專利名稱：蓮原花青素作為晚期糖基化終產(chǎn)物形成抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，更具體涉及一種蓮原花青素用于制備抑制晚期糖基化終產(chǎn)物形成的天然藥物(抑制劑)在保健食品和食品添加劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
晚期糖基化終末產(chǎn)物(advancedglycosylation end products, AGEs)是人體內(nèi)的還原糖與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)發(fā)生不可逆反應(yīng)所形成的，是非酶糖基化衰老理論的最終產(chǎn)物。在無酶的參與下，還原糖的醛基或酮基與蛋白質(zhì)氨基酸氨基基團(tuán)通過親核結(jié)合，首先生成不穩(wěn)定的Schiff堿,Schiff堿發(fā)生化學(xué)重排,形成較穩(wěn)定的糖化合物Amadori產(chǎn)物,此為糖基化反應(yīng)的早期階段。Amadori產(chǎn)物或Amadori產(chǎn)物經(jīng)過多步脫水和分子重排產(chǎn)生的多種高度反應(yīng)性羰基化合物，如3-脫氧葡萄糖酮醛和甲基乙二醛等，進(jìn)一步與其他游離氨基反應(yīng)，最后形成不可逆性的AGEs，這是糖基化反應(yīng)的晚期階段。晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)現(xiàn)一般被分為兩類:1)突光型交聯(lián)AGEs,如交聯(lián)素(Crossline)、戍糖素(Pentosidine)和批唳類衍生物(VesperlysineA, B，C) ;2)無突光非交聯(lián)AGEs,如卩比咯素(Pyrraline)、羧甲基賴氨酸(CML)和羧乙基賴氨酸(CEL)。AGEs可通過直接捕獲蛋白質(zhì)和引起蛋白質(zhì)之間發(fā)生交聯(lián)而影響其功能和結(jié)構(gòu)，AGEs還可與其特異性受體相互作用，通過催化和活化單核巨噬細(xì)胞、激活轉(zhuǎn)錄因子kB、促進(jìn)生長因子及細(xì)胞因子的合成和釋放、滅活一氧化氮以及誘導(dǎo)氧化應(yīng)激等途徑造成組織細(xì)胞損傷。因此，尋找有效的AGEs抑制劑也越來越受到世界醫(yī)藥研究機(jī)構(gòu)和多領(lǐng)域科學(xué)家的重視。AGEs生成抑制的機(jī)理一般分為兩類:1.通過影響Maillard反應(yīng)底物及反應(yīng)的中間產(chǎn)物或改變其反應(yīng)條件來抑制；2.通過將已生成的AGEs交聯(lián)物進(jìn)行裂解來抑制。即AGEs形成抑制和AGEs斷裂抑制。在較高氧氣濃度、金屬離子濃度、溫度、水分活度及適宜pH下，都會(huì)促進(jìn)AGEs的生成。此外,對(duì)于高血糖和糖尿病患者,通過降低其血糖濃度來抑制其體內(nèi)AGEs的生成也是一條可行的途徑。AGEs作為Maillard反應(yīng)的終末產(chǎn)物，其形成的必要條件是反應(yīng)初始的羰胺反應(yīng)，即氨基酸或胺等親核化合物和帶有羰基的化合物(如還原糖)發(fā)生親核反應(yīng)，并生成希夫堿；之后再經(jīng)歷Amadori(或Heyns)重排,生成較為穩(wěn)定的Amadori(或Heyns)化合物，并在不同的pH下降解生成各種羰基類化合物，研究表明這些反應(yīng)性的羰基化合物是形成AGEs的前體化合物。故從反應(yīng)底物和反應(yīng)中間產(chǎn)物出發(fā)，用不發(fā)生美拉德反應(yīng)的親核化合物來封閉羰基化合物，是一條較好的抑制途徑。再者，還可以用合成抑制劑溴化苯酰甲基噻唑(PTB)、二甲基噻唑(ALT711)通過裂解雙羰基之間的C-C鍵來裂解并清除已生成的AGEs。氨基胍(AG)是現(xiàn)在廣泛研究的一種AGEs形成抑制劑，AG能捕獲AGEs的前體物質(zhì)如乙二醛、甲基乙二醛和葡萄糖酮醛等反應(yīng)性羰基化合物，形成無活性的替代物，從而抑制AGEs形成。目前，僅有AG達(dá)到臨床應(yīng)用階段，但AG對(duì)人體有較大的副作用，如引起胃腸道功能紊亂、破壞肺功能以及引起血管炎等。因此，開發(fā)天然無副作用的AGEs抑制劑已成為執(zhí)占。
原花青素屬于縮合單寧，是廣泛存在于各種植物的核皮或種籽等部位的一種多酚化合物。原花青素廣泛分布于葡萄、山楂、花生、銀杏等植物中。研究表明，原花青素具有強(qiáng)大的抗氧化作用，其清除自由基的能力是Ve的50倍、V。的20倍。此外，原花青素也具有很好的抗癌活性和保護(hù)心血管的功能。因而，其廣泛應(yīng)用于食品、化妝品和藥品等領(lǐng)域。目前，國內(nèi)外在葡萄籽原花青素方面的研究取得了突出的成果，尤其是在藥理保健方面的功效研究日趨成熟和完善。而對(duì)蓮科植物中的原花青素的研究本發(fā)明人還是首屈一指的。蓮房是蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn.)的成熟花托(又名蓮蓬殼，Seedpod of the lotus,簡(jiǎn)稱LS),其來源豐富,是未被充分利用的綠色環(huán)保資源。蓮房主要成分包括蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、粗纖維、灰分、胡蘿卜素、維生素B2、尼古酸、維生素C、蹂質(zhì)及微量蓮子堿等?！侗静菥V目》中指出蓮房具有“消瘀、止血”之功效。本發(fā)明人已建立了完善的蓮原花青素(Lotus Procyanidins, LPC)的提取分離工藝(已獲得專利保護(hù)ZL02 I15423. 6)，對(duì)蓮原花青素生理活性功效進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，蓮原花青素有良好的抗氧化，清除自由基、抗肝氧化損傷、抗心肌缺血和降脂等多種功效。其是一種優(yōu)良的天然抗老年癡呆藥物(已獲得專利保護(hù)0610124805. 2)，可誘導(dǎo)KB細(xì)胞凋亡，影響KB細(xì)胞表面粘附分子⑶44的表達(dá)；同時(shí)在整體動(dòng)物水平上首次證明了 LSPC對(duì)DMBA誘發(fā)金黃地鼠頰囊癌變具有化學(xué)預(yù)防作用。但是到目前為止，國內(nèi)外還未見蓮原花青素作為晚期糖基化終產(chǎn)物抑制劑的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑(天然藥物)在保健食品和食品添加劑中應(yīng)用，蓮原花青素具體涉及蓮原花青素對(duì)模擬生理環(huán)境及模擬食品體系中晚期糖基化終產(chǎn)物形成的抑制作用，并探討其作用機(jī)制。為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施一種蓮原花青素(包括其組成單體、二聚體、三聚體等低聚糖和高聚體及其混合物，以及它們與其他增效劑如VE、V。、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和半胱氨酸等復(fù)合物)用于制備抑制晚期糖基化終產(chǎn)物形成的抑制劑(天然藥物)在保健食品和食品添加劑中的應(yīng)用。申請(qǐng)人首次發(fā)現(xiàn)蓮科植物中存在大量低聚原花青素，并且建立和完善了蓮原花青素的提取分離工藝，已獲得中華人民共和國專利授權(quán)(ZL02 I 15423.6)。蓮原花青素提取工藝簡(jiǎn)便、原料豐富、無毒副作用。為達(dá)到上述的目的，一種以蓮原花青素為主要活性成分的藥物組合物。各種天然活性成分提取物重量百分比分別為蓮原花青素占70-80%，增效劑如VE、V。、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和半胱氨酸等復(fù)合物占10-20%，(選取上述增效劑中的一種應(yīng)用即可)其它天然提取物如荷葉提取物和銀杏葉提取物等重量之和占5-10% (荷葉提取物和銀杏葉提取物重量的比為1:1)。蓮原花青素的制備方法如下將一定量的新鮮蓮房去籽洗凈，盡快撕碎后按照1:10 (m/V)的料液比加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇，以防止其被氧化。在60°c條件下浸提90min，抽濾得濾液，濾液在50°C條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓回收乙醇，然后將濃縮液過AB-8大孔樹脂，再用10倍量蒸餾水洗去不被吸附的雜質(zhì)，之后用70%(v/v)的乙醇洗脫，收集洗脫液，真空回收乙醇，待葉綠素沉淀后傾出上清液，抽濾得濾液，用乙酸乙酯萃取，所得萃取液在40°C條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓回收乙酸乙酯，完全旋蒸干后用少量水溶解，溶解后進(jìn)行真空冷凍干燥，得黃色粉末，即為蓮房原花青素低聚體，上述提取工藝參照中國授權(quán)專利(ZLO2 115423. 6)進(jìn)行。荷葉提取物得制備方法如下將荷葉粉末與60%乙醇溶液按照料液比1:14CW/V),超聲15min，提取4次，真空回收乙醇，即可得荷葉提取物得水溶液，真空冷凍干燥即得粉末狀荷葉提取物。銀杏葉提取物、VE、V。、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和半胱氨酸均為粉末狀，VE> Vc購于Biosharp公司，EGCG購于sigma公司，半胱氨酸購于國藥集團(tuán)，銀杏葉提取物購于深圳市漢榮實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司。上述粉末按照一下比例(重量比)混合即得粉末狀晚期糖基化終末產(chǎn)物抑制劑蓮原花青素占70-80%，增效劑如VE、V。、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和半胱氨酸等復(fù)合物占10-20%，(選取上述增效劑中的一種應(yīng)用即可)，荷葉提取物和銀杏葉提取物等重量之和占5-10% (荷葉提取物和銀杏葉提取物重量的比為1:1)。此種以蓮原花青素為主要活性成分的天然藥物組合物具有良好的抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的作用，可在保健食品和食品添加劑中的應(yīng)用。本發(fā)明在模擬生理環(huán)境(葡萄糖-牛血清白蛋白體系)及模擬食品體系(乳糖-賴氨酸體系)中，利用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)了蓮原花青素對(duì)體系中晚期糖基化終末產(chǎn)物的抑制作用，并利用HPLC法檢測(cè)了蓮原花青素及其主要結(jié)構(gòu)單元兒茶素對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物形成過程中重要中間物質(zhì)一甲基乙二醛(MGO)的清除作用，對(duì)蓮原花青素、兒茶素與甲基乙二醛的加合產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在保健食品和食品添加劑中的應(yīng)用，其技術(shù)方案如下A.蓮原花青素從蓮科植物中提取(專利授權(quán)號(hào)為02115423. 6)，無任何毒負(fù)作用，所述的蓮科植物中提取的蓮原花青素作為藥物活性成分，利用現(xiàn)代常用藥物制劑手段，可將蓮原花青素作成活性成分制成可制備膠囊、微囊、粉劑、顆粒劑、片劑和口服液等任何一種藥學(xué)上可接受的劑型。所述的蓮科植物具體包括蓮房、荷葉、蓮籽殼、蓮藕皮和蓮藕節(jié)。B.在模擬生理環(huán)境下，研究了蓮原花青素對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物形成的抑制作用。用pH7. 4的0. 2mol/L的磷酸緩沖液(PBS)配制成5mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)溶液、
0.2mol/L的葡萄糖(Glu)及3mmol/L的疊氮鈉(NaN3)溶液來模擬人體生理環(huán)境，用PBS緩沖液配制終濃度為0. 01、0. 02、0. 04、0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、lmg/mL蓮房原花青素溶液及Img/mL 的氨基胍溶液(AG)，實(shí)驗(yàn)分 4 組1) Control 組BSA+Glu+NaN3; 2) BSA 組BSA+NaN3;3)LSPC 組BSA+Glu+LSPC+NaN3; 4) AG 組(陽性對(duì)照)BSA+Glu+AG+NaN3,于 37°C 的隔水式培養(yǎng)箱中密封避光孵育35d。后用熒光分光光度計(jì)在晚期糖基化終產(chǎn)物產(chǎn)生的特征激發(fā)和發(fā)射波長(EX=370nm，EM=440nm)下，檢測(cè)其熒光值，計(jì)算抑制率(IR)。C.在模擬食品體系下，研究了蓮原花青素對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物形成的抑制作用。在80°C和100°C分別加熱2h和IOmin時(shí)抑制率達(dá)最高。80°C時(shí)，LSPC對(duì)模擬體系中AGEs生成的半抑制濃度IC50為0. 162mg/mL ; 100°C時(shí)，LSPC對(duì)模擬體系中AGEs生成的半抑制濃度 IC50 為 0. 250mg/mL。D.利用HPLC-MS法探討了蓮原花青素對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物形成的抑制機(jī)制，鑒定了多種結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)物。一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在保健食品中的應(yīng)用，其步驟是以蓮原花青素為主要活性成分的藥物組合物。各種天然活性成分提取物重量百分比分別為蓮原花青素占75%，增效劑如VE、Vc、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和半胱氨酸等復(fù)合物占15% (選取上述增效劑中的一種應(yīng)用即可)，其它天然提取物如荷葉提取物和銀杏葉提取物等占10%，荷葉提取物得制備方法如下將荷葉粉末與60%乙醇溶液按照料液比1:14 (W/V)，超聲15min，提取4次，真空回收乙醇，即可得荷葉提取物得水溶液，真空冷凍干燥即得粉末狀荷葉提取物。銀杏葉提取物、VE、VC、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和半胱氨酸均為粉末狀，VE、VC購于Biosharp公司，EGCG購于sigma公司，半胱氨酸購于國藥集團(tuán)，銀杏葉提取物購于深圳市漢榮實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司。獲得一種蓮原花青素作為晚期糖基化終產(chǎn)物形成抑制劑，可通過一種蓮原花青素作為晚期糖基化終產(chǎn)物形成抑制劑與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑或輔劑(賦形劑或輔劑通常占30%-70%)(如淀粉、糊精、蔗糖、木糖醇、碳酸鈣等)結(jié)合形成各種膠囊、片劑或者飲料等各種保健品(一種蓮原花青素作為晚期糖基化終產(chǎn)物形成抑制劑在保健品中的含量通常為40-50重量％)。所述的保健食品包括預(yù)防老年病、糖尿病、腎臟疾病和動(dòng)脈血管病的各種劑型保健食品中的用途。一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在食品添加劑中的應(yīng)用，其步驟是在食品的加熱、烹飪、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸?shù)冗^程中，加入一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑(按照重量比1000:1的比例加入)，從而抑制食品在這些過程中產(chǎn)生有害的晚期糖基化終末產(chǎn)物。所述的食品添加劑包括抗氧化劑、營養(yǎng)強(qiáng)化劑、著色劑等。所述的營養(yǎng)強(qiáng)化劑為常用的食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑1、維生素類維生素A、P -胡蘿卜素、B族維生素(硫胺素鹽酸鹽、核黃素、煙酸)、維生素C。2、礦物元素強(qiáng)化劑鈣、碘、鐵、鋅。3、常用的賴氨酸強(qiáng)化劑有L_鹽酸賴氨酸、L-賴氨酸.L-天門冬氨酸鹽、L-賴氨酸-L-谷氨酸鹽等。另外，?；撬嵋彩浅Ｓ玫囊环N氨基酸強(qiáng)化劑。4、目前常用于食品強(qiáng)化的蛋白質(zhì)有大豆蛋白、乳清蛋白、脫脂乳粉、酵母粉、魚粉
坐寸o一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在作為食品添加劑添加到固體中的應(yīng)用，其步驟是將固體食品放入以蓮原花青素為主要活性成分的藥物組合物的水溶液中(濃度為ImgmL)浸潰，然后浙干，然后入鍋油炸或翻炒，即能有效減少固體食品在高溫烹飪過程中產(chǎn)生的晚期糖基化終末產(chǎn)物。所述的固體食品具體指一些高油高脂的食品如油炸雞腿、油炸薯?xiàng)l、薯片等。一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在液體食品中的應(yīng)用，其步驟是在液體食品中加入上述以蓮原花青素為主要活性成分的藥物組合物(重量比為1000:1)，然后再進(jìn)行熱加工(高溫蒸煮或微波加熱等，溫度在120°C -220°c)，即能有效減少液體食品在熱加工過程中產(chǎn)生的晚期糖基化終末產(chǎn)物。液體食品具體為高脂高蛋白高糖等液體食品如牛奶、咖啡等。本發(fā)明與原有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果本發(fā)明采用高效液相色譜法檢測(cè)了蓮原花青素及其主要結(jié)構(gòu)單元兒茶素對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物形成過程中重要中間物質(zhì)——甲基乙二醛(MGO)的清除作用。并用高效液相多級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用法鑒定出4種兒茶素與甲基乙二醛加合產(chǎn)物和9種蓮原花青素與甲基乙二醛加合產(chǎn)物。結(jié)果證實(shí)，蓮原花青素對(duì)模擬生理環(huán)境及模擬食品體系中晚期糖基化終末產(chǎn)物形成都具有良好的抑制作用。具體是1.氨基胍(AG)是現(xiàn)在廣泛研究的一種晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)形成抑制劑。目前，僅有AG達(dá)到臨床應(yīng)用階段，但AG對(duì)人體有較大的副作用，如引起胃腸道功能紊亂、破壞肺功能以及引起血管炎等，不宜長期使用。而蓮原花青素是一種天然無毒副作用的提取物，且對(duì)AGEs的抑制效果優(yōu)于AG。因此，蓮原花青素可以作為一種良好的天然AGEs抑制劑。2.本發(fā)明表示在體外模擬生理?xiàng)l件，葡萄糖一牛血清白蛋白體系37°C孵育35d下，蓮原花青素對(duì)晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)生成的抑制率隨濃度的增加而增加(P〈0.01)。其抑制率明顯高于相同濃度的氨基胍(AG)。3.本發(fā)明表示在模擬食品體系(a -乳糖/L-Lysine)中，在80°C和100°C加熱條件下，蓮原花青素對(duì)晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)生成都有良好的抑制作用。


圖1-1為一種不同時(shí)間下LSPC對(duì)AGEs生成的抑制。圖1-2為一種不同濃度的LSPC對(duì)AGEs生成的抑制。圖2-1為一種80°C不同反應(yīng)時(shí)間下LSPC對(duì)模擬體系中AGEs生成的抑制效果。圖2-2為一種100°C不同反應(yīng)時(shí)間下LSPC對(duì)模擬體系中AGEs生成的抑制效果。圖2-3為一種80°C不同濃度的LSPC對(duì)模擬體系中AGEs生成的抑制效圖2-4為一種100°C不同濃度的LSPC對(duì)模擬體系中AGEs生成的抑制效果。圖3-1為一種315nm下MGO清除色譜圖。圖3-2 為一種 AG、LSPC、Catechin 對(duì) MGO 的清除率。圖3-3 為一種 273nm 下 Catechin&MGO 和 LSPC&MG0 反應(yīng)物色譜圖。圖3-4為一種4種Catechin&MGO反應(yīng)產(chǎn)物(A, B，C，D)和9種LSPC&MG0反應(yīng)產(chǎn)物(E, F，G, H，I, J, K，L, M)的二級(jí)質(zhì)譜圖。圖3-5 為一種推測(cè)的 4 種 Catechin&MGO 反應(yīng)產(chǎn)物(A, B，C，D)和 9 種 LSPC&MG0。反應(yīng)產(chǎn)物(E,F，G, H，I, J, K，L, M)的結(jié)構(gòu)圖。
具體實(shí)施例方式下面用蓮原花青素對(duì)模擬生理環(huán)境及模擬食品體系中晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制作用，并探討其作用機(jī)制，說明其在天然藥物，保健食品和食品添加劑的新用途。實(shí)施例1 :
以蓮原花青素為主要活性成分的藥物組合物。蓮原花青素占70或75或80%，增效劑如VE、VC、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和半胱氨酸等復(fù)合物占10或15或20%，(選取上述增效劑中的一種應(yīng)用即可)其它天然提取物如荷葉提取物和銀杏葉提取物等重量之和占5或8或10% (荷葉提取物和銀杏葉提取物重量的比為1:1)。可通過將本發(fā)明化合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑或輔劑(如淀粉、糊精、蔗糖、木糖醇、碳酸鈣等)結(jié)合形成各種膠囊、片劑或者飲料等各種保健品或食品添加劑，利用現(xiàn)代常用藥物制劑手段，可將蓮原花青素為主要活性成分的藥物組合物制成片劑、膠囊、顆粒劑、口服液、緩釋制劑、控釋制劑、納米制劑、注射劑任何一種藥學(xué)上可接受的劑型。在模擬生理環(huán)境下，蓮原花青素對(duì)晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制作用I實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)原料蓮科植物原料采自洪湖種植區(qū)，品種名稱為“武植2號(hào)”(請(qǐng)見遺傳資源表)。將一定量的新鮮蓮房去籽洗凈，盡快撕碎后按照1:10 (m/V)的料液比加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇，以防止其被氧化。在60°C條件下浸提90min，抽濾得濾液，濾液在50°C條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓回收乙醇，然后將濃縮液過AB-8大孔樹脂，再用10倍量蒸餾水洗去不被吸附的雜質(zhì)，之后用70%(v/v)的乙醇洗脫，收集洗脫液，真空回收乙醇，待葉綠素沉淀后傾出上清液，抽濾得濾液，用乙酸乙酯萃取，所得萃取液在40°C條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓回收乙酸乙酯，完全旋蒸干后用少量水溶解，溶解后進(jìn)行真空冷凍干燥，得黃色粉末，即為蓮房原花青素低聚體，上述提取工藝參照中國授權(quán)專利(ZL02 I 15423. 6)進(jìn)行。蓮房原花青素低聚體樣品利用鹽酸正丁醇法檢測(cè)，其原花青素含量相對(duì)于葡萄籽原花青素標(biāo)品為106. 22±0. 46%。1. 2實(shí)驗(yàn)試劑牛血清白蛋白(BSA)、葡萄糖(Glu)、疊氮鈉(NaN3)、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司、氨基胍(AG)購于sigma公司。1. 3主要儀器島津RF5301熒光分光光度計(jì)，隔水式培養(yǎng)箱。2實(shí)驗(yàn)方法2.1AGEs體外孵育時(shí)間的確定2.1.1 分組方法實(shí)驗(yàn)分 3 組DControl 組BSA+Glu+NaN3; 2)BSA組BSA+NaN3;3)LSPC 組BSA+Glu+LSPC+NaN3，每組 3 個(gè)平行。2.1. 2加樣方法:BSA、Glu、NaN3 (防腐劑)和LSPC分別用pH為7. 4的0. 2M的PBS溶解，加入30ml的具塞玻璃管中，使其最終的濃度為BSA 5mg/ml;Glu 36mg/ml;NaN33mM;LSPC 0. 2mg/ml。2.1. 3檢測(cè)方法三組試管置于37°C的隔水式培養(yǎng)箱中密封避光孵育,后于3、7、14、21、28、35、42、49、56、63、70d取Iml反應(yīng)液進(jìn)行檢測(cè)。取得的Iml反應(yīng)液，避光冷卻至室溫，用pH為7. 4的PBS稀釋到4ml，再用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)其熒光值(EX=370nm，EM=440nm，入射和出射狹縫寬度皆為5nm)。其熒光值都按稀釋倍數(shù)換算到原始濃度的熒光值，抑制率(IR%)按下述公式計(jì)算
權(quán)利要求
1.一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在保健食品中的應(yīng)用，所述的保健食品包括預(yù)防糖尿病、腎臟疾病和動(dòng)脈血管病的各種劑型保健食品。
2.一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在食品添加劑中的應(yīng)用，所述的食品添加劑包括抗氧化劑、營養(yǎng)強(qiáng)化劑、著色劑。
3.一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在作為食品添加劑添加到固體中的應(yīng)用，所述的固體食品為油炸雞腿、油炸薯?xiàng)l、薯片。
4.一種蓮原花青素制備抑制晚期糖基化終末產(chǎn)物形成的抑制劑在液體食品中的應(yīng)用，所述的液體食品為牛奶、咖啡。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是蓮原花青素為蓮原花青素的單體和低聚體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，所述的晚期糖基化終產(chǎn)物形成中間產(chǎn)物是活性二羰基化合物甲基乙二醛。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是蓮原花青素為膠囊、微囊、粉劑、顆粒劑、片劑和 口服液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蓮原花青素作為晚期糖基化終產(chǎn)物形成抑制劑的用途，一種以蓮原花青素為主要活性成分的藥物組合物。各種天然活性成分提取物重量百分比分別為蓮原花青素占70-80%,增效劑如VE、VC、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和半胱氨酸等復(fù)合物占10-20%，其它天然提取物如荷葉提取物和銀杏葉提取物等重量之和占5-10%。采用高效液相色譜法檢測(cè)了蓮原花青素及其主要結(jié)構(gòu)單元兒茶素對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物形成過程中重要中間物質(zhì)—甲基乙二醛的清除作用。并用高效液相多級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用法鑒定出4種兒茶素與甲基乙二醛加合產(chǎn)物和9種蓮原花青素與甲基乙二醛加合產(chǎn)物。結(jié)果證實(shí)，蓮原花青素對(duì)模擬生理環(huán)境及模擬食品體系中晚期糖基化終末產(chǎn)物形成都具有良好的抑制作用。
文檔編號(hào)A23L1/217GK103070400SQ20121024703
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月17日
發(fā)明者孫智達(dá), 吳茜, 李書藝, 關(guān)亞飛, 謝筆鈞 申請(qǐng)人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)