專利名稱：熒光標(biāo)記多肽及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)，尤其涉及一種熒光標(biāo)記多肽及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
組蛋白去乙?；?histone deacetylases,HDAC)是一類從組蛋白賴氨酸殘基上去除ε-N-乙?；拿讣易?。真核生物中，染色質(zhì)的基本單位是核小體。核小體由核心組蛋白(Η2Α，Η2Β, Η3，Η4)構(gòu)成的八聚體、一段146個堿基的DNA片段和連接組蛋白Hl組成。核心組蛋白的C端疏水氨基酸位于核小體的內(nèi)部，N端氨基酸則伸出核小體外，并被各種組蛋白修飾酶進行特異性位點的修飾，包括磷酸化、乙?；?、甲基化和泛素化等。通過對組蛋白賴氨酸殘基的修飾并導(dǎo)致組蛋白過乙?；M蛋白去乙?；缚梢哉{(diào)控特定基因的表達(dá)并參與各種生理病理過程的調(diào)控。 人類組蛋白去乙?；讣易骞灿?8個成員，并根據(jù)其與酵母組蛋白去乙?；傅耐葱苑殖伤念?，其中一類和二類被認(rèn)為是“典型的”組蛋白去乙?；福涮攸c是可以被trichostation A抑制；第三類酶的催化活性依賴于NAD+輔因子的存在，并不受trichostation A的影響；第四類酶(HDACll)的催化中心保留了和一二類組蛋白去乙?；赶嗤幕鶊F。組蛋白去乙?；敢种苿┲饕ㄟ^調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)活性氧生成、阻止血管生成等作用機制發(fā)揮其抗癌作用，并已成為全球抗腫瘤藥物的研究的熱點。目前只有兩種組蛋白去乙?；敢种苿￢orinostat和Romidepsin被美國食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)并被用于治療表皮T細(xì)胞淋巴瘤。因此，建立一個準(zhǔn)確高效的組蛋白乙?；敢种苿w外篩選平臺在此類藥物的臨床前研發(fā)中顯得十分重要和急迫。目前體外篩選組蛋白乙?；敢种苿w外多使用市售試劑盒來完成，其檢測是通過兩步法來實現(xiàn)的，第一步是將去乙?；负偷孜锓跤?，反應(yīng)去除底物上的乙酰基，第二步是加入特異識別并切割去乙酰基化的底物的酶，并釋放出有色或者熒光基團用于檢測。這種體外篩選方法成本較高，且由于反應(yīng)過程需要加入一步酶偶聯(lián)反應(yīng)作為顯色反應(yīng)，在篩選過程中容易得到假陽性或者假陰性結(jié)果，從而對后續(xù)的研發(fā)工作帶來許多障礙，并不適用于現(xiàn)代醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)新藥研發(fā)的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，就是為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種熒光標(biāo)記多肽及其制備方法和應(yīng)用。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案一種熒光標(biāo)記多肽，其氨基酸序列為TSRHK(Ac)-CONH2,該氨基酸序列第五位賴氨酸殘基上的乙?；鶊F可被組蛋白去乙?；缸R別并切除。上述熒光標(biāo)記多肽的制備方法，包括以下順序進行的步驟A、取 Fmoc-Lys (Ac)-Rink 酸胺 4_ 甲基二苯甲胺樹脂(Fmoc-Lys(Ac)-RinkAmide-MBHAResin)置于反應(yīng)容器中，以N，N_ 二甲基甲酰胺溶脹樹脂，然后用脫保護液反應(yīng)2次后，抽出脫保護液；B、依次向反應(yīng)容器中加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-His(trt)-0H、苯并三氮唑-N，N, N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N-二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)；然后抽出反應(yīng)液，再用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干；C、向反應(yīng)容器中加入脫保護液反應(yīng)2次，然后抽出脫保護液，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干；D、依次向反應(yīng)容器中加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Arg(Pbf)-0H、苯并三氮唑-N，N, N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N-二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)，然后抽出反應(yīng)液，再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干；
E、向反應(yīng)容器中加入脫保護液振蕩反應(yīng)2次，然后抽出脫保護液，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干；F、依次向反應(yīng)容器中加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Ser (Boc)-0H、苯并三氮唑-N，N, N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N-二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)，然后抽出反應(yīng)液，再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干；G、向反應(yīng)容器中加入脫保護液振蕩反應(yīng)2次，然后抽出脫保護液，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干；H、依次向反應(yīng)容器中加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Thr(tBu)_0H、苯并三氮唑-N，N, N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N-二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)，然后抽出反應(yīng)液，再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干；I、向反應(yīng)容器中加入脫保護液振蕩反應(yīng)2次，然后抽出脫保護液，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干；J、依次向反應(yīng)容器中加入N，N_二甲基甲酰胺、5-FAM、苯并三氮唑-N，N，N’，N’_四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N-二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)，然后抽出反應(yīng)液，再用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽出洗滌液，即得到存在于洗滌液中的熒光標(biāo)記多肽，洗滌液中的熒光標(biāo)記多肽再通過C18反相柱利用HPLC分離提純得到熒光標(biāo)記多肽產(chǎn)品。上述熒光標(biāo)記多肽的制備方法，其中，所述的脫保護液為含有20%哌啶的N，N_ 二甲基甲酰胺溶液。上述熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，是以所述熒光標(biāo)記多肽為底物，篩選組蛋白去乙?；敢种苿?。上述熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其中，所述篩選組蛋白去乙?；敢种苿┑姆椒ㄊ荌)將檢測化合物用DMSO梯度稀釋為化合物溶液；2)在384孔微孔板中，每孔加入I微升梯度稀釋后的化合物溶液；3)每孔加入15微升含16微摩爾/升熒光標(biāo)記多肽的反應(yīng)緩沖液；3)每孔加入15微升含O. 4單位SIRT I酶(或者合適濃度的其他HDAC酶)的反應(yīng)緩沖液；4)放入30 V孵箱中反應(yīng)60分鐘；5)每孔加入45微升反應(yīng)終止液；7)使用遷移率變動實驗測量所述熒光標(biāo)記多肽的轉(zhuǎn)化率并計算檢測化合物的半數(shù)抑制濃度IC50，如半數(shù)抑制濃度IC50小于10微摩爾/升，則所述檢測化合物為組蛋白去乙酰化酶抑制劑。上述熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其中，所述化合物溶液的配制方法是，取濃度為10毫摩爾/升的檢測化合物溶液，用DMSO按照半對數(shù)梯度稀釋的方法稀釋至所用終濃度的30倍濃度。上述熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其中，所述反應(yīng)緩沖液的配制方法是，取25毫升I摩爾/升的Tris溶液，137毫升I摩爾/升的氯化鈉溶液，2. 7毫升I摩爾/升的氯化鉀溶液，I毫升I摩爾/升的氯化鎂溶液，O. I克BSA粉末以及5毫升O. I摩爾/升的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸溶液，加入蒸餾水定容至I升。上述熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其中，所述反應(yīng)終止液的配制方法是，取100毫升I摩爾/升的HEPES緩沖液，20毫升O. 5摩爾/升的EDTA溶液，I. 33毫升30%的Bri j35溶液和I毫升5毫摩爾/升的suramin溶液,加入蒸懼水定容至I升。 上述熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其中，所述的化合物所用終濃度根據(jù)檢測化合物的特性和實驗設(shè)計而不同，最高終濃度為100微摩爾/升。本發(fā)明制備的熒光標(biāo)記多肽可以作為組蛋白去乙?；傅牡孜?，反應(yīng)后通過遷移率變動實驗來直接檢測底物的轉(zhuǎn)化率，從而計算出檢測化合物對酶活性的抑制程度。使用本發(fā)明的熒光標(biāo)記多肽作為底物來篩選去乙?；敢种苿?，由于不再需要第二步酶偶聯(lián)反應(yīng)，因此與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有快速(I個半小時以內(nèi)得到結(jié)果)、經(jīng)濟(成本為試劑盒方法的一半甚至四分之一)、直接準(zhǔn)確(假陽/陰性率低)的特點，可用于大規(guī)模篩選化合物庫來鑒定組蛋白去乙酰化酶抑制劑。


圖I為制備多肽的HPLC分析圖；圖2為制備多肽的質(zhì)譜分析圖；圖3為檢測化合物的半數(shù)抑制濃度(IC50)分析圖。
具體實施例方式實施例I熒光標(biāo)記多肽的制備方法I)精確稱取10克的Fmoc-Lys (Ac) -Rink酰胺4_甲基二苯甲胺樹脂加入200毫升的反應(yīng)容器中，并加入100毫升N，N-二甲基甲酰胺溶脹樹脂30分鐘，抽干，再用N，N-二甲基甲酰胺振蕩洗漆3次,每次50暈升,3分鐘I次,抽干，加入50暈升脫保護試劑(含20%哌啶的N，N- 二甲基甲酰胺)振蕩反應(yīng)2次，每次15分鐘中間再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌I次，抽出脫保護液，用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，抽干，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性。2)依次向反應(yīng)容器中加入50毫升N，N- 二甲基甲酰胺，12. 65克Fmoc-His (trt)-OH，8. 30克苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯，2. 7克I-羥基苯并三氮唑，2. 4毫升N，N-二異丙基乙胺，振蕩30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，每次50毫升，3分鐘I次，抽干。3)加入50毫升脫保護試劑(含20%哌啶的N，N-二甲基甲酰胺)振蕩反應(yīng)2次，每次15分鐘中間再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌I次，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性，抽出脫保護液，用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，抽干。4)依次向反應(yīng)容器中加入50毫升N，N- 二甲基甲酰胺，7. 72克Fmoc-Arg(Pbf) -0H, 8. 30克苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯，2. 7克I-羥基苯并三氮唑，2. 4毫升N，N-二異丙基乙胺，振蕩30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，每次50毫升，3分鐘I次，抽干。5)加入50毫升脫保護試劑(含20%哌啶的N，N-二甲基甲酰胺)振蕩反應(yīng)2次，每次15分鐘中間再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌I次，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性，抽出脫保護液，用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，抽干。6)依次向反應(yīng)容器中加入50毫升N，N- 二甲基甲酰胺，9. 24克Fmoc-Ser (Boc) -0H, 8. 30克苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯，2. 7克I-羥基 苯并三氮唑，2. 4毫升N，N-二異丙基乙胺，振蕩30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，每次50毫升，3分鐘I次，抽干。7)加入50毫升脫保護試劑(含20%哌啶的N，N-二甲基甲酰胺)振蕩反應(yīng)2次，每次15分鐘中間再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌I次，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性，抽出脫保護液，用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，抽干。8)依次向反應(yīng)容器中加入50毫升N，N- 二甲基甲酰胺，6. 24克Fmoc-Thr (tBu)-0H，8. 30克苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯，2. 7克I-羥基苯并三氮唑，2. 4毫升N，N-二異丙基乙胺，振蕩30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性。抽出反應(yīng)液，再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，每次50毫升，3分鐘I次，抽干。9)加入50毫升脫保護試劑(含20%哌啶的N，N-二甲基甲酰胺)振蕩反應(yīng)2次，每次15分鐘中間再用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌I次，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陽性，抽出脫保護液，用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，抽干。10)依次向反應(yīng)容器中加入50毫升N，N_ 二甲基甲酰胺，9. 24克5_FAM，8. 30克苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯，2. 7克I-羥基苯并三氮唑，2. 4毫升N，N- 二異丙基乙胺，振蕩30分鐘，取少許樹脂做茚三酮檢測，呈陰性，抽出反應(yīng)液。再用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂3次，每次50毫升，3分鐘I次，抽干。11)取所得的樣品做HPLC和MS分析(圖1，圖2)以檢測制備多肽的質(zhì)量。實施例2遷移率變動實驗中的化合物溶液和反應(yīng)溶液的配制方法I)取濃度為10毫摩爾/升的化合物溶液，用DMSO按照半對數(shù)稀釋的方法稀釋至所用終濃度的30倍濃度，放置備用，此為化合物溶液。2)取25毫升I摩爾/升的Tris溶液，137毫升I摩爾/升的氯化鈉溶液，2. 7毫升I摩爾/升氯化鉀溶液和I毫升I摩爾/升的氯化鎂，O. I克BSA粉末以及5毫升O. I摩爾/升的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸溶液加入750毫升蒸餾水中，并調(diào)節(jié)pH值到8. 0，再用I升的容量瓶定容至I升，并用O. 45微米孔徑的濾器過濾后備用，此為反應(yīng)緩沖液。3)取100毫升I摩爾/升的HEPES緩沖液，20毫升O. 5摩爾/升EDTA溶液，I. 33毫升30% Brij 35溶液，I毫升5毫摩爾/升suramin溶液加入800毫升蒸餾水中，并調(diào)節(jié)PH值到7. 5，再用I升的容量瓶定容至I升，并用O. 45微米孔徑的濾器過濾后備用，此為反應(yīng)終止液。
實施例3熒光標(biāo)記多肽作為底物篩選組蛋白去乙酰化酶抑制劑的方法I)取I微升梯度稀釋后的化合物溶液加入384孔微孔板中2)每孔加入15微升含16微摩爾/升突光標(biāo)記多肽的反應(yīng)緩沖液。3)每孔加入15微升含O. 4單位SIRT I酶(或者合適濃度的其他HHDAC酶)的反應(yīng)緩沖液。4)放入30°C孵箱中反應(yīng)60分鐘(或者合適的反應(yīng)時間)。5)每孔加入45微升反應(yīng)終止液。6)使用遷移率變動實驗(可以使用Caliper EZ Reader II來讀取反應(yīng)信號，也可以使用凝膠電泳和凝膠成像儀來分析實驗結(jié)果)測量底物的轉(zhuǎn)化率并計算化合物的半數(shù) 抑制濃度(IC50)。圖I為制備多肽的HPLC分析圖；圖2為制備多肽的質(zhì)譜分析圖；圖3為檢測化合物的半數(shù)抑制濃度(IC50)分析圖。序列表<110>輝源生物科技(上海)有限公司〈120〉熒光標(biāo)記多肽及其制備方法和應(yīng)用〈160〉I<210>1<211>5<212>PRT〈213〉人工序列〈400〉ITSRHK (Ac) -CONH權(quán)利要求
1.一種熒光標(biāo)記多肽，其氨基酸序列為TSRHK (Ac) -CONH2,該氨基酸序列第五位賴氨酸殘基上的乙?；鶊F可被組蛋白去乙酰化酶識別并切除。
2.如權(quán)利要求I所述的熒光標(biāo)記多肽的制備方法，其特征在于包括以下順序進行的步驟 A、取Fmoc-Lys(Ac)-Rink 酸胺 4-甲基二苯甲胺樹脂(Fmoc-Lys(Ac)-RinkAmide-MBHAResin)置于反應(yīng)容器中，以N，N-二甲基甲酰胺溶脹樹脂，然后用脫保護液反應(yīng)2次后，抽出脫保護液； B、依次向反應(yīng)容器中加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-His(trt)-OH、苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N- 二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)；然后抽出反應(yīng)液，再用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干； C、向反應(yīng)容器中加入脫保護液反應(yīng)2次，然后抽出脫保護液，用N，N-二甲基甲酰胺洗漆樹脂，抽干； D、依次向反應(yīng)容器中加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N- 二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)，然后抽出反應(yīng)液，再用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干； E、向反應(yīng)容器中加入脫保護液振蕩反應(yīng)2次，然后抽出脫保護液，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干； F、依次向反應(yīng)容器中加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Ser(Boc)-OH、苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N- 二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)，然后抽出反應(yīng)液，再用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干； G、向反應(yīng)容器中加入脫保護液振蕩反應(yīng)2次，然后抽出脫保護液，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干； H、依次向反應(yīng)容器中加入N，N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Thr(tBu)-OH、苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N- 二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)，然后抽出反應(yīng)液，再用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干； I、向反應(yīng)容器中加入脫保護液振蕩反應(yīng)2次，然后抽出脫保護液，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽干； J、依次向反應(yīng)容器中加入N，N- 二甲基甲酰胺、5-FAM、苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、I-羥基苯并三氮唑和N，N-二異丙基乙胺，振蕩反應(yīng)，然后抽出反應(yīng)液，再用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂，抽出洗滌液，即得到存在于洗滌液中的熒光標(biāo)記多肽，洗滌液中的熒光標(biāo)記多肽再通過C18反相柱利用HPLC分離提純得到熒光標(biāo)記多肽產(chǎn)品。
3.根據(jù)權(quán)利2要求所述的熒光標(biāo)記多肽的制備方法，其特征在于所述的脫保護液為含有20%哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液。
4.如權(quán)利要求I所述的熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其特征在于以所述熒光標(biāo)記多肽為底物，篩選組蛋白去乙?；敢种苿?。
5.如權(quán)利要求4所述的熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其特征在于，所述篩選組蛋白去乙?；敢种苿┑姆椒ㄊ? 1)將檢測化合物用DMSO梯度稀釋為化合物溶液； 2)在384孔微孔板中，每孔加入I微升梯度稀釋后的化合物溶液；3)每孔加入15微升含16微摩爾/升熒光標(biāo)記多肽的反應(yīng)緩沖液；3)每孔加入15微升含去乙?；傅姆磻?yīng)緩沖液；4)放入30°C孵箱中反應(yīng)60分鐘；5)每孔加入45微升反應(yīng)終止液；7)使用遷移率變動實驗測量所述熒光標(biāo)記多肽的轉(zhuǎn)化率并計算檢測化合物的半數(shù)抑制濃度IC50，如半數(shù)抑制濃度IC50小于I微摩爾/升，則所述檢測化合物為組蛋白去乙酰化酶抑制劑。
6.如權(quán)利要求5所述的熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其特征在于所述化合物溶液的配制方法是，取濃度為10毫摩爾/升的檢測化合物溶液，用DMSO按照半對數(shù)梯度稀釋的方法稀釋至所用終濃度的30倍濃度。
7.如權(quán)利要求5所述的熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其特征在于所述反應(yīng)緩沖液的配制方法是，取25毫升I摩爾/升的Tris溶液，137毫升I摩爾/升的氯化鈉溶液，2. 7毫升I摩爾/升的氯化鉀溶液，I毫升I摩爾/升的氯化鎂溶液，O. I克BSA粉末以及5毫升O. I摩爾/升的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸溶液，加入蒸餾水定容至I升。
8.如權(quán)利要求5所述的熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其特征在于所述反應(yīng)終止液的配制方法是，取100毫升I摩爾/升的HEPES緩沖液，20毫升O. 5摩爾/升的EDTA溶液，I. 33毫升30%的Bri j35溶液和I毫升5毫摩爾/升的suramin溶液，加入蒸餾水定容至I升。
9.如權(quán)利要求6所述的熒光標(biāo)記多肽的應(yīng)用，其特征在于所述的化合物所用終濃度根據(jù)檢測化合物的特性和實驗設(shè)計而不同，最高終濃度為100微摩爾/升。
全文摘要
一種熒光標(biāo)記多肽，其氨基酸序列為TSRHK(Ac)-CONH2，以Fmoc-Lys(Ac)-Rink酰胺4-甲基二苯甲胺樹脂等為原料制備而成。本發(fā)明制備的熒光標(biāo)記多肽可以作為組蛋白去乙酰化酶的底物，反應(yīng)后通過遷移率變動實驗來直接檢測底物的轉(zhuǎn)化率，從而計算出檢測化合物對酶活性的抑制程度，來篩選和鑒定組蛋白去乙?；敢种苿?。使用本發(fā)明的熒光標(biāo)記多肽作為底物來篩選去乙酰化酶抑制劑，由于不再需要第二步酶偶聯(lián)反應(yīng)，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有快速(1個半小時以內(nèi)得到結(jié)果)、經(jīng)濟(成本為試劑盒方法的一半甚至四分之一)、直接準(zhǔn)確(假陽/陰性率低)的特點，并可用于大規(guī)模篩選化合物庫來鑒定組蛋白去乙?；敢种苿?。
文檔編號C12Q1/34GK102924570SQ20121037870
公開日2013年2月13日 申請日期2012年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月8日
發(fā)明者王柏秋, 孫凌冰, 王睿, 余佳凌 申請人:輝源生物科技(上海)有限公司