專利名稱：含有抗igf-1受體抗體的組合物和獲得所述抗體的方法
含有抗IGF-1受體抗體的組合物和獲得所述抗體的方法
本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2005年12月20日、申請(qǐng)?zhí)枮?00580048584. 9、發(fā)明名稱為“含有抗IGF-I受體抗體的組合物和獲得所述抗體的方法”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
參考相關(guān)申請(qǐng)
本申請(qǐng)要求2004年12月22日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)系列60/638，961的利益， 且在此引用作為參考。發(fā)明領(lǐng)域
本申請(qǐng)?zhí)峁┝松婕翱笽GF-I受體抗體的組合物和方法。
發(fā)明背景
胰島素樣生長(zhǎng)因子I和2 (分別為IGF-I和I GF-2)促進(jìn)多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的分化和增殖。
IGF-I和IGF-2兩者隨血漿廣泛地在整個(gè)身體中循環(huán)。其通過結(jié)合并激活I(lǐng)GF-I 受體(IGF-IR)來對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生其作用。IGF-IR是酪氨酸激酶生長(zhǎng)因子受體家族的成員。其氨基酸序列與胰島素受體的氨基酸序列具有大約70%的同一性。
異常的IGF-1、IGF-2、和/或IGF-IR的活性與許多醫(yī)學(xué)狀況相關(guān)聯(lián)，所述醫(yī)學(xué)狀況包括不同類型的癌癥、生長(zhǎng)缺陷(例如，肢端肥大癥、巨人癥和身材矮小癥(small stature))、牛皮癬、動(dòng)脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后血管的平滑肌再狹窄(restonsis)、糖尿病、微血管增生、神經(jīng)病變、肌肉質(zhì)量減少(loss of muscle mass)和骨質(zhì)疏松癥。
序列。
附圖概述圖I提供了編碼輕鏈可變結(jié)構(gòu)域LI至L52和重鏈可變結(jié)構(gòu)域Hl至H52的核苷酸圖2提供了輕鏈可變結(jié)構(gòu)域LI至L52的氨基酸序列。⑶R和FR區(qū)被標(biāo)示。圖3提供了重鏈可變結(jié)構(gòu)域Hl至H52的氨基酸序列。⑶R和FR被標(biāo)示。圖4提供了輕鏈可變結(jié)構(gòu)域LI至L52的輕鏈CDRl區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。
圖5提供了輕鏈可變結(jié)構(gòu)域LI至L52的輕鏈⑶R2區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。
圖6提供了輕鏈可變結(jié)構(gòu)域LI至L52的輕鏈⑶R3區(qū)域的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。
圖7提供了重鏈可變結(jié)構(gòu)域Hl至H52的重鏈⑶Rl區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。
圖8提供了重鏈可變結(jié)構(gòu)域Hl至H52的重鏈⑶R2區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。
圖9提供了重鏈可變結(jié)構(gòu)域Hl至H52的重鏈⑶R3區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。


圖10提供了融合至人I gGlFc區(qū)域(下劃線標(biāo)示的)的人IGF-1R細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的14氨基酸序列，其具有caspace-3切割位點(diǎn)(粗體)。
圖11提供了融合至人IgGlFc區(qū)域(下劃線標(biāo)示的)的人胰島素受體的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。
圖12提供了在C末端與雞抗生物蛋白融合的人IGR-IR細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(包括信號(hào)肽)的蛋白序列。在該圖中，將IGF-IR E⑶中的起始Met指定為位置I。
圖13提供了人K輕鏈抗體恒定區(qū)和人IgGl重鏈抗體恒定區(qū)的多肽序列。
圖14提供了舉例說明4個(gè)噬菌體展示的抗體對(duì)IGF-IR-Fc分子的結(jié)合顯著好于其對(duì)胰島素受體-Fe或鼠類Fe的結(jié)合的圖。
圖15提供了舉例說明某些抗體與IGF-I和IGF-2競(jìng)爭(zhēng)對(duì)IGF-1R的結(jié)合的能力的圖。
圖16提供了舉例說明某些抗體抑制32D hu IGF-1R+IRS-1細(xì)胞生長(zhǎng)的能力的圖。
圖17提供了舉例說明某些抗體抑制Balb/C 3T3hu IGF-1R細(xì)胞生長(zhǎng)的能力的圖。
發(fā)明概述
在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.包含選自下列序列的輕鏈CDR3 i.與選自圖6中所示L1-L52的輕鏈CDR3序列的CDR3序列相差不超過總共2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈⑶R 3序列；ii.M X1X2X3X4X5P X6X7Q X8X9X10XiiP X12T;和 iv. Q S Y X13X14X15N X16X17X18 ；b.包含選自下列序列的重鏈 CDR3 :i.與選自圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列的CDR3序列相差不超過總共3個(gè)氨基酸的添加、置換和 / 或缺失的重鏈 CDR3 序列；ii. X19X20X21X22X23X24X25X26X27F D I; iii. X28X29X3tlX31X32X 33X34X35X36X37X38M D V;iv.D S S X39;或c. (a)的輕鏈 CDR3 序列和(b)的重鏈 CDR3 序列；其中X1是谷氨酰胺殘基或谷氨酸殘基，X2是丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、蘇氨酸殘基或絲氨酸殘基，X3是亮氨酸殘基、苯丙氨酸殘基或蘇氨酸殘基，X4是谷氨酰胺殘基、谷氨酸殘基或組氨酸殘基，X5是蘇氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、色氨酸殘基或纈氨酸殘基，X6是甘氨酸殘基、丙氨酸殘基、纈氨酸殘基、亮氨酸殘基、異亮氨酸殘基、脯氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、色氨酸殘基或半胱氨酸殘基，X7是蘇氨酸殘基、丙氨酸殘基或絲氨酸殘基，X8是精氨酸殘基、絲氨酸殘基、亮氨酸殘基或丙氨酸殘基，X9是天冬酰胺殘基、絲氨酸殘基或組氨酸殘基，X10是天冬酰胺殘基或絲氨酸殘基，X11是色氨酸殘基、纈氨酸殘基、酪氨酸殘基、脯氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X12是亮氨酸殘基、酪氨酸殘基或異亮氨酸殘基，X13是天冬氨酸殘基或谷氨酰胺殘基，X14是絲氨酸殘基或脯氨酸殘基，X15是絲氨酸殘基、酪氨酸殘基、天冬氨酸殘基或丙氨酸殘基，X16是谷氨酰胺殘基、精氨酸殘基、纈氨酸殘基或色氨酸殘基，X17是精氨酸殘基、纈氨酸殘基、異亮氨酸殘基或無殘基，X18是纈氨酸殘基或無殘基，X19是谷氨酸殘基或無殘基，X2tl是酪氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X21是絲氨酸殘基、天冬酰胺殘基、色氨酸殘基、谷氨酸殘基、天冬氨酸殘基或無殘基，X22是絲氨酸殘基、天冬氨酸殘基、色氨酸殘基、丙氨酸殘基、精氨酸殘基、蘇氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、亮氨酸殘基、谷氨酸殘基或無殘基，X23是絲氨酸殘基、甘氨酸殘基、天冬酰胺殘基、蘇氨酸殘基、色氨酸殘基、 纈氨酸殘基、丙氨酸殘基或異亮氨酸殘基，X24是精氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、酪氨酸殘基、 纈氨酸殘基、丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基，或色氨酸殘基，X25是天冬酰胺殘基、亮氨酸殘基、天冬氨酸殘基、蘇氨酸殘基、色氨酸殘基、酪氨酸殘基、纈氨酸殘基、丙氨酸殘基，或組氨酸殘基，X26是天冬氨酸殘基、絲氨酸殘基、天冬酰胺殘基，或谷氨酰胺殘基，X27是丙氨酸殘基或脯氨酸殘基，X28是丙氨酸殘基或無殘基，X29是谷氨酸殘基、 酪氨酸殘基、甘氨酸殘基或無殘基，X3tl是精氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X31是甘氨酸殘基、天冬氨酸殘基、纈氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X32是絲氨酸殘基、天冬氨酸殘基、甘氨酸殘基或無殘基，X33是苯丙氨酸殘基、天冬氨酸殘基、酪氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基、組氨酸殘基、色氨酸殘基或無殘基，X34是色氨酸殘基、天冬氨酸殘基、酪氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X35是天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基、精氨酸殘基、絲氨酸殘基、甘氨酸殘基、酪氨酸殘基，或色氨酸殘基，X36是酪氨酸殘基、賴氨酸殘基、異亮氨酸殘基、亮氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X37是酪氨酸殘基、絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、天冬氨酸殘基或甘氨酸殘基，X38是甘氨酸殘基、天冬酰胺殘基，或酪氨酸殘基，X39是纈氨酸殘基、甘氨酸殘基，或絲氨酸殘基，且所述抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合人IGF-1R。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDRl序列相差總共不超過6個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相差總共不超過2個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈 CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相差總共不超過3個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈⑶R3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的⑶Rl序列相差總共不超過2個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52 的CDR2序列相差總共不超過5個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列； 和f.與圖9中所示的H1-H52的⑶R3序列相差總共不超過4個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和 /或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDRl序列相差總共不超過5個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相差總共不超過I個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相差總共不超過2個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDRl序列相差總共不超過I個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈⑶Rl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的⑶R2序列相異總共不超過4個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的 H1-H52的⑶R3序列相異總共不超過3個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈⑶R3 序列；在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDRl序列相異總共不超過4個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和 /或缺失的輕鏈CDRl序列；b.圖5中所示的L1-L52的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的 L1-L52的CDR3序列相異總共不超過I個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3 序列；d.圖7中所示的H1-H52的重鏈⑶Rl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的⑶R2序列相異總共不超過3個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列；在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDRl序列相異總共不超過3個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.圖6中所示的L1-L52的輕鏈CDR3序列；c.與圖 8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈⑶R2序列；和d.與圖9中所示的H1-H52的⑶R3序列相異總共不超過I個(gè)氨基酸的添加、置換或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDRl序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈⑶Rl序列；b.與圖8中所示的H1-H52 的CDR2序列相異總共不超過I個(gè)氨基酸的添加、置換或缺失的重鏈CDR2序列；和c.圖9 中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDRl序列相異總共不超過I個(gè)氨基酸殘基的添加、置換或缺失的輕鏈⑶Rl序列；和b.圖8中所示的H1-H52的重鏈CDR2序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含圖4中所示的L1-L52 的CDRl序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含序列，所述序列選自a.選自 i. RSSQSLLHSNGYNYLD、ii. RASQ(G/S) (I/V) (G/S)X(Y/F)L(A/N)和 iii. RSSQS(L/I) XXXXX 的輕鏈 CDRl 序列；b.選自 i. LGSNRAS、ii. AASTLQS 和 iii. EDNXRPS 的輕鏈 CDR2 序列；c.選自i. SSNWWS、ii. XYYWS 和 iii. SYAM(S/Η)的重鏈 CDRl 序列；和 d.選自 i. (E/I) (I/V) (Y/N) (H/Y) SGST (N/Y) YNPSLKS;和 ii. XIS (G/S) SG (G/S) STYYADSVKG 的重鏈 CDR2 序列；其中，括號(hào)內(nèi)包括的氨基酸殘基符號(hào)代表序列中相同位置的可選擇的殘基，各X獨(dú)立地是任何氨基酸殘基，各Z獨(dú)立地是甘氨酸殘基、丙氨酸殘基、纈氨酸殘基、亮氨酸殘基、異亮氨酸殘基、脯氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、色氨酸殘基，或半胱氨酸殘基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含重鏈CDR3序列，該序列與圖9中所示的 H1-H52的CDR3序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含重鏈CDR3序列，該序列與圖9中所示的H1-H52的 CDR3序列相異總共不超過I個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含2個(gè)氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52 的CDRl序列相異總共不超過6個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDRl序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈⑶Rl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的 CDR2序列相異總共不超過5個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含3個(gè)氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDRl序列相異總共不超過6個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2 個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的⑶Rl序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈⑶Rl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈⑶R2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的⑶R3序列相異總共不超過4個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含4個(gè)氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDRl序列相異總共不超過6個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52 的CDR2序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDRl序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈⑶Rl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的⑶R2序列相異總共不超過5個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈⑶R2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52 的CDR3序列相異總共不超過4個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含5個(gè)氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4 中所示的L1-L52的CDRl序列相異總共不超過6個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈 ⑶Rl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的⑶R2序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3 個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDRl序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的⑶R3序列相異總共不超過4個(gè)氨基酸的添加、置換和 /或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.與圖 4中所示的L1-L52的CDRl序列相異總共不超過6個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈 CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3 個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDRl序列相異總共不超過2個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個(gè)氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的⑶R 3序列相異總共不超過4個(gè)氨基酸的添加、置換和 /或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.圖4中所示的輕鏈CDRl序列；ii.圖5中所示的輕鏈CDR2序列；和iii.圖6中所示的輕鏈⑶R3序列；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.圖7中所示的重鏈⑶Rl 序列;ii.圖8中所不的重鏈⑶R2序列;和iii.圖9中所不的重鏈⑶R3序列;或c. (a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，所述各序列分別與選自L1-L52的相同輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的⑶R1XDR2和⑶R3序列同一 ；b.各自分別與選自H1-H52的相同重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列同一的重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列；或c. (a)的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列和(b)的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少15個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列由與圖I中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少80%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等嚴(yán)緊條件下與由圖I中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補(bǔ)序列雜交；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與18圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少15個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列由與圖I中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少 80%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等嚴(yán)緊條件下與由圖I所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補(bǔ)序列雜交；或c. Ca)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合人IGF-1R。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含 a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少25個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖I中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少85%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在高度嚴(yán)緊條件下與由圖I所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補(bǔ)序列雜交；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少25個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列由與圖I中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少85%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在高度嚴(yán)緊條件下與由圖I中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補(bǔ)序列雜交；或c) (a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少35個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖I中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少90%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列jPb.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少35個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖I中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少90%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c) (a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少50個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖I中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少95%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少50個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖I中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少95%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列； 或c) (a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少97%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少75個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖I中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少97%的同一'丨生的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列jPb.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少97%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少75個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖I中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少97%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c) (a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少99%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii. 由與圖I中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少99%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和匕重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少99%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖 2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和 iii.由與圖I中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少99% 的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c) (a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其選自圖2中所示的L1-L52 ；b.選自圖3中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列；或c. Ca)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含選自下列組合的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、 L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHlU L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、 L17H17、L18H18、L19H19、L20、H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、 L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、 L38H38、L39H39、L40H40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、 L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白還包含a.圖13的K輕鏈恒定序列，b.圖13的I gGl重鏈恒定序列或c.圖13的κ輕鏈恒定序列和圖13的I gGl重鏈恒定序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白， 當(dāng)結(jié)合IGF-IR時(shí)a.抑制IGF-lR;b.激活I(lǐng)GF_lR;c.與參照抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)對(duì)IGF-IR的結(jié)合；d.與所述參照抗體結(jié)合相同的IGF-IR的表位；e.結(jié)合IGF-1R，該結(jié)合具有基本上與所述參照抗體相同的Kd ;或f.結(jié)合IGF-1R,其解離率(off rate)基本上與所述參照抗體相同；其中所述參照抗體包含選自下列組合的輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的組合L1H1、 L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、 L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20、H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、 L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、 L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40H40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、 L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白，當(dāng)與人IGF-IR結(jié)合時(shí)，抑制IGF-I和/或IGF-2對(duì)所述人IGF-IR的結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白在選自血清、IGF-I和GF-2的生長(zhǎng)刺激物存在的情況下抑制癌癥的生長(zhǎng)高于80%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞是MCF-7人乳腺癌細(xì)胞。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白以高于其對(duì)于人胰島素受體的選擇性至少50倍的選擇性結(jié)合人IGF-1R。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白在體內(nèi)抑制腫瘤的生長(zhǎng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白抑制IGF-IR介導(dǎo)的酪氨酸磷酸化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合非人靈長(zhǎng)類、食蟹猴(cynomologous monkey)、黑猩猩、非靈長(zhǎng)類哺乳動(dòng)物、卩齒齒動(dòng)物、小鼠、大鼠、侖鼠、豚鼠、 貓或狗的IGF-1R。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包括a.人抗體；b.人源化抗體；c.嵌合抗體；d.單克隆抗體；e.多克隆抗體；f.重組抗體；g.抗原結(jié)合抗體片段; h.單鏈抗體；i.雙抗體；j.三鏈抗體；k.四鏈抗體(tetrabody) ; I. Fab片段；m. F(ab，)2 片段；n.結(jié)構(gòu)域抗體(domainantibody) ;o. IgD 抗體;p. IgE 抗體;q. IgM 抗體;r. IgGl 抗體；s. IgG2抗體；t. IgG3抗體；u. IgG4抗體；或v.具有至少一個(gè)減少形成H鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢(shì)的鉸鏈區(qū)內(nèi)突變的IgG4抗體。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的多核苷酸，該多核苷酸包含編碼所述抗原結(jié)合蛋白的輕鏈、重鏈或兩者的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸包含圖I的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域核酸序列和/或圖I的重鏈可變結(jié)構(gòu)域核酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，質(zhì)粒包含所述分離的多核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述質(zhì)粒是表達(dá)載體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，分離的細(xì)胞包含所述多核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞的染色體包含所述多核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞。在另一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)載體包含所述核酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是CHO細(xì)胞。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了制備結(jié)合人IGF-IR的抗原結(jié)合蛋白的方法，其包括在允許所述分離的細(xì)胞表達(dá)所述抗原結(jié)合蛋白的條件下溫育所述細(xì)胞。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含所述抗原結(jié)合蛋白的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在受試者中治療病癥的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物，其中可通過在所述受試者中減少IGF-IR的活性來治療所述病癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者是人類。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述病癥是多發(fā)性骨髓瘤、液體腫瘤 (liquid tumor)、肝癌、胸腺疾病(thymus disorder)、T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病、內(nèi)分泌紊亂(endocronological disorder)、局部缺血或神經(jīng)變性疾病(neurodegenerative disorder)。在另一個(gè)實(shí)施方案，所述液體腫瘤選自急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)和慢性髓細(xì)胞性白血病(CML);其中所述肝癌選自肝癌、肝細(xì)胞癌、膽管癌、血管肉瘤、血管肉瘤、 肝胚細(xì)胞瘤；其中所述胸腺疾病選自胸腺瘤和甲狀腺炎，其中所述T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病選自多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡(SLE)、格雷夫斯病、橋本甲狀腺炎、重癥肌無力、自身免疫性甲狀腺炎、白塞病(Bechet’s Disease),其中所述內(nèi)分泌紊亂選自II型糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減退、甲狀腺炎、腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)和腎上腺皮質(zhì)功能減退；其中所述局部缺血是心臟梗塞后局部缺血(post cardiac infarct ischemia)，或其中所述神經(jīng)變性病癥是阿耳茨海默氏病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述病癥選自肢端肥大癥、膀胱癌、腎母細(xì)胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生癥、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉瘤、與轉(zhuǎn)移類癌瘤相關(guān)的腹瀉、分泌腸道血管活性妝的腫瘤(vasoactive intestinal peptide secreting tumors)、巨人癥、 牛皮癬、動(dòng)脈粥樣硬化、血管的平滑肌再狹窄、不適當(dāng)?shù)奈⒀茉鲋?、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、頭和頸鱗狀上皮細(xì)胞癌、口腔癌、口腔白斑、前列腺上皮內(nèi)瘤形成(prostate intraepithelial neoplasia)、肛門癌、食管癌、胃癌、骨癌、轉(zhuǎn)移癌、真性紅細(xì)胞增多癥、與氧化應(yīng)激相關(guān)的良性病癥、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、急性呼吸窘迫綜合征、對(duì)乙酰氨基酚的過度劑量、支氣管肺發(fā)育異常、囊性纖維化、肺纖維化和糖尿病性視網(wǎng)膜病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括給所述受試者施用第二療法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在給所述受試者施用所述藥物組合物之前和/或與此同時(shí)和/或之后施用所述第二療法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二療法包括放照治療、手術(shù)或第二藥物組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二藥物組合物包含藥劑，所述藥劑選自皮質(zhì)類固醇、止吐藥、鹽酸昂丹司瓊、鹽酸格拉司瓊、甲氧氯普胺(metroclopramide)、多潘立酮、氟派唳醇、賽克利嗪、勞拉西泮、丙氯拉嗪、 地塞米松、甲氧異丁嗪、托吡西隆、癌癥疫苗、GM-CSF抑制劑、GM-CSF DNA疫苗、基于細(xì)胞的疫苗、樹突細(xì)胞疫苗、重組病毒疫苗、熱激蛋白(HSP)疫苗、同種異體腫瘤疫苗(allogeneic tumor vaccine)、自體腫瘤疫苗、止痛劑、布洛芬、萘普生、三水楊酸膽堿鎂、鹽酸氧可酮、 抗血管生成(anti-angiogenic agent)、抗血管劑(anti-vascular agent)、貝伐單抗、抗 VEGF抗體、抗VEGF受體抗體、可溶性VEGF受體片段、抗TWEAK抗體、抗TWEAK受體抗體、可溶性TWEAK受體片段、AMG 706、AMG 386、抗增殖劑、法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑(farnesyl protein transferase inhibitor)、αν β 3 抑制劑、αν β 5 抑制劑、ρ53 抑制劑、ki t 受體抑制劑、ret受體抑制劑、I3DGFR抑制劑、生長(zhǎng)激素分泌抑制劑、血管生成素抑制劑 (angiopoietin inhibitor)、腫瘤浸潤(rùn)性巨卩遼細(xì)胞抑制劑、c-fms抑制劑、抗c_fms抗體、 CSF-I抑制劑、抗CSF-I抗體、可溶性c-fms片段、培維索孟、吉西他濱、panitumumab、依立替康(irinothecan)、和SN-38。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括給所述受試者施用第三療法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述病癥是癌癥，所述第二療法包括施用panitumumab,且所述第三療法包括施用吉西他濱。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述病癥選自肢端肥大癥、膀胱癌、 腎母細(xì)胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、 子宮頸癌、滑膜肉瘤、與轉(zhuǎn)移的類癌瘤相關(guān)的腹瀉、血管活性腸肽分泌型腫瘤、巨人癥、牛皮癬、動(dòng)脈粥樣硬化、血管的平滑肌再狹窄、不適當(dāng)?shù)奈⒀茉鲋?、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、頭與頸鱗狀上皮細(xì)胞癌、口腔癌、口腔白斑癥、前列腺上皮內(nèi)瘤形成、肛門癌、食管癌、 胃癌、骨癌、轉(zhuǎn)移癌、真性紅細(xì)胞增多癥、涉及氧化應(yīng)激的良性病癥、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、急性呼吸窘迫綜合征、對(duì)乙酰氨基酚的過量、支氣管肺發(fā)育異常、囊性纖維化、肺纖維化和糖尿病性視網(wǎng)膜病。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了增加受試者壽命的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中減少IGF-IR活性的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中減少IGF-IR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法， 其包括給所述受試者施用所述藥物組合物。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中抑制IGF-I和/或IGF-2對(duì)I GF-IR的結(jié)合的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物。
發(fā)明詳述
本發(fā)明提供了涉及結(jié)合胰島素樣生長(zhǎng)因子受體(“IGF-1R”)的分子的組合物、22試劑盒和方法，所述分子包括激動(dòng)或拮抗IGF-IR的分子，例如抗IGF-IR抗體、抗體片段和抗體衍生物，例如拮抗性抗IGF-IR抗體、抗體片段或抗體衍生物。也提供了包含編碼結(jié)合 IGF-IR的多肽的整體或部分的核苷酸序列的核酸及其衍生物和片段(例如編碼抗IGF-IR 抗體的整體或部分、抗體片段或抗體衍生物的核酸)、包含這些核酸的質(zhì)粒和載體以及包含這些核酸和/或載體以及質(zhì)粒的細(xì)胞或細(xì)胞系。提供的方法包括，例如制備、鑒定或分離結(jié)合IGF-IR的分子例如抗IGF-IR抗體的方法，確定分子是否結(jié)合IGF-IR的方法，確定分子是否激動(dòng)或拮抗IGF-IR的方法，制備包含結(jié)合IGF-IR的分子的組合物例如藥物組合物的方法，和給受試者施用結(jié)合IGF-IR的分子的方法，例如用于治療由IGF-IR介導(dǎo)的病癥的方法，和用于在體內(nèi)或體外激動(dòng)或拮抗IGF-1R、IGF-I和/或IGF-2的生物學(xué)活性的方法。
使用標(biāo)準(zhǔn)的單或三字母縮寫標(biāo)示多核苷酸和多肽序列。除非另外指出，多肽序列在左邊具有其氣基末端，在右邊具有其竣基末端以及單鏈核酸序列，雙鏈核酸序列的上面的鏈在左邊具有其5’末端，在右邊具有其3’末端。也可通過說明其與參照序列的不同之處來描述特定的多肽或多核苷酸序列。
特定輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸和多肽序列示于圖1、2和3中，其中將其標(biāo)記為，例如，LI (“輕鏈可變結(jié)構(gòu)域1”)、H1 (“重鏈可變結(jié)構(gòu)域I”)等。通過組合輕鏈的名稱和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的名稱來表示包含來自圖2和3的輕鏈和重鏈的抗體。例如，“L4H7” 表示包含L4的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和Η7的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體。
除非此處另外定義，所用的與本發(fā)明相關(guān)的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語將具有由本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的意思。此外，除非上下文另外要求，單數(shù)術(shù)語包括復(fù)數(shù)而復(fù)數(shù)術(shù)語包括單數(shù)。一般地，用于此處描述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳和蛋白質(zhì)以及核酸化學(xué)和雜交的術(shù)語學(xué)和技術(shù)是本領(lǐng)域內(nèi)熟知和常用的術(shù)語和技術(shù)。除非另外說明，通常按照在整個(gè)本說明書中引用和描述的本領(lǐng)域熟知的和各種一般和更專業(yè)的參考資料中描述的常規(guī)方法進(jìn)行本發(fā)明的方法和技術(shù)。參見，例如，Sambrook等人Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第 2 版，Cold Spri ng Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)和 Ausubel 等人,Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992),和 Harlow and Lane Antibodies:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990)，其在此引用作為參考。按照廠商說明書進(jìn)行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)，如通常在本領(lǐng)域內(nèi)實(shí)現(xiàn)的或如此處所描述的。所用的與此處描述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)的實(shí)驗(yàn)室方法和技術(shù)相關(guān)的術(shù)語學(xué)是本領(lǐng)域熟知的和常用的術(shù)語學(xué)?？蓪?biāo)準(zhǔn)的技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和遞送以及患者的治療。
下列術(shù)語，除非另外指出，將理解為具有下列意思
術(shù)語“分離的分子”(其中所述分子是例如多肽、多核苷酸或抗體)是分子，依賴于其來源或衍生的來源，所述分子(I)不與在其天然狀態(tài)下天然伴隨其的組分結(jié)合，(2)基本上不含來自相同物種的其他分子，(3)由來自不同物種的細(xì)胞表達(dá)或(4)非天然地發(fā)生。因此，化學(xué)合成的或在與來自其天然起源的細(xì)胞不同的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的分子將與其天然結(jié)合的組分“分離”。也可用本領(lǐng)域熟知的純化技術(shù)通過分離使分子基本上不含天然結(jié)合的組分?？赏ㄟ^本領(lǐng)域內(nèi)許多熟知的方法測(cè)定分子純度或均質(zhì)性。例如，可使用聚丙烯酰胺凝膠電泳和使用本領(lǐng)域內(nèi)熟知的技術(shù)對(duì)凝膠染色以顯示多肽來測(cè)定多肽樣品的純度。對(duì)于某些目的，可通過HPLC或本領(lǐng)域熟知的用于純化的其他方法來提供更高的分辨率。
術(shù)語“ IGF-IR抑制劑”和“ IGF-IR拮抗劑”可互換使用。各為可檢測(cè)地抑制IGF-1R 的至少一種功能的分子。相反地，“IGF-1R激動(dòng)劑”是可檢測(cè)地增加IGF-IR的至少一種功能的分子。由IGF-IR抑制劑引起的抑制作用不必是完全的，只要使用測(cè)定法可檢測(cè)其?？墒褂肐GF-IR功能的任何測(cè)定法，此處提供其實(shí)例?？赏ㄟ^IGF-IR抑制劑抑制或通過IGF-IR 激動(dòng)劑增加的IGF-IR功能的實(shí)例，包括對(duì)IGF-1、IGF-12和/或另一種IGF-IR激活分子的結(jié)合、激酶活性、下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。IGF-IR抑制劑和IGF-IR激動(dòng)劑的類型的實(shí)例包括，但不限于，IGF-IR結(jié)合多肽例如抗原結(jié)合蛋白(例如，IGF-IR抑制性抗原結(jié)合蛋白)、抗體、抗體片段和抗體衍生物。
術(shù)語“肽”、“多肽”和“蛋白”各自指包含兩個(gè)或多個(gè)通過肽鍵連接的氨基酸殘基的分子。這些術(shù)語包括，例如，天然的和人工的蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽類似物(例如突變蛋白、變體和融合蛋白)以及翻譯后修飾或共價(jià)或非共價(jià)修飾的蛋白。肽、多肽或蛋白可以是單體或多聚體。
如此處所用的，術(shù)語“多肽片段”是指與對(duì)應(yīng)的全長(zhǎng)蛋白相比，具有氨基末端和/ 或羧基末端缺失的多肽。片段在長(zhǎng)度上可以是，例如，至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 20、50、70、80、90、100、150或200個(gè)氨基酸。片段在長(zhǎng)度上也可以是例如至多1,000,750, 500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11 或 10 個(gè)氨基酸。片段還可在其任一末端或兩個(gè)末端包含一個(gè)或多個(gè)額外的氨基酸，例如，來自不同的天然發(fā)生的蛋白(例如，F(xiàn)e或亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域)的氨基酸序列或人工氨基酸序列(例如，人工連接體序列)。
本發(fā)明的多肽包括已以任何方法和因任何理由修飾的多肽，例如，所述理由是例如(1)減少對(duì)蛋白水解的敏感性，(2)減少對(duì)氧化的敏感性，(3)改變形成蛋白復(fù)合物的結(jié)合親和力，(4)改變結(jié)合親和力，和(4)賦予或改變其他物化或功能特性。類似物包括多肽的突變蛋白。例如，可在天然發(fā)生的序列中(例如，在形成分子間接觸的結(jié)構(gòu)域以外的多肽部分中)產(chǎn)生單個(gè)或多個(gè)氨基酸的置換(例如，保守性氨基酸置換)?！氨Ｊ匦园被嶂脫Q”是基本上不改變親本序列的結(jié)構(gòu)特征的置換(例如，取代氨基酸不應(yīng)當(dāng)傾向于打斷親本序列中發(fā)生的螺旋，或破壞表征親本或其功能性所必需的其他類型的二級(jí)結(jié)構(gòu))° 在 Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed. , ff.H.Freeman and Company, New York (1984));Introduction to Protein Structure (C. Branden和 J. Tooze, eds.，Garland Publishing, New York, N. Y. (1991));和 Thornton 等人 Nature354:105 (1991)中描述了本領(lǐng)域承認(rèn)的多肽二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的實(shí)例，所述參考資料各自在此引用作為參考。
本發(fā)明也提供了 IGF-IR結(jié)合多肽的非肽類似物。非肽類似物通常在制藥工業(yè)中用作具有類似于模板肽性質(zhì)的性質(zhì)的藥物。這些類型的非肽化合物稱為“肽模擬物(peptide mimetics)”或“擬妝(peptidomimeticsY'Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986) ; Veber 和 Freidinger TINS ρ· 392 (1985);和 Evans 等人 J. Med. Chem. 30:1229 (1987)，其在此引用作為參考。在結(jié)構(gòu)上與治療有用的肽相似的肽模擬物可用于產(chǎn)生等同的治療或預(yù)防功效。一般地，擬肽在結(jié)構(gòu)上與范例多肽(paradigm polypeptide)(即，具有想要的生物化學(xué)性質(zhì)或藥理活性的多肽)例如人抗體相似，但任選地通過本領(lǐng)域內(nèi)熟知的方法使一個(gè)或多個(gè)肽鍵被選自下列的鍵取代一ch2nh—、-CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH-(順式和反式)、一COCH2—、一CH(OH)CH2一和一CH2SO—。用相同類型的D氨基酸系統(tǒng)性地置換共有序列的一個(gè)或多個(gè)氨基酸(例如，D賴氨酸取代L賴氨酸)也可用于產(chǎn)生更穩(wěn)定的多肽。此外， 可通過本領(lǐng)域已知的方法(Rizo和Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)，此處引用作為參考)例如通過添加能夠形成使肽環(huán)化的分子內(nèi)二硫鍵的內(nèi)部半胱氨酸殘基來產(chǎn)生受限制的肽(constrained peptide),所述肽包含共有序列或基本上相同的共有序列變異。
多肽(例如，抗體)的“變體”包含氨基酸序列，在所述氨基酸序列中，相對(duì)于另一個(gè)多肽序列，一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被插入、缺失和/或置換。本發(fā)明的變體包括融合蛋白。
多肽的“衍生物”是已通過例如綴合至另一個(gè)化學(xué)部分例如聚乙二醇、白蛋白(例如，人血清白蛋白)、磷酸化和糖基化被化學(xué)修飾的多肽(例如抗體)。除非另外指出，術(shù)語 “抗體”包括，除了包含兩條全長(zhǎng)的重鏈和兩條全長(zhǎng)的輕鏈的抗體外，其衍生物、變體、片段和突變蛋白，下面描述了其實(shí)例。
“抗原結(jié)合蛋白”是包含結(jié)合抗原的部分和任選地支架或構(gòu)架部分的蛋白，所述支架或構(gòu)架部分允許所述抗原結(jié)合部分采取促進(jìn)所述抗原結(jié)合蛋白對(duì)所述抗原結(jié)合的構(gòu)象。 抗原結(jié)合蛋白的實(shí)例包括抗體、抗體片段(例如，抗體的抗原結(jié)合部分)、抗體衍生物和抗體類似物。抗原結(jié)合蛋白可包括，例如，可選擇的蛋白支架或具有移植的CDR或CDR衍生物的人工支架。這些支架包括，但不限于，包含被導(dǎo)入以例如穩(wěn)定所述抗原結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)的突變的抗體來源的支架以及包含例如生物可相容的聚合物的完全合成的支架。參見，例如，Korndorfer 等人，2003，Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics,第 53 卷,Issue 1:121-129; Roque 等人,2004, Biotechno I. Prog. 20:639-654。此外，可使用妝抗體模擬物(“PAMs”)，以及基于使用纖連蛋白組分作為支架的抗體模擬物的支架。
抗原結(jié)合蛋白可具有例如天然發(fā)生的免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)?！懊庖咔虻鞍住笔撬木垠w分子。在天然發(fā)生的免疫球蛋白中，各四聚體由兩個(gè)相同的多肽鏈對(duì)組成，各對(duì)具有一個(gè) “輕”鏈(大約25kDa)和一個(gè)“重”鏈(大約50-70kDa)。各鏈的氨基末端部分包含大約100至 110或更多個(gè)氨基酸組成的負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的可變區(qū)。各鏈的羧基末端部分界定主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子作用(effector function)的恒定區(qū)。人輕鏈被分類為κ和λ輕鏈。重鏈被分類為 μ、δ、Υ、α或ε，并分別將抗體的同種型確定為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內(nèi)，所述可變區(qū)和恒定區(qū)通過大約12或更多個(gè)氨基酸的“ J”區(qū)域連接，重鏈也包含大約 10 或更多個(gè)氨基酸的“D” 區(qū)域。一般參照，F(xiàn)undamental Immunology Ch. 7 (Paul, ff. , ed., 第2版，Raven Press，N. Y. (1989))(對(duì)于所有目的，以其全文在此引用作為參考)。各輕/ 重鏈對(duì)的可變區(qū)形成了抗體結(jié)合位點(diǎn)，從而使完整的免疫球蛋白具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。
天然發(fā)生的免疫球蛋白鏈展示了由三個(gè)超變區(qū)(也稱作互補(bǔ)決定區(qū)或⑶R)連接的相對(duì)保守的框架區(qū)(FR)的相同的一般結(jié)構(gòu)。從N端至C端，輕鏈和重鏈都包含結(jié)構(gòu)域FR1、 CDRl、FR2、CDR2、FR 3、CDR3和FR4。氨基酸至各結(jié)構(gòu)域的分配Kaba t等人在Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，US Dept, of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242，1991 中的定義一致。
除非另外說明，“抗體”是指完整的免疫球蛋白或與所述完整的抗體競(jìng)爭(zhēng)特異性結(jié)合的其抗原結(jié)合部分?？赏ㄟ^重組DNA技術(shù)或通過完整抗體的酶促或化學(xué)切割產(chǎn)生抗原結(jié)合部分?？乖Y(jié)合部分包括，除其他以外，可包含免疫球蛋白的至少一部分的Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙抗體、三抗體、四鏈體和多肽，所述一部分足以賦予對(duì)該多肽的特異性抗原結(jié)合。
Fab片段是具有\(zhòng)、VH、(^和ChI結(jié)構(gòu)域的單價(jià)片段；F (ab’)2片段是具有在鉸鏈區(qū)通過二硫鍵連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；Fd片段具有Vh和ChI結(jié)構(gòu)域；Fv片段具有抗體的單臂的\和Vh結(jié)構(gòu)域；以及dAb片段具有Vh結(jié)構(gòu)域、' 結(jié)構(gòu)域，或Vh或' 結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段(美國(guó)專利6，846，634,6, 696，245，美國(guó)申請(qǐng)
發(fā)明者F·J·卡爾佐, R·V·德什潘德, 蔡美美 申請(qǐng)人:安進(jìn)公司