專利名稱：一種氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒和檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細菌的檢測技術(shù)，特別是氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒和檢測方法。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代分子遺傳學的發(fā)展，氣單胞菌屬(Aeromonas)到目前已擴展到包括嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophil)、豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)、溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)、殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)、中間氣單胞菌(Aeromonas media)、維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)、簡氏氣單胞菌 (Aeromonas jandaei)等14個氣單胞菌表型種和16個基因種,其模式種為嗜水氣單胞菌，豚鼠氣單胞菌是極常見的氣單胞菌。氣單胞菌屬細菌在臨床和環(huán)境中都分布很廣,水、土壤、空氣中都有分布。由氣單胞菌屬細菌引起的水產(chǎn)養(yǎng)殖動物疾病種類繁多，不僅給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失，還可通過水產(chǎn)動物和水產(chǎn)品感染人畜，導致人畜腹瀉和食物中毒，影響人類健康。因此，建立氣單胞菌屬細菌的檢測方法，對于監(jiān)控該屬病原的繁殖、疾病發(fā)生和流行以及疾病的及時防治都具有十分重要的意義。傳統(tǒng)的生理生化檢測方法可以準確鑒定待檢菌株，但是操作復雜，成本高，耗時長。潘曉藝等，“氣單胞菌和嗜水氣單胞菌雙重PCR檢測方法的建立”，華中農(nóng)業(yè)大學學報，2011，30(6) : 759-763.公開的PCR檢測可以克服生理生化檢測方法的缺陷，但該方法沒有提供可供參考和借鑒的檢測靈敏度，所使用的兩對引物其檢測靈敏度是否一致也不能被證明，因此在病原診斷和疾病流行學研究方面存在缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種新的氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒和檢測方法。本發(fā)明氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒，包含序列如SEQ ID NO 2所示的引物對1，擴增來自氣單胞菌屬細菌的基因。本發(fā)明氣單胞菌屬細菌的檢測方法，包括如下步驟a,提取樣本DNA :提取待檢樣本中的DNA ；b，基因擴增用權(quán)利要求I所述的試劑盒對待檢樣本中的DNA進行擴增；C，結(jié)果檢測對DNA擴增結(jié)果進行檢測。其中，步驟a所述的樣本為養(yǎng)殖水體。本發(fā)明還提供了 SEQ ID NO :1 2所示的寡核苷酸序列的用途，其用于擴增或檢測來自氣單胞菌屬細菌的基因。本發(fā)明提供的試劑盒和方法可以擴增氣單胞菌屬細菌的甘油磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶基因的基因片段，特異性強、靈敏度高、耗時短，用于快速檢測養(yǎng)殖水體，可及時有效地預(yù)防魚病的發(fā)生，具有良好的應(yīng)用前景。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明權(quán)利要求書記載的內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖I本發(fā)明引物擴增氣單胞菌的電泳圖譜。I :空白對照；2 :嗜水氣單胞菌；3 -M鼠氣單胞菌；M DNA maker I ；
圖216S rDNA 特異性引物擴增結(jié)果圖譜。MiDNAmaker I ；1:60°C ；2:65°C ；3:68°C ；4 :空白對照；圖3特異性檢測結(jié)果。O :空白對照；1 :無乳鏈球菌；2 :蠟狀芽孢桿菌；3 :熒光假單胞菌；4 :海豚鏈球菌；5 :愛德華氏菌；6 =DNAmaker I ；7 :柱狀黃桿菌；8 :鼠傷寒沙門氏菌；9 :河流弧菌；10 :糞腸球菌；11 :金黃色葡萄球菌；12 :嗜水氣單胞菌；13 :豚鼠氣單胞菌；圖4實際樣品的檢測。I :陽性對照；2 :陰性對照；3 :水樣；4 :尾鰭；5 :觸;6_7 :患病組織塊；M DNA maker I ；圖5患病組織的擴增產(chǎn)物測序圖。
具體實施例方式一、實驗材料和儀器I、試驗菌株試驗菌種表
權(quán)利要求
1.一種氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒，其特征在于包含序列如SEQ IDNO :廣2所示的引物對1，擴增來自氣單胞菌屬細菌的基因。
2.一種氣單胞菌屬細菌的檢測方法，其特征在于包括如下步驟 a，提取樣本DNA :提取待檢樣本中的DNA ； b，基因擴增用權(quán)利要求I所述的試劑盒對待檢樣本中的DNA進行擴增； c，結(jié)果檢測對DNA擴增結(jié)果進行檢測。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟a所述的樣本為養(yǎng)殖水體。
4.SEQ ID NO :1 2所示的寡核苷酸序列的用途，其特征在于用于擴增或檢測來自氣單胞菌屬細菌的基因。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒，包含序列如SEQ IDNO1~2所示的引物對1，擴增來自氣單胞菌屬細菌的基因。本發(fā)明還公開了一種氣單胞菌屬細菌的檢測方法。本發(fā)明檢測試劑盒和檢測方法可以準確、有效的檢測氣單胞菌屬細菌，且特異性強、靈敏度高、耗時短，檢測快速，可以用于養(yǎng)殖水體的快速檢測和預(yù)測，預(yù)防魚病的發(fā)生，提高經(jīng)濟效益。
文檔編號C12N15/54GK102925578SQ201210460319
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月15日
發(fā)明者肖丹, 黃冠軍, 劉天強, 劉衍鵬, 李茂 申請人:通威股份有限公司