專利名稱：富集重鎘的基因工程菌及其構(gòu)建和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及鎘富集基因工程菌及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，具體是指鎘富集基因工程菌構(gòu)建及其構(gòu)建得到的一株菌株，還涉及該菌株的鎘耐受和鎘吸收等功能的表征。
背景技術(shù)：
由工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)活動產(chǎn)生的大量重金屬對人類和生態(tài)環(huán)境造成了非常嚴(yán)峻的危害，例如Cd、Hg、As、Pb等，可以代替Zn、Fe、Cu以及其它的一些非重金屬元素，破壞它們作為一些蛋白和酶的輔因子作用，從而干擾生物體的正常生理代謝活動。而且大部分重金屬可以長期停留在環(huán)境土壤中，用傳統(tǒng)的物理化學(xué)方法修復(fù)，包括利用化學(xué)試劑提取、電化學(xué)、就地掩埋等等，往往代價過高、效率低下，甚至?xí)淖兺寥赖奈锢砗突瘜W(xué)結(jié)構(gòu)，大大降低土壤肥力。近年來，以基因工程菌為基礎(chǔ)的生物修復(fù)方式以其經(jīng)濟性和有效性等優(yōu)勢，正得到越來越多的重視。惡臭假單胞菌、Pseudomonas是具有很強抗逆性能的一株環(huán)境優(yōu)勢菌株，能夠降解環(huán)境中的多種有機污染物，如甲苯，并具有一定的重金屬(如Cu和Cd)耐受能力等。惡臭假單胞菌KT2440 putida KT2440)是一株模式環(huán)境微生物菌株，也是迄今遺傳研究闡述得最為清晰、代謝多樣性研究得最為透徹的腐生假單胞菌，且作為根際促生菌，可以與植物配合作用，增強植物在環(huán)境脅迫尤其是重金屬污染中的生存能力。惡臭假單胞菌KT2440基因組在2002年被解析，是第一個被解析的惡臭假單胞菌菌株。由于其遺傳操作系統(tǒng)簡單清晰，是首選的基因克隆、表達的革蘭氏陰性菌株之一。目前利用微生物修復(fù)治理土壤中的重金屬污染土壤的機理包括通過菌體分泌的有機酸和氨基酸的溶解作用、微生物對重金屬的生物轉(zhuǎn)化作用等。而來源于裂殖酵母、低等藻類和大部分植物的植物螯合肽合成酶，在重金屬離子的誘導(dǎo)下，可以催化低分子量的谷胱甘肽(GSH)并通過轉(zhuǎn)肽反應(yīng)生成相對高分子量的植物螯合肽(Y-Glu-Cys) n-Gly(n=2-ll)，后者是具有更強金屬螯合能力的非蛋白巰基(NPT)多肽。研究表明，通過在E. coli中異源表達粟酒裂酵母) 5)% ! 基因和小麥J(/ ! 基因可以明顯增強工程菌的耐Cd能力，并可以提高菌體中Cd的累積量(分別達到14.9μ mol/g[dry weight]和 7· 2 μ mol/g[dry weight])。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個技術(shù)目的在于提供了一株新的可以富集重金屬鎘的惡臭假單胞菌基因工程菌；使得本發(fā)明得到的基因工程菌株具有可以作為植物促生菌，可與植物配合協(xié)同修復(fù)重金屬污染土壤的潛力。本發(fā)明的第二個技術(shù)目的在于提供上述基因工程菌株的構(gòu)建方法，該構(gòu)建方法是一種在惡臭假單胞菌KT2440中異源表達粟酒裂殖酵母pombe)植物螯合肽合成酶基因的基因工程方法。
3
本發(fā)明的第三個技術(shù)目的在于上述基因工程菌株在配合植物協(xié)同修復(fù)土壤重金屬污染中的應(yīng)用。為實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。一、采用本發(fā)明所述的構(gòu)建方法得到的一株富集重鎘的基因工程菌，其分類命名為惡臭假單胞菌iPsGudomoims putida ) KT2440_SpPCS，其保藏編號為CCTCC NO M2012435。二、本發(fā)明所述的可惡臭假單胞菌iPsGudomorms putida)KT2440-SpPCS的構(gòu)建方法以環(huán)境模式菌株惡臭假單胞菌iPseudomonas putida ) KT2440為出發(fā)菌,重組表達粟酒裂殖酵母基因獲得可以富集重金屬鎘的目標(biāo)基因工程菌。具體步驟如下
1)以粟酒裂殖酵母基因組DNA為模板，PCR擴增出分基因，經(jīng)T-A克隆連接到測序載體PMD19-T Simple質(zhì)粒，挑正確的轉(zhuǎn)化子，經(jīng)測序，比對正確，得到包含表達基因SpPCS的中間質(zhì)粒PMDig-T-^/^y ；
2)設(shè)計酶切位點將分插入到表達質(zhì)粒pBBRlMCS-5載體的相應(yīng)的酶切位點之間、連接獲得重組質(zhì)粒pBBRlMCS-5-分；
3)將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pBBRlMCS-S-^/^y電擊轉(zhuǎn)化導(dǎo)入到惡臭假單胞菌KT2440的感受態(tài)細胞中，經(jīng)50 μ g/mL的慶大霉素篩選得到陽性轉(zhuǎn)化子即惡臭假單胞菌iPseudomonas
)KT2440-SpPCS。三、本發(fā)明所述鎘富集基因工程菌的應(yīng)用，具體地，是指在惡臭假單胞菌{Pseudomonas putida^) KT2440-SpPCS配合植物協(xié)同修復(fù)土壤重金屬污染中的應(yīng)用。對上述應(yīng)用方法的驗證主要包括鎘耐受能力顯著提高、鎘富集能力明顯增多、非蛋白巰基產(chǎn)量顯著提高三步驟。(I) 鎘耐受能力檢測
將出發(fā)菌株和本發(fā)明所述的重組基因工程菌株在5 mL含有相應(yīng)抗性的種子液中培養(yǎng)過夜，分別轉(zhuǎn)接至含有100 mL培養(yǎng)液的三角瓶中，當(dāng)OD6tltl=O. 5時，加入O. 6 mM IPTG誘導(dǎo)，I小時后，加入500 μ M氯化鎘，之后每隔兩個小時在OD6c 條件下測量菌體密度。重組菌和空質(zhì)粒對照在相應(yīng)抗性的種子液中培養(yǎng)過夜，分別轉(zhuǎn)接于50 mL培養(yǎng)液的三角瓶中，當(dāng)OD600=O. 5時，加入0.6 mM IPTG誘導(dǎo)，當(dāng)OD600=L O時，分別按1、10_2、10_4、10_6的稀釋度，取100 μ L菌液涂布在不同濃度Cd2+的抗性平板上，30°C培養(yǎng)30小時后，取出拍照。(2)鎘富集能力檢測轉(zhuǎn)接過夜培養(yǎng)的重組菌和對照空質(zhì)粒菌株于25mL LB液體培養(yǎng)基中，當(dāng)0D_=0. 5時，加入不同濃度的氯化鎘溶液和O. 6mM IPTG誘導(dǎo)，30°C繼續(xù)培養(yǎng)5小時，收菌，用5mM HEPES (pH 7. 1,0. 85% NaCl)細菌兩次，65°C下干燥24小時，用70%的濃硝酸處理過夜，取可溶物用石墨爐原子吸收分光光度計在228. 8 nm下檢測鎘吸收量。(3)非蛋白巰基(NPT)檢測原始菌和重組菌經(jīng)O. 6 mM IPTG誘導(dǎo)后，I小時后加入不同濃度的氯化鎘，10小時后，菌體迅速在液氮中冷卻，研磨徹底破碎。取用300 mL含有I M NaOH和lmg/L NaBH4的溶液溶解，4 °〇下13000 g離心5 min，取上清用50 mL含有37% (w/v)的HCl酸化?？偟腘PT的檢測，取10 mL樣品液加入500 mL ElIman’ s試劑
45，5’-dithiobis (2-nitrobenzoic acid) ] (DTNP), 30 °C反應(yīng)兩分鐘后，在 412 nm 處檢測
吸光度。本發(fā)明的有益效果在于
本發(fā)明將來源于粟酒裂殖酵母pombe)的植物螯合肽合成酶基因(分/7O通過基因工程的方法成功在惡臭假單胞菌KT2440中異源表達，成功構(gòu)建了對Cd污染具有一定生物修復(fù)潛力的生物工程菌，可以極大程度地提高菌體內(nèi)的非蛋白巰基(NPT)含量和對重金屬鎘的耐受能力，經(jīng)石墨爐原子吸收檢測到基因工程菌可以富集更多的重金屬鎘，無論是對原始出發(fā)菌株KT2440和基因來源菌株而言，其實現(xiàn)了意想不到的效果，即首次通過廣宿主載體pBBRlMCS-5在模式環(huán)境菌株惡臭假單胞菌KT2440中成功表達了粟酒裂殖酵母的植物螯合肽合成酶基因，且能一定程度上提高宿主菌的重金屬鎘耐受性、鎘富集量和細胞內(nèi)與鎘螯合的巰基總量。而惡臭假單胞菌作為植物促生菌的植物促生作用可以將其與某些超積累植物或者一般的普通植物配合，以達到更好的植物修復(fù)作用。


圖。
的鎘吸收量。量。收量。比。其中，pBB:KT2440-pBBRlMCS-5-空質(zhì)粒對照菌株，PCS:KT2440_SpPCS 發(fā)明菌株；pBB-I，pBB+I :空質(zhì)粒對照菌株不加IPTG』IPTG ;PCS_I，PCS+I :發(fā)明菌株不加IPTG，加IPTG。本發(fā)明所述的菌株，其分類命名為惡臭假單胞菌Pseudomoims putidaKT2440-SpPCS ;其保藏機構(gòu)全稱為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，簡稱CCTCC，地址為中國.武漢.武漢大學(xué)；保藏日期為2012年10月28日，保藏號編號為CCTCC NO M 2012435。
圖I植物螯合肽合成酶基因iSpPCS) PCR擴增產(chǎn)物的電泳圖。
圖2廣宿主表達載體pBBRlMCS-5-分的構(gòu)建圖譜。
圖3表達載體pBBRlMCS-5-分的酶切鑒定圖譜。
圖4表達載體pBBRlMCS-S-^/^y導(dǎo)入惡臭假單胞菌KT2440的酶切鑒定圖 譜。
圖5重組蛋白在惡臭假單胞菌KT2440中表達的SDS-PAGE電泳圖。
圖6原始菌和基因工程菌的在O. 5 mM Cd2+脅迫下的生長曲線圖。
圖7本發(fā)明菌株和空質(zhì)粒對照菌株在不同濃度Cd2+和不同OD值的Cd沖擊實驗
圖8空質(zhì)粒對照菌株和不同轉(zhuǎn)化子的工程菌在30 μ M氯化鎘溶液中誘導(dǎo)4小時量。
圖9空質(zhì)粒對照菌株和本發(fā)明菌株在30 μ M氯化鎘溶液中誘導(dǎo)不同時間的鎘吸收圖10空質(zhì)粒對照菌株和本發(fā)明菌株對照在不同濃度氯化鎘中誘導(dǎo)3小時的鎘吸圖11空質(zhì)粒對照菌株和本發(fā)明菌株在不同Cd濃度下的生長差異和NPT含量對
具體實施例方式
5
下面的實施例對本發(fā)明作詳細說明，但對本發(fā)明沒有限制。本發(fā)明的生物材料的來源的說明
I、質(zhì)粒來源
(I) PMD19-T Simple :購自 Promega 公司。(2) pBBRlMCS-5來源微生物學(xué)報(2006) 46:763-766。申請人首先通過查閱到該生物材料的上述文獻出處，并聯(lián)系了發(fā)表人李順鵬教授，請求其贈與該生物材料，并免費獲得了該生物材料；且申請人在此聲明，保證從本申請日起二十年內(nèi)向公眾發(fā)放該生物材料。2、粟酒裂殖酵母基因組DNA {SpPCS的基因登錄號NM_001018985)來源
New Phytologist (2003) 159: 323 - 330。申請人首先通過查閱到該生物材料的上述文獻出處，并聯(lián)系了發(fā)表人Stephan Clemens,并郵件請求其贈與該生物材料,并免費獲得了該生物材料；且申請人在此聲明，保證從本申請日起二十年內(nèi)向公眾發(fā)放該生物材料。3、出發(fā)菌株惡臭假單胞菌KT2440的感受態(tài)菌株的來源
Soil Biology & Biochemistry, 32(2000) 315-321。申請人首先通過查閱到該生物材料的上述文獻出處，并聯(lián)系了發(fā)表人J. L. Ramos,并郵件請求其贈與該生物材料，并免費獲得了該生物材料；且申請人在此聲明，保證從本申請日起二十年內(nèi)向公眾發(fā)放該生物材料。4、引物的設(shè)計及合成自行設(shè)計并外包金斯瑞生物技術(shù)公司合成。實施例I
本實施例說明構(gòu)建包含表達基因SpPCS的中間質(zhì)粒PMD19-T-5^^y的方法。其過程包
括
I、設(shè)計合成不帶有酶切位點的上游引物和下游引物，
Primerl 上游引物5’ - ATGAACATTGTTAAACGAGCA -3’ ；
Primer2 下游引物5，- TCACGTATTTTTACAGCA -3，。2、以粟酒裂殖酵母基因組DNA為模板，PCR擴增目的基因片段，結(jié)果見圖1，反應(yīng)條件為94 ° C 預(yù)變性 5min;94 °C 30s, 55 °C 30s, 72 °C I. 5 min, 72 °C 5 min，30 個循環(huán)。PCR擴增出的SpPCS基因后，經(jīng)T-A克隆連接到測序載體PMD19-T S imp I e質(zhì)粒，挑取正確的轉(zhuǎn)化子，經(jīng)測序，比對正確，得到包含表達基因SpPCS的中間質(zhì)粒PMD19-T-分Pd實施例2
本實施例說明構(gòu)建包含表達基因SpPCS的重組質(zhì)粒pBBRlMCS-5-5^^y的方法，具體構(gòu)建途徑見圖2。其過程包括
I、包含基因SpPCS的重組質(zhì)粒pBBRlMCS-S-^/^y的構(gòu)建，
(I)合成帶有酶切位點的上游引物和EcoRl酶切位點的下游引物
Primer3上游引物
5’ - GCGgTTfi^ATGAACATTGTTAAACGAGCA _3’ ；
Primer4下游引物
5’ - GGGGiTmTCACGTATTTTTACAGCA -3’。(2)以PMD19-T-5^G為模板，PCR擴增目的基因片段，反應(yīng)條件為PCR反應(yīng)條件為94 °C預(yù)變性 5min ;94°C 30s, 55°C 30s, 72°C I. 5 min,72°C 5 min，30 個循環(huán)。純化擴增出帶酶切位點的分基因后，與經(jīng)同樣酶切位點酶切的pBBRlMCS-5表達質(zhì)粒連接，酶切結(jié)果(見圖3和圖4)表明，重組質(zhì)粒pBBRlMCSK/^G構(gòu)建成功。實施例3
本實施例說明將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pBBRlMCS-5-分電擊轉(zhuǎn)化導(dǎo)入到惡臭假單胞菌KT2440的感受態(tài)細胞中，經(jīng)50 μ g/mL的慶大霉素篩選得到陽性轉(zhuǎn)化子KT2440_SpPCS的方法。(DKT2440感受態(tài)細胞的制備在平板上活化KT2440菌株；20小時后挑單菌落，接種于5mL LB種子液中；12小時后按1%接種量轉(zhuǎn)接于100 mL LB培養(yǎng)液中；當(dāng)0D600=0. 6 O. 75時，立即于冰上冰浴20分鐘；4°C，5000 r/min,離心10分鐘收菌，用HEPES緩沖液(3禮，？!1=7.0)洗菌3次；加50(^1^ HEPES緩沖重懸，500 μ L 20%甘油，每50yL分
裝用于一次電轉(zhuǎn)化。(2)電轉(zhuǎn)化條件取50 ng重組質(zhì)粒，按如下電擊轉(zhuǎn)化條件1. 2 kV，200 Q,25yF,Imm電轉(zhuǎn)杯。用I mL SOC培養(yǎng)基懸浮后,轉(zhuǎn)入15 mL聚丙烯酰胺離心管中30°C復(fù)蘇2小時后，經(jīng)50 4 8/1^的慶大霉素篩選得到陽性轉(zhuǎn)化子即目的菌株02440-5 05。另取50 ngpBBRlMCS-5空質(zhì)粒，按相同條件得到空質(zhì)粒對照菌株KT2440_pBBRlMCS_5。實施例4
本實施例說明SDS-PAGE凝膠電泳鑒定植物螯合肽合成酶表達結(jié)果。導(dǎo)入重組質(zhì)粒的工程菌KT244(H§7/^y，在30°C下培養(yǎng)后成功表達出植物螯合肽合成酶。SDS-PAGE電泳結(jié)果(圖5)顯示，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的菌體(第2、3、4、5條帶，分別代表用IPTG誘導(dǎo)3、4、5、6小時)在45KDa上方有一條特異性的雜帶，箭頭指出，與預(yù)期大小一致，且隨時間延長，此目的條帶的蛋白量越來越多，而原始菌(第一條帶)中無此條帶。實施例5
本實施例說明構(gòu)建成功的含基因工程菌KT2440-SpPCS與出發(fā)菌株KT2440鎘耐受、鎘富集能力和非蛋白巰基含量的對比。I、鎘耐受性能對比
KT2440出發(fā)菌和重組菌在5 mL含有相應(yīng)抗性的LB種子液中培養(yǎng)過夜，分別轉(zhuǎn)接至含有100 mL LB培養(yǎng)液的三角瓶中，當(dāng)OD6qq=O. 5時，加入O. 6 mM IPTG誘導(dǎo)，I小時后，加入500 μ M氯化鎘，之后每隔兩個小時在OD6tltl條件下測量菌體密度，得到的生長曲線圖見圖6，由圖中可以看出，在液體條件培養(yǎng)下，基因工程菌KT2440-SpPCS高濃度氯化鎘脅迫下的生長情況要比出發(fā)菌株KT2440好得多。重組菌和空質(zhì)粒對照菌株在相應(yīng)抗性的LB種子液中培養(yǎng)過夜，分別轉(zhuǎn)接于50 mLLB培養(yǎng)液的三角瓶中，當(dāng)OD6qq=O. 5時，加入O. 6 mM IPTG誘導(dǎo)，當(dāng)OD6tltl=L O時，分別按1，10_2，10_4，10_6的稀釋度，取100 μ L菌液涂布在不同濃度Cd2+的抗性平板上，30°C培養(yǎng)30小時后，取出拍照。結(jié)果見圖7，由圖中可以看出，在不同濃度的氯化鎘平板上，在不同菌液的稀釋度下，基因工程菌KT2440-分都要比出發(fā)菌株KT2440長得好，表明KT2440- SpPCS比KT2440有更好的Cd耐受性。2、鎘富集能力對比轉(zhuǎn)接過夜培養(yǎng)的耐鎘工程菌KT2440- SpPCS和空質(zhì)粒對照菌株于25mL LB液體培養(yǎng)基中，當(dāng)OD6tltl=O. 5時，加入不同濃度的氯化鎘溶液和O. 6mMIPTG誘導(dǎo)，30°C繼續(xù)培養(yǎng)5小時，收菌，用5mM HEPES (pH 7. 1,0. 85% NaCl)洗菌兩次，65°C下干燥24小時，用70%的氯化鎘處理過夜，取可溶物用石墨爐原子吸收分光光度計在228. Snm下檢測鎘吸收量，所得的各種數(shù)據(jù)結(jié)果見圖8-圖10，從圖中可知，導(dǎo)入表達質(zhì)粒pBBRlMCS-5-分的基因工程菌KT2440_SpPCS的不同轉(zhuǎn)化子，在不同時間和不同濃度的Cd2+下的鎘吸收量都比空質(zhì)粒對照要多。3、非蛋白巰基(NPT)含量對比KT2440出發(fā)菌株和重組菌KT2440_SpPCS經(jīng)O. 6mM IPTG誘導(dǎo)后，I小時后加入不同濃度的氯化鎘，10小時后，菌體迅速在液氮中冷卻，研磨徹底破碎。取用300 mL含有I M NaOH和I mg/L NaBH4的溶液溶解，4°C下13000 g離心5min，取上清用50 mL含有37%(w/v)的HCl酸化?？偟腘PT的檢測，取10 mL樣品液加A 500 mL Ellman ‘s 試劑 5，5，-dithiobis (2-nitrobenzoic acid) ] (DTNP), 30°C反應(yīng)兩分鐘，在412 nm處檢測吸光度，所得的結(jié)果見圖11，從圖中可以看出I)當(dāng)重金屬脅迫和
基因表達時，非蛋白巰基總量會隨之增加，且隨著重金屬離子濃度的增大而增加；2)在沒有Cd脅迫下，原始菌和重組菌生長和NPT總量基本無差異；20 μ mo I Cd誘導(dǎo)下，兩者生長無差異，而重組菌的NPT總量明顯高于原始菌；當(dāng)Cd在500-700 μ mo I時，重組菌生長情況好于原始菌，于此結(jié)果一致的是重組菌的NPT總量也要顯著高于原始菌。本實施例證明，通過本發(fā)明的基因工程菌KT2440_SpPCS的構(gòu)建方法，使其得到的重組惡臭假單胞菌KT2440-SpPCS可以耐受和富集重金屬鎘，之前國外有文獻報道過在大腸桿菌和釀酒酵母中表達不同的植物螯合肽合成酶基因，以提高宿主菌的鎘及其它重金屬的耐受能力和富集能力，多為對其酶學(xué)性質(zhì)進行定性研究，而由于大腸桿菌和釀酒酵母本身并非環(huán)境模式菌株，將其用于土壤環(huán)境修復(fù)幾無可能，而本實驗中用到的惡臭假單胞菌KT2440本身就具有很好的金屬耐受能力，且可作為根際促生菌可以促進植物生長，利用其表達存在于真核生物中的植物螯合肽合成酶基因修復(fù)污染環(huán)境中的重金屬還未見報道，此為重金屬污染環(huán)境的微生物修復(fù)提供了一種新穎和可行的方法。
權(quán)利要求
1.一株富集重鎘的基因工程菌，其分類命名為惡臭假單胞菌putida) KT2440-SpPCS，其保藏編號為CCTCC NO M 2012435。
2.權(quán)利要求I所述的臭假單胞菌KT2440_SpPCS的構(gòu)建方法， 其特征在于以環(huán)境模式菌株惡臭假單胞菌iPseudomorms putida) KT2440為出發(fā)菌,重組表達粟酒裂殖酵母基因5)9/^5·,獲得可以富集重金屬鎘的目標(biāo)基因工程菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于具體步驟如下1)以粟酒裂殖酵母基因組DNA為模板，PCR擴增出分基因，經(jīng)T-A克隆連接到測序載體PMD19-T Simple質(zhì)粒，挑正確的轉(zhuǎn)化子，經(jīng)測序，比對正確，得到包含表達基因SpPCS 的中間質(zhì)粒PMDig-T-^/^S ；2)設(shè)計酶切位點將分插入到表達質(zhì)粒pBBRlMCS-5載體的相應(yīng)的酶切位點之間、連接獲得重組質(zhì)粒pBBRlMCS-S-^/^S ；3)將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pBBRlMCS-S-^/^S電擊轉(zhuǎn)化導(dǎo)入到惡臭假單胞菌KT2440的感受態(tài)細胞中，經(jīng)50 μ g/mL的慶大霉素篩選得到陽性轉(zhuǎn)化子即惡臭假單胞菌iPseudomonas)KT2440-SpPCS。
4.權(quán)利要求I所述的惡臭假單胞菌{Pseudomonasputida )KT2440-SpPCS配合植物協(xié)同修復(fù)土壤重金屬污染中的應(yīng)用。
全文摘要
發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及鎘富集基因工程菌及其構(gòu)建和應(yīng)用，具體是指鎘富集基因工程菌構(gòu)建及其構(gòu)建得到的一株菌株，還涉及該菌株的鎘耐受和鎘吸收等功能的表征。采用本發(fā)明所述的構(gòu)建方法得到的一株富集重鎘的基因工程菌，其分類命名為惡臭假單胞菌(Pseudomonasputida)KT2440-SpPCS，其保藏編號為CCTCCNOM 2012435。其構(gòu)建過程主要是通過分子生物學(xué)手段在惡臭假單胞菌KT2440中異源表達粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)植物螯合肽合成酶基因SpPCS，本發(fā)明得到的基因工程菌株可以作為植物促生菌，這為后續(xù)與植物配合協(xié)同修復(fù)重金屬的研究奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號C12R1/40GK102925404SQ20121048661
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月26日
發(fā)明者鄭濤, 劉偉, 陳怡露, 陳璞, 雍曉雨, 周俊 申請人:南京工業(yè)大學(xué)