專利名稱：C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種檢測試劑盒，確切講是一種用于檢測?；蜇i或羊以及相關?；蜇i或羊的產品是否感染C型口蹄疫病毒的試劑盒。
背景技術：
口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD)是一種由口蹄疫病毒(Foot and mouthdisease virus,FMDV)引起的危害牛、豬、羊等偶蹄動物的嚴重的急性熱性高度接觸性傳染病。由于其傳播速度快，不易控制和消滅，嚴重危害世界動物貿易，被世界衛(wèi)生組織列為必須上報傳染病之一。口蹄疫病毒屬于微核糖核酸病毒科(picornaviridas)中的口蹄疫病毒屬(aphthavirus)。共包括 A、C、O、Asia I、SAT I、SAT II 及 SAT III 型 7 個血清型，各血清型之間無交叉保護力。FMDV的病毒粒子直徑20-25nm，為正二十面體結構，近似圓形；基因組為全長8，500 (nt)的正鏈RNA,包括一個開放閱讀框(open reading frame, 0RF), 5’-非編碼區(qū)(5，-Untraslated Region, 5，-UTR)和 3，-非編碼區(qū)(3，-Untraslated Region,3’ _UTR);0RF編碼病毒多聚蛋白，依賴于自身編碼的蛋白酶(L、2A、3C)及少數的宿主因子，在經過3級裂解后，形成4種病毒結構蛋白(VP4、VP2、VP3和VPl)和9種非結構蛋白(Lab、Lb、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D);四種結構蛋白各60分子構成病毒顆粒，VPl靠近由五個原粒組成病毒表面的小洞，VP2和VP3位于遠端，VP4則完全位于衣殼里面。盡管目前國內外對口蹄疫的病原學、血清分型、診斷做了大量的研究，但口蹄疫病毒幾乎遍及世界各地，口蹄疫對偶蹄類經濟動物的威脅眾所周知，它的發(fā)病率和造成的經濟至今仍為各類傳染病之首。為了確定口蹄疫是否在某一地區(qū)存在，檢測動物血清抗體的方法并非完全可靠，還必須通過通過病原學檢測以確診病原的存在。一般檢測方法為生物學實驗、血清型診斷技術和分子生物學技術等診斷技術，但是這些方法有的敏感性不高、有的特異性不強、有的檢出率較低，即使病毒分離技術被認為是檢測口蹄疫的金標準，但其確認結果至少需要7天，檢測周期太長，并且這些技術普遍費用太高，存在二次散毒的隱患，一般基層很難開展此項工作。C型口蹄疫在我國周邊亞洲地區(qū)具有流行史，對我國威脅較大。因此我們實驗室利用在60年代從前蘇聯(lián)引進的C型口蹄疫毒株建立了一種快速診斷C型口蹄疫的診斷技術，完成對C型口蹄疫病毒的診斷和監(jiān)控，對于防止其傳入我國具有重要的戰(zhàn)略意義。中國發(fā)明專利200810034124. 6公開一種用于檢測0型口蹄疫病毒的LAMP試劑盒，該試劑盒由包含有六條LAMP引物的LAMP反應液構成的檢測體系構成。由于該專利的試劑盒中有六條引物，因此其制造成本與使用成本相對較大。其次，該專利使用中需要定時定量儀器，這使其應用受到很大限制。第三，使用該專利檢測時只能得到兩條電泳條帶，這影響其檢測靈敏度，并易造成檢測結果識別的困難
發(fā)明內容
本發(fā)明提供一種可克服現有技術不足，能進行快速、簡便檢測，具有較高靈敏度和更好經濟性能的可檢測出被檢測牛或豬或羊，或?；蜇i或羊的產品是否感染C型口蹄疫病毒的試劑盒。本發(fā)明的C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒中包括有兩對LAMP弓丨物，這兩對弓I物分別是 SEQl、SEQ2、SEQ3 和 SEQ4,即
表I本發(fā)明的試劑盒中的引物
權利要求
1.C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒，其特征在于試劑盒中包括有兩對LAMP引物，這兩對引物分別是SEQ1、SEQ2、SEQ3和SEQ4。
2.權利要求I所述的C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒，其特征在于試劑盒中還有dNTP，Bst 聚合酶，AMV 反轉錄酶，2x 緩沖液(Tris-HCL，KCL, MgSO4, (NH4)2SO4, Tween-20,Betains, dNTPs。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于檢測牛或豬或羊以及相關?；蜇i或羊的產品是否感染C型口蹄疫病毒的試劑盒。本發(fā)明的C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒中包括有兩對LAMP引物，這兩對引物分別是SEQ1、SEQ2、SEQ3和SEQ4。用本發(fā)明的試劑盒進行檢測，具有方便、及時、快捷的優(yōu)點，并且有較高的檢測靈敏度，同時在具體的檢測過程中只需用普通的水浴鍋或熱源即可。
文檔編號C12Q1/68GK102776294SQ20121022168
公開日2012年11月14日 申請日期2012年6月30日 優(yōu)先權日2012年6月30日
發(fā)明者丁耀忠, 劉永生, 周建華, 張 杰, 陳豪泰, 馬麗娜 申請人:中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所