專利名稱：一種應(yīng)用于發(fā)酵大生產(chǎn)的菌種保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及菌種保存方法，特別涉及一種應(yīng)用于發(fā)酵大生產(chǎn)的菌種保存方法。
背景技術(shù)：
實驗室和工廠菌種室對菌種常用的保藏法是斜面低溫保藏法，即將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2-8°C的冰箱中保藏，其優(yōu)點是操作簡單，使用方便，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等；但是其缺點是容易變異，因為培養(yǎng)基與菌種同時處在2-8°C保存條件下，菌種仍會緩慢利用培養(yǎng)基殘留成分而緩慢生長，影響微生物的性狀；其次因菌種屢次傳代會使微生物的代謝改變，進(jìn)而影響微生物的性狀；再次因菌種在固體斜面培養(yǎng)基上涂布生長的差異影響發(fā)酵生產(chǎn)批水平的不穩(wěn)定差異，同時貯存空間大，器皿保管困難；污染雜菌的機會較多。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種應(yīng)用于發(fā)酵大生產(chǎn)的菌種保存方法，該方法能實現(xiàn)菌種無需屢次傳，保證菌種性狀穩(wěn)定，不易變異；并能夠縮小貯存空間，確保菌種保存環(huán)境安全可靠；減少或避免雜菌污染。尤其因其可直接復(fù)制性的使用于發(fā)酵大生產(chǎn)，無需進(jìn)行菌種孢子的二次擴培，避免了因菌種制備的因素對發(fā)酵生產(chǎn)批水平穩(wěn)定性的影響，有利于提聞生廣效率和質(zhì)量。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所提出的技術(shù)方案為一種應(yīng)用于發(fā)酵大生產(chǎn)的菌種保存方法，其特征在于包括如下步驟
步驟I :將固體斜面培養(yǎng)基上生長成熟的菌種中滅菌洗脫液洗脫制成菌懸液；
步驟2 :過濾菌懸液去除培養(yǎng)基；
步驟3 :過濾后的菌懸液進(jìn)行冷凍管分裝；
步驟4 :將分裝后裝有菌懸液的菌種置于_78°C—-82°C下超低溫保存。進(jìn)一步，所述的斜面培養(yǎng)基的組分及其重量配比為麩皮3.2 — 3.5%，硫酸鎂 O. 004 — O. 006%，磷酸氫二銨 O. 01 — O. 02%，磷酸氫二鉀 O. 008 — O. 012%，酵母膏
O.5-1.0%，葡萄糖1.0-2. 0%，瓊脂I. O — 2. 0%，其余為無菌水。進(jìn)一步，所述的菌種為金霉素產(chǎn)生菌、鹽霉素產(chǎn)生菌、泰樂菌素產(chǎn)生菌。進(jìn)一步，所述的滅菌洗脫液為滅菌甘油。進(jìn)一步，步驟2中所述的過濾為采用雙層無菌紗布過濾。優(yōu)選的，所述的滅菌甘油為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20-25%的滅菌甘油。進(jìn)一步，所述的冷凍管體積為l_60mL。優(yōu)選的，所述的冷凍管為PV材質(zhì)。采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所述的菌種保存方法，具有顯著優(yōu)點如下一是采用該發(fā)明保存方法，去除了培養(yǎng)基，避免了菌種在保存期內(nèi)有生長的營養(yǎng)條件，穩(wěn)定了菌種的性狀；二是采用該發(fā)明保存方法，對菌種采用了 20-25%的滅菌甘油作為保護劑保護，在確保菌種在保存期內(nèi)的存活穩(wěn)定性同時也確保了菌種的性狀；三是采用該發(fā)明保存方法，大大縮小了菌種的貯存空間，同時因其采用PV材質(zhì)冷凍管保存，不易造成破碎，使菌種保存安全可靠；四是采用該發(fā)明保存方法實現(xiàn)了每支分裝菌種的一次性使用，減少或避免發(fā)生雜菌污染尤其是交叉污染。五是采用該發(fā)明保存方法實現(xiàn)了菌種直接復(fù)制性的使用于發(fā)酵大生產(chǎn)，無需進(jìn)行菌種孢子的二次擴培，避免了因菌種制備的因素對發(fā)酵生產(chǎn)批水平穩(wěn)定性的影響。采用上述菌種保存方法對其主菌種和工作菌種進(jìn)行保存，主菌種在10年的保存期內(nèi)及工作菌種在180天的保存期內(nèi)能達(dá)到保持性狀穩(wěn)定、生產(chǎn)水平穩(wěn)定的效果。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式
，對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實施例I金霉素產(chǎn)生菌菌種的保存方法
步驟I :將固體斜面培養(yǎng)基上生長成熟的菌種中滅菌洗脫液洗脫制成菌懸液；斜面培養(yǎng)基的組成成分為麩皮32g，硫酸鎂0.04g，磷酸氫二銨O. lg，磷酸氫二鉀0.08g，酵母膏5g，葡萄糖10g，瓊脂10g，無菌水定容至IL ;滅菌洗脫液為20%滅菌甘油。步驟2 :過濾菌懸液去除培養(yǎng)基，過濾采用雙層無菌紗布過濾；
步驟3 :過濾后的菌懸液進(jìn)行Iml冷凍管分裝；
步驟4 :將分裝后裝有菌懸液的菌種置于_78°C下超低溫保存。實施例2金霉素產(chǎn)生菌菌種的保存方法
步驟I :將固體斜面培養(yǎng)基上生長成熟的菌種中滅菌洗脫液洗脫制成菌懸液；斜面培養(yǎng)基的組成成分為麩皮35g，硫酸鎂0.06g，磷酸氫二銨O. 2g，磷酸氫二鉀O. 12g，酵母膏10g，葡萄糖20g，瓊脂20g，無菌水定容至IL ;滅菌洗脫液為25%滅菌甘油。步驟2 :過濾菌懸液去除培養(yǎng)基，過濾采用雙層無菌紗布過濾；
步驟3 :過濾后的菌懸液進(jìn)行60ml冷凍管分裝；
步驟4 :將分裝后裝有菌懸液的菌種置于_82°C下超低溫保存。實施例3金霉素產(chǎn)生菌菌種的保存方法
步驟I :將固體斜面培養(yǎng)基上生長成熟的菌種中滅菌洗脫液洗脫制成菌懸液；斜面培養(yǎng)基的組成成分為麩皮33. 5g，硫酸鎂0.05g，磷酸氫二銨O. 15g，磷酸氫二鉀O. 10g，酵母膏7. 5g，葡萄糖15g，瓊脂15g，無菌水定容至IL ;滅菌洗脫液為23%滅菌甘油。步驟2 :過濾菌懸液去除培養(yǎng)基，過濾采用雙層無菌紗布過濾；
步驟3 :過濾后的菌懸液進(jìn)行30ml冷凍管分裝；
步驟4 :將分裝后裝有菌懸液的菌種置于-80°C下超低溫保存。實施例4-9菌種的保存方法見下表 表I
權(quán)利要求
1.一種菌種保存方法，其特征在于包括如下步驟 步驟I :將固體斜面培養(yǎng)基上生長成熟的菌種用滅菌洗脫液洗脫制成菌懸液； 步驟2 :過濾菌懸液去除培養(yǎng)基； 步驟3 :過濾后的菌懸液進(jìn)行冷凍管分裝； 步驟4 :將分裝后裝有菌懸液的菌種置于_78°C—-82°C下超低溫保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種菌種保存方法，其特征在于所述的斜面培養(yǎng)基的組分及其重量配比為麩皮3. 2 — 3. 5%，硫酸鎂O. 004 - O. 006%，磷酸氫二銨O. 01 — O. 02%,磷酸氫二鉀O. 008 — O. 012%,酵母膏O. 5-1. 0%，葡萄糖I. 0-2. 0%，瓊脂1.0-2. 0%，其余為無菌水。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種菌種保存方法，其特征在于所述的菌種為金霉素產(chǎn)生菌、鹽霉素產(chǎn)生菌、泰樂菌素產(chǎn)生菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種菌種保存方法，其特征在于所述的滅菌洗脫液為滅菌甘油。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種菌種保存方法，其特征在于所述的過濾采用雙層無菌紗布過濾。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種菌種保存方法，其特征在于所述的滅菌甘油為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20-25%的滅菌甘油。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種菌種保存方法，其特征在于所述的冷凍管體積為l_60mLo
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種菌種保存方法，其特征在于所述的冷凍管為PV材質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種菌種保存方法，其特征在于包括如下步驟步驟1將固體斜面培養(yǎng)基上生長成熟的菌種中滅菌洗脫液洗脫制成菌懸液；步驟2過濾菌懸液去除培養(yǎng)基；步驟3過濾后的菌懸液進(jìn)行冷凍管分裝；步驟4將分裝后裝有菌懸液的菌種置于-78℃-82℃下超低溫保存。采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所述的菌種保存方法，具有顯著優(yōu)點如下該方法能實現(xiàn)菌種無需屢次傳代，保證菌種性狀穩(wěn)定，不易變異；并能夠縮小貯存空間，確保菌種保存環(huán)境安全可靠；減少或避免雜菌污染。有利于提高生產(chǎn)效率和質(zhì)量。
文檔編號C12N1/04GK102911871SQ201210456959
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月6日
發(fā)明者林貞 申請人:浦城正大生化有限公司