專利名稱：加強(qiáng)鈍齒棒桿菌nad激酶表達(dá)在高低供氧條件下提高該菌株l-精氨酸生產(chǎn)能力的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種加強(qiáng)鈍齒棒桿菌NAD激酶表達(dá)，在高低供氧條件下提高該菌株L-精氨酸生產(chǎn)能力的方法。
背景技術(shù)：
L-精氨酸(L-Arginine，簡稱L-Arg)作為一種半必需氨基酸，是合成蛋白質(zhì)、磷酸肌酸的重要原料，也是生物體內(nèi)尿素循環(huán)的重要中間產(chǎn)物，具有重要的生理功能和應(yīng)用價值，廣泛應(yīng)用于食品、化工和醫(yī)藥等領(lǐng)域。由于精氨酸具有特殊的應(yīng)用價值，所以國內(nèi)需求量巨大，采用發(fā)酵法生產(chǎn)L-精氨酸具有環(huán)保、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點，所以構(gòu)建高產(chǎn)L-精氨酸工程菌株對于實現(xiàn)發(fā)酵法生產(chǎn)L-精氨酸工業(yè)化生產(chǎn)具有重要意義。NADPH是生物體中一種重要的輔酶，作為電子供體，其為氧化還原反應(yīng)提供還原動力，而且對于細(xì)胞抗活性氧的毒害起到重要作用。NAD激酶催化NAD+與ATP反應(yīng)生成NADP+與ADP，這是NADP+生物合成的最后一步，也是限速步驟，而NADP+通過還原反應(yīng)生成NADPH，其在生物體內(nèi)發(fā)揮重要的生理功能。谷氨酸棒桿菌作為氨基酸生產(chǎn)菌株，其發(fā)酵生產(chǎn)各種氨基酸需要在高溶氧的環(huán)境下進(jìn)行，提供充足的NADPH對于緩解菌體所處的氧脅迫的環(huán)境具有重要意義。NADPH作為一些氧化還原反應(yīng)中的輔酶，在氨基酸生物合成過程中起到了重要作用。在L-精氨酸生物合成途徑中需要NADPH的參與(I)由a-酮戊二酸經(jīng)谷氨酸脫氫酶(識*)合成L-谷氨酸需一分子NADPH; (2)由N-乙酰谷氨酸磷酸經(jīng)乙酰谷氨酸半醛脫氫酶合成N-乙酰谷氨酸-5-半醛需要一分子NADPH，所以增加菌體生產(chǎn)NADPH能力對于提高其L-精氨酸生產(chǎn)能力具有重要意義。在谷氨酸棒桿菌中NADP+的還原主要通過脫氫酶催化來實現(xiàn)，其中主要由磷酸戊糖途徑(PPP途徑)中的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH/af/)及6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH/>/m0提供，另外一小部分由TCA循環(huán)中的異檸檬酸脫氫酶(I⑶/ict/)，蘋果酸酶(MEA a7萬)，其中由G6PDH提供的NADPH占細(xì)胞總量的70%以上，而G6TOH是PPP途徑中的限速酶，該途徑的代謝流受到[NADP+]/[NADPH]比例的調(diào)控。所以通過加強(qiáng)NAD激酶的表達(dá)增加NADP+含量，從而調(diào)控PPP途徑的流量，進(jìn)而增加胞內(nèi)NADPH的含量是有效的方法。通過加強(qiáng)酶或破壞酶基因的表達(dá)來提高菌株對于目標(biāo)產(chǎn)物的生產(chǎn)能力是代謝工程的主流手段，除此之外，一些研究通過改變輔酶(如NADPH)的水平來改變菌株對目標(biāo)產(chǎn)物的生產(chǎn)能力，并應(yīng)用于大腸桿菌、釀酒酵母、谷氨酸棒桿菌中。NADPH作為氨基酸生物合成途徑中重要的輔酶因子，通過應(yīng)用代謝工程手段增強(qiáng)PPP途徑或加強(qiáng)NADPH合成的相關(guān)基因的表達(dá)來增加NADPH的供應(yīng)，對于提高菌株氨基酸生產(chǎn)能力具有積極的作用。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道，在谷氨酸棒桿菌中通缺失葡萄糖磷酸異構(gòu)酶、加強(qiáng)G6TOH的表達(dá)、克隆表達(dá)大腸桿菌中關(guān)于NADPH合成的相關(guān)基因等可有效提聞菌株L-賴氣酸的生廣能力。鈍齒棒桿菌是我國研究者分離得到的一株短棒狀、革蘭氏陽性菌株。其突變株在國內(nèi)氨基酸工業(yè)中 得到廣泛的應(yīng)用。鈍齒棒桿菌SYPA是本實驗室通過多級復(fù)合誘變篩選獲得的一株L-精氨酸高產(chǎn)菌株，其在高供氧的條件下發(fā)酵產(chǎn)L-精氨酸。作為一株高產(chǎn)L-精氨酸的菌株，其需要大量NADPH來提供還原動力，同時需要充足的NADPH作為電子供體緩解氧自由基可能對微生物產(chǎn)生的損傷作用。本發(fā)明通過加強(qiáng)表達(dá)NADPH生物合成的限速酶(NAD激酶)來增加胞內(nèi)NADPH的供應(yīng)，一方面保證充足的NADPH為L-精氨酸生物合成提供還原動力；另一方面緩解高供氧發(fā)酵條件可能對菌株產(chǎn)生的氧脅迫。通過這種方法來增加鈍齒棒桿菌生產(chǎn)L-精氨酸的能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了通過加強(qiáng)鈍齒棒桿菌NAD激酶表達(dá)在高低溶氧條件下提高該菌株L-精氨酸生產(chǎn)能力的方法。從鈍齒棒桿菌SYPA中擴(kuò)增編碼NAD激酶的基因，與含有tac啟動子的穿梭表達(dá)質(zhì)粒pJC-tec連接，電擊轉(zhuǎn)化入鈍齒棒桿菌SYPA中，構(gòu)建重組菌株，來增強(qiáng)該菌株的NAD激酶的表達(dá)量，從而增加胞內(nèi)NADP+及NADPH的含量，進(jìn)而提高L-精 氨酸的產(chǎn)量。具體發(fā)明方案如下1.重組菌株SY k/dtac-ppnK的獲取
克隆鈍齒棒桿菌SYPA基因組上的基因，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒將該重組穿梭質(zhì)粒通過電擊轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)入鈍齒棒桿菌中，獲得重組鈍齒棒桿菌 >Y k/WC-tac-ppnK。(I)穿梭質(zhì)粒WC-tac-ppnK質(zhì)粒的構(gòu)建
依據(jù)NCBI中公布的谷氨酸棒桿菌中編碼NAD激酶的ppnK的基因序列(GenBank NC_006958)，利用其同源性，設(shè)計引物擴(kuò)增鈍齒棒桿菌中的基因。引物設(shè)計如下ppnK F Xba1:5’ -GCTCTAGAATGACTGCACCCACGAACG-3’ppnK R Sal1:5’ -GCGTCGACTTACCCCGCTGACCTGG-3’
以鈍齒棒桿菌基因組為模板，以V RppnK R為引物，擴(kuò)增兩端酶切位點分別為Xbal I及Sal I的基因片段，PCR產(chǎn)物經(jīng)過純化后與pMD 19_T vector連接，轉(zhuǎn)入E. coli JM 109中保存質(zhì)粒。從含Amp的平板上挑取單菌落，提取質(zhì)粒經(jīng)單、雙酶切驗證，并測序。對于成功與目的基因連接的質(zhì)粒，與pJC-toc用相同限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切，經(jīng)純化后連接，獲得pJC-tac-ppnk重組質(zhì)粒。(2)重組菌株 SWk/v]C-tac-ppnK 的構(gòu)建
提取質(zhì)粒通過電擊轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)化入鈍齒棒桿菌中，涂布于含50ug/L的Kan平板上，于30°C條件下培養(yǎng)36h，挑取轉(zhuǎn)化子，于含Kan的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，提取質(zhì)粒驗證。2.重組菌株發(fā)酵評價
采用250mL的搖瓶對鈍齒棒桿菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，設(shè)定兩個不同供氧模型，即裝液量分別為20mL、60mL/250mL，分別考察不同供氧條件下，重組菌株與出發(fā)菌株發(fā)酵過程各項參數(shù)的差異，評價NAD激酶增強(qiáng)表達(dá)對菌株生長、L-精氨酸生產(chǎn)及碳源消耗的影響。發(fā)酵方法如下
搖瓶種子培養(yǎng)基(g L—1):葡萄糖30，酵母粉10，尿素1.5，(NH4)2SO4 20, KH2PO4 1，MgSO4 7H20 0. 5。NaOH 調(diào) pH7. 0 7. 2，裝液量 30 mL/250 mL。115°C滅菌 7min
搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基(g L-1):葡萄糖150，酵母粉10，KH2PO41. 5，(NH4)2SO4 50，MnSO4 H2O 0. 02, MgSO4 7H20 0. 5，F(xiàn)eSO4 7H20 0. 02，L-His 5.0X10_4，生物素 8X1(T5，輕質(zhì) CaCO3 30。NaOH調(diào) pH7. 0 7. 2，裝液量 20 mL/250 mL 或 60 mL/250 mL，115°C滅菌 7 min。培養(yǎng)方法將保存菌種與含糖肉湯培養(yǎng)基斜面劃線，于30°C恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約20_24h,從斜面上挑取一環(huán)菌接種于搖瓶種子培養(yǎng)基,于30°C 120rpm/min往復(fù)式搖床上培養(yǎng)14-16h至0D562約為15-18，按5%的接種量接種于搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基，于30°C120rpm/min往復(fù)式搖床上培養(yǎng)24_36h,補(bǔ)加5%的葡萄糖,至發(fā)酵結(jié)束共培養(yǎng)96h。發(fā)酵參數(shù)測定方法
A.菌體生長以0. 25M的HCl對發(fā)酵樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，于分光光度計測定A562 0B. L-精氨酸含量測定按照坂口試劑法測定。 C.葡萄糖含量測定按照DNS法測定。3.確定于鈍齒棒桿菌中加強(qiáng)表達(dá)。通過對比重組菌株與出發(fā)菌株中NAD激酶的活性,確定由穿梭質(zhì)粒pJC-tec攜帶目的基因/7/7/#在重組菌株中有效表達(dá)。本發(fā)明的結(jié)果重組菌株與出發(fā)菌株在高低供氧的條件下發(fā)酵，在其對數(shù)生長后期測定NAD激酶的活性，分別提高了 2倍(HOS)及1. 2倍(L0S)。發(fā)酵108h后測定菌體生物量及發(fā)酵液中L-精氨酸產(chǎn)量，高供氧條件下重組菌的生物量為27g/L較出發(fā)菌株(32g/L)低，但L-精氨酸產(chǎn)量為28. 85g/L較出發(fā)菌株(25. 35g/L)提高了 12% ;在低供氧的條件下，重組菌的生物量為17g/L較出發(fā)菌株(21g/L)低，但L-精氨酸產(chǎn)量為10. 87g/L較出發(fā)菌株(7. 85g/L)高38. 5%。同時，重組菌株中葡萄糖_6_磷酸脫氫酶的活性提高，NADP+及NADPH的含量均有提高，NAD+及NADH的含量均有下降。綜合以上數(shù)據(jù)，在鈍齒棒桿菌中成功表達(dá)，且NAD激酶的表達(dá)，對菌株產(chǎn)L-精氨酸具有積極的意義。


圖1重組質(zhì)粒構(gòu)建的示意圖
圖2質(zhì)粒構(gòu)建的核酸電泳圖1 :DL5000 marker 2 :PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
3 pJC~tac 質(zhì)粒酶切 4 -.d-tac-ppnK 單酶切 5 -.d-tac-ppnK 以 Xba I 及 Sal I 雙酶切 6 DNA 入 Hind III marker
圖3高低供氧條件重組菌株與出發(fā)菌株的全細(xì)胞蛋白電泳 M :蛋白 Marker1:高供氧出發(fā)菌株2 :高供氧重組菌株3 :低供氧出發(fā)菌株4 :低供氧重組菌株；
圖4高供氧條件下重組菌株與出發(fā)菌株發(fā)酵過程測定與比較 (A)菌體生物量(B) L-精氨酸產(chǎn)量(C)葡萄糖含量 (▲)重組菌株( )出發(fā)菌株
圖5低供氧條件下重組菌株與出發(fā)菌株發(fā)酵過程測定與比較 (A)菌體生物量(B) L-精氨酸產(chǎn)量(C)葡萄糖含量 (▲)重組菌株( )出發(fā)菌株 圖6應(yīng)用高效液相分析發(fā)酵液中的游離氨基酸
具體實施例方式實施例1重組鈍齒棒桿菌SYPA/pJC-tec-/7/7ffif的構(gòu)建1.重組菌株SYPA/pJC-tec-/7/7ffif的獲取
克隆鈍齒棒桿菌SYPA基因組上的基因，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒將該重組穿梭質(zhì)粒通過電擊轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)入鈍齒棒桿菌中，獲得重組鈍齒棒桿菌 >Y k/WC-tac-ppnK。(I)穿梭質(zhì)粒WC-tac-ppnK質(zhì)粒的構(gòu)建
依據(jù)NCBI中公布的谷氨酸棒桿菌中編碼NAD激酶的的基因序列，利用其同源性，設(shè)計引物擴(kuò)增鈍齒棒桿菌中的/基因。引物設(shè)計如下ppnK F Xba1:5’ -GCTCTAGAATGACTGCACCCACGAACG-3’ppnK R Sal1:5’ -GCGTCGACTTACCCCGCTGACCTGG-3’
以鈍齒棒桿菌基因組為模板，以V RppnK R為引物，擴(kuò)增兩端酶切位點分別為 Xbal I及Sal I的基因片段，PCR產(chǎn)物經(jīng)過純化后與pMD 19_T vector連接，轉(zhuǎn)入E. coli JM 109中保存質(zhì)粒。從含Amp的平板上挑取單菌落，提取質(zhì)粒經(jīng)單、雙酶切驗證，并測序。獲得目的基因序列完全正確的PMD 19-T-/7/7/#質(zhì)粒。對于成功連入T載體的質(zhì)粒，與pJC-tec用Xba I及Sal I雙酶切，經(jīng)核酸電泳分別對目的基因片段和pJC-hc酶切片段進(jìn)行割膠回收，用T4 DNAligase連接后轉(zhuǎn)化入E. coli JM 109中保存質(zhì)粒。從含Kan的平板上挑取單菌落，提取質(zhì)粒經(jīng)單雙酶切驗證，獲得WC-tac-ppnK重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒i^-tac-ppnK的構(gòu)建流程示意圖如圖1所示，其構(gòu)建過程的核酸電泳圖如圖2所示?；蚣s960bp，與圖2中ppnK的PCR產(chǎn)物的長度一致。之后對重組質(zhì)粒進(jìn)行單雙酶切，單酶切條帶位置約7300bp左右，雙酶切有兩條帶，一條與空質(zhì)粒酶切的位置相當(dāng)，一條與PPnK的PCR產(chǎn)物條帶位置相當(dāng)，說明v￥^_tac_ppnK穿梭質(zhì)粒構(gòu)建成功。(2)重組菌株 SYPA/^C-tac-ppnK 的構(gòu)建
從E. co7i JM 109中提取質(zhì)粒通過電擊轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)化入鈍齒棒桿菌感受態(tài)中，電轉(zhuǎn)后加入培養(yǎng)基，于30°C 120rpm/min搖床上振搖2h,使菌體復(fù)蘇,表達(dá)抗性基因。而后將菌液涂布于含50ug/L的Kan平板上，于30°C條件下培養(yǎng)36h，挑取轉(zhuǎn)化子，于含Kan的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，提取質(zhì)粒進(jìn)行PCR驗證或雙酶切驗證。挑選成功轉(zhuǎn)化的菌株進(jìn)行進(jìn)一步發(fā)酵實驗。實施例2 :重組菌株與出發(fā)菌株分別在高低供氧的條件下發(fā)酵，分別考察NAD激酶表達(dá)對其發(fā)酵參數(shù)的影響。采用250mL的搖瓶對鈍齒棒桿菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，設(shè)定兩種不同的供氧模型，即搖瓶裝液量分別為20/250mL及60/250mL。發(fā)酵方法如發(fā)明內(nèi)容中所述，發(fā)酵108h，每隔12h取一次樣，測定所有樣品的菌濃及發(fā)酵上清中L-精氨酸及葡萄糖的含量。具體發(fā)酵過程參數(shù)如圖5。如圖5所示，在高供氧的環(huán)境下，重組菌株的菌體生物量一直低于出發(fā)菌株，這可能與重組菌株本身攜帶者較大的重組質(zhì)粒有關(guān)。至發(fā)酵96h，重組菌的生物量為27g/L較出發(fā)菌株(32g/L)降低約16%。在L-精氨酸積累的過程中，重組菌株在發(fā)酵前期并未表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢，至發(fā)酵72h后，重組菌株才表現(xiàn)出產(chǎn)酸的優(yōu)勢，至發(fā)酵96h，重組菌株L-精氨酸產(chǎn)量為28.85g/L較出發(fā)菌株(25. 35g/L)提高了 12%。在葡萄糖的消耗過程中，出發(fā)菌株的消耗速率高于重組菌株，在發(fā)酵后期，消耗速率的差距縮小，碳源的消耗主要用于菌體的繁殖及L-精氨酸的積累。
如圖6所示，在低供氧的環(huán)境下，重組菌株的菌體生物量一直低于出發(fā)菌株，這與高供氧的情況類似，但其菌體生物量較高供氧的環(huán)境下大幅度下降。至發(fā)酵96h，重組菌的生物量為17g/L較出發(fā)菌株(21g/L)降低約19%。在L-精氨酸積累的過程中，重組菌株在發(fā)酵前期并未表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢，至發(fā)酵36h后，重組菌株表現(xiàn)出產(chǎn)酸的優(yōu)勢，至發(fā)酵96h，重組菌株L-精氨酸產(chǎn)量為10.87g/L較出發(fā)菌株(7.85g/L)提高了 38.5%。在葡萄糖的消耗過程中，在發(fā)酵前期出發(fā)菌株的消耗速率高于重組菌株，在發(fā)酵后期，重組菌株的糖耗速率明顯加快，這可能是由于L-精氨酸積累量的提高有關(guān)。
由以上發(fā)酵實驗可見，在高低供氧的條件下NAD激酶增強(qiáng)表達(dá)對菌株的生長及L-精氨酸的生產(chǎn)存在影響。在一定程度上提高了菌體L-精氨酸的生產(chǎn)能力，所以加強(qiáng)NAD激酶的表達(dá)對于鈍齒棒桿菌生產(chǎn)L-精氨酸具有積極的意義。實施例3高低供氧條件下重組菌與出發(fā)菌發(fā)酵液中其它游離氨基酸分析 高低供氧條件下重組菌與出發(fā)菌的發(fā)酵方法如發(fā)明內(nèi)容中所述，至發(fā)酵72h后，取樣，
離心獲得上清，經(jīng)適當(dāng)稀釋后，采用異硫氰酸苯酯衍生法對發(fā)酵樣品中的氨基酸進(jìn)行衍生化。衍生后的樣品用高效液相色譜進(jìn)行分析，以80%的乙腈及碳酸氫鈉為流動相，采用梯度洗脫的方式，分析圖譜如圖7所示。發(fā)酵液中的雜酸較少，以L-精氨酸含量最高，其次為賴氨酸、異亮氨酸、甘氨酸及苯丙氨酸等。分析結(jié)果如表3所示，其中以精氨酸、異亮氨酸及賴氨酸含量有較大變化。在高低溶氧條件下，重組菌較出發(fā)菌在精氨酸、賴氨酸及異亮氨酸的含量上均有不同程度提高。這可能與三種氨基酸生物合成途徑中多種氧化還原反應(yīng)需要NADPH提供還原動力有關(guān)。所以通過加強(qiáng)NAD激酶的表達(dá)來提高菌株L-精氨酸的生產(chǎn)能力的方法是行之有效的。表3發(fā)酵液中游離氨基酸分析
Concemtiatlm HOSLOS
_SYPA 5-5 SYPA 5-5/NADKSYPA 5-5SYPA 5-5/HADK
Aif 264 *oj ismm113^0,14
BeIJMJO1.SaO.W08P*0I3150*0 02
LfsI 1J2磁05H4*0J22 6mm
權(quán)利要求
1.一種提高鈍齒棒桿菌SYPA在高低供氧條件下生產(chǎn)L-精氨酸生產(chǎn)能力的方法，其特征為，通過加強(qiáng)鈍齒棒桿菌SYPA的NAD激酶表達(dá)，以提高該菌株的L-精氨酸生產(chǎn)能力。
2.依據(jù)權(quán)力要求I中所述的方法，其特征為應(yīng)用穿梭表達(dá)質(zhì)粒pJC-tac攜帶編碼NAD 激酶的基因于鈍齒棒桿菌SYPA中表達(dá)。
3.依據(jù)權(quán)力要求I所述方法，其特征為克隆鈍齒棒桿菌SYPA基因組上的基因，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒WC-tac-ppnK,將該重組穿梭質(zhì)粒通過電擊轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)入鈍齒棒桿菌中，獲得重組鈍齒棒桿菌SWk/dtac-ppnK ；(1)穿梭質(zhì)粒質(zhì)粒的構(gòu)建依據(jù)NCBI中公布的谷氨酸棒桿菌中編碼NAD激酶的的基因序列，利用其同源性，設(shè)計弓I物擴(kuò)增鈍齒棒桿菌中的PPnK基因，引物設(shè)計如下ppnK FXba1:5，-GC7T7M^ATGACTGCACCCACGAACG-3，ppnK R Sail :5’ -GC^^TTACCCCGCTGACCTGG-3’以鈍齒棒桿菌基因組為模板，以V RppnK R為引物，擴(kuò)增兩端酶切位點分別為 Xbal I及Sal I的基因片段，PCR產(chǎn)物經(jīng)過純化后與pMD 19-T vector連接，轉(zhuǎn)入 E. coli JM 109中保存質(zhì)粒；從含Amp的平板上挑取單菌落，提取質(zhì)粒經(jīng)單、雙酶切驗證，并測序；對于成功與目的基因連接的質(zhì)粒，與pJC-1ac用相同限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切，經(jīng)純化后連接，獲得v￥^_tac_ppnK重組質(zhì)粒；(2)重組菌株SWk/\>]C-tac-ppnK的構(gòu)建提取質(zhì)粒通過電擊轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)化入鈍齒棒桿菌中，涂布于含50ug/L 的Kan平板上，于30°C條件下培養(yǎng)36h，挑取轉(zhuǎn)化子，于含Kan的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，提取質(zhì)粒驗證。
4.依據(jù)權(quán)力要求I所述方法，其特征為采用250mL搖瓶對重組鈍齒棒桿菌發(fā)酵培養(yǎng)，構(gòu)建兩種不同的供氧模式，裝液量20ml的為高供氧環(huán)境，裝液量60ml的為低供氧環(huán)境，分別在高供氧和低供氧的發(fā)酵環(huán)境下利用重組鈍齒棒桿菌生產(chǎn)L-精氨酸。
全文摘要
本發(fā)明加強(qiáng)鈍齒棒桿菌NAD激酶的表達(dá)，以提高該菌株的L-精氨酸生產(chǎn)能力。在高供氧的條件下，NAD激酶活性提高了86.2%，NADP+及NADPH分別提高了7.30%及36.84%，L-精氨酸產(chǎn)量提高了12%；在低供氧的條件下，NAD激酶活性提高了34.8%，NADP+及NADPH分別提高了14.67%及15.0%，L-精氨酸產(chǎn)量提高了38.5%。
文檔編號C12P13/10GK102994539SQ20121051199
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月4日
發(fā)明者許正宏, 趙芹芹, 竇文芳, 饒志明, 史勁松, 徐美娟 申請人:江南大學(xué)