR掃描結(jié)果帶圖片。
[0027]圖14為D17MU38位點(diǎn)STR掃描結(jié)果帶圖片。
[0028]圖15為D7MU71位點(diǎn)STR掃描結(jié)果帶圖片。
[0029]圖16為基于奈氏標(biāo)準(zhǔn)遺傳距離Ds的五個(gè)品系長(zhǎng)爪沙鼠的鄰接樹(shù)，Popl:CMU,pop2:NW, pop3:ZF, pop4:DL, pop5:GZ。
【具體實(shí)施方式】
[0030]實(shí)施例1
[0031]1.1 方法
[0032]長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)篩選實(shí)驗(yàn)采用首醫(yī)長(zhǎng)爪沙鼠群體和浙江長(zhǎng)爪沙鼠群體，首醫(yī)長(zhǎng)爪沙鼠群體16只、浙江長(zhǎng)爪沙鼠群體64只；采取腎組織，放入小無(wú)菌塑料袋中，_20°C冰凍保存?zhèn)溆谩?br> [0033]1.1.1長(zhǎng)爪沙鼠基因組DNA提取與檢測(cè)
[0034](I)取長(zhǎng)爪沙鼠腎組織約0.1g于勻漿器中，加入1.7ml EDTA-Na2 (pH = 8.0) (NaCl2.19g，EDTA-Na24.47g，用IOM NaOH調(diào)至pH = 8.0，加蒸餾水至500ml)溶液，勻漿磨碎。將勻漿好的組織液加入10% SDS 100 μ I至終濃度為0.5%，再加入20mg/ml蛋白酶KlO μ 1，充分混勻后，置于37°C水浴過(guò)夜。
[0035](2)加入等體積(2ml)的Tris-飽和酚，充分混勻后(避免劇烈振蕩)以12000r/min離心lOmin，含DNA的水相位于上層，含雜質(zhì)的有機(jī)相位于下層。吸取上清液于另一個(gè)
試管中，重復(fù)2~3次。
[0036](3)向上清液中加入等體積的飽和酹/氯仿(2ml)充分混勻，12000r/min離心IOmin0吸取上清液于另一個(gè)試管中，加入等體積的氯仿(2ml)充分混勻，12000r/min離心IOmin0
[0037](4)吸取上清液于另一個(gè)試管中，加入飽和NaCl 200 μ I混勻,然后加入3~5ml冷的無(wú)水乙醇，混勻，可見(jiàn)絮狀沉淀物出現(xiàn)。稍加離心，可見(jiàn)DNA沉淀團(tuán)，吸出無(wú)水乙醇，加入Iml 75%乙醇洗滌兩次，吸出乙醇，空氣中干燥DNA樣品。
[0038](5)視沉淀塊大小加入 100 μ I ~200 μ I TE 緩沖液(0.5Μ Tris, 2ml, 0.5M EDTA，
0.2ml，加蒸餾水至100ml)，充分溶解DNA。核酸蛋白分析儀測(cè)樣品濃度、OD260, OD280以及兩者比值。DNA樣品-20 0C保存?zhèn)溆谩?br> [0039]1.1.2微衛(wèi)星引物的選擇
[0040]實(shí)驗(yàn)選用536個(gè)小鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)，以及GenBank中Neumann k等[5]于2001年報(bào)道的長(zhǎng)爪沙鼠的9個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，引物序列參照相關(guān)數(shù)據(jù)(http://www.ncb1.nlm.nih.gov/pubmed/)。所有引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司以及北京基諾博實(shí)生物技術(shù)有限公司合成。
[0041]1.1.3PCR反應(yīng)以及瓊脂糖電泳檢測(cè)
[0042]使用首醫(yī)長(zhǎng)爪沙鼠群體16個(gè)樣本基因組DNA作為微衛(wèi)星位點(diǎn)篩選的PCR擴(kuò)增模版，篩選出長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)；使用浙江長(zhǎng)爪沙鼠群體64個(gè)樣本基因組DNA作為微衛(wèi)星位點(diǎn)優(yōu)化篩選的PCR擴(kuò)增模板，篩選多態(tài)性較好的長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)。PCR反應(yīng)體系為15μ 1，其中:10XBuffer 1.5μ 1，上下游引物(lOOpmol/μ I)各 I μ l，4XdNTP IOOymol/L:1μ I, Taq 酶 IU:1 μ I，50_100ng 基因組 DNA:1 μ I，純水(ddH20):8.5μ1 ;其中，Mg2+的終濃度為1.5~3.0mM。擴(kuò)增條件:94°C預(yù)變性5min，94°C變性30s，退火溫度(47~60°C )30s，72°C延伸30s，35個(gè)循環(huán)后72°C繼續(xù)延伸7min，擴(kuò)增產(chǎn)物4°C保存。取擴(kuò)增產(chǎn)物5μ I經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳140V，30min，成相拍照。
[0043]長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)篩選PCR擴(kuò)增分為兩步:第一步，對(duì)首都醫(yī)科大學(xué)長(zhǎng)爪沙鼠群體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并將PCR產(chǎn)物做克隆測(cè)序，篩選出長(zhǎng)爪沙鼠的微衛(wèi)星位點(diǎn)，并確定最佳擴(kuò)增條件。影響PCR擴(kuò)增結(jié)果的主要因素是Mg2+濃度和退火溫度，固定其它因素，Mg2+濃度設(shè)為1.5禮、2.01111、2.51111和3.01111 4個(gè)梯度，退火溫度根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期經(jīng)驗(yàn)溫度值從47°C~60°C設(shè)12個(gè)梯度。經(jīng)瓊脂糖電泳后，對(duì)條帶清晰、只有一條或兩條，且條帶大小位于微衛(wèi)星大小范圍內(nèi)的位點(diǎn)進(jìn)行克隆測(cè)序，測(cè)序結(jié)果符合微衛(wèi)星定義的記錄這個(gè)優(yōu)化的Mg2+濃度和退火溫度，并把該位點(diǎn)作為被選位點(diǎn)。第二步，將篩選出的129個(gè)長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)和GenBank中的7個(gè)位點(diǎn)(見(jiàn)表1.1)共136個(gè)對(duì)浙江長(zhǎng)爪沙鼠群體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，篩選擴(kuò)增效率高，多態(tài)性良好的適用于封閉群長(zhǎng)爪沙鼠遺傳檢測(cè)的微衛(wèi)星位點(diǎn)。將浙江長(zhǎng)爪沙鼠群體64個(gè)基因組DNA 4個(gè)一組，隨機(jī)分為隨機(jī)16組混合DNA。選用6個(gè)多態(tài)性較好的位點(diǎn)篩選多態(tài)性好的基因組DNA，用長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)多態(tài)性好的基因組DNA進(jìn)行PCR，PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳后，根據(jù)瓊脂糖電泳結(jié)果，初步判斷該位點(diǎn)的多態(tài)性，把等位基因數(shù)達(dá)到3個(gè)的位點(diǎn)保留，淘汰等 位基因數(shù)量小于3的位點(diǎn)。
[0044]1.2.結(jié)果
[0045]1.2.1基因組DNA分析
[0046]兩個(gè)長(zhǎng)爪沙鼠群體的基因組DNA (首醫(yī)長(zhǎng)爪沙鼠群體16個(gè)，浙江長(zhǎng)爪沙鼠群體64個(gè)，總計(jì)80個(gè))，經(jīng)0.8%瓊脂糖電泳檢測(cè)顯示完整性好；核酸蛋白分析儀檢測(cè)所有樣品的OD260/OD280值均在1.8~2.0之間。動(dòng)物編號(hào)1-10號(hào)的基因組DNA的瓊脂糖電泳圖如圖1。
[0047]1.2.2長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)的篩選
[0048]536個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)中擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)有清晰圖帶，且只有I條或2條，且擴(kuò)增結(jié)果有較好重復(fù)性，測(cè)序結(jié)果符合微衛(wèi)星位點(diǎn)特點(diǎn)的位點(diǎn)有129個(gè)，將序列測(cè)定的結(jié)果輸入Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)。表1.1中列出了這些長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的小鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)名稱(chēng)及Genbank注冊(cè)號(hào)。其中，完美型微衛(wèi)星104個(gè)(80.62%)，不完美型微衛(wèi)星25個(gè)(19.38% )0把這些位點(diǎn)作為被選位點(diǎn)。
[0049]表1.1 GenBank中的長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)名稱(chēng)、注冊(cè)號(hào)及對(duì)應(yīng)的小鼠位點(diǎn)名稱(chēng)
[0050]
【權(quán)利要求】
1.一種通過(guò)小鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)篩選長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)的方法，包括: 獲得一個(gè)長(zhǎng)爪沙鼠群體的長(zhǎng)爪沙鼠基因組DNA樣品； 從GenBank中挑選小鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)，進(jìn)行引物合成； 將所述長(zhǎng)爪沙鼠基因組DNA作為微衛(wèi)星位點(diǎn)篩選的PCR模板； 進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并確定最佳擴(kuò)增條件； 瓊脂糖電泳，篩選條帶清晰、無(wú)雜帶或少雜帶的微衛(wèi)星大小范圍內(nèi)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物； 對(duì)篩選出的PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆測(cè)序； 篩選出長(zhǎng)爪沙鼠的微衛(wèi)星位點(diǎn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中篩選出長(zhǎng)爪沙鼠微衛(wèi)星位點(diǎn)共129個(gè)，分別為DXMit39、DXMitl7、D19Mit21、D19Mitll、D19Mit9、D19Mit2、D19Mitl、D18Mit45、D18Mit49、D17Mitl3、D17Mit38、D17Mit42、D16Mit26、D16Mit7、D15Mit34、D15Mitl7、D14Mit6、D14Mit92、DllMit4、DllMit35、DllMit36、DllMit42、DllMitl28、DllMit263、DlOMit66、D10Mit86、D9Mit70、D9Mit55、D9Mit47、D9Mit6、D8Mitl84、D8Mit56、D8Mit35、D8Mit24、D7Mit26、D7Mit33、D7Mit46、D7Mit71、D7Mit227、D7Mit333、D7Nds 1、D6Mit5、D6Mit37、D6Mit52、D6Mit85、D6Mitl39、D5Mit9、D5Mit25、D5Mit34、D4Mitl、D4Mit5、D4Mit7、D3Mit258、D3Mitl30、D3Mit221、D3Mitll7、D3Mitl7、D2Mit76、D2Mit231、D2Mit425、D2Mit525、DlMit428、DlMit432、DlMitll9、DlMit65、D16Mitl70、D12Mitl35、D9Mit323、D9Mit253、D15Mit9、D16Mitl00、D17Mit27、D17Mitl94、DllMit242、D10Mit266、D8Mit46、D7Mitl45、D6Mit339、D4Mit54、D5Mit31、D13M8、D12Mit201、DllMitl63、D17Mitl23、D2Mit22、D2Mitl、D3Mit56、D3Mitl56、D4Mitl23、D6Mit9、D9Mitl20、D10Mit223、DllMitl20、DllMit65、D13Mit246、D14Mitl6、D15Mitl23、D15Mitl24、D17Mit36、DlMitll2、D2Mitl6.1、D3MitlO、D3Mit215、D5Mit367、D6Mit23、D7Mit39、D7Mit76、D8Mit83、D10Mit20、DllMit5、D8Mitl70、DlMit362、D3Mit268、D6Mitl02、D7Mitl90、D8Mitl70、D13Mitl、D13Mit3、D13Mitl71、D16Mitl21、D13Mit216、D15Mit267、D16Mitl08、D16Mitl32、D17Mitl43、D17Mitl94、D17Mit226、D6Mitl02、D10Mit90。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，PCR反應(yīng)的上下游引物對(duì)分別為SEQID NO:1和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和 SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9 和 SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11和 SEQ ID NO: 12、SEQ IDNO:13 和 SEQ ID NO: 14,SEQ ID N0:15 和 SEQ ID NO: 16、SEQ ID N0:17 和 SEQ ID NO: 18,SEQID NO:19 和 SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23 和 SEQID NO:24,SEQ ID N0:25 和 SEQ ID NO:26、SEQ ID N0:27 和 SEQ ID NO:28、SEQ ID N0:29 和 SEQID NO:30, SEQ ID NO:31 和 SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33 和 SEQID NO:34、SEQID NO:35和 SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:37和 SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:39和 SEQ IDNO:40、SEQ IDN0:41 和 SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43 和 SEQ ID NO:44、SEQ ID N0:45 和 SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47 和 SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49 和 SEQID NO:50、SEQID NO:51 和 SEQ IDNO:52,SEQ ID NO:53 和 SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:55 和 SEQ IDNO:56,SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59 和 SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61 和 SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63 和 SEQ ID NO:64,SEQ ID NO:65 和 SEQ ID NO:66、SEQID NO:67 和 SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69 和 SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:71 和 SEQ IDNO:72, SEQ ID NO:73 和 SEQ ID
4.一種對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠群體進(jìn)行遺傳檢測(cè)的方法，所述方法包括: 獲得長(zhǎng)爪沙鼠基因組DNA樣品； 選用適合于長(zhǎng)爪沙鼠群體遺傳檢測(cè)的微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物，以長(zhǎng)爪沙鼠基因組DNA樣品為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增； 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物； 短串聯(lián)重復(fù)掃描檢測(cè)； 利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法分析群體內(nèi)的遺傳變異性、群體間的遺傳距離。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述群體內(nèi)遺傳變異選用的分析指標(biāo)為平均觀(guān)察等位基因數(shù)、平均有效雜合度、平均觀(guān)察雜合度、香隆指數(shù)；所述群體間遺傳距離采用奈氏標(biāo)準(zhǔn)遺傳距離、群體間遺傳分化系數(shù)Rst、分子方差分析。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中選用39個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，包括權(quán)利要求2中所篩選的 32 個(gè)位點(diǎn):D16Mit7、D16Mit26、DlMit362、D8Mitl84、D7Mit33、D6Mit37、D5Mit31、D12Mit201、D2Mit22、D15Mitl24、DllMit36、D7Mit71、D2Mit76、D3Mitl30、D19Mitl、DllMit35、D17Mit38、DXMitl7、D8Mit56、D10Mit66、D13Mitl、D3Mitl7、D15Mitl7、DllMit42、D17Mitl3、D19Mit9、DllMit4、D4Mit5、D3Mit56、D15Mit267、D6Mit9 和 D7Mit39 ； 以及已知的 7 個(gè)位點(diǎn):AF200942、AF200943、AF200944、AF200946、AF200945、AF200941、AF200947。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中PCR反應(yīng)的上下游引物分別為SEQID NO:261和SEQ ID NO:262,SEQ ID NO:263 和 SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:265 和 SEQ ID NO:266、SEQID NO:267 和 SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:269 和 SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:271 和 SEQID NO:272, SEQ ID NO:273 和 SEQ ID NO:274、SEQ ID N0:27 和 SEQ ID NO: 28、SEQID NO:，25 和 SEQ ID NO:26、SEQ ID NO :223 和 SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:63 和 SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:71 和 SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:85 和 SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:159 和 SEQID NO:160,SEQ ID NO:163 和 SEQ ID NO: 164,SEQ ID NO:169 和 SEQ ID NO: 170、SEQ IDNO:195 和 SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:41 和 SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:75 和 SEQID NO:，76,SEQ ID NO:115和 SEQ ID N0:116、SEQ ID NO:107和 SEQ ID NO: 108,SEQ IDNO:13和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:39 和 SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:3 和 SEQ ID N0:4、SEQ ID NO:63 和 SEQ ID NO:64、SEQ ID N0:49 和 SEQ IDNO:50、SEQID NO:233 和 SEQ ID NO: 234,SEQ ID NO:113和 SEQ ID NO: 114、SEQ IDNO:31 和 SEQ IDNO:32,SEQ ID NO:43 和 SEQ ID NO:44,SEQ ID N0:19 和 SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:9 和SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:37 和 SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:101 和 SEQID NO:102、SEQ IDNO:173 和 SEQ ID NO: 174、SEQ ID NO:243 和 SEQ ID NO:244、SEQ IDNO: 93 和 SEQ ID NO:，94、SEQ ID NO:211 和 SEQ ID NO:212。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中選用28個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)AF200942、AF200943、AF200944、AF200946、AF200945、AF200941、AF200947、D 16Mit7、D 16Mit26、D lMit362、D8Mitl84、D7Mit33、D6Mit37、D5Mit31、D12Mit201、D2Mit22、D15Mitl24、DllMit36、D7Mit71、D2Mit76、D3Mitl30、D19Mitl、DllMit35、D17Mit38、DXMitl7、D8Mit56、D10Mit66和 D13Mitl。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，PCR反應(yīng)的上下游引物分別為SEQIDNO:，261 和 SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:263 和 SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:265 和 SEQ IDNO:，266,SEQ ID NO:267 和 SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:269 和 SEQ ID NO:270,SEQ IDNO:271和 SEQ ID NO:272,SEQ ID NO:273 和 SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:27和 SEQ IDNO:28,SEQID NO:25 和 SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:223 和 SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:63 和 SEQ IDNO:64,SEQ ID NO:71 和 SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:85 和 SEQ ID NO:86、SEQID NO:159 和SEQ ID NO:160,SEQ ID NO:163 和 SEQ ID NO: 164,SEQ ID NO:169 和 SEQID NO: 170、SEQID NO:195 和 SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:41 和 SEQ ID NO:42、SEQ IDNO:75 和 SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:115 和 SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:107 和 SEQ IDNO:108、SEQ ID NO:13 和 SEQ ID NO: 14,SEQ ID NO:39 和 SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO:22、SEQID NO:3 和 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:63 和 SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:49 和 SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:233 和 SEQ ID NO:234。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法的應(yīng)用，用于進(jìn)行長(zhǎng)爪沙鼠群體內(nèi)遺傳變異和群體間遺傳差異分析。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103484452SQ201210195672
【公開(kāi)日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2012年6月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月14日
【發(fā)明者】陳振文, 杜小燕, 路靜, 薩曉嬰, 賀爭(zhēng)鳴, 王超, 李長(zhǎng)龍 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)