一種含纖維素原料的酶解方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含纖維素原料的酶解方法，該方法包括在水的存在下，將含纖維素原料與酶混合，將含纖維素原料酶解，得到酶解產(chǎn)物，其特征在于，所述酶解分多階段進(jìn)行，所述多階段包括連續(xù)進(jìn)行的主酶解階段以及主酶解階段以后的間歇酶解階段，在主酶解階段中，向酶解罐中連續(xù)加入含纖維素原料以及酶，含纖維素原料的加入量以及酶的加入量使得經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖含量為50-100g/L，并使經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物分別連續(xù)流入后續(xù)階段的酶解罐中進(jìn)行間歇酶解，直至后續(xù)階段的各個酶解罐的酶解終點(diǎn)的酶解產(chǎn)物中單糖的含量為大于或等于105g/L。本發(fā)明的方法能有效地提高原料的糖轉(zhuǎn)化率，并大大縮短酶解周期。
【專利說明】一種含纖維素原料的酶解方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種含纖維素原料的酶解方法。
【背景技術(shù)】
[0002]現(xiàn)有技術(shù)的由含纖維素原料，如秸桿制備乙醇的方法主要包括三個步驟:1、含纖維素原料的預(yù)處理，2、纖維素的酶解，3、糖的發(fā)酵制乙醇。
[0003]經(jīng)過預(yù)處理后的含纖維素原料中的纖維素裸露出來，在與纖維素酶混合后被纖維素酶水解的反應(yīng)通常稱為酶解反應(yīng)，又可以稱為糖化反應(yīng)，酶解的主要產(chǎn)物是單糖。纖維素在纖維素酶的作用下能夠轉(zhuǎn)化成葡萄糖，半纖維素在半纖維素酶的作用下能夠轉(zhuǎn)化成木糖等單糖，葡萄糖和木糖都可以用于發(fā)酵生產(chǎn)乙醇，比如釀酒酵母可以發(fā)酵葡萄糖制備乙醇，樹干畢赤酵母可以發(fā)酵木糖制備乙醇。纖維素的非結(jié)晶結(jié)構(gòu)是很容易被打破的，它可以完全降解成葡萄糖，然后由葡萄糖發(fā)酵成乙醇。
[0004]在傳統(tǒng)的含纖維素原料的酶解方法中，酶解步驟通常采用間歇式操作，即將含纖維素原料和酶全部加入到一個酶解罐中并混合均勻，在適當(dāng)?shù)拿附鈼l件下維持至酶解終點(diǎn)，得到酶解產(chǎn)物。所述傳統(tǒng)的間歇式酶解方法的能耗較高，單糖產(chǎn)率較低，酶的作用效率低，酶解周期長，且設(shè)備利用率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有的含纖維素原料的酶解方法單糖產(chǎn)率較低，酶的作用效率低，酶解周期長的缺陷，提供一種具有較高單糖產(chǎn)率，酶的作用效率較高，酶解周期較短的含纖維素原料的酶解方法。
[0006]本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)`現(xiàn)，現(xiàn)有技術(shù)的含纖維素原料的酶解方法中，含纖維素原料，如秸桿原料通常是以液漿的形式存在，在將漿液狀的全部秸桿原料直接與酶混合時，會使酶濃度降低，使酶活力下降。再者，將經(jīng)過預(yù)處理的秸桿與酶混合酶解的方法通常為將破碎的秸桿顆粒一次全部加入到酶與水的混合液中與酶液混合，進(jìn)行酶解糖化反應(yīng)，或者，先將所用反應(yīng)物料一經(jīng)預(yù)處理的秸桿顆粒于反應(yīng)罐中與水混合，然后在酶解溫度下，將酶直接加入到反應(yīng)罐中反應(yīng)。盡管上述混合是在攪拌條件下進(jìn)行的，但是秸桿顆粒仍然不容易與酶混合均勻。因?yàn)?，?jīng)過預(yù)處理后的秸桿粒度變小，顆粒以及碎屑狀的秸桿顆粒很容易互相粘連和團(tuán)聚，因此一次將全部秸桿完全與酶混合，僅有部分秸桿能與酶充分接觸，但是由于秸桿之間的粘連和團(tuán)聚也會有部分秸桿不能充分與酶接觸，即使在攪拌下，也不能完全將秸桿打散，從而導(dǎo)致酶的利用率較低。因此，酶解后纖維素轉(zhuǎn)化為糖的轉(zhuǎn)化率低，且酶解周期較長。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種含纖維素原料的酶解方法，該方法包括在水的存在下，將含纖維素原料與酶混合，將含纖維素原料酶解，得到酶解產(chǎn)物，其中，所述酶解分多階段進(jìn)行，所述多階段包括連續(xù)進(jìn)行的主酶解階段以及主酶解階段以后的間歇酶解階段，在主酶解階段中，向酶解罐中連續(xù)加入含纖維素原料以及酶，含纖維素原料的加入量以及酶的加入量使得經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖含量為50-100g/L，并使經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物分別連續(xù)流入后續(xù)階段的酶解罐中進(jìn)行間歇酶解，直至后續(xù)階段的各個酶解罐的酶解終點(diǎn)的酶解產(chǎn)物中單糖的含量為大于或等于105g/L。
[0008]本發(fā)明的方法通過采用連續(xù)酶解與間歇酶解相結(jié)合的方式，使含纖維素原料能與酶混合均勻并充分接觸，并且在反應(yīng)過程中，酶的濃度一直保持在較高的水平，因此，含纖維素原料能與酶充分反應(yīng)，從而有效地提高了原料的糖轉(zhuǎn)化率。例如，在其它的蒸汽爆破條件都相同的情況下，實(shí)施例1的單糖產(chǎn)率達(dá)38.41%，酶解周期僅為64小時；而對比例I的單糖產(chǎn)率僅為35.35%，單糖產(chǎn)率提高幅度達(dá)8.7%，酶解周期高達(dá)88小時，酶解周期縮短20小時以上，并同時提高的設(shè)備利用率并降低了綜合能耗。
[0009]本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予以詳細(xì)說明。
【具體實(shí)施方式】
[0010]以下對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的【具體實(shí)施方式】僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0011]本發(fā)明提供的含纖維素原料的酶解方法包括在水的存在下，將含纖維素原料與酶混合，將含纖維素原料酶解，得到酶解產(chǎn)物，其中，所述酶解分多階段進(jìn)行，所述多階段包括連續(xù)進(jìn)行的主酶解階段以及主酶解階段以后的間歇酶解階段，在主酶解階段中，向酶解罐中連續(xù)加入含纖維素原料以及酶，含纖維素原料的加入量以及酶的加入量使得經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖含量為50-100g/L(5-10%)，并使經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物分別連續(xù)流入后續(xù)階段的酶解罐中進(jìn)行間歇酶解，直至后續(xù)階段的各個酶解罐的酶解終點(diǎn)的酶解產(chǎn)物中單糖的含量為大于或等于105g/L (10.5%)。其中，該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖 含量指從主酶解階段的最后一個酶解罐中流出的酶解產(chǎn)物中單糖的含量；酶解終點(diǎn)的酶解產(chǎn)物中單糖的含量指經(jīng)過主酶解階段以及后續(xù)的酶解階段后得到的最終的酶解產(chǎn)物中單糖的含量。
[0012]按照本發(fā)明，所述主酶解階段為連續(xù)進(jìn)行酶解的階段，在該主酶解階段中，向酶解罐中連續(xù)加入含纖維素原料以及酶，能夠保證酶與纖維素原料的充分接觸、混合，并保證經(jīng)過主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖達(dá)到一定的濃度，從而利于酶解周期的優(yōu)化。優(yōu)選情況下，含纖維素原料的加入量以及酶的加入量使得經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖含量為60-80g/L。
[0013]按照本發(fā)明，在主酶解階段中，所述連續(xù)加入的含纖維素原料以及酶的加入量只要保證使得經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖含量為50-100g/L(5-10%)，更優(yōu)選為60-80g/L (6.0-8.0%)即可，并且所述含纖維素原料的加入量可以根據(jù)生產(chǎn)能力而定，例如，可以為10-300千克/小時。
[0014]按照本發(fā)明，所述多階段包括主酶解階段的依次串聯(lián)的多個酶解階段的酶解罐，以及與位于主酶解階段末位的酶解罐連通的后續(xù)間歇酶解階段的多個并聯(lián)的酶解罐。即，所述對主酶解階段以及后續(xù)的間歇酶解階段中的每個酶解階段均優(yōu)選對應(yīng)一個酶解罐。其中，本發(fā)明對所述連續(xù)進(jìn)行的主酶解階段以及后續(xù)的間歇酶解階段所用的酶解罐的種類和數(shù)量沒有特別限定，可以為本領(lǐng)域常規(guī)使用的酶解罐。它們的位置可以在高度相同的一個平面上或者高度不同的平面上，呈梯級式。本發(fā)明優(yōu)選多個酶解罐在一個平面上串聯(lián)連接。[0015]按照本發(fā)明，所述主酶解階段的酶解罐的數(shù)量沒有特別限定，從主酶解階段的效率以及縮短酶解周期的角度考慮，優(yōu)選情況下，所述主酶解階段包括依次串聯(lián)的2-3個酶解罐，即，依次包括串聯(lián)的兩個或三個酶解罐；優(yōu)選情況下，將含纖維素原料連續(xù)加入主酶解階段的第一酶解階段的酶解罐中，為了更好地保證酶解效果，將酶分別連續(xù)加入主酶解階段的第一酶解階段的酶解罐和與其串聯(lián)的第二酶解階段的酶解罐中。在所述第二酶解罐中加入酶的方式，優(yōu)選，待第一酶解階段得到的酶解產(chǎn)物流入第二酶解階段的酶解罐后再連續(xù)向第二酶解階段的酶解罐中加入酶。
[0016]按照本發(fā)明，對主酶解階段以后的間歇酶解階段的酶解罐的數(shù)量沒有特別的限制，從充分酶解和生產(chǎn)周期的縮短以及設(shè)備的利用率等方面綜合考慮，優(yōu)選情況下，所述主酶解階段以后的間歇酶解階段包括并聯(lián)的2-4個酶解罐。
[0017]按照本發(fā)明，更優(yōu)選情況下，所述主酶解階段包括連續(xù)進(jìn)行的三個酶解階段，即，位于首位的第一酶解階段的酶解罐，與第一酶解階段的酶解罐串聯(lián)的第二酶解階段的酶解罐以及與第二酶解階段的酶解罐串聯(lián)的第三酶解階段的酶解罐，即優(yōu)選位于主酶解階段的末位的為第三酶解階段的酶解罐，將由第三酶解階段得到的酶解產(chǎn)物分別連續(xù)送入與之連通的后續(xù)的間歇酶解階段的多個并聯(lián)的酶解罐中繼續(xù)進(jìn)行酶解。
[0018]按照本發(fā)明，在所述主酶解階段中，所述串聯(lián)的多個酶解階段的酶解罐輸送酶解產(chǎn)物的方式多為溢流方式，且每個酶解階段的酶解程度也與纖維素原料以及酶的流量以及--體積有關(guān)。
[0019]具體地，在所述主酶解階段中，后一酶解階段的酶解罐的物料入口和與其相鄰的前一酶解階段的酶解罐的物料出口相連通。每個酶解階段的酶解罐的物料入口可以位于酶解罐的上部，與之對應(yīng)，每個酶解階段的物料出口可以位于酶解罐的下部；或者每個酶解階段的酶解罐的物料入口也可以位于酶解罐的下部，與之對應(yīng)，每個酶解罐的物料出口也可以位于酶解罐的上部。在所述主酶解解階段中，從第一酶解階段的酶解罐的物料入口連續(xù)加入含纖維素原料和酶，使含纖維素原料酶解，待第一酶解階段的酶解產(chǎn)物從酶解罐的物料出口流出進(jìn)入第二酶解階段的酶解罐中，將酶連續(xù)加入第二酶解階段的酶解罐中，從而與第一酶解階段酶解的酶解產(chǎn)物混合，繼續(xù)酶解，經(jīng)第二酶解階段酶解的酶解產(chǎn)物從第二酶解罐的物料出口流出進(jìn)入第三酶解階段的酶解罐中繼續(xù)充分酶解，而后將酶解產(chǎn)物分別連續(xù)送入與之連通的后續(xù)的間歇酶解階段的多個并聯(lián)的酶解罐中繼續(xù)進(jìn)行酶解直至酶解終點(diǎn)；后續(xù)間歇酶解的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，將經(jīng)過主酶解階段的酶解產(chǎn)物分別連續(xù)流入間歇酶解階段的多個并聯(lián)的酶解罐中，并優(yōu)選按照酶解罐的順序依次引入。按照引入的順序，將經(jīng)過間歇酶解的終點(diǎn)酶解產(chǎn)物依次引出，并再次連續(xù)引入經(jīng)過主酶解階段酶解后的產(chǎn)物，從而實(shí)現(xiàn)連續(xù)酶解。例如，以三個并聯(lián)的酶解罐為例，將經(jīng)過主酶解階段酶解產(chǎn)物先連續(xù)引入間歇酶解階段的第一酶解罐中，待物料注滿后，繼續(xù)引入間歇酶解階段的第二酶解罐中，待物料注滿后，繼續(xù)引入間歇酶解階段的第三酶解罐中，在向該第三酶解罐中引入的同時將第一酶解罐的物料連續(xù)引出，待第三酶解罐中的物料注滿后，將經(jīng)過主酶解階段的酶解產(chǎn)物再次引入該間歇酶解階段的第一酶解罐中。
[0020]此外，由于酶解產(chǎn)物粘度較大，流動性較差，因此，可以將后一酶解階段的酶解罐的物料入口設(shè)置成比所述前一酶解階段的酶解罐的物料入口稍低。另外，并可以通過泵送幫助粘稠的酶解產(chǎn)物順利地流入到下一個酶解罐中。[0021]所述酶解罐的結(jié)構(gòu)及酶解罐的串聯(lián)連接方式都是本領(lǐng)域公知的，在此不再贅述。每個酶解罐中物料的初始裝液量通常為每個酶解罐體積的50-70% ;當(dāng)物料的流入和流出達(dá)到平衡后，將每個酶解罐的裝液量調(diào)節(jié)至酶解罐體積的80%左右。
[0022]按照本發(fā)明，酶解使用的酶通常包括纖維素酶，出于成本和效果的綜合考慮，優(yōu)選以每克含纖維素原料的干重計(jì)，所述纖維素酶的用量為8-20酶活力單位，更優(yōu)選為10-15酶活力單位。
[0023]例如，當(dāng)所述以干重計(jì)的含纖維素原料的加入量可以為300-350千克/小時，優(yōu)選為310-330千克/小時，在所述主酶解階段中，所述纖維素酶的加入總量為
2.4\106-7.0\106酶活力單位/小時，更優(yōu)選為3.0父106-5.25 X IO6酶活力單位/小時(纖
維素酶的加入總量包括主酶解階段的向多個酶解罐，如第一酶解罐和第二酶解罐中加入的纖維素酶的總量)。
[0024]按照本發(fā)明，優(yōu)選情況下，在所述主酶解階段中，為了在盡量短的時間內(nèi)保證得到的酶解產(chǎn)物具有一定的單糖含量，連續(xù)向第一酶解階段的酶解罐加入的酶占酶總加入量的50%-70%，向第二酶解階段的酶解罐加入的酶占酶總加入量的30%-50%。因此，在上述含纖維素原料的加料量的前提下，連續(xù)加入第一酶解階段的酶解罐的纖維素酶的加入量為
1.2X 106-4.9X IO6酶活力單位/小時，連續(xù)加入第二酶解階段的酶解罐的纖維素酶的加入量為0.72X 106-3.5 X IO6酶活力單位/小時。
[0025]優(yōu)選情況下，所述酶解使用的酶還包括半纖維素酶。因?yàn)榘肜w維素酶可以降解半纖維素成為溶于水的木糖，所以酶解使用的酶包括半纖維素酶，從而可以更充分地暴露纖維素，增加纖維素與纖維素酶的接觸幾率，以增加單糖產(chǎn)率。
`[0026]本發(fā)明的方法還包括在主酶解階段中，以每克含纖維素原料的干重計(jì)，所述半纖維素酶的用量為4.4-8.8酶活力單位。在上述含纖維素原料的加料量的前提下，將半纖維素酶分別連續(xù)加入第一酶解階段的酶解罐和第二酶解階段的酶解罐中，連續(xù)加入第一酶解階段的酶解罐的半纖維素酶的加入量為0.66Χ 106-2.156 X IO6酶活力單位/小時，連續(xù)加入第二酶解階段的半酶解罐的纖維素酶的加入量為0.396X IO6-L 54Χ106酶活力單位/小時。
[0027]由于本發(fā)明僅涉及對酶解方式的改進(jìn)，因此對用含纖維素的原料制備單糖的方法的其它步驟沒有特別的限制。
[0028]其中，所述纖維素酶可以通過各種方式獲得，例如商購得到，或者通過使用產(chǎn)酶微生物分泌得到。由于使用產(chǎn)酶微生物分泌得到的酶會含有各種副產(chǎn)物，因此優(yōu)選直接加入酶。本發(fā)明所述纖維素酶的酶活力按照美國國家可再生能源實(shí)驗(yàn)室(National Renewable
Energy Laboratory, NREL)提供的標(biāo)準(zhǔn)方法-纖維素酶活力測定NREL LAP-006測定，
所述纖維素酶的酶活力單位為在該標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定的測定條件下，I分鐘內(nèi)將I克WhatmanN0.1濾紙轉(zhuǎn)化為葡萄糖所需酶的微克數(shù)。
[0029]按照本發(fā)明，所述纖維素酶為復(fù)合酶，至少包括C1型纖維素酶、Cx型纖維素酶和纖維二糖酶三種酶。
[0030]C1酶可以使結(jié)晶的纖維素轉(zhuǎn)變?yōu)榉墙Y(jié)晶的纖維素。
[0031]Cx型纖維素酶又分為Cxi型纖維素酶和Cx2型纖維素酶兩種。Cxi型纖維素酶為內(nèi)切型纖維素酶，可以從水合非結(jié)晶纖維素分子內(nèi)部作用于β_1，4-糖苷鍵，生成纖維糊精和纖維二糖。Cx2型纖維素酶是一種外切型纖維素酶，可以從水合非纖維素分子的非還原端作用于β-1，4-糖苷鍵，逐一切斷β-1，4-糖苷鍵生成葡萄糖。
[0032]纖維二糖酶則作用于纖維二糖，生成葡萄糖。
[0033]本發(fā)明所述半纖維素酶的酶活力單位(U)為在50°C、pH=4.8條件下，每分鐘分解濃度為I重量％木聚糖溶液產(chǎn)生I微克還原糖(以木糖計(jì))所需的酶量。
[0034]本發(fā)明所述半纖維素酶的活力指每克半纖維素酶所具有的活力單位。所述半纖維素酶的活力利用半纖維素酶在50°C、pH為4.8的條件下水解I重量％木聚糖產(chǎn)生還原糖(以木糖計(jì))，所得還原糖與過量3，5—二硝基水楊酸(DNS)發(fā)生顏色反應(yīng)，用分光光度計(jì)測得反應(yīng)液550納米的光吸收值與還原性糖(以木糖計(jì))的生成量成正比關(guān)系測定。具體測定方法如下:
[0035]準(zhǔn)確稱取1.000克木聚糖，用0.5毫升pH=4.8的0.1摩爾/升乙酸-乙酸鈉緩沖溶液溶解，然后用去離子水定容到100毫升，得到I重量％木聚糖溶液；
[0036]稱取30克四水合酒石酸鉀鈉放入500毫升錐形瓶內(nèi)，加16克NaOH后，加50毫升去離子水，以5°C /分鐘的速度水浴加熱至固體物質(zhì)溶解，加入I克3，5- 二硝基水楊酸，至溶解，冷卻至室溫，用去離子水定容至100毫升，可得3，5- 二硝基水楊酸(DNS)溶液；
[0037]將木糖80°C烘干至恒重，準(zhǔn)確稱取1.000克溶于1000毫升水中，加10毫克疊氮化鈉防腐，得到I毫克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)木糖溶液；
[0038]準(zhǔn)確稱取1.000克固體半纖維素酶或移取I毫升液體半纖維素酶原液，用0.5毫升pH=4.8的0.1摩爾乙酸-乙酸鈉緩沖溶液溶解，然后用去離子水定容到100毫升，得到稀釋100倍的待測酶液；
`[0039]分別將在50°C水浴加熱60分鐘的2毫升木糖梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1毫克/毫升、0.2毫克/毫升、0.3毫克/毫升、0.4毫克/毫升和0..5毫克/毫升，所述木糖梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液用去離子水與I毫克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)木糖溶液混合制備)或去離子水(木糖空白對照)，與2毫升DNS混合沸水浴5分鐘，冷卻，去離子水定容15毫升后，用分光光度計(jì)在550納米下分別測定反應(yīng)后木糖梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液的光吸收值，以光吸收值為橫坐標(biāo)，木糖濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。由該標(biāo)準(zhǔn)曲線可得回歸方程y=bx+a，其中，X為光吸收值，y為木糖濃度，a為所得直線方程的截距，b為所得直線方程的斜率；
[0040]取0.2毫升待測酶液與1.8毫升所述I重量％木聚糖溶液或pH=4.8的0.1摩爾/升乙酸一乙酸鈉緩沖溶液(木聚糖空白對照)，按照與上述木糖梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的步驟測試光吸收值。并按照下式計(jì)算半纖維素酶的活力:
[0041]
【權(quán)利要求】
1.一種含纖維素原料的酶解方法，該方法包括在水的存在下，將含纖維素原料與酶混合，將含纖維素原料酶解，得到酶解產(chǎn)物，其特征在于，所述酶解分多階段進(jìn)行，所述多階段包括連續(xù)進(jìn)行的主酶解階段以及主酶解階段以后的間歇酶解階段，在主酶解階段中，向酶解罐中連續(xù)加入含纖維素原料以及酶，含纖維素原料的加入量以及酶的加入量使得經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖含量為50-100g/L，并使經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物分別連續(xù)流入后續(xù)階段的酶解罐中進(jìn)行間歇酶解，直至后續(xù)階段的各個酶解罐的酶解終點(diǎn)的酶解產(chǎn)物中單糖的含量為大于或等于105g/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，含纖維素原料的加入量以及酶的加入量使得經(jīng)過該主酶解階段得到的酶解產(chǎn)物中的單糖含量為60-80g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述多階段包括主酶解階段的依次串聯(lián)的多個酶解階段的酶解罐，以及與位于主酶解階段末位的酶解罐連通的后續(xù)間歇酶解階段的多個并聯(lián)的酶解罐。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述主酶解階段包括依次串聯(lián)的2-3個酶解罐；將含纖維素原料連續(xù)加入主酶解階段的第一酶解階段的酶解罐中，將酶分別連續(xù)加入主酶解階段的第一酶解階段的酶解罐和與其串聯(lián)的第二酶解階段的酶解罐中。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述主酶解階段以后的間歇酶解階段包括并聯(lián)的2-4個酶解罐。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，連續(xù)向主酶解階段的第一酶解階段的酶解罐加入的酶占酶總加入量的50-70%，連續(xù)向第二酶解階段的酶解罐加入的酶占酶總加入量的30-50%ο
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4或6所述的方法，其中，酶解使用的酶包括纖維素酶，以每克含纖維素原料的干重計(jì)，所述纖維素酶的用量為8-20酶活力單位。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4或6所述的方法，其中，酶解使用的酶還包括半纖維素酶，以每克含纖維素原料的干重計(jì)，所述半纖維素酶的用量為4.4-8.8酶活力單位。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述酶解的溫度為45-55°C，所述酶解的pH值為4-6。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、2或4所述的方法，其中，所述含纖維素原料為蒸汽爆破的含纖維素原料和/或酸處理的含纖維素原料。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述含纖維素原料為秸桿。
【文檔編號】C12P19/14GK103789374SQ201210434861
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年11月2日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月2日
【發(fā)明者】劉文信, 魏擁輝, 張寧, 楊宇平, 王廣霞, 閆偉松, 劉麗君, 劉勁松, 李凡 申請人:中糧營養(yǎng)健康研究院有限公司, 中糧生化能源（肇東）有限公司, 中糧集團(tuán)有限公司