專利名稱：miRNA-539及其反義核苷酸的用途和其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種內(nèi)源性的非編碼小RNAs的新藥用途，尤其涉及miRNA-539及其反義核苷酸在預(yù)防或治療心臟疾病中的用途，屬于心臟疾病的診斷、預(yù)防和治療領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心血管疾病是人類健康和生命的主要威脅，是人類健康的頭號(hào)殺手，全世界范圍內(nèi)每年有一千七百萬人死于心血管疾病，其死亡率已接近所有癌癥死亡 率的總和。在我國，隨著人民生活水平日益提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，心血管疾病死亡率呈明顯上升趨勢，已超過癌癥成為第一大致死原因。根據(jù)國家衛(wèi)生部2004年底公布的最新統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，我國18歲及以上居民高血壓患病率為18. 8%，估計(jì)全國患病人數(shù)I. 6億多，由此造成的心肌肥大、心肌梗死、冠心病、以及心力衰竭等凋亡相關(guān)心臟疾病的病人達(dá)幾千萬。目前關(guān)于心臟疾病發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚，心臟疾病的預(yù)防、診斷和治療尚不能達(dá)到讓人滿意的效果，急需開發(fā)新的技術(shù)、方法用于心臟病的診斷、防治。miRNA是新近研究發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性非編碼小RNA分子，許多研究表明miRNA對于維持心臟正常生理功能具有重要作用，心臟中的miRNA異常表達(dá)與許多心臟疾病的發(fā)生相關(guān)。因此，將miRNA作為心臟疾病治療的靶點(diǎn)，開發(fā)相關(guān)藥物具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。單一的miRNA可以同時(shí)作用于多個(gè)祀基因的mRNA的表達(dá),這樣藥物作用于一個(gè)miRNA可以調(diào)節(jié)多個(gè)參與心臟發(fā)病基因的表達(dá)，影響多個(gè)信號(hào)通路，從整體上達(dá)到治療疾病的目的。由于miRNA在心臟病理狀態(tài)下表達(dá)水平不同，因此可以通過檢測miRNA的表達(dá)水平來預(yù)測診斷疾病。細(xì)胞凋亡(apoptosis)，又稱程序性細(xì)胞死亡，是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束生命的過程。它是一個(gè)主動(dòng)的、高度有序的、由基因控制及一系列酶參與的過程，對正常胚胎發(fā)育，維持細(xì)胞群體及惡性病變過程中均起重要作用，在保證多細(xì)胞生物的健康生存過程中扮演著關(guān)鍵的角色。在許多心肌損傷或心臟病理狀態(tài)下，如心肌缺血再灌注損傷、心肌肥大、心力衰竭等，心肌細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡。由于成熟的心肌細(xì)胞不能分裂增殖，心肌細(xì)胞過度凋亡必然會(huì)使心肌細(xì)胞數(shù)目減少，這一點(diǎn)可能是一些心臟疾病發(fā)病的機(jī)理。目前研究發(fā)現(xiàn)許多miRNA通過調(diào)控凋亡相關(guān)靶蛋白的表達(dá)參與細(xì)胞凋亡的發(fā)生，這些miRNA有促凋亡的，也有抑凋亡的。尋找心臟中特異表達(dá)的、參與心肌細(xì)胞凋亡的miRNA，闡明其作用機(jī)理，對于開發(fā)以miRNA為策略的心臟疾病的診斷、治療具有及其重要的意義和應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是確定或發(fā)現(xiàn)調(diào)控心肌細(xì)胞凋亡的心臟特異性性表達(dá)的miRNA，進(jìn)一步確定其在心肌缺血再灌、心肌梗死、冠心病、心肌肥大和心肌纖維化等心臟疾病中的關(guān)鍵作用，將其應(yīng)用到這些心臟疾病的診斷、防治中。針對上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一方面，本發(fā)明提供一種miRNA-539反義核苷酸，所述反義核苷酸的序列為下述SEQ ID NO: I所示的核苷酸序列5 ’ -CCUCUUUAAUAGGAACCACACA-3 ’，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了 2' -O-甲基修飾。又一方面，本發(fā)明提供本發(fā)明所述的miRNA-539反義核苷酸在制備用于預(yù)防或治療心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途。還一方面，本發(fā)明提供一種miRNA-539在制備用于診斷和/或預(yù)后評估心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途，所述miRNA-539的序列為下述SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列5，-UGUGUGGUUCCUAUUAAAGAGG-3，。優(yōu)選地，所述心臟疾病選自肌梗死、心肌缺血損傷、心肌肥大和心肌纖維化中的一
種或多種。另一方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)防或治療心臟疾病的藥物組合物，所述藥物組合物含有本發(fā)明所述的miRNA-539反義核苷酸和藥學(xué)上可接受的載體、病毒或輔料。優(yōu)選地，所述miRNA-539反義核苷酸的含量為O. 5 lg/ml。優(yōu)選地，所述載體選自殼聚糖、膽固醇、納米顆粒和脂質(zhì)體中的一種或多種。優(yōu)選地，所述藥物組合物以口服或注射方式給藥。優(yōu)選地，所述注射為靜脈注射、肌肉注射、冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射或直接心肌注射。再一方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)防或治療心臟疾病的心臟疾病的試劑盒，所述試劑盒含有本發(fā)明所述的miRNA-539反義核苷酸。還一方面，本發(fā)明提供一種用于診斷和/或預(yù)后評估心臟疾病的試劑盒，所述試劑盒含有miRNA-539核苷酸或用于特異性檢測miRNA-539的探針或引物；所述miRNA-539的序列為下述SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列5，-腳⑶G⑶UCCUAUUAAAGAGG-3，；所述探針或引物為SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。優(yōu)選地，所述心臟疾病選自肌梗死、心肌缺血損傷、心肌肥大和心肌纖維化中的一種或多種。本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miRNA-539在心肌缺血損傷及缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡過程中miRNA-539表達(dá)顯著上調(diào)。通過轉(zhuǎn)染和注射miRNA-539反義核苷酸抑制miRNA-539的表達(dá)可以抑制心肌細(xì)胞凋亡及心肌缺血損傷，心肌梗死面積減少。以上實(shí)驗(yàn)說明miRNA-539反義核苷酸通過抑制心肌細(xì)胞凋亡對心臟具有保護(hù)作用，miRNA-539反義核苷酸對許多心臟疾病具有潛在的預(yù)防和治療價(jià)值。而給予miRNA-539升高miRNA-539的表達(dá)則可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，心肌缺血損傷會(huì)更加嚴(yán)重。具體的，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)miRNA-539 反義核苷酸(5’ -CCUCUUUAAUAGGAACCACACA-3’ )通過抑制心肌細(xì)胞凋亡對心臟具有保護(hù)作用。心肌細(xì)胞缺氧或心肌缺血損傷過程miRNA-539表達(dá)顯著上調(diào)，miRNA-539的上調(diào)可能誘導(dǎo)了心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。miRNA-539在缺血再灌注動(dòng)物模型的心肌組織中表達(dá)上調(diào)，miRNA-539可作為診斷心臟病的標(biāo)志，抑制內(nèi)源性的miRNA-539小鼠，可以抵抗心肌缺血再灌注損傷，心肌梗死面積減少，心功能顯著改善。將miRNA-539反義核苷酸與適當(dāng)?shù)妮d體結(jié)合形成藥物,導(dǎo)入心臟或體內(nèi)，對許多心臟疾病將具有預(yù)防及治療作用?？梢钥紤]將miRNA-539反義核苷酸與殼聚糖、膽固醇、脂質(zhì)體、納米顆粒等包裝形成藥物分子，通過口服、靜脈注射、肌肉注射、冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射或直接心肌注射的方式，用于防治心臟疾病、改善心臟功能、阻止心肌纖維化及心肌重構(gòu)的發(fā)生。


以下，結(jié)合附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中圖I表明心肌缺血損傷及缺氧處理(Anoxia)的心肌細(xì)胞凋亡過程中miRNA-539表達(dá)水平的變化，其中圖IA表明原代心肌細(xì)胞缺氧處理miRNA-539表達(dá)水平，其中縱坐標(biāo)表示以O(shè)分鐘的miRNA-539表達(dá)量為基準(zhǔn)，在心肌缺血損傷及缺氧處理過程中不同時(shí)間下miRNA-539的表達(dá)量；圖IB表明小鼠心肌缺血損傷miRNA-539表達(dá)水平，其中縱坐標(biāo)表示以O(shè)分鐘的miRNA-539表達(dá)量為基準(zhǔn)，在心肌缺血損傷及缺氧處理過程中不同時(shí)間下miRNA-539的表達(dá)量；圖2表明抑制內(nèi)源性的miRNA-539對心肌細(xì)胞凋亡的抵抗作用，其中圖2A表示原代心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-539反義核苷酸(anta_539)抑制內(nèi)源性的miRNA-539的表達(dá)；圖2B 表示對缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的影響，轉(zhuǎn)染NC作為陰性對照，其中縱坐標(biāo)表示，在心肌細(xì)胞凋亡過程中以未加任何物質(zhì)處理的心肌細(xì)胞中miRNA-539的表達(dá)為基準(zhǔn)，不同樣品中miRNA-539的表達(dá)量；圖3表明miRNA-539反義核苷酸對心肌缺血損傷的抵抗作用；其中圖3A為小鼠心肌注射miRNA-539反義核苷酸后實(shí)施心肌缺血再灌注手術(shù)的試驗(yàn)結(jié)果，ARR/LV表示危險(xiǎn)區(qū)總面積/左心室面積，INF/AAR表示梗死區(qū)面積/危險(xiǎn)區(qū)總面積，INF/LV表示梗死區(qū)面積/左心室面積，其中每組從左到右依次為未加任何物質(zhì)處理的對照組I，經(jīng)缺血再灌注的對照組II (Con)，經(jīng)缺血再灌注的陰性對照處理組(NC)和經(jīng)缺血再灌注的miRNA-539反義核苷酸處理組(Anta-539);圖3B為小鼠心肌注射miRNA-539反義核苷酸后檢測miRNA-539反義核苷酸對心肌梗死面積的試驗(yàn)結(jié)果，其中每組從左到右依次為未加任何物質(zhì)處理的對照組I，經(jīng)缺血再灌注的對照組II (Con)，經(jīng)缺血再灌注的陰性對照處理組(NC)和經(jīng)缺血再灌注的miRNA-539反義核苷酸處理組(Anta_539);圖3C為小鼠心肌注射miRNA-539反義核苷酸后心肌凋亡的結(jié)果，其中以未加任何物質(zhì)處理的作為對照組。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。除非特別指出，以下各實(shí)施例中涉及的各種實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)方法和操作，包括原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)，感染心肌細(xì)胞的劑量，細(xì)胞轉(zhuǎn)染，心臟缺血再灌手術(shù)步驟，Evans blue/TTC雙染，TUNEL 檢測均可參見以下文獻(xiàn)Wang JX, et al, miR-499 regulates mitochondrialdynamics by targeting calcineurin and dynamin-related protein-1. 2011 January17:71-78。上述文獻(xiàn)在此全文引入作為參考。除非特別指出，以下試驗(yàn)中所用的材料試驗(yàn)動(dòng)物為小鼠，其品種為小鼠品種為C57/BL6，購自北京醫(yī)科大學(xué)。除非特別指明，以下實(shí)施例中所用的酶如限制性內(nèi)切酶、擴(kuò)增酶和逆轉(zhuǎn)錄酶等，均購自北京博奧生物有限公司。除非特別指明，以下實(shí)施例中所用的引物均委托北京華大基因所合成。
除非特別指明，以下實(shí)施例中所用的試劑均為分析純級試劑，且可從正規(guī)渠道商購獲得。實(shí)駘例I心肌缺血及心肌細(xì)朐缺氣誘導(dǎo)的心肌細(xì)朐凋亡討稈中miRNA-539表汰情況檢測對于心肌細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，采用本?shí)驗(yàn)室已建立的方法培養(yǎng)大鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞，低氧培養(yǎng)箱(氧濃度低于1%)培養(yǎng)不同時(shí)間，提取RNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測miRNA-539 (SEQ ID NO: 2 :5’-UGUGUGGUUCCUAUUAAAGAGG-3’)的表達(dá)水平，PCR 體系 25 μ 1，PCR 條件如下95 °C Imin—個(gè)循環(huán)；95 °C 15s, 56 °C 15sec, 72 °C Imin 共 28 個(gè)循環(huán)；最后72°C延伸5min，PCR引物設(shè)計(jì)如下，擴(kuò)增片段約126bp (miRNA-539的全長編碼序列SEQ IDNO:4，其序列為 TCACTCCCAAGAGGCCTATGGATGCTGGTATTCCTGCTGTGCTACTGTTTCATACTTGAGGAGAAATTATCCTTGGTGTGTTGGCTCTTTTGGATGAATCATACAAGGATAATTTCTTTTTGAGTA,其中標(biāo)下劃線的部分為上下游引物，下游引物與該序列的C末端序列反向互補(bǔ))
上游引物5'-TCACTCCCAAGAGGCCTATGG-3' (SEQ ID N0:5),下游引物5'-TACTCAAAAAGAAATTATCCT-3 (SEQ ID N0:6) '。miRNA-539 表達(dá)水平在低氧處理4h-8h內(nèi)顯著上調(diào)(圖1A)。本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈建立心肌缺血模型，缺血不同時(shí)間取心臟缺血區(qū)及非缺血區(qū)心肌組織，提取總RNA，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測miRNA-539的表達(dá)水平，PCR 體系 25μ 1，PCR 條件如下95°C Imin—個(gè)循環(huán)；95°C 15s, 56°C 15s, 72°C Imin 共 28 個(gè)循環(huán)；最后72。。延伸5min)，擴(kuò)增片段約126bp (SEQ ID N0:4), PCR引物設(shè)計(jì)如下上游引物5'-TCACTCCCAAGAGGCCTATGG-3' (SEQ ID NO:5)，下游引物5'-TACTCAAAAAGAAATTATCCT-3' (SEQ ID NO:6)。結(jié)果顯示缺血30min-120min心肌缺血組織較非缺血組織及非缺血模型組miRNA-539表達(dá)水平顯著上升(圖1B)，其中以假手術(shù)組(sham)作為對照組。實(shí)驗(yàn)例2miRNA_539反義核苷酸抑制心肌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)中使用原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞為模型。轉(zhuǎn)染miRNA-539反義核苷酸(該序列由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成)(miRNA-539反義核苷酸序列是與miRNA-539序列完全反向互補(bǔ)的序列，5' -CAGUACUUUUGUGUAGUACAA-3' (SEQ ID NO: I，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了 W -O-甲基修飾。它可以與miRNA-539結(jié)合來抑制miRNA-539的表達(dá))，轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)方法可參看文章(Wang JX, et al, miR-499 regulates mitochondrial dynamics by targetingcalcineurin and dynamin-related protein-1. 2011 January 17:71-78)。轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后，在低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)處理細(xì)胞3小時(shí)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。臺(tái)盼蘭染色方法檢測心肌細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果見圖2，結(jié)果顯示抑制內(nèi)源性miRNA-539可以顯著抑制缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)例3miRNA_539反義核苷酸抑制心肌缺血損傷實(shí)驗(yàn)以C57/BL6小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，每組8只小鼠，將測得的結(jié)果用one-way ANOVO統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(參見 Wang JX, et al, miR-499 regulates mitochondrialdynamics by targeting calcineurin and dynamin-related protein-1. 2011 January17:71-78)，按照下述方法分別將30mg/kgmiRNA-539反義核苷酸(anta-539)和它的陰性對照(NC)注射小鼠(該miRNA是在，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了 2' -O-甲基修飾，即在核酸的2’端的羥基被甲氧基取代以增強(qiáng)核酸的穩(wěn)定性。該修飾是由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司進(jìn)行修飾的，其不抑制現(xiàn)有已知的任何基因的表達(dá)，其序列為SEQ ID NO:3 5' -CAGUACUUUUGUGUAGUACAA-3'，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了 W -O-甲基修飾)。小鼠稱重并麻醉，仰臥位固定，剪毛并用碘酒消毒手術(shù)區(qū)。頸部正中切開氣管并插管，連動(dòng)物呼吸機(jī)進(jìn)行正壓通氣，在胸骨左緣處及心臟搏動(dòng)處縱行切開皮膚約3cm，逐層鈍性分離皮下組織、肌肉，開胸，小心提起心包并剪開，充分暴露心臟。于磷酸鹽緩沖液(PBS)中分別將按每只小鼠重量計(jì)算需要的反義核苷酸(anta-539)和它的陰性對照(NC)，稀釋終體積為200 μ L，再分別通過26號(hào)導(dǎo)管從心尖進(jìn)入動(dòng)脈根部，注射同時(shí)夾閉主動(dòng)脈及肺動(dòng)脈，持續(xù)夾閉20秒。監(jiān)測5min，待心臟恢復(fù)竇律后，清除胸腔內(nèi)積血并用去針頭注射器抽吸氣體關(guān)閉胸腔。等小鼠清醒后，脫離呼吸機(jī)，放回籠中。心電圖監(jiān)測整個(gè)手術(shù)過程。注射反義核苷酸(anta-539)和它的陰性對照(NC) 3天后進(jìn)行心臟缺血再灌注手術(shù)，具體操作如下小鼠麻醉后，背位固定于實(shí)驗(yàn)用木板上，并進(jìn)行心電圖監(jiān)測。頸部正中切開氣管并插管，連動(dòng)物人工呼吸機(jī)，于第四肋間開胸，小心提起心包并剪開，充分暴露心臟、血管。在肺動(dòng)脈圓錐和左心耳之間，以左冠狀靜脈主干為標(biāo)志，于左心耳根部下方2_處進(jìn)針，進(jìn)針深度O. 5mm ;以6/0帶針縫合線穿過心肌表層，在肺動(dòng)脈圓椎旁出針；待心電圖恢復(fù)·穩(wěn)定IOmin后，予以結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)。以I、aVL導(dǎo)聯(lián)ST段弓背向上抬高大于O. Imv并持續(xù)O. 5h以上作為結(jié)扎成功的標(biāo)志。缺血45min之后，松開結(jié)扎線開始再灌注。以ST段下降為標(biāo)志。清除胸腔內(nèi)積血并用去針頭注射器抽吸氣體關(guān)閉胸腔。再灌注24小時(shí)用Evans blue/TTC雙染測定心肌梗死面積。結(jié)果顯示注射miRNA-539反義核苷酸的小鼠I/R組心肌梗死面積比野生小鼠I/R組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p〈0.01)，見圖3A。心梗面積按如下方法計(jì)算左心室面積(left ventricle, LV)為藍(lán)色、紅色和白色面積之和；危險(xiǎn)區(qū)總面積(area at risk, AAR)為紅色和白色面積之和；梗死區(qū)面積(infarct area, INF)為白色面積。危險(xiǎn)區(qū)面積(AAR/LV, %)=(危險(xiǎn)區(qū)總面積/左心室面積)X 100%,心梗面積(INF/AAR，％)=(梗死區(qū)面積/危險(xiǎn)區(qū)總面積)X 100%。同時(shí)又檢測了注射miRNA-539反義核苷酸對I/R的凋亡的影響，用TUNEL檢測(圖3B)，結(jié)果顯示miRNA-539反義核苷酸可顯著抑制心肌缺血再灌注引起的心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生，其中以假手術(shù)組作為對照組。以上的結(jié)果說明小鼠經(jīng)冠狀動(dòng)脈注射miRNA-539反義核苷酸可顯著抑制心肌缺血再灌注損傷。
權(quán)利要求
1.一種miRNA-539反義核苷酸，所述反義核苷酸的序列為下述SEQ ID NO: I所示的核苷酸序列 5 ’ -CCUCUUUAAUAGGAACCACACA-3 ’，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了 2' -O-甲基修飾。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的miRNA-539反義核苷酸在制備用于預(yù)防或治療心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途。
3.—種miRNA-539在制備用于診斷和/或預(yù)后評估心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途，所述miRNA-539的序列為下述SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列 5’-腳⑶G⑶UCCUAUUAAAGAGG-3，。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述心臟疾病選自肌梗死、心肌缺血損傷、心肌肥大和心肌纖維化中的一種或多種。
5.一種用于預(yù)防或治療心臟疾病的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物含有權(quán)利要求I所述的miRNA-539反義核苷酸和藥學(xué)上可接受的載體、病毒或輔料。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述miRNA-539反義核苷酸的含量為 O. 5 lg/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的藥物組合物，其特征在于，所述載體選自殼聚糖、膽固醇、納米顆粒和脂質(zhì)體中的一種或多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求5至7中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物以口服或注射方式給藥；優(yōu)選地，所述注射為靜脈注射、肌肉注射、冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射或直接心肌注射。
9.一種用于預(yù)防或治療心臟疾病的試劑盒，所述試劑盒含有權(quán)利要求I所述的miRNA-539反義核苷酸。
10.一種用于診斷和/或預(yù)后評估心臟疾病的試劑盒，所述試劑盒含有miRNA-539核苷酸或用于特異性檢測miRNA-539的探針或引物； 所述miRNA-539的序列為下述SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列 5’-腳⑶G⑶UCCUAUUAAAGAGG-3，； 所述探針或引物為SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列； 優(yōu)選地，所述心臟疾病選自肌梗死、心肌缺血損傷、心肌肥大和心肌纖維化中的一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明提供一種miRNA-539及其反義核苷酸的用途和其藥物組合物，具體為所述miRNA-539反義核苷酸在制備用于預(yù)防或治療心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途，所述miRNA-539反義核苷酸的序列為下述SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列5’-CCUCUUUAAUAGGAACCACACA-3’，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了2′-O-甲基修飾；及miRNA-539在制備用于診斷和/或預(yù)后評估心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途。本發(fā)明說明miRNA-539反義核苷酸通過抑制心肌細(xì)胞凋亡對心臟具有保護(hù)作用，miRNA-539反義核苷酸對許多心臟疾病具有潛在的預(yù)防和治療價(jià)值。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102888403SQ20121025072
公開日2013年1月23日 申請日期2012年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月19日
發(fā)明者李培峰, 王昆 申請人:中國科學(xué)院動(dòng)物研究所