專利名稱：魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從魚類加工副產(chǎn)物中提取酶的方法，尤其涉及一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝。
背景技術(shù)：
魷魚是生活在海洋中的無脊椎動物，每年全球食用量非常大，而魷魚有30%左右的頭、足、內(nèi)臟及表皮等廢棄物，其中內(nèi)臟占15. 92%，通常被廢棄和就地掩埋處理，這樣既沒有充分開發(fā)魷魚附加值，造成其中蛋白質(zhì)資源的極大浪費(fèi)，而且還存在著環(huán)境污染的隱患。隨著魷魚加工業(yè)的不斷發(fā)展，加工下腳料中內(nèi)臟占大部分，魷魚內(nèi)臟中含有豐富的酶，但至今還沒有對其進(jìn)行提取方法的研究。目前對魷魚內(nèi)臟的利用主要集中在利用蛋白酶從魷魚內(nèi)臟中提取魚油和用其生產(chǎn)“魷溶漿”，該法利用內(nèi)源蛋白酶的自溶作用將魷魚內(nèi)臟液化，以得到蛋白水解液，但通過自溶作用獲得的水解液存在明顯的苦澀味和腥臭味，產(chǎn)品風(fēng) 味差。因此，有效地處理魷魚廢棄物并進(jìn)行高值化綜合利用，具有較大的經(jīng)濟(jì)和環(huán)保價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提取方法設(shè)計(jì)合理、能將魷魚廢棄物進(jìn)行綜合利用的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝，其特點(diǎn)是其步驟如下以新鮮的或者解凍后的魷魚內(nèi)臟為原料，將水浙干后，用組織勻漿機(jī)處理成漿狀；然后按質(zhì)量體積比1:2-4向勻漿后的原料中加入PH7. 5的磷酸鹽緩沖液，常溫下攪拌浸提2-4h，得魷魚內(nèi)臟酶液;過濾，濾液在-20°C _40°C下保藏，或者對濾液進(jìn)行冷凍干燥處理，即得到魷魚內(nèi)臟酶粉。本發(fā)明所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝中過濾時(shí)優(yōu)選使用板框壓濾機(jī)壓濾，過60目篩。本發(fā)明所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝中保藏的溫度條件最佳為-23. 5°C。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法以魷魚加工廢棄物為原料，從中提取內(nèi)臟酶，有效利用魷魚加工過程中的副產(chǎn)物一內(nèi)臟，變廢為寶，避免了其中蛋白資源的浪費(fèi)，減少對環(huán)境的污染。該工藝簡單，生產(chǎn)成本低，高效節(jié)能，本發(fā)明所得酶粉活性高，穩(wěn)定性強(qiáng)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，工藝簡單，生產(chǎn)周期短，提取率高，高效節(jié)能，適合工業(yè)化生產(chǎn)，有很好的經(jīng)濟(jì)效益和廣闊的應(yīng)用前景。


圖I為L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施例方式以下進(jìn)一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對其權(quán)利的限制。實(shí)施例1，一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝，其步驟如下以新鮮的或者解凍后的魷魚內(nèi)臟為原料，將水浙干后，用組織勻漿機(jī)處理成漿狀；然后按質(zhì)量體積比1:3向勻漿后的原料中加入PH7. 5的磷酸鹽緩沖液，常溫下攪拌浸提3h，得魷魚內(nèi)臟酶液；過濾，濾液在-23. 5°C下保藏，或者對濾液進(jìn)行冷凍干燥處理，即得到魷魚內(nèi)臟酶粉。實(shí)施例2，一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝，其步驟如下以新鮮的或者解凍后的魷魚內(nèi)臟為原料，將水浙干后，用組織勻漿機(jī)處理成漿狀；然后按質(zhì)量體積比1:2向勻漿后的原料中加入PH7. 5的磷酸鹽緩沖液，常溫下攪拌浸提2h，得魷魚內(nèi)臟酶液；過濾，濾液在_20°C下保藏，或者對濾液進(jìn)行冷凍干燥處理，即得到魷魚內(nèi)臟酶粉。實(shí)施例3，一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝，其步驟如下以新鮮的或者解凍后的魷魚內(nèi)臟為原料，將水浙干后，用組織勻漿機(jī)處理成漿狀；然后按質(zhì)量體積比I: 4向勻漿后的原料中加入PH7. 5的磷酸鹽緩沖液，常溫下攪拌浸提4h，得魷魚內(nèi)臟酶液;過濾，濾液在_40°C下保藏，或者對濾液進(jìn)行冷凍干燥處理，即得到魷魚內(nèi)臟酶粉。 實(shí)施例4，實(shí)施例I或2或3所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝中，過濾時(shí)使用板框壓濾機(jī)壓濾，過60目篩。酶是一種能催化反應(yīng)過程的蛋白質(zhì)，本發(fā)明通過酶活力的測定來驗(yàn)證所提取出來的物質(zhì)是酶。蛋白酶在20°C、pH為7的條件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸終止酶反應(yīng)，并將未水解的酪素沉淀除去，濾液對紫外光有吸收，可用紫外分光光度法測定。根據(jù)吸光度計(jì)算其酶活力。酶活單位的定義每ImL粗酶液，在一定溫度和pH值條件下，Imin水解酪素產(chǎn)生Iug酪氨酸為一個(gè)酶活力單位，以(u/mL)表示。I、繪制L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線
(1)取O.05g L-酪氨酸溶于純水中，定容至25ml，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液I，其濃度為2mg/ml ；
(2)將標(biāo)準(zhǔn)溶液I稀釋一倍作為標(biāo)準(zhǔn)溶液2，其濃度為lmg/ml；
(3)將標(biāo)準(zhǔn)溶液2稀釋一倍作為標(biāo)準(zhǔn)溶液3，其濃度為O.5mg/ml ；
(4)將標(biāo)準(zhǔn)溶液3稀釋一倍作為標(biāo)準(zhǔn)溶液4，其濃度為O.25mg/ml ；
(5)再將標(biāo)準(zhǔn)溶液4稀釋一倍作為標(biāo)準(zhǔn)溶液5，其濃度為O.125mg/ml ；
(6)取標(biāo)準(zhǔn)溶液1、2、3、4、5各I.4ml，分別加O. 65ml 22. 5%三氯乙酸溶液，于290nm測其吸光度；
(7)根據(jù)測得的吸光度值A(chǔ)為為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度c為橫坐標(biāo)作出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、酶活力的測定
先將酪蛋白溶液放入40±0. 2°C恒溫水浴中，預(yù)熱5min，吸取適量稀釋的酶液2ml于試管中，加入酪蛋白2ml搖勻后放入20°C恒溫水浴中反應(yīng)20min，加入4ml 22. 5%三氯乙酸溶液震蕩搖勻后置于冰水浴中l(wèi)Omin，取出室溫條件下6000r/min離心15 min，取上清液過濾，290nm測其吸光度?？瞻诪橄劝牙业鞍着c三氯乙酸混合IOmin后再加酶液，然后與反應(yīng)液共同離心測吸光度值，以蒸餾水校準(zhǔn)儀器。在20°C下每毫升酶液每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生I μ g酪氨酸，定義為I個(gè)蛋白酶活力單位。X = AXKX 8/2 X 1/20 XnXE = 1/5 XAXKXnXE 式中X——樣品的酶活力，(u/mL)；
A——試樣溶液的平均吸光度；
K——吸光常數(shù)；
8——反應(yīng)試劑的總體積，mL ；
2——吸取酶液2. OOmL ；
1/10-反應(yīng)時(shí)間IOmin,以Imin計(jì)； η——稀釋倍數(shù)
E——紫外法與福林法的換算系數(shù)(中性、堿性蛋白酶系數(shù)為O. 50)。所得結(jié)果表示至整數(shù)。所得酶液活力不低于12u/mL。
權(quán)利要求
1.一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝，其特征在于其步驟如下以新鮮的或者解凍后的魷魚內(nèi)臟為原料，將水浙干后，用組織勻漿機(jī)處理成漿狀；然后按質(zhì)量體積比1:2-4向勻漿后的原料中加入PH7. 5的磷酸鹽緩沖液，常溫下攪拌浸提2-4h，得魷魚內(nèi)臟酶液；過濾，濾液在-20°C _40°C下保藏，或者對濾液進(jìn)行冷凍干燥處理，即得到魷魚內(nèi)臟酶粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝，其特征在于過濾時(shí)使用板框壓濾機(jī)壓濾，過60目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝，其特征在于保藏的溫度條件為-23. 5。。。
全文摘要
本發(fā)明是一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝，其步驟如下以新鮮的或者解凍后的魷魚內(nèi)臟為原料，將水瀝干后，用組織勻漿機(jī)處理成漿狀；然后按質(zhì)量體積比1:2-4向勻漿后的原料中加入pH7.5的磷酸鹽緩沖液，常溫下攪拌浸提2-4h，得魷魚內(nèi)臟酶液；過濾，濾液在-20℃～-40℃下保藏，或者對濾液進(jìn)行冷凍干燥處理，即得到魷魚內(nèi)臟酶粉。本發(fā)明方法以魷魚加工廢棄物為原料，從中提取內(nèi)臟酶，有效利用魷魚加工過程中的副產(chǎn)物，避免了其中蛋白資源的浪費(fèi)，減少對環(huán)境的污染。該工藝簡單，生產(chǎn)成本低，高效節(jié)能，本發(fā)明所得酶粉活性高，穩(wěn)定性強(qiáng)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，工藝簡單，生產(chǎn)周期短，提取率高，高效節(jié)能，適合工業(yè)化生產(chǎn)，有很好的經(jīng)濟(jì)效益和廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號C12N9/64GK102864134SQ20121021795
公開日2013年1月9日 申請日期2012年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月28日
發(fā)明者陳憶鳳, 朱勤, 張俊杰, 段蕊 申請人:江蘇天福萊集團(tuán)有限公司