專利名稱：一種發(fā)酵液中游離細(xì)胞的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種發(fā)酵液中游離細(xì)胞的提取工藝。
背景技術(shù)：
微生物法丙烯酰胺發(fā)酵生產(chǎn)過程主要培養(yǎng)的是一種諾卡氏放線菌，在發(fā)酵罐培養(yǎng)達(dá)到預(yù)期的生物量、酶活力后，需對發(fā)酵液進(jìn)行分離清洗，將發(fā)酵液中的諾卡氏放線菌提取出來，送到水合工段，作為催化劑參與水合反應(yīng)。傳統(tǒng)工藝采用將發(fā)酵液與一定比例海藻膠混合造粒，形成固定化細(xì)胞催化劑，此種方法細(xì)菌的利用率低?，F(xiàn)較多的采用游離細(xì)胞直接水合反應(yīng)，提高細(xì)菌的利用率。因此游離細(xì)胞的分離提取成為此技術(shù)的關(guān)鍵，一般工藝采用發(fā)酵液中添加一定量的絮凝沉降劑，使發(fā)酵液中的細(xì)菌沉降下來，然后再將沉降下來的菌泥加水反復(fù)清洗，此種工藝的缺點是發(fā)酵液中的機(jī)械雜質(zhì)及一些有機(jī)物與細(xì)菌分離不清，造成雜質(zhì)帶入后道水合反應(yīng)工序。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本工藝將機(jī)械過濾加離心分離加微濾膜過濾清洗耦合，提供一種發(fā)酵液中游離細(xì)胞的提取工藝。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案為一種發(fā)酵液中游離細(xì)胞的提取工藝，其特征包括以下步驟
1)將丙烯酰胺發(fā)酵液經(jīng)過機(jī)械過濾器采用濾布過濾，去除發(fā)酵液中大顆粒的機(jī)械雜質(zhì)和未消耗的不溶性物質(zhì)，機(jī)械雜質(zhì)去除率> 99. 9% ；2)采用高速碟片式離心機(jī)對過濾后的發(fā)酵液進(jìn)行清洗分離，控制分離速度I.5t/h，排
渣
周期為4min，除去發(fā)酵液中殘留的未消耗的有機(jī)、無機(jī)可溶性營養(yǎng)物質(zhì)，離心后得到菌
液；
3)上述菌液經(jīng)過真空微濾纖維膜清洗，以純水為清洗劑，體積比為10:1，反復(fù)清洗2^3次，去除殘留的小分子可溶性無機(jī)、有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)及不溶物，得到純凈的游離菌體，電導(dǎo)率彡50Us/cm、色度彡10 Hazen，雜質(zhì)去除率彡99. 99%，整個過程游離細(xì)菌回收率彡99%。進(jìn)一步地，所述的機(jī)械過濾器濾膜材料為621號絨濾布復(fù)合一層200目尼龍濾布。本發(fā)明的優(yōu)點在于本工藝采取機(jī)械過濾加離心分離加微濾膜過濾清洗耦合工藝，能夠得到純凈的游離菌體，清洗合格的游離菌體電導(dǎo)率< 50Us/cm、色度< 10 Hazen、雜質(zhì)去除率> 99. 99%，整個過程游離細(xì)菌回收率> 99%。
具體實施例方式以下實施例僅為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。首先將含有諾卡氏放線菌的發(fā)酵液經(jīng)機(jī)械過濾器過濾，過濾采用621號絨濾布再復(fù)合一層200目的尼龍濾布有效去除發(fā)酵液中大顆粒機(jī)械雜質(zhì)及殘留的未消耗的不溶性物質(zhì)，機(jī)械雜質(zhì)去率> 99. 9%，除然后用一種5800轉(zhuǎn)/分高速碟片離心機(jī)(TID313型)對過濾后的發(fā)酵液進(jìn)行清洗分離，控制分離速度I. 5t/h，一個分離排渣周期為4分鐘，此過程中去除了 99%的發(fā)酵液中殘留的未消耗的有機(jī)、無機(jī)可溶性營養(yǎng)物，再將此離心后的菌液用一種真空微濾纖維膜清洗，以純水為清洗劑，體積比為10:1 反復(fù)清洗2 3次，去除殘留的小分子的可溶性無機(jī)、有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)及不溶物。經(jīng)此工藝處理后我們得到純凈的游離菌體電導(dǎo)率彡50Us / cm、色度彡10 Hazen，雜質(zhì)去除率>99. 99%，整個過程游離細(xì)菌回收率彡 99%o
其中，621號絨濾布，出自天津正中織物；200目的尼龍濾布，出自天津正中織物。
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵液中游離細(xì)胞的提取工藝，其特征包括以下步驟 1)將含有諾卡氏放線菌的發(fā)酵液經(jīng)過機(jī)械過濾器采用濾布過濾，去除發(fā)酵液中大顆粒 的機(jī)械雜質(zhì)和未消耗的不溶性物質(zhì)，機(jī)械雜質(zhì)去除率> 99. 9% ； 2)采用高速碟片式離心機(jī)對過濾后的發(fā)酵液進(jìn)行清洗分離，控制分離速度I.5t/h，排渣周期為4min，除去發(fā)酵液中殘留的未消耗的有機(jī)、無機(jī)可溶性營養(yǎng)物質(zhì)，離心后得到菌液； 3)上述菌液經(jīng)過真空纖維微濾膜清洗，以純水為清洗劑，體積比為10:1，反復(fù)清洗2^3次，去除殘留的小分子可溶性無機(jī)、有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)及不溶物，得到純凈的游離菌體，電導(dǎo)率彡50Us/cm、色度彡lOHazen，雜質(zhì)去除率彡99. 99%，整個過程游離細(xì)菌回收率彡99%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種發(fā)酵液中游離細(xì)胞的提取工藝，其特征在于所述的濾布材料為621號絨濾布復(fù)合一層200目尼龍濾布。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種發(fā)酵液中游離細(xì)胞的提取工藝,首先將含有諾卡氏放線菌的發(fā)酵液經(jīng)過機(jī)械過濾器過濾除大顆粒機(jī)械雜質(zhì)，再經(jīng)過碟片式離心機(jī)與真空微濾纖維膜過濾除無機(jī)、有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)及不溶物。本發(fā)明的有益效果為本工藝采取機(jī)械過濾加離心分離加微濾膜過濾清洗耦合工藝，能夠得到純凈的游離菌體，清洗合格的游離菌體電導(dǎo)率≤50Us/cm、色度≤10Hazen、雜質(zhì)去除率≥99.99%，整個過程游離細(xì)菌回收率≥99%。
文檔編號C12R1/365GK102776141SQ20121025162
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月20日
發(fā)明者丁建華, 曹艷, 楊濤, 沈瑞華, 熊光輝, 錢小方, 陸煌生, 顧稀平 申請人:江蘇南天農(nóng)科化工有限公司