毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種引起食物中毒沙門(mén)氏菌屬快檢試劑，特別是食源性鼠傷寒沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、付傷寒甲、乙沙門(mén)氏菌的快檢試劑及其制備方法。該快檢試劑具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等特點(diǎn)。較傳統(tǒng)方法更具有應(yīng)用價(jià)值，對(duì)指導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。本發(fā)明是將增菌液中增加了特異性的沙門(mén)氏菌屬多價(jià)及單價(jià)血清，使檢測(cè)確診過(guò)程縮短至2-6小時(shí)，增菌時(shí)能夠利用特異血清的血清凝集反應(yīng)，鑒定的準(zhǔn)確率均在97％以上。檢測(cè)致病菌時(shí)耗時(shí)少、靈敏度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)。
【專利說(shuō)明】毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】本發(fā)明涉及一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑，特別是最常見(jiàn)的在外環(huán)境中生活力較強(qiáng)，在水、牛乳及肉類食品中能生存幾個(gè)月，最適溫度下繁殖迅速的毒蠟樣芽胞桿菌的快檢試劑。毒蠟樣芽胞桿菌食物中毒多由米飯、動(dòng)物性食品，特別是肉類引起(如病死牲畜肉、熟肉制品)，也可由家禽、蛋類、奶類食品引起。以急性胃腸炎為主，主要癥狀有嘔吐，腹瀉，腹痛，糞便為黃綠色水樣便。發(fā)熱3 8 0C-4 (TC。重病人出現(xiàn)寒戰(zhàn)，驚厥，抽搐和昏迷。老人，兒童和體弱者如不及時(shí)進(jìn)行急救處理也可導(dǎo)致死亡。傳統(tǒng)常規(guī)檢測(cè)診斷方法為細(xì)菌培養(yǎng)分離，選擇標(biāo)準(zhǔn)典型菌株再進(jìn)行血清學(xué)鑒定檢測(cè)。整個(gè)檢測(cè)確診過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)、一般需要72-120小時(shí)，靈敏度不高，對(duì)快速準(zhǔn)確診斷，搶救病人帶來(lái)極大的不便，本發(fā)明打破傳統(tǒng)常規(guī)分步檢測(cè)手段，在快速鑒別診斷食物中毒致病菌毒蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用上具有明顯的優(yōu)勢(shì)。從而減少由于檢測(cè)手段落后而造成對(duì)人體健康的危害，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等特點(diǎn)。較傳統(tǒng)方法更具有應(yīng)用價(jià)值，對(duì)指導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。
[0002]【背景技術(shù)】本發(fā)明的目的在于提供一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑，蠟樣芽胞桿菌引起食物中毒。全年都可發(fā)生，多由米飯、動(dòng)物性食品如肉類引起引起。傳統(tǒng)常規(guī)檢測(cè)診斷方法是要經(jīng)過(guò)標(biāo)本采集、分離鑒定、小白鼠喂飼實(shí)驗(yàn)、雙份血清凝集實(shí)驗(yàn)、沉淀實(shí)驗(yàn)等鑒定實(shí)驗(yàn)才能確診。傳統(tǒng)生化鑒定試驗(yàn)周期長(zhǎng)，操作繁瑣，試劑質(zhì)量無(wú)法保證，嚴(yán)重影響了致病菌確認(rèn)工作、選擇性分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基上挑選可疑菌落需要經(jīng)驗(yàn)，存在漏檢的可能，而毒蠟樣芽胞桿菌的腸毒素穩(wěn)定性很高，加工后的食物雖然有時(shí)檢不出，但仍有可能存在腸毒素，而腸毒素的常規(guī)檢驗(yàn)方法需要做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，難度大，周期長(zhǎng)。整個(gè)檢測(cè)確診過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)約4-15天。本發(fā)明是將增菌液中增加了特異性的毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清，使檢測(cè)確診過(guò)程縮短至2-6小時(shí)，增菌時(shí)能夠利用特異血清的血清凝集反應(yīng)，鑒定的準(zhǔn)確率均在97%以上。檢測(cè)致病菌時(shí)耗時(shí)少、靈敏度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)。
[0003]
【發(fā)明內(nèi)容】
本發(fā)明的要點(diǎn)在于選擇合適的培養(yǎng)基組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌、無(wú)菌制備血清等工藝而成一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑。
[0004]本發(fā)明選擇的快檢試劑配方如下`(克/每升蒸餾水)蛋白胨5.0-10.0 ;乳糖
3.5-4.5 ;磷酸氫二鈉4.0-5.0 ;磷酸二氫鈉5.0-6.0 ;復(fù)合生長(zhǎng)因子10.0-20.0 ;無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清10-20ml ;蒸餾水加至1000 mL，調(diào)pH7.1
快檢試劑呈無(wú)色或淡黃色透明液體，無(wú)任何沉淀物。食物源性中毒樣品在接種培養(yǎng)2-6小時(shí)時(shí)，液面交界有處有白色沉淀凝集，鏡下有凝集包團(tuán)，為陽(yáng)性，即可確診。磷酸鹽為緩沖劑，保持培養(yǎng)基PH穩(wěn)定，有利致病菌的生長(zhǎng)繁殖。
[0005]本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是:
1)、將蛋白胨、乳糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、復(fù)合生長(zhǎng)因子混合于900mL蒸餾水加熱溶解，調(diào)pH7.1，121°C 15min高壓滅菌；
2)、冷卻后以無(wú)菌操作將兩液合并，加無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清混勻，分裝于滅菌容器內(nèi)備用。[0006]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):(1)快檢試劑營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)單；(2)臨床應(yīng)用效果滿意，解決了床邊接種的困難，污染小；(3)檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、選擇性強(qiáng)、檢出率高；
(4)接種樣本2-6小時(shí)后，即能得到液體篩選增菌凝集包團(tuán)，便于觀察菌落生長(zhǎng)情況，穩(wěn)定性好；(5)對(duì)快速準(zhǔn)確診斷，搶救病人對(duì)指導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。
[0007]【具體實(shí)施方式】下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明:
按照下表所列數(shù)據(jù)(克/每升蒸餾水)及其所述步驟進(jìn)行配置:
配方一:
蛋白胨5.0-10.0 ;乳糖3.5-4.5 ;磷酸氫二鈉4.0-5.0 ;磷酸二氫鈉5.0-6.0 ;復(fù)合生長(zhǎng)因子10.0-20.0 ;無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清10-20ml ;蒸餾水加至1000 mL,調(diào) ρΗ7.I。
配方二:
蛋白胨6.0-8.0;乳糖4.0-4.5 ;磷酸氫二鈉4.5-5.0;磷酸二氫鈉5.5-6.0;復(fù)合生長(zhǎng)因子14.0-20.0 ;無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清14-20ml ;蒸餾水加至1000 mL,調(diào) ρΗ7.I。
配方三:
蛋白胨6.0-9.0;乳糖3.5-4.0 ;磷酸氫二鈉4.0-4.5 ;磷酸二氫鈉5.0-5.5 ;復(fù)合生長(zhǎng)因子12.0-19.0 ;無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清ll_19ml ;蒸餾水加至1000 mL,調(diào) ρΗ7.I。
【權(quán)利要求】
1.本發(fā)明涉及一種蠟樣芽胞桿菌快檢試劑，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸餾水)蛋白胨5.0-10.0;乳糖3.5-4.5 ;磷酸氫二鈉4.0-5.0 ;磷酸二氫鈉5.0-6.0 ;復(fù)合生長(zhǎng)因子10.0-20.0 ;無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清10-20ml ;蒸餾水加至1000 mL,調(diào) ρΗ7.I。
2.—種權(quán)利要求1所述蠟樣芽胞桿菌快檢試劑的制備方法，其特征在于具有如下的步驟: 1)、將蛋白胨、乳糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、復(fù)合生長(zhǎng)因子混合于900mL蒸餾水加熱溶解，調(diào)pH7.1，121°C 15min高壓滅菌； 2)、冷卻后以無(wú)菌操作將兩液合并，加無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清混勻，分裝于滅菌容器內(nèi)備用。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK103667416SQ201210354584
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2012年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月22日
【發(fā)明者】崔瑛 申請(qǐng)人:青島道合生物科技有限公司