專利名稱：一種人骨巨細胞瘤細胞株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細胞株，尤其涉及一種人骨巨細胞瘤細胞株及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
骨巨細胞瘤(giant cell tumor of bone,簡稱GCT)是一種常見的原發(fā)性骨腫瘤，占原發(fā)骨腫瘤的20%。一般認為它屬良性，曾被稱為“良性骨巨細胞瘤(Blood- good)”。但是按良性腫瘤常規(guī)方法治療后卻容易復(fù)發(fā)，近年來它被放在良、惡性之間的位置，屬中間性(Intermediate)或侵襲性(Aggressive)腫瘤。骨巨細胞瘤病因不明，有幾種不同說法。骨巨細胞瘤主要組織成分為類似破骨細胞的巨細胞和比較瘦小的梭形或圓形的基質(zhì)細胞。由于巨細胞很象破骨細胞，英國學(xué)者Stewart稱之為“破骨細胞瘤”。不過多數(shù)人認為基細胞(Stroma cell)是主要的,可能來自未分化結(jié)締組織細胞(Undif ferentiated con-nectivetissue cell)。也有人認為基細胞來自未分化中胚細胞(Undifferen tiated mesenchymalcell)，并轉(zhuǎn)化成巨細胞。又有人認為它們屬內(nèi)皮細胞來源。還有人將之歸屬纖維組織細胞 (Fibroushistiocytic cell)來源。骨巨細胞瘤生物學(xué)行為復(fù)雜，多變。GCT具有明顯的局部侵襲性，復(fù)發(fā)率高，并可發(fā)生轉(zhuǎn)移骨巨細胞瘤。目前治療方法主要以手術(shù)治療為主，采用切刮術(shù)加滅活處理，植入自體或異體松質(zhì)骨或骨水泥，但易復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率達40 70%。而廣泛的擴大切除或節(jié)段截除術(shù)將嚴重影響患者肢體功能，且同樣具有相對較高的復(fù)發(fā)率(10%左右)。再加上對化療無效，放療后也易肉瘤變，所以GCT的治療一直比較棘手，醫(yī)生能選擇的治療方法也少之又少。加快GCT在基礎(chǔ)及臨床上的研究勢在必行。目前,在細胞水平上對骨巨細胞瘤的研究主要是通過臨床活體標本培養(yǎng)出原代細胞再加以研究，相關(guān)文獻報道也比較少。而對于骨巨細胞瘤特別是惡性骨巨細胞瘤這種稀有的腫瘤，臨床活體標本是很難得到的，再加上原代細胞經(jīng)過很有限傳代后就會死亡或失去原有的特征，這大大限制了對骨巨細胞瘤的研究.目前，布達佩斯條約國際確認的培養(yǎng)物保藏單位還沒有收錄骨巨細胞瘤細胞株。建立GCT細胞株的相關(guān)文獻也僅有1993年來自日本的一篇(Establishment of a Cell Line from a Human Giant Cell Tumor of Bone),且文獻中所提到的細胞株CG-I現(xiàn)在已無法得到。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種人骨巨細胞瘤細胞株及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的人骨巨細胞瘤細胞株為人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WF，保藏編號為CCTCC NO. C2012101，于2012年9月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCCJi址武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學(xué))。所述人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可作為研究骨巨細胞瘤發(fā)生、骨巨細胞瘤發(fā)展或骨巨細胞瘤轉(zhuǎn)移的細胞模型。所述人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可用于建立骨巨細胞瘤動物模型。所述人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可應(yīng)用于篩選和/或研制
治療骨巨細胞瘤藥物。本發(fā)明提供的人骨巨細胞瘤GCT-WF可以用于在細胞水平上研究骨巨細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機理，建立骨巨細胞瘤動物模型，并將其作為靶標篩選或研制抗癌藥物。


圖I為本發(fā)明人骨巨細胞瘤GCT-WF細胞在顯微鏡下觀察的細胞形態(tài)圖。
具體實施例方式下面參照附圖，結(jié)合具體實施例對本發(fā)明所述的人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101進行詳細的介紹和描述，以更好的理解本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解的是，下述實施例并不限制本發(fā)明范圍。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。I.骨巨細胞瘤標本的獲得
本發(fā)明的骨巨細胞瘤標本來自于一骨巨細胞瘤患者，該患者為男性，35歲，進行右股骨上段骨巨細胞瘤切除手術(shù)。從手術(shù)切除標本中選取活性良好腫瘤組織數(shù)塊作為本發(fā)明的骨巨細胞瘤標本。2.原代培養(yǎng)
采用組織塊貼壁法進行骨巨細胞瘤細胞的原代培養(yǎng)，使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37°C，CO2濃度為5%，飽和濕度下培養(yǎng)，直至培養(yǎng)皿中的細胞長至80%左右。3.傳代培養(yǎng)
采用細胞消化法進行骨巨細胞瘤細胞的傳代培養(yǎng)將原代培養(yǎng)的培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液棄去，加入O. 25%胰酶溶液，使充分浸潤；肉眼觀察細胞層，當(dāng)見到出現(xiàn)細針孔空隙時，棄去胰酶溶液，并加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基終止消化，穩(wěn)定傳代至第五代后，得到骨巨細胞瘤細胞株。將得到的骨巨細胞瘤細胞株命名為人骨巨細胞瘤GCT-WF，并于2012年9月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱0^0，地址武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學(xué))，保藏編號為 CCTCC NO. C2012101。在顯微鏡下觀察獲得的人骨巨細胞瘤GCT-WF細胞形態(tài)，結(jié)果如圖I所示，細胞呈梭型，類似于骨巨細胞瘤中基質(zhì)細胞的形狀。人骨巨細胞瘤GCT-WF的倍增時間約為48小時。人骨巨細胞瘤GCT-WF的細胞周期中各期間所占周期時間的比例為=Gtl和G1 60%，
S17%，G2和M 23%，其中Gtl休眠期，G1為DNA合成前期，S為DNA合成期，G2為DNA合成后期，M為分裂期。人骨巨細胞瘤GCT-WF可以用于研究骨巨細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機理，建立骨巨細胞瘤動物模型，并將其作為靶標篩選或研制抗癌藥物。以上對本發(fā)明的具體實施例進行了詳細描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和 修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WF，其特征在于，所述細胞株保藏編號為CCTCCNO.C2012101。
2.權(quán)利要求I所述人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在建立骨巨細胞瘤發(fā)生、骨巨細胞瘤發(fā)展或骨巨細胞瘤轉(zhuǎn)移的細胞模型中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求I所述人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在建立骨巨細胞瘤動物模型中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求I所述人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在篩選治療骨巨細胞瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開一種人骨巨細胞瘤細胞株及其應(yīng)用，該人骨巨細胞瘤細胞株為人骨巨細胞瘤細胞株GCT-WFCCTCCNO.C2012101，可以用于在細胞水平上研究骨巨細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機理，建立骨巨細胞瘤動物模型，并將其作為靶標篩選抗癌藥物。
文檔編號C12N5/09GK102943065SQ20121046758
公開日2013年2月27日 申請日期2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月19日
發(fā)明者華瑩奇, 蔡鄭東, 尹飛, 孫偉, 王卓瑩, 鄭龍坡, 曾輝, 孫夢熊 申請人:上海市第十人民醫(yī)院