專利名稱：酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
白酒酒糟是釀酒工業(yè)中的主要副產(chǎn)品，如果酒糟不及時(shí)加以處理，就會(huì)腐敗變質(zhì)，不僅浪費(fèi)了寶貴的資源，還會(huì)嚴(yán)重污染周圍環(huán)境，因而充分而有效的對(duì)酒糟加以綜合利用，既可以減輕環(huán)境污染，又可以節(jié)約糧食、降低成本，因此，酒糟的綜合利用對(duì)我國(guó)的資源開(kāi)發(fā)和環(huán)境保護(hù)具有十分重要的意義。利用酒糟再發(fā)酵生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)白酒，通過(guò)技術(shù)手段進(jìn)一步利用酒糟中的可發(fā)酵性淀粉，降低糧耗，實(shí)現(xiàn)資源的循環(huán)利用，節(jié)約成本。酒糟中可發(fā)酵性淀粉的定義在合適溫度、PH值等的條件下，酒糟中能夠被淀粉酶水解為小分子的糊精或麥芽糖，然后被糖化酶糖化為可發(fā)酵性的糖類，如葡萄糖、果糖等，最后被酵母菌充分利用， 發(fā)酵產(chǎn)生酒精和二氧化碳，放出一定生物熱量的淀粉。目前，酒糟中可發(fā)酵性淀粉含量的測(cè)定尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，所以，酒廠的酒糟都沒(méi)有測(cè)定過(guò)其中的可發(fā)酵性淀粉含量，不能夠準(zhǔn)確的評(píng)估酒糟的可利用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可為酒糟的綜合利用提供理論依據(jù)的酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法。本發(fā)明的酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，包括以下步驟
I、試樣處理
(I)、液化，每甑各取等量剛出甑的酒糟，相互混合均勻，稱取酒糟樣品質(zhì)量m=50-100g，置于放有折疊濾紙的漏斗內(nèi)，用300ml、85%的乙醇洗去可溶性糖類，濾干乙醇，將殘留物移A 500 ml燒杯內(nèi)，并用IOOml水洗濾紙，洗液并入燒杯內(nèi)，再加入150 ml水于燒杯內(nèi)，將燒杯置沸水浴上加熱15min，使淀粉糊化，冷卻至60°C以下，加20ml、5g/L的淀粉酶溶液，在55-60°C保溫lh，并同時(shí)攪拌，然后取I滴此液加I滴碘溶液,若顯藍(lán)色,再加熱糊化并加淀粉酶溶液，繼續(xù)保溫，直至加碘不顯藍(lán)色為止，加熱至沸，冷后移入250 ml三角瓶中，并加水至刻度，混勻；
所述的鵬溶液稱取3. 6g鵬化鐘溶于20m水中，加入I. 3 g鵬，溶解后加水定各至IOOml ；
所述的淀粉酶為a -淀粉酶，酶活力大于或等于20，000u/g。(2)、蒸煮，將裝有已液化酒糟糊的三角瓶用棉塞和防水紙封口后，放入高壓蒸汽滅菌鍋，于壓力0. IMPa保壓lh，取出，冷卻至60°C。(3)、糖化，用硫酸溶液調(diào)整蒸煮液pH值至4. 4-4. 7，按每克酒糟加入150u_200u糖化酶，糖化酶的活力大于或等于50，000u/g，當(dāng)糖化酶活力為100000U /g，酒糟的量為50g時(shí)，加入糖化酶的量為50 X 200 + 100000g=0. Ig,攪勻，放入60°C恒溫箱內(nèi)，糖化60min，冷卻至 30°C - 35°C。
(4)過(guò)濾，糖化液用脫脂棉過(guò)濾，濾液用250ml容量瓶接收，用水洗滌殘?jiān)盟ǜ髦量潭?，fe勾。2、測(cè)定:
(I)、標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液，吸取5. Oml堿性酒石酸銅甲液及5. Oml堿性酒石酸銅乙液，置于150ml錐形瓶中，加水IOml，加入玻璃珠2粒，沸騰時(shí)使溶液均勻，并防止暴沸，從滴定管滴加9ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每?jī)擅胍坏蔚乃俣壤^續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好退去即為終點(diǎn)，記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，同法平行操作三份，取其平均值，計(jì)算每IOml (甲乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量A (mg)；
所述的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取lg，經(jīng)過(guò)98°C 100°C干燥2h的葡萄糖，加水溶解后加A5ml鹽酸，并以水定容至1000ml，此溶液每毫升相當(dāng)于I. Omg葡萄糖。(2)、試樣溶液預(yù)測(cè)，吸取5. Oml堿性酒石酸銅甲液及5. Oml堿性酒石酸銅乙液,置 于150ml錐形瓶中，加水IOml，加入玻璃珠兩粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，保持沸騰，以先快后慢的速度從滴定管中滴加試樣溶液，待溶液顏色變淺時(shí)，再以每?jī)擅胍坏蔚乃俣鹊味ǎ敝了{(lán)色剛好退去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。(3)、試樣溶液測(cè)定，吸取5. Oml堿性酒石酸銅甲液及5. 0 ml堿性酒石酸銅乙液，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預(yù)測(cè)體積少Iml的試樣溶液至錐形瓶中，并在2min內(nèi)加熱至沸，保持沸騰繼續(xù)以每?jī)擅胍坏蔚乃俣鹊味?，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗樣液體積V。所述的堿性酒石酸銅甲液稱15g硫酸銅(CuSO4 5H20)及0. 050g亞甲藍(lán)，溶于水中并定容至IOOOml ；
所述的堿性酒石酸銅乙液稱取50g酒石酸鉀鈉、75g氫氧化鈉，溶于水中，完全溶解后，用水定容至1000ml。3、 結(jié)果計(jì)算，試樣中葡萄糖的含量X = A
-；-XlOO ，
mXV/250X1000式中
X——酒糟中還原糖的含量(以葡萄糖計(jì))，單位為克每百克；
A堿性酒石酸銅溶液(甲液、乙液各半)相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量(mg)； m------稱取酒糟的質(zhì)量，單位為克；
V------測(cè)定時(shí)平均消耗酒糟溶液的體積，單位為毫升；
酒糟中可發(fā)酵性淀粉的含量Y = XX0. 9，式中
Y------酒糟中可發(fā)酵性淀粉的含量，單位為克每百克；
0.9一一以葡萄糖計(jì)換算成淀粉的換算系數(shù)。本發(fā)明的酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，利用試樣經(jīng)去除可溶性糖后，淀粉用淀粉酶水解成糊精和小分子雙糖，再用糖化酶糖化成可發(fā)酵性的單糖，最后按還原糖測(cè)定，并折算成可發(fā)酵性淀粉含量，通過(guò)測(cè)定酒糟中的可發(fā)酵性淀粉，為酒糟的綜合利用提供理論依據(jù)。所用的儀器和藥品簡(jiǎn)單，能準(zhǔn)確快速測(cè)定酒糟中可發(fā)酵性淀粉含量，通過(guò)先測(cè)定可發(fā)酵性淀粉含量，判定酒糟能否進(jìn)一步利用。
具體實(shí)施例方式一種酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，包括以下步驟
I、試樣處理
(I)稱取酒糟50g用300ml 85%乙醇沖洗酒糟樣品，過(guò)濾掉乙醇，將殘留物500 ml燒杯內(nèi)，并用IOOml水洗濾紙，洗液并入燒杯內(nèi)，再加入150 ml水于燒杯內(nèi)，將燒杯置沸水浴上加熱15 min，使淀粉糊化，冷卻至60°C以下，加20 ml淀粉酶溶液，在55°C _60°C保溫Ih，并同時(shí)攪拌，然后取I滴此液加I滴碘溶液，若顯藍(lán)色,再加熱糊化并加淀粉酶溶液,繼續(xù)保溫，直至加碘不顯藍(lán)色為止，50g酒糟的用酶量40ml，加熱至沸，冷后移入250 ml三角瓶中，并加水至刻度。(2)、蒸煮，將裝有已液化好酒糟糊的三角瓶用棉塞和防水紙封口后，放入高壓蒸 汽滅菌鍋，于壓力0. IMPa保壓lh，取出，冷卻至60°C。(3)、糖化，用10%的硫酸溶液調(diào)整蒸煮液pH值至4. 6，加入糖化酶量0. lg，攪勻，放入60°C恒溫箱內(nèi)，糖化60min，冷卻至30°C -35°C。
(4)過(guò)濾，糖化液用脫脂棉過(guò)濾，濾液用250ml容量瓶接收，用水洗滌殘?jiān)?，用水定容至刻度，fe勾。2、測(cè)定
(I)、標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液，吸取5. Oml堿性酒石酸銅甲液及5. Oml堿性酒石酸銅乙液，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加9ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每?jī)擅胍坏蔚乃俣壤^續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好退去即為終點(diǎn)，記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，同法平行操作三份，取其平均值為13. 3ml，計(jì)算每IOml (甲乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量A (mg)，這里 A=13. 3mg。(2)、試樣溶液預(yù)測(cè)，吸取5. Oml堿性酒石酸銅甲液及5. Oml堿性酒石酸銅乙液,置于150ml錐形瓶中，加水IOml，加入玻璃珠兩粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，保持沸騰，以先快后慢的速度從滴定管中滴加試樣溶液，待溶液顏色變淺時(shí)，再以每?jī)擅胍坏蔚乃俣鹊味ǎ敝了{(lán)色剛好退去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積，為3ml。(3)、試樣溶液測(cè)定，吸取5. Oml堿性酒石酸銅甲液及5.0 ml堿性酒石酸銅乙液，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加4 ml的試樣溶液至錐形瓶中，使在2min內(nèi)加熱至沸，保持沸騰繼續(xù)以每?jī)擅胍坏蔚乃俣鹊味?，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗樣液體積V，平均值為
2.9ml03、結(jié)果計(jì)算
X = mXv/Jqxiqqq XlOO
權(quán)利要求
1.一種酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，其特征在于它包括以下步驟 (1)、試樣處理 (a)、液化，每甑各取等量剛出甑的酒糟，相互混合均勻，稱取酒糟樣品質(zhì)量m=50-100g，置于放有折疊濾紙的漏斗內(nèi)，用300ml、85%的乙醇洗去可溶性糖類，濾干乙醇，將殘留物移A 500ml燒杯內(nèi)，并用IOOml水洗濾紙，洗液并入燒杯內(nèi)，再加入150ml水于燒杯內(nèi)，將燒杯置沸水浴上加熱15min，使淀粉糊化，冷卻至60°C以下，加20ml、5g/L的淀粉酶溶液，在55-60°C保溫lh，并同時(shí)攪拌，然后取I滴此液加I滴碘溶液,若顯藍(lán)色,再加熱糊化并加淀粉酶溶液，繼續(xù)保溫，直至加碘不顯藍(lán)色為止，加熱至沸，冷后移入250ml三角瓶中，并加水至刻度，混勻； (b)、蒸煮，將裝有已液化酒糟糊的三角瓶用棉塞和防水紙封口后，放入高壓蒸汽滅菌鍋，于壓力0. IMPa保壓lh，取出，冷卻至60°C ； (C)、糖化，用硫酸溶液調(diào)整蒸煮液pH值至4. 4-4. 7，按每克酒糟加入150u-200u糖化酶，攪勻，放入60°C恒溫箱內(nèi)，糖化60min，冷卻至30°C -35°C ； (d)過(guò)濾，糖化液用脫脂棉過(guò)濾，濾液用250ml容量瓶接收，用水洗滌殘?jiān)?，用水定容至刻度，搖勾; (2)測(cè)定 (a)、標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液，吸取5.Oml堿性酒石酸銅甲液及5. Oml堿性酒石酸銅乙液，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加9ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每?jī)擅胍坏蔚乃俣壤^續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好退去即為終點(diǎn)，記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，同法平行操作三份，取其平均值，計(jì)算每IOml堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量A ; (b)、試樣溶液預(yù)測(cè)，吸取5.Oml堿性酒石酸銅甲液及5. Oml堿性酒石酸銅乙液,置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠兩粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，保持沸騰，以先快后慢的速度從滴定管中滴加試樣溶液，待溶液顏色變淺時(shí)，再以每?jī)擅胍坏蔚乃俣鹊味ǎ敝了{(lán)色剛好退去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積； (C)、試樣溶液測(cè)定，吸取5. Oml堿性酒石酸銅甲液及5. Oml堿性酒石酸銅乙液,置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預(yù)測(cè)體積少Iml的試樣溶液至錐形瓶中，并在2min內(nèi)加熱至沸，保持沸騰繼續(xù)以每?jī)擅胍坏蔚乃俣鹊味?，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗樣液體積V ； (3)、結(jié)果計(jì)算，試樣中葡萄糖的含量
2.如權(quán)利要求I所述的酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，其特征在于所述的碘溶液制備方法，稱取3. 6g碘化鉀溶于20m水中，加入I. 3 g碘,溶解后加水定容至100ml。
3.如權(quán)利要求I所述的酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，其特征在于所述的淀粉酶為a -淀粉酶，酶活力大于或等于20000u/g。
4.如權(quán)利要求I所述的酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，其特征在于糖化酶的活力大于或等于50000u/g。
5.如權(quán)利要求I所述的酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，其特征在于所述的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液制備方法，稱取lg，經(jīng)過(guò)98°C 100°C干燥2h的葡萄糖，加水溶解后加入5ml鹽酸，并以水定容至1000ml，此溶液每毫升相當(dāng)于I. Omg葡萄糖。
6.如權(quán)利要求I所述的酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，其特征在于所述的堿性酒石酸銅甲液制備方法，稱15g硫酸銅及0. 050g亞甲藍(lán),溶于水中并定容至IOOOml ;所述的堿性酒石酸銅乙液制備方法，稱取50g酒石酸鉀鈉、75g氫氧化鈉，溶于水中，完全溶解后，用水定容至1000ml。
全文摘要
一種酒糟中可發(fā)酵性淀粉酶水解測(cè)定方法，其步驟是，試樣經(jīng)去除可溶性糖后，淀粉用淀粉酶水解成糊精和小分子雙糖，再用糖化酶糖化成可發(fā)酵性的單糖，最后按還原糖測(cè)定，并折算成可發(fā)酵性淀粉含量，利用所產(chǎn)酒精的含量計(jì)數(shù)可發(fā)酵性淀粉的含量。本發(fā)明的方法有較強(qiáng)的可靠性，通過(guò)測(cè)定酒糟中的可發(fā)酵性淀粉，為酒糟的綜合利用提供理論依據(jù)，所用的儀器和藥品簡(jiǎn)單，能準(zhǔn)確快速測(cè)定酒糟中可發(fā)酵性淀粉含量，通過(guò)先測(cè)定可發(fā)酵性淀粉含量，判定酒糟能否進(jìn)一步利用。
文檔編號(hào)C12Q1/40GK102776265SQ201210212260
公開(kāi)日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月26日
發(fā)明者嚴(yán)偉, 劉建文, 吳生文, 廖昶, 陳飛 申請(qǐng)人:四特酒有限責(zé)任公司