一種割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用產(chǎn)堿桿菌發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠并采用丙酮進(jìn)行后提取的方法，步驟如下：S1.菌種保藏斜面的制備：將產(chǎn)堿桿菌ATCC31555接種到培養(yǎng)基斜面上，于30℃恒溫培養(yǎng)2-4天備用；S2.用接種環(huán)于上述斜面上挑一環(huán)菌體至一級種子液體培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)24小時(shí)，得到一級液體種子；S3.將一級種子按10％接種量接于二級種子液體培養(yǎng)基中，28-38℃培養(yǎng)12-24個(gè)小時(shí)，得到二級液體種子；S3.上述種子用于接種至滅菌后的5L發(fā)酵罐中發(fā)酵；S4.發(fā)酵20-36個(gè)小時(shí)后，將5L小罐中發(fā)酵液排出1-3.5L，再補(bǔ)加1-3.5L液體發(fā)酵培養(yǎng)基，如此重復(fù)2-3次，發(fā)酵結(jié)束；S5.發(fā)酵液的后提取。該方法縮短發(fā)酵周期，提高生產(chǎn)效率和得率。
【專利說明】一種割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用產(chǎn)堿桿菌發(fā)酵產(chǎn)韋蘭膠的方法，特別涉及一種割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠，并用丙酮提取的方法。
【背景技術(shù)】 [0002]微生物代謝膠也叫生物合成膠，許多微生物在生長代謝過程中，在不同的外部條件下都能產(chǎn)生一定量的各種多糖。微生物多糖安全無毒，有獨(dú)特的理化性質(zhì)，且與植物和動(dòng)物多糖相比，微生物多糖的生產(chǎn)受地理環(huán)境、氣候、自然災(zāi)害等因素的影響較小，產(chǎn)量及質(zhì)量都很穩(wěn)定。韋蘭膠是一種新型微生物多糖。韋蘭膠的結(jié)構(gòu)骨架由D-葡萄糖、D-葡萄糖醛酸、D-葡萄糖和L-鼠李糖單元組成。韋蘭膠中含有2.8% -7.5%乙?；?1.6% -14.9%的葡萄糖醛酸，甘露糖、葡萄糖和鼠李糖的摩爾比例為1: 2: 2。
[0003]韋蘭膠是美國Kelco公司80年代繼黃原膠、結(jié)冷膠之后開發(fā)的最有市場前景的微生物多糖之一，迄今為止美國的Kelco公司是韋蘭膠全球唯一的生產(chǎn)、供應(yīng)商。韋蘭膠具有優(yōu)良的觸變性、懸浮性、水溶性等流變性能，且具有卓越的穩(wěn)定性，市場前景廣闊。它主要作為增稠劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、潤滑劑、成膜劑和粘合劑應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)的各個(gè)方面，尤其在食品、混凝土、石油、石墨等工業(yè)中有廣泛的應(yīng)用前景。
[0004]目前國外僅有一些關(guān)于其結(jié)構(gòu)和應(yīng)用性的專利報(bào)道。在國內(nèi)的研究還停留在實(shí)驗(yàn)室階段。無法形成工業(yè)化生產(chǎn)。主要是因?yàn)橛糜诎l(fā)酵的菌種對原料的要求較高且產(chǎn)率太低，導(dǎo)致發(fā)酵液中的韋蘭膠濃度較低，另外發(fā)酵液中的副產(chǎn)物太多。這些因素進(jìn)一步造成提取的成本居高不下.另一方面國內(nèi)韋蘭膠成品質(zhì)量較差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術(shù)的不足之處，提供一種高效可行并可降低韋蘭膠生產(chǎn)成本，減小投資，益于生產(chǎn)應(yīng)用的割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠的方法，并采用丙酮沉淀的方法提取，有效去除了發(fā)酵液中的雜質(zhì)和色素。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
[0007]一種割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠的方法，其特征在于:依次步驟如下:
[0008]S1.菌種保藏斜面的制備:將產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes sp.) ATCC31555接種到培養(yǎng)基斜面上，于30°C恒溫培養(yǎng)2-4天待用；斜面培養(yǎng)基組成包括，單位IL:蔗糖15g，酵母粉3g,蛋白胨5g,牛肉膏5g,瓊脂15g,用蒸懼水定容至1L, pH值7.0 ;其中所用菌種:鞘氨醇單胞菌(Alcaligenes sp.)ATCC31555 ；
[0009]S2.上述斜面用于接種至滅菌后的一級液體種子培養(yǎng)基中，一級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:葡萄糖15-20g，酵母粉4-8g，牛肉膏4-8g，蛋白胨3-6g，K2HPO4 2_3g，MgSO4 0.01-0.03g，用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后用接種環(huán)從菌種保藏斜面上挑I環(huán)菌體接入上述冷卻的液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30°C、轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上培養(yǎng)24h，得到一級液體種子；[0010]S3.上述一級液體種子用于接種至滅菌后的二級級液體種子培養(yǎng)基中，二級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位IL:葡萄糖15-20g，酵母粉4-8g，蛋白胨3-6g，K2HPO4 2_3g，MgSO4 0.01-0.038，用蒸餾水定容至11^，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后將一級液體種子按10%接種量接入上述冷卻的二級液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于28-38 °C、轉(zhuǎn)速為120_200rpm的搖床上培養(yǎng)12-24h，得到二級液體種子；
[0011]S4.上述二級液體種子培養(yǎng)基用于接種至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成包括，單位 IL:玉米淀粉水解液 250-400ml, NaNO3 3.0-4.0g, MgSO40.2-0.4g，K2HPO4
4.5-6.0g，CaCO3 1.0-2.0g，F(xiàn)eS04 0.001-0.005g，蛋白胨 5_10g，用蒸餾水定容至 3L，pH 值
5.0-8.0，將發(fā)酵罐培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后按照體積比5-12%的接種量將液體培養(yǎng)基接入上述冷卻的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度28-38°C，溶氧控制在30-40% ；
[0012]S5.發(fā)酵14-30個(gè)小時(shí)后，將發(fā)酵液排出1_2.5L，并將滅過菌的1_2.5L液體發(fā)酵培養(yǎng)基加入5L小罐中，繼續(xù)在28-38°C條件下培養(yǎng)10-20個(gè)小時(shí)；上述操作重復(fù)1_3次。
[0013]S6.發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵液用水稀釋0-3倍，用旋渦式攪拌槳以300-400轉(zhuǎn)/分鐘速度攪拌，再勻速緩慢加入0.8-1.3倍體積的丙酮，攪拌半小時(shí),離心將上清液倒掉，固體烘干后粉碎。得到韋蘭膠的產(chǎn)量為20-40g/L。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用割罐法生產(chǎn)韋蘭膠，可以大大提高底物的利用率，并減少種子制備的繁瑣，相當(dāng)于普通發(fā)酵3-4個(gè)周期的效果，有效的提高生產(chǎn)效率，降低了成本。并且不需要復(fù)雜的設(shè)備，后處理方法簡單，用丙酮可以有效去除了發(fā)酵液中的各種雜質(zhì)，脫色效果也非常明顯，使得到產(chǎn)品的純度有了很大的提高，同時(shí)提高了韋蘭膠的收率，進(jìn)一步降低了成本。該方法具有很高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，市場優(yōu)勢非常明顯。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下結(jié)合實(shí)施例，對依據(jù)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】詳述如下:
[0016]實(shí)施例1
[0017]S1.菌種保藏斜面的制備:將產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes sp.) ATCC31555接種到培養(yǎng)基斜面上，于30°C恒溫培養(yǎng)2-4天待用；斜面培養(yǎng)基組成包括，單位IL:蔗糖15g，酵母粉3g,蛋白胨5g,牛肉膏5g,瓊脂15g,用蒸懼水定容至1L, pH值7.0 ;其中所用菌種:鞘氨醇單胞菌(Alcaligenes sp.)ATCC31555 ；
[0018]S2.上述斜面用于接種至滅菌后的一級液體種子培養(yǎng)基中，一級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位IL:葡萄糖15g,酵母粉4g,牛肉膏4g,蛋白胨3g, K2HPO4 2g, MgSO4 0.01g,用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后用接種環(huán)從菌種保藏斜面上挑I環(huán)菌體接入上述冷卻的液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30°C、轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上培養(yǎng)24h，得到一級液體種子；
[0019]S3.上述一級液體種子用于接種至滅菌后的二級級液體種子培養(yǎng)基中，二級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位IL:葡萄糖15g，酵母粉4g，蛋白胨3g，K2HP042g，MgSO4 0.01gj蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后將一級液體種子按10%接種量接入上述冷卻的二級液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30°C、轉(zhuǎn)速為200rpm的搖床上培養(yǎng)16h，得到二級液體種子；
[0020]S4.上述二級液體種子培養(yǎng)基用于接種至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成包括，單位 IL:玉米淀粉水解液 250ml，NaNO3 3.0g, MgSO4 0.2g，Κ2ΗΡ044.5g，CaCO3 1.0g,FeS04 0.0Olg，蛋白胨5g，用蒸餾水定容至3L，pH值7.0，將發(fā)酵罐培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后按照體積比12%的接種量將液體培養(yǎng)基接入上述冷卻的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度38 °C，溶氧控制在30% ；
[0021]S5.發(fā)酵14個(gè)小時(shí)后，將發(fā)酵液排出2L，并將滅過菌的2L液體發(fā)酵培養(yǎng)基加入5L小罐中，繼續(xù)在38°C條件下培養(yǎng)15個(gè)小時(shí)；
[0022]S6.將步驟S5.重復(fù)3次。
[0023]S7.發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵液原液用旋渦式攪拌槳以的400轉(zhuǎn)/分鐘速度攪拌，再勻速緩慢加入0.8倍丙酮，攪拌半小時(shí)，離心將上清液倒掉，固體烘干粉碎。得到韋蘭膠產(chǎn)品為220g。
[0024]實(shí)施例2
[0025]S1.菌種保藏斜面的制備:將產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes sp.) ATCC31555接種到培養(yǎng)基斜面上，于30°C恒溫培養(yǎng)2-4天待用；斜面培養(yǎng)基組成包括，單位IL:蔗糖15g，酵母粉3g,蛋白胨5g,牛肉膏5g,瓊脂15g,用蒸懼水定容至1L, pH值7.0 ;其中所用菌種:鞘氨醇單胞菌(Alcaligenes sp.)ATCC31555:
[0026]S2.上述斜面用于接種至滅菌后的一級液體種子培養(yǎng)基中，一級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位11^:葡萄糖2(^，酵母粉88，牛肉膏88，蛋白胨68，K2HPO4 3g，MgSO4 0.03g,用蒸餾水定容至lL，pH值7. 0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后用接種環(huán)從菌種保藏斜面上挑I環(huán)菌體接入上述冷卻的液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30°C、轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上培養(yǎng)24h，得到一級液體種子；
[0027]S3.上述一級液體種子用于接種至滅菌后的二級級液體種子培養(yǎng)基中，二級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位IL:葡萄糖20g，酵母粉8g，蛋白胨6g，K2HP043g, MgSO40.03g，用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后將一級液體種子按10%接種量接入上述冷卻的二級液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于28°C、轉(zhuǎn)速為120rpm的搖床上培養(yǎng)12h，得到二級液體種子；
[0028]S4.上述二級液體種子培養(yǎng)基用于接種至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成包括，單位 IL:玉米淀粉水解液 400ml，NaNO3 4.0g, MgSO40.4g，K2HPO4 6.0g, CaCO3 2.0g,FeS04 0.005g，蛋白胨10g，用蒸餾水定容至3L，pH值8.0，將發(fā)酵罐培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后按照體積比5%的接種量將液體培養(yǎng)基接入上述冷卻的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度28 V，溶氧控制在40 % ；
[0029]S5.發(fā)酵30個(gè)小時(shí)后，將發(fā)酵液排出2.5L，并將滅過菌的2.5L液體發(fā)酵培養(yǎng)基加入5L小罐中，繼續(xù)在28°C條件下培養(yǎng)20個(gè)小時(shí)。
[0030]S6.將步驟S5.重復(fù)2次。
[0031 ] S7.發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵液稀釋3倍，用旋渦式攪拌槳以的400轉(zhuǎn)/分鐘速度攪拌，再勻速緩慢加入1.3倍丙酮，攪拌半小時(shí)，離心將上清液倒掉，固體烘干粉碎。得到韋蘭膠產(chǎn)品為330g。
[0032] 實(shí)施例3[0033]S1.菌種保藏斜面的制備:將產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes sp.) ATCC31555接種到培養(yǎng)基斜面上，于30°C恒溫培養(yǎng)2-4天待用；斜面培養(yǎng)基組成包括，單位IL:蔗糖15g，酵母粉3g,蛋白胨5g,牛肉膏5g,瓊脂15g,用蒸懼水定容至1L, pH值7.0 ;其中所用菌種:鞘氨醇單胞菌(Alcaligenes sp.)ATCC31555 ；
[0034]S2.上述斜面用于接種至滅菌后的一級液體種子培養(yǎng)基中，一級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位IL:葡萄糖18g，酵母粉5g，牛肉膏6g，蛋白胨4g，K2HPO4 2.5g，MgSO4 0.02g,用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后用接種環(huán)從菌種保藏斜面上挑I環(huán)菌體接入上述冷卻的液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30°C、轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上培養(yǎng)24h，得到一級液體種子；
[0035]S3.上述一級液體種子用于接種至滅菌后的二級級液體種子培養(yǎng)基中，二級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位IL:葡萄糖18g，酵母粉5g，蛋白胨4g，K2HPO4 2.5g，MgSO4
0.02g，用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后將一級液體種子按10%接種量接入上述冷卻的二級液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于35°C、轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上培養(yǎng)18h，得到二級液體種子；
[0036]S4.上述二級液體種子培養(yǎng)基用于接種至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成包括，單位 IL:玉米淀粉水解液 350ml，NaNO3 3.5g，MgSO40.3g，K2HPO4 5.0g, CaCO3 1.5g，F(xiàn)eSO4 0.004g,蛋白胨8g，用蒸餾水定容至3L，pH值5.0，將發(fā)酵罐培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后按照體積比8%的接種量將液體培養(yǎng)基接入上述冷卻的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度35 °C，溶氧控制在30% ；
[0037]S5.發(fā)酵20個(gè)小時(shí)后，將發(fā)酵液排出1L，并將滅過菌的IL液體發(fā)酵培養(yǎng)基加入5L小罐中，繼續(xù)在35°C條件下培養(yǎng)10個(gè)小時(shí)；
[0038]S6.將步驟S5.重復(fù)3次。
[0039]S7.發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵液稀釋I倍，用旋渦式攪拌槳以的350轉(zhuǎn)/分鐘速度攪拌，再勻速緩慢加入I倍丙酮，攪拌半小時(shí)，離心將上清液倒掉，固體烘干粉碎。得到韋蘭膠產(chǎn)品為 175g。
[0040]實(shí)施例4
[0041]S1.菌種保藏斜面的制備:將產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes sp.) ATCC31555接種到培養(yǎng)基斜面上，于30°C恒溫培養(yǎng)2-4天待用；斜面培養(yǎng)基組成包括，單位IL:蔗糖15g，酵母粉3g,蛋白胨5g,牛肉膏5g,瓊脂15g,用蒸懼水定容至1L, pH值7.0 ;其中所用菌種:鞘氨醇單胞菌(Alcaligenes sp.)ATCC31555 ；
[0042]S2.上述斜面用于接種至滅菌后的一級液體種子培養(yǎng)基中，一級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L:葡萄糖18g，酵母粉6g，牛肉膏6g，蛋白胨5g，K2HPO4 2g，MgSO4 0.01g,用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后用接種環(huán)從菌種保藏斜面上挑I環(huán)菌體接入上述冷卻的液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30°C、轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上培養(yǎng)24h，得到一級液體種子；
[0043]S3.上述一級液體種子用于接種至滅菌后的二級級液體種子培養(yǎng)基中，二級液體種子培養(yǎng)基組成包括，單位IL:葡萄糖18g，酵母粉6g，蛋白胨5g，K2HPO4 2g, MgSO4 0.01g,用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ;將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后將一級液體種子按10%接種量接入上述冷卻的二級液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30°C、轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床上培養(yǎng)20h，得到二級液體種子；
[0044]S4.上述二級液體種子培養(yǎng)基用于接種至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成包括，單位 IL:玉米淀粉水解液 300ml, NaNO3 3g，MgSO4 2g，Κ2ΗΡ045.5g，CaCO3 2g，F(xiàn)eS04
0.003g，蛋白胨7g，用蒸餾水定容至3L，pH值7.5，將發(fā)酵罐培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后按照體積比10%的接種量將液體培養(yǎng)基接入上述冷卻的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度30 V，溶氧控制在40 %。
[0045]S5.發(fā)酵18個(gè)小時(shí)后，將發(fā)酵液排出1.5L，并將滅過菌的1.5L液體發(fā)酵培養(yǎng)基加入5L小罐中，繼續(xù)在30°C條件下培養(yǎng)12個(gè)小時(shí)；
[0046]S6.將步驟S5.重復(fù)I次。
[0047]S7.發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵液稀釋2倍，用旋渦式攪拌槳以的300轉(zhuǎn)/分鐘速度攪拌，再勻速緩慢加入1.2倍丙酮，攪拌半小時(shí)，離心將上清液倒掉，固體烘干粉碎。得到韋蘭膠IlOgo
[0048]上述參照實(shí)施例對割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠的方法的詳細(xì)描述，是說明性的而不是限定性的，可根據(jù)所限定范圍例舉出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范`圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠的方法，其特征在于:依次步驟如下: . 51.菌種保藏斜面的制備:將產(chǎn)堿桿菌ATCC31555接種到培養(yǎng)基斜面上，于30°C恒溫培養(yǎng)2-4天待用；斜面培養(yǎng)基組成包括:蔗糖15g，酵母粉3g，蛋白胨5g，牛肉膏5g，瓊脂15g，用蒸餾水定容至1L，pH值7.0 ;所用菌種:鞘氨醇單胞菌ATCC31555 ； .52.上述斜面用于接種至滅菌后的一級液體種子培養(yǎng)基中，一級液體種子培養(yǎng)基組成包括:葡萄糖15_20g，酵母粉4-8g，牛肉膏4-8g，蛋白胨3-6g，K2HPO4 2_3g，MgSO4.0.01-0.03g，用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ; 將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后用接種環(huán)從菌種保藏斜面上挑I環(huán)菌體接入上述冷卻的液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于.30°C、轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上培養(yǎng)24h，得到一級液體種子； .53.上述一級液體種子用于接種至滅菌后的二級級液體種子培養(yǎng)基中，二級液體種子培養(yǎng)基組成包括:葡萄糖15_20g，酵母粉4-8g，蛋白胨3-6g，K2HPO4 2_3g，MgSO4.0.01-0.03g，用蒸餾水定容至lL，pH值7.0 ; 將液體種子培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后將一級液體種子按10%接種量接入上述冷卻的二級液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于28_38°C、轉(zhuǎn)速為120-200rpm的搖床上培養(yǎng)12_24h，得到二級液體種子； .54.上述二級液體種子培養(yǎng)基用于接種至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成包括:玉米淀粉水解液 250-400ml, NaNO3 3.0-4.0g, MgSO40.2-0.4g, K2HPO4 4.5-6.0g, CaCO3.1.0-2.0g, FeS04 0.001-0.005g，蛋白胨 5_10g，用蒸餾水定容至 3L，pH 值 5.0-8.0 ； 將發(fā)酵罐培養(yǎng)基于115°C、15min滅菌再冷卻；然后按照體積比5-12%的接種量將液體培養(yǎng)基接入上述冷卻的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度28-38°C，溶氧控制在30-40% ； .55.發(fā)酵14-30個(gè)小時(shí)后，將發(fā)酵液排出1-2.5L，并將滅過菌的1_2.5L液體發(fā)酵培養(yǎng)基加入5L小罐中，繼續(xù)在28-38°C條件下培養(yǎng)10-20個(gè)小時(shí)；上述操作重復(fù)1_3次。 .56.發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵液用水稀釋0-3倍，用旋渦式攪拌槳以300-400轉(zhuǎn)/分鐘速度攪拌，再勻速緩慢加入0.8-1.3倍體積的丙酮，攪拌半小時(shí)，離心將上清液倒掉，固體烘干后粉碎，得到韋蘭膠的產(chǎn)量為20-40g/L。
【文檔編號(hào)】C12R1/05GK103695498SQ201210364669
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2012年9月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月27日
【發(fā)明者】李紅芬, 梁軍軍, 劉云 申請人:天津科百生物科技研發(fā)有限公司