專利名稱：一種利用圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種利用圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的方法。
背景技術(shù)：
脂肪酶廣泛的存在于動(dòng)植物和微生物中。植物中含脂肪酶較多的是油料作物的種子，如蓖麻籽、油菜籽，當(dāng)油料種子發(fā)芽時(shí)，脂肪酶能與其他的酶協(xié)同發(fā)揮作用催化分解油脂類物質(zhì)生成糖類，提供種子生根發(fā)芽所必需的養(yǎng)料和能量；動(dòng)物體內(nèi)含脂肪酶較多的是高等動(dòng)物的胰臟和脂肪組織，在腸液中含有少量的脂肪酶，用于補(bǔ)充胰脂肪酶對(duì)脂肪消化的不足，在肉食動(dòng)物的胃液中含有少量的丁酸甘油酯酶。在動(dòng)物體內(nèi)，各類脂肪酶控制著消化、吸收、脂肪重建和脂蛋白代謝等過程；細(xì)菌、真菌和酵母中的脂肪酶含量更為豐富。由于 微生物種類多、繁殖快、易發(fā)生遺傳變異，具有比動(dòng)植物更廣的作用pH、作用溫度范圍以及底物專ー性，且微生物來源的脂肪酶一般都是分泌性的胞外酶，適合于エ業(yè)化大生產(chǎn)和獲得高純度樣品，因此微生物脂肪酶是エ業(yè)用脂肪酶的重要來源，并且在理論研究方面也具有重要的意義。堿性脂肪酶是在堿性條件下水解的脂肪酶，生產(chǎn)的原料為小麥、玉米等農(nóng)副產(chǎn)物，通過生物發(fā)酵技術(shù)轉(zhuǎn)化。它可以水解天然油脂，產(chǎn)生脂肪酸和甘油，是ー種專門在異相系統(tǒng)油水接口上水解特殊酯類的酶。堿性脂肪酶是ー種新型洗滌劑用酶，主要用途是作為洗滌劑的新酶種。它的特性能分解衣物油污成甘油ニ脂、甘油単脂及脂肪酸等較易溶于水的物質(zhì)，從而顯著提高洗衣粉的洗滌效果，尤其是去除黃斑的效果。我們常用各種含酶洗衣粉，其中的酶制劑主要有堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。堿性脂肪酶則主要作用于脂肪酸及其酯類污物，也就是我們通常所指的油污類。
目前，脂肪酶主要采用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)，且一般都采用批次培養(yǎng)的エ藝。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的組成和培養(yǎng)條件以及流加批次培養(yǎng)エ藝都對(duì)脂肪酶的產(chǎn)酶水平影響很大。研究中本專利以圓弧青霉為出發(fā)菌株，對(duì)影響發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的表明活性剤、鹽類、培養(yǎng)基初始PH及溶氧進(jìn)行了研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了ー種利用圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的方法，本專利以圓弧青霉為出發(fā)菌株，對(duì)影響發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的表明活性剤、鹽類、培養(yǎng)基初始PH及溶氧進(jìn)行了研究。I. ー種利用圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的方法，其特征在于發(fā)酵吋，250 mL的三角瓶中裝入一定量的發(fā)酵培養(yǎng)基，接種ー環(huán)孢子，于旋轉(zhuǎn)式搖床上30°C培養(yǎng)96 h，搖床轉(zhuǎn)速 250 r/min。2.步驟I所述的發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):豆餅粉3. O、玉米漿3. O、大豆磷脂0. 5-1. 0，磷酸氫ニ鉀0. 5-1. 5，硫酸鎂0.05-0. 2，豆油1.0 ;不同初始pH，121°C下滅菌30 min。3.步驟2所述的大豆磷脂為最優(yōu)的表面活性劑，最佳濃度為0. 75 g/L。4.步驟2所述的磷酸氫ニ鉀的最佳濃度為I. 0 g/L，硫酸鎂的最佳濃度為0. I g/
し5.步驟2所述的初始pH最佳為8. O。6.步驟I所述的最佳裝液量為25 mL/250 mL。



圖I培養(yǎng)基初始pH值對(duì)圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的影響；
圖2搖瓶裝液量對(duì)圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的影響。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明，但對(duì)本發(fā)明沒有限制。本專利所用的菌株為圓弧青霉，購買于CGMCC，編號(hào)為CGMCC3. 4041。實(shí)施例I
本實(shí)施例說明表面活性劑對(duì)圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的影響，由于表面活性劑能改變細(xì)胞膜的通透性和改善氧在氣液界面的傳遞速度。因此在培養(yǎng)基中添加某些表面活性劑能提高酶的產(chǎn)率，分別試驗(yàn)了吐溫40、吐溫60、吐溫80、卵磷脂、大豆磷脂、聚醚330為表面活性劑6種表面活性劑對(duì)菌株產(chǎn)酶的影響。結(jié)果如表I所示。由表I可以看出，磷脂對(duì)脂肪酶的合成有明顯的促進(jìn)作用，其中尤以卵磷脂最佳但考慮到成本和來源，所以選擇價(jià)格低廉、來源豐富的大豆磷脂，最佳濃度為0. 75 g/L。
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本實(shí)施例說明鹽類對(duì)圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的影響，在培養(yǎng)基中分別添加琥珀酸鈉、磷酸氫ニ鉀和硫酸鎂等鹽類，結(jié)果見表2。
由表2可以看出，在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，琥珀酸鈉抑制脂肪酶的合成，磷酸氫ニ鉀和硫酸鎂卻能促進(jìn)脂肪酶的合成。磷酸氫ニ鉀和硫酸鎂的最佳濃度分別為1.0 g/L和0. I g/L。
表I鹽類對(duì)_弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)減性脂肪酶的影響
權(quán)利要求
1.一種利用圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的方法，其特征在于發(fā)酵時(shí)，250 mL的三角瓶中裝入一定量的發(fā)酵培養(yǎng)基，接種一環(huán)孢子，于旋轉(zhuǎn)式搖床上30°C培養(yǎng)96 h，搖床轉(zhuǎn)速250 r/min。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，發(fā)酵培養(yǎng)基豆餅粉3.0g/L、玉米漿3.0g/L、大豆磷脂 0. 5-1.0 g/L，磷酸氫二鉀 0. 5-1. 5 g/L，硫酸鎂 0.05-0. 2 g/L，豆油 1.0 g/L ;不同初始pH, 121°C下滅菌30 min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于大豆磷脂為表面活性劑，濃度為0.75g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于磷酸氫二鉀的濃度為1.0g/L，硫酸鎂的濃度為 0. I g/Lo
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于初始pH為8.O。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于裝液量為25mL/250 mL。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種利用圓弧青霉發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的方法，本專利以圓弧青霉為出發(fā)菌株，對(duì)影響發(fā)酵生產(chǎn)堿性脂肪酶的表明活性劑、鹽類、培養(yǎng)基初始pH及溶氧進(jìn)行了研究。
文檔編號(hào)C12N9/20GK102766612SQ20121020933
公開日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月25日
發(fā)明者張斌 申請(qǐng)人:蘇州百趣食品有限公司