專利名稱：彎曲菌分離、鑒定的試劑盒、制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及彎曲菌分離、鑒定的試劑盒、制備和應(yīng)用，彎曲菌屬中包括空腸彎曲菌或非空腸彎曲菌等彎曲菌的同步分離和鑒定方法，利用選擇性分離培養(yǎng)基對應(yīng)生長的彎曲菌典型菌落形態(tài)、簡易生化和特異性酶-底物反應(yīng)組合試驗(yàn)鑒定空腸彎曲菌或非空腸彎曲菌在內(nèi)的其他彎曲菌的試劑盒和使用方法。
背景技術(shù)：
彎曲菌屬目前有30多個(gè)種，廣泛寄生在自然界中的飛鳥和養(yǎng)殖的禽、畜動物中的腸道(結(jié)腸或空腸部位)，長期定殖并隨排泄物污染環(huán)境和食品，其中的空腸彎曲菌、結(jié)腸彎曲菌、海鷗彎曲菌屬于已知的禽、畜動物類肉類制品明確檢疫的病 原菌，同時(shí)，也是能引起食源性傳播和暴發(fā)的重要病原菌之一。國內(nèi)的許多實(shí)驗(yàn)室(包括臨床實(shí)驗(yàn)室和公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室)在實(shí)際工作中無法通過可選擇的常規(guī)微生物分離方法和材料達(dá)到分離空腸彎曲菌等彎曲菌的預(yù)期效果，反而受制于彎曲菌微需氧的苛氧條件、標(biāo)準(zhǔn)菌株不易保存和選擇性培養(yǎng)基的批間質(zhì)控要求繁瑣、敏感性和特異性低以及缺少簡單有效的對疑似菌落篩選方法和依賴鑒定用自動化生化反應(yīng)試劑材料所需的昂貴費(fèi)用，既費(fèi)工又費(fèi)時(shí)。本發(fā)明是基于傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)技術(shù)簡化，經(jīng)提煉、加入創(chuàng)新材料組合成的檢測程序，包括對多種復(fù)雜樣品的預(yù)處理和增值，使用選擇性平板的篩選、甄別包括空腸彎曲菌在內(nèi)的所有彎曲菌的典型菌落，結(jié)合簡易快速鑒別方法和特異性酶-底物反應(yīng)組合試驗(yàn)在2個(gè)培養(yǎng)周期內(nèi)鑒定空腸彎曲菌或非空腸彎曲菌的試劑盒和篩選方法，較之現(xiàn)階段使用的傳統(tǒng)分離平板和鑒定技術(shù)必須依賴自動化生化鑒定儀器或分子生物學(xué)為主的方法更具有易學(xué)、綜合成本低、操作簡單、快速、無需依賴特殊儀器且有特異性、準(zhǔn)確性及陽性預(yù)期值高的優(yōu)點(diǎn)。適用糞便(或者糞便拭子)、食品、環(huán)境水樣等多種標(biāo)本中包括空腸彎曲菌或非空腸彎曲菌的同步分離和鑒定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可利用彎曲菌屬所有不同種細(xì)菌的生物學(xué)特性和酶反應(yīng)試驗(yàn)鑒定的彎曲菌分離、鑒定的試劑盒、制備和應(yīng)用。主要解決對空腸彎曲菌和非空腸彎曲菌等彎曲菌分離方法存在的漏檢率高、鑒定步驟繁復(fù)且成本較高、篩選效能不夠直觀的技術(shù)難題。本發(fā)明針對多種不同類型標(biāo)本分別使用可選擇性增菌液或?qū)Ｒ恍苑蛛x平板配合簡單的生長條件甄別模式、獨(dú)特的革蘭染色形態(tài)和細(xì)菌特異性呼吸酶-底物反應(yīng)特征綜合建立而成的一套行之有效的分離和特異性鑒別試驗(yàn)，達(dá)到對包括空腸彎曲菌和非空腸彎曲菌等彎曲菌的分離、篩選和準(zhǔn)確鑒定的效果。本發(fā)明的技術(shù)方案為彎曲菌分離、鑒定的試劑盒及其制備方法，包括
I、選擇性增菌液I (衛(wèi)斯理肉湯)基礎(chǔ)成分胰化酪蛋白胨20. Og, N, N- 二羥乙基甘氨酸緩沖液(Bicine buffer) 10. Og (sigmaB3876),氯化鈉5. Og,酵母浸出物2. 5g,瓊脂粉l.Og，亞硫酸鐵O. 25g, Na2S2O3 O. 25g，丙酮酸鈉O. 25g，蒸餾水983. 75ml。堿性高鐵血紅素溶液6. 25ml (每IOOml配方高鐵血紅素O. 32g,0. 15N氫氧化鈉溶液IOOml溶解混勻后，5磅30分鐘，108°C冷卻備用)，10ml抗生素組合氨曲南10mg/L，兩性霉素B2mg/L，萬古霉素10mg/L。肉湯基礎(chǔ)經(jīng)15磅15分鐘(121°C )滅菌后冷卻至50°C加入高鐵血紅素溶液和抗生素組合液后分裝225ml/瓶備用。2、選擇性增菌液II :按照上述培養(yǎng)基分裝9ml/管，備用。3、改良卡爾馬里(KARMALI)瓊脂平板成分活性炭4. Og，哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ)990. 0ml，一起加熱溶解經(jīng)15磅15分鐘(121°C)滅菌后冷卻至50°C加入抗生素添加劑IOml(丙酮酸鈉50. Omg，放線菌酮50. Omg，頭孢哌酮16. Omg，氯化鐵血紅素16. Omg，萬古霉素10. Omg)，調(diào)整pH至7. 2 (按冷卻至25°C后測量值為標(biāo)準(zhǔn))。傾注無菌平板置冰箱中，備用。4、哥倫比亞血平板哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)950ml :特殊蛋白胨23. Og，瓊脂份10. Og,氯化鈉5. Og,淀粉I. Og,加蒸餾水950ml煮沸3次 后冷卻后調(diào)整pH至7. 3 (按冷卻至25°C后測量值為標(biāo)準(zhǔn))經(jīng)15磅15分鐘(121°C)滅菌后冷卻至50°C加入50ml無菌脫纖維綿羊血，混勻后傾注無菌平板置冰箱中，備用。5、微需氧產(chǎn)氣袋成分碳酸氫鈉8. Og,活性炭3. Og,枸櫞酸2. Og,鐵粉7g，無水硫酸銅I. 5g，硅藻土 10g，均勻干燥脫水后置錫紙袋內(nèi)，真空封口，預(yù)計(jì)產(chǎn)氣量為2. 5-3. 5升。使用方法取剪刀在袋口 1/3處斜開一小口，加入IOml蒸餾水后之置入容量為3. 5升或7升的樂扣樂扣(L0CK-L0CK)密封盒中，加蓋密封盒體后放入42°C培養(yǎng)。6、革蘭染色液革蘭染色液I液即結(jié)晶紫取結(jié)晶紫酒精飽和液(結(jié)晶紫13. 8g溶于95%酒精I(xiàn)OOml內(nèi))10ml，1%草酸銨水溶液(草酸銨0. 9g溶于90ml蒸餾水)90ml，混合均勻即可；革蘭染色液II液即碘酒取碘化鉀2. Og溶于IOml蒸餾水中，再加碘粒l.Og，充分搖動使之溶解，再加蒸餾水300ml即可。儲存于棕色瓶中備用；革蘭染色液III液純酒精液；革蘭染色液IV液即復(fù)紅染液(堿性復(fù)紅8. 16g，溶于質(zhì)量百分比濃度95%酒精I(xiàn)OOml內(nèi)，取IOml加入質(zhì)量百分比濃度5%石碳酸水溶液90ml，臨用時(shí)再以蒸餾水稀釋10倍)或沙黃染色液(用2. 5%沙黃酒精溶液10ml，加蒸餾水90ml)。使用方法涂片用火焰固定后，加結(jié)晶紫染液I分鐘，傾去染液，加碘液染液I分鐘，水洗。用酒精液脫色半分鐘，快速用流水沖去染液。最后加稀釋復(fù)紅復(fù)染半分鐘，流水沖洗干凈后待自然干燥后即可鏡檢。結(jié)果觀察革蘭陽性菌呈深紫色；革蘭陰性菌呈淡紅色。7、氧化酶試劑成分質(zhì)量百分比濃度1%對-氨基-4-甲基苯胺鹽酸鹽水溶液。使用方法取I片3X3cm的無菌濾紙，2次對折后將中心銳角部位與待測菌落表面接觸后展開濾紙片后將氧化酶試劑直接滴加于紙片上，試劑與菌落接觸擴(kuò)散后立即(3秒左右)呈現(xiàn)紅色-深紅色-紫紅色反應(yīng)者為陽性，超過10秒后出現(xiàn)陽性者不作為陽性結(jié)果判斷；不顯色者為陰性。8、馬尿酸紙片和馬尿酸酶反應(yīng)試劑馬尿酸紙片制備方法馬尿酸鈉l.Og，溶于50ml蒸餾水中(2%質(zhì)量百分比濃度)，經(jīng)0. 22 μ m孔徑濾膜加壓過濾后滴加于直徑6. 35mm無菌厚紙片中，烘干備用；馬尿酸酶反應(yīng)試劑茚三酮溶液茚三酮3. 5g，加50ml丙酮和50ml正丁醇溶解混均后分裝2. 5ml于無菌棕色滴瓶中備用。快速馬尿酸水解酶試驗(yàn)方法取生理鹽水0. Iml加于清潔小試管中，并投入馬尿酸鹽紙片I張，再加入50μ I經(jīng)f2d培養(yǎng)的用被測菌的新鮮菌落或菌苔調(diào)制成的> IO1Vml濃厚菌懸液，36°C水浴2h，緩緩加入馬尿酸鹽試劑0. 1ml，搖勻后36°C放置5分鐘，呈深紫色變化者即為陽性?？焖傺趸概c馬尿酸水解酶試驗(yàn)(陽性)是判定空腸彎曲菌的唯一依據(jù)。
本發(fā)明的有益效果是根據(jù)多種不同類型的標(biāo)本選擇先進(jìn)行預(yù)增菌或直接使用選擇性分離平板的方式達(dá)到對標(biāo)本中目的菌進(jìn)行有效分離，通過選擇性分離平板生長的“疑似”典型菌落接種于純化、非選擇性平板的傳代，在細(xì)菌的2次傳代周期內(nèi)完成培養(yǎng)條件甄別試驗(yàn)、獨(dú)特的革蘭染色形態(tài)、氧化酶試驗(yàn)、馬尿酸酶水解試驗(yàn)等簡易、有效、特異、準(zhǔn)確的鑒定空腸彎曲菌和非空腸彎曲菌等彎曲菌的目的，而簡易有效的操作過程也極大提高了單位時(shí)間的工作效率，使專業(yè)人員更易掌握和接受，客觀上能有效減少整個(gè)試驗(yàn)過程中人為因素造成的隨機(jī)誤差。
具體實(shí)施例方式首先按照技術(shù)方案內(nèi)容配制試劑盒，使用者根據(jù)不同檢材選擇使用增菌分離步驟或直接用選擇性平板的分離步驟，選擇3-5個(gè)疑似菌落的使用組合鑒別試驗(yàn)完成甄別試驗(yàn)。
I、不同檢材的解釋、采集要求和預(yù)處理方法。I)、糞便包括人(患者和帶菌者)、家禽(畜)等動物性糞便標(biāo)本盡可能新鮮采集約Ig (拇指大小)，液狀便采約lrnl，在lh-2h內(nèi)進(jìn)行接種培養(yǎng)。若短時(shí)間不能檢測時(shí)，應(yīng)使用商品化運(yùn)送培養(yǎng)基保存，24h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。糞便類樣品一般采用直接分離法，即用棉簽(拭子)挑取標(biāo)本直接接種卡爾馬里(KARMALI)平板后劃線分離，平板置容量為3. 5升的L0CK-L0CK塑料盒中，放入I個(gè)微需氧產(chǎn)氣袋(已加入IOml蒸餾水)后蓋緊密封后置42°C培養(yǎng)48h觀察菌落生長結(jié)果。2)、水包括飲用水、生活用水、江、河、湖水和污水等液態(tài)標(biāo)本用無菌玻璃或塑料瓶采集250ml-500ml,液體清澈者可使用孔徑O. 22 μ m-0. 45 μ m濾膜進(jìn)行負(fù)壓過濾后將濾膜剪碎后置彎曲菌選擇性增菌液II中進(jìn)行選擇性增菌，增菌管置容量為7升的L0CK-L0CK塑料盒中，放入2個(gè)微需氧產(chǎn)氣袋(已各加入IOml蒸餾水)后蓋緊密封后置42°C培養(yǎng)24_48h后挑取增菌液I滿環(huán)接種KARMALI平板后劃線分離，平板置容量為3. 5升的L0CK-L0CK塑料盒中，放入I個(gè)微需氧產(chǎn)氣袋(已加入IOml蒸餾水)后蓋緊密封后置42°C培養(yǎng)48h觀察菌落生長結(jié)果。3)、食品采集定型包裝或非定型包裝500g_1000g，對部分表面含水的樣品可以先使用棉簽(拭子)直接接觸樣品表面進(jìn)行多點(diǎn)涂抹后直接接種KARMALI平板后劃線分離，平板置容量為3. 5升的L0CK-L0CK塑料盒中，放入I個(gè)微需氧產(chǎn)氣袋(已加入IOml蒸餾水)后蓋緊密封后置42°C培養(yǎng)48h觀察菌落生長結(jié)果；所有定型或非定型食品樣品剪碎或均質(zhì)后按照食品與彎曲菌選擇性增菌液I 1:10比例進(jìn)行混勻，增菌容器置容量為7升的L0CK-L0CK塑料盒中，放入2個(gè)微需氧產(chǎn)氣袋(已各加入IOml蒸餾水)后蓋緊密封后置42°C培養(yǎng)24-48h后挑取增菌液Iml轉(zhuǎn)種于彎曲菌選擇性增菌液II中，增菌管置容量為7升的L0CK-L0CK塑料盒中，放入2個(gè)微需氧產(chǎn)氣袋(已各加入IOml蒸餾水)后蓋緊密封后置42°C培養(yǎng)24-48h后挑取增菌液I滿環(huán)接種KARMALI平板后劃線分離，平板置容量為3. 5升的L0CK-L0CK塑料盒中，放入I個(gè)微需氧產(chǎn)氣袋(已加入IOml蒸餾水)后蓋緊密封后置42°C培養(yǎng)48h觀察菌落生長結(jié)果。2、檢查方法
I) KARMALI選擇性分離平板生長的“疑似”典型菌落的判斷(48h):初代分離的空腸彎曲菌和非空腸彎曲菌等彎曲菌落為無色，空腸彎曲菌落有明顯的透明質(zhì)樣感，結(jié)腸彎曲菌落相對呈灰白色；空腸彎曲菌落為1_2_，結(jié)腸彎曲菌落為2-3_ ;總體來說濕潤、較透明、小且不規(guī)則的扁平菌落符合彎曲菌疑似菌落的特征。觀察并選擇3-5個(gè)彎曲菌疑似菌落進(jìn)行組合鑒定試驗(yàn)。2)哥倫比亞血平板純化彎曲菌落特征典型的空腸彎曲菌和非空腸彎曲菌等彎曲菌經(jīng)42 °C微需氧培養(yǎng)48h后菌落特征分別為空腸彎曲菌落或菌苔為灰白、濕潤、單個(gè)菌落2mm、呈扁平不規(guī)則狀；結(jié)腸彎曲菌等非空腸彎曲菌落或菌苔為白色、濕潤、單個(gè)菌落3mm、呈相對凸起的不規(guī)則形狀。3)組合鑒定試驗(yàn)程序I :培養(yǎng)條件甄別試驗(yàn)-革蘭染色-氧化酶-馬尿酸鹽水解酶試驗(yàn)-報(bào)告結(jié)果。即首先挑取彎曲菌疑似菌落分別劃線接種于1/2個(gè)哥倫比亞血平板后分別置36°C普通培養(yǎng)箱進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)和42°C微需氧培養(yǎng)4 8h后分別觀察菌落生長情況挑取普通培養(yǎng)箱不生長但是微需氧生長的同一樣品對應(yīng)生長的哥倫比亞血平板培養(yǎng)物依次進(jìn)行革蘭染色和氧化酶試驗(yàn)革蘭染色結(jié)果為典型的革蘭陰性近似“短桿菌”且“似桿非桿”的呈扭曲狀或螺旋狀形態(tài)；氧化酶試驗(yàn)結(jié)果為非?？焖俚年栃苑磻?yīng)。完成培養(yǎng)條件甄別試驗(yàn)-革蘭染色-氧化酶試驗(yàn)的菌落符合彎曲菌屬的生物學(xué)典型特征；隨后當(dāng)馬尿酸鹽水解酶試驗(yàn)為陽性結(jié)果時(shí)應(yīng)報(bào)告為空腸彎曲菌；當(dāng)馬尿酸鹽水解酶試驗(yàn)為陰性結(jié)果時(shí)應(yīng)報(bào)告為彎曲菌屬的陽性結(jié)果。4)組合鑒定試驗(yàn)程序II :革蘭染色-培養(yǎng)條件甄別試驗(yàn)-氧化酶-馬尿酸鹽水解酶試驗(yàn)-報(bào)告結(jié)果。即首先挑取彎曲菌疑似菌落進(jìn)行革蘭染色當(dāng)革蘭染色結(jié)果為典型的革蘭陰性近似“短桿菌”且“似桿非桿”的呈扭曲狀或螺旋狀形態(tài)時(shí)初步判斷“高度懷疑”，反之則排除彎曲菌；挑取革蘭染色結(jié)果“高度懷疑”的菌落分別劃線接種于1/2個(gè)哥倫比亞血平板后分別置36°C普通培養(yǎng)箱進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)和42°C微需氧培養(yǎng)48h后分別觀察菌落生長情況挑取普通培養(yǎng)箱不生長但是微需氧生長的同一樣品對應(yīng)生長的哥倫比亞血平板培養(yǎng)物進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)。如果氧化酶試驗(yàn)結(jié)果為非?？焖俚年栃苑磻?yīng)可以認(rèn)為已經(jīng)完成革蘭染色-培養(yǎng)條件甄別試驗(yàn)-氧化酶的菌落符合彎曲菌屬的生物學(xué)典型特征；隨后當(dāng)馬尿酸鹽水解酶試驗(yàn)為陽性結(jié)果時(shí)應(yīng)報(bào)告為空腸彎曲菌；當(dāng)馬尿酸鹽水解酶試驗(yàn)為陰性結(jié)果時(shí)應(yīng)報(bào)告為彎曲菌屬的陽性結(jié)果。
權(quán)利要求
1.彎曲菌分離、鑒定的試劑盒，包括 1)、選擇性增菌液I: 基礎(chǔ)成分胰化酪蛋白胨20. Og, N，N-二羥乙基甘氨酸緩沖液10. 0g，氯化鈉5. 0g，酵母浸出物2. 5g，瓊脂粉l.Og，亞硫酸鐵O. 25g, Na2S2O3 O. 25g，丙酮酸鈉O. 25g，蒸餾水983. 75ml ； 堿性高鐵血紅素溶液6. 25ml ； IOml抗生素組合液氨曲南10mg/L,兩性霉素B2mg/L,萬古霉素10mg/L ； 上述組分混合后分裝225ml/瓶備用； 2)、選擇性增菌液II:選擇性增菌液I分裝9ml/管，備用； 3)、改良卡爾馬里瓊脂平板成分 活性炭4. Og, 哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ)990. Oml, 抗生素添加劑IOml :丙酮酸鈉50. Omg,放線菌酮50. Omg,頭孢哌酮16. Omg,氯化鐵血紅素16. Omg,萬古霉素10. Omg, 上述組分混合后傾注無菌平板置冰箱中，備用； 4)、哥倫比亞血平板哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)950ml:蛋白胨23. 0g，瓊脂粉10. 0g，氯化鈉5.Og,淀粉I. Og,加蒸懼水950ml煮沸3次后加入50ml無菌脫纖維綿羊血,混勻后傾注無菌平板置冰箱中，備用； 5)、微需氧產(chǎn)氣袋成分碳酸氫鈉8.0g，活性炭3. 0g，枸櫞酸2. 0g，鐵粉7g，無水硫酸銅I. 5g，硅藻土 10g，均勻干燥脫水后置錫紙袋內(nèi)，真空封口 ； 6)、革蘭染色液革蘭染色液I液結(jié)晶紫酒精飽和液IOml和1%草酸銨水溶液90ml的混合液；革蘭染色液II液碘酒；革蘭染色液III液純酒精液；革蘭染色液IV液即復(fù)紅染液； 7)、氧化酶試劑成分質(zhì)量百分比濃度1%對-氨基-4-甲基苯胺鹽酸鹽水溶液； 8)、馬尿酸紙片和馬尿酸酶反應(yīng)試劑所述的馬尿酸酶反應(yīng)試劑為茚三酮溶液。
2.權(quán)利要求I所述試劑盒的制備方法，包括以下步驟 1、選擇性增菌液I制備 基礎(chǔ)成分胰化酪蛋白胨20. Og, N，N-二羥乙基甘氨酸緩沖液10. 0g，氯化鈉5. 0g，酵母浸出物2. 5g，瓊脂粉l.Og，亞硫酸鐵O. 25g，Na2S2O3 0.25g，丙酮酸鈉0. 25g，蒸餾水983. 75ml ； 堿性高鐵血紅素溶液6. 25ml :每IOOml配方高鐵血紅素0. 32g,0. 15N氫氧化鈉溶液IOOml溶解混勻后，5磅30分鐘，108°C冷卻備用； IOml抗生素組合氨曲南10mg/L,兩性霉素B2mg/L,萬古霉素10mg/L 基礎(chǔ)成分經(jīng)121°C 15磅15分鐘滅菌后冷卻至50°C加入高鐵血紅素溶液和抗生素組合液后分裝225ml/瓶備用； 2、選擇性增菌液II制備選擇性增菌液I分裝9ml/管，備用； 3、改良卡爾馬里瓊脂平板制備成分活性炭4.0g，哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ)990. 0ml，一起加熱溶解經(jīng)121°C 15磅15分鐘滅菌后冷卻至50°C加入抗生素添加劑10ml，所述的抗生素添加劑由下述組分混合而成丙酮酸鈉50. Omg,放線菌酮50. Omg,頭孢哌酮16. Omg,氯化鐵血紅素16. Omg，萬古霉素10. Omg,按冷卻至25°C后測量值為標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)整pH至7. 2，傾注無菌平板置冰箱中，備用； 4、哥倫比亞血平板制備哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)950ml:蛋白胨23. Og，瓊脂粉10. 0g，氯化鈉5. Og,淀粉I. Og,加蒸餾水950ml煮沸3次，按冷卻至25°C后測量值為標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)整pH至7.3，經(jīng)121°C 15磅15分鐘滅菌后冷卻至50°C加入50ml無菌脫纖維綿羊血，混勻后傾注無菌平板置冰箱中，備用； 5、微需氧產(chǎn)氣袋制備成分碳酸氫鈉8.Og,活性炭3. Og,枸櫞酸2. Og,鐵粉7g，無水硫酸銅I. 5g，硅藻土 10g，均勻干燥脫水后置錫紙袋內(nèi)，真空封口 ； 6、革蘭染色液制備革蘭染色液I液即結(jié)晶紫取結(jié)晶紫酒精飽和液10ml，1%草酸銨水溶液90ml，混合均勻即可；革蘭染色液II液即碘酒取碘化鉀2. Og溶于IOml蒸餾水中，再加碘粒I. 0g，充分搖動使之溶解，再加蒸餾水300ml即可，儲存于棕色瓶中備用；革蘭染色液III液純酒精液；革蘭染色液IV液即復(fù)紅染液堿性復(fù)紅8. 16g，溶于質(zhì)量百分比濃度95%酒精I(xiàn)OOml內(nèi)，取IOml加入質(zhì)量百分比濃度5%石碳酸水溶液90ml，臨用時(shí)再以蒸餾水稀釋10倍或沙黃染色液； 7、氧化酶試劑制備成分質(zhì)量百分比濃度1%對-氨基-4-甲基苯胺鹽酸鹽水溶液；8、馬尿酸紙片和馬尿酸酶反應(yīng)試劑制備馬尿酸紙片制備方法馬尿酸鈉l.Og，溶于50ml蒸餾水中，經(jīng)0. 22 μ m孔徑濾膜加壓過濾后滴加于直徑6. 35mm無菌厚紙片中，烘干備用；馬尿酸酶反應(yīng)試劑茚三酮溶液茚三酮3. 5g，加50ml丙酮和50ml正丁醇溶解混均后分裝2. 5ml于無菌棕色滴瓶中備用。
3.權(quán)利要求I所述試劑盒在水中彎曲菌的同步分離和鑒定中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求I所述試劑盒在食品中彎曲菌的同步分離和鑒定中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及彎曲菌分離、鑒定的試劑盒、制備和應(yīng)用，主要解決對空腸彎曲菌和非空腸彎曲菌等彎曲菌分離方法存在的漏檢率高、鑒定步驟繁復(fù)且成本較高、篩選效能不夠直觀的技術(shù)難題。本發(fā)明技術(shù)方案彎曲菌分離、鑒定的試劑盒，包括選擇性增菌液Ⅰ、選擇性增菌液Ⅱ、改良卡爾馬里瓊脂平板、哥倫比亞血平板、微需氧產(chǎn)氣袋、革蘭染色液、氧化酶試劑、馬尿酸紙片和馬尿酸酶反應(yīng)試劑；利用選擇性分離培養(yǎng)基對應(yīng)生長的彎曲菌典型菌落形態(tài)、簡易生化和特異性酶-底物反應(yīng)組合試驗(yàn)鑒定空腸彎曲菌或非空腸彎曲菌。
文檔編號C12Q1/04GK102816831SQ20121026844
公開日2012年12月12日 申請日期2012年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月1日
發(fā)明者許學(xué)斌, 袁政安, 金匯明 申請人:上海市疾病預(yù)防控制中心