專利名稱：一種水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因OsDRxoc6的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物基因工程技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一個(gè)水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因0sDRxoc6的分離克隆和功能驗(yàn)證及應(yīng)用。0sDRxoc6基因位于水稻細(xì)菌性條斑病抗性 QTLqBlsr5a，該基因沒有內(nèi)含子，它是水稻抗病反應(yīng)中的正調(diào)控因子。抑制0sDRXOC6基因表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病的抗性水平顯著降低，而超量表達(dá)該基因的轉(zhuǎn)基因植株抗病能力顯著提高。
背景技術(shù)：
植物在生長(zhǎng)的過程中，受到多種病原物的侵害。植物病原物的種類繁多，包括病毒、細(xì)菌、真菌和線蟲等。病原物侵入植物導(dǎo)致兩種結(jié)果(1)病原體成功的在寄主植物內(nèi)繁殖，引起相關(guān)的病癥；(2)寄主植物產(chǎn)生抗病反應(yīng)，殺死病原物或阻止其生長(zhǎng)。利用抗性基因資源改良植物的抗病性，是預(yù)防病害同時(shí)又保護(hù)環(huán)境的根本出路。
植物的抗病反應(yīng)是多基因參于調(diào)控的復(fù)雜過程。參于植物抗病反應(yīng)的基因分為兩類(I)抗病基因，又稱R (resistance)基因和(2)抗病相關(guān)基因。
根據(jù)目前人們對(duì)抗病基因功能的認(rèn)識(shí)，這類基因的產(chǎn)物主要是作為受體，直接或間接與病原蛋白相互作用，啟動(dòng)植物體內(nèi)的抗病信號(hào)傳導(dǎo)路徑(Tang等，1996 ；Baker等， 1997 ；Jia等，2000 ；Dangl和Jones, 2001 ；Nimchuk等，2001);抗病基因介導(dǎo)的抗病反應(yīng)抗性強(qiáng)，是很好的基因資源。但迄今為止尚未從水稻體內(nèi)克隆到一個(gè)主效抗病基因來抵抗水稻細(xì)菌性條斑病菌(簡(jiǎn)稱水稻條斑病菌)的侵染，使利用抗病基因改良植物抗性受到限制； 目前僅從玉米B73中克隆得到了一個(gè)與水稻條斑病菌無毒基因avrRxol相對(duì)應(yīng)的抗性基因 Rxol (Zhao等，2004)，抗病基因的資源特別有限。此外，由于病原的快速突變，一個(gè)抗病基因的作用往往幾年或者十幾年后就喪失了。
抗病相關(guān)基因是指除抗病基因外所有參于抗病反應(yīng)的基因，它們的編碼產(chǎn)物參于合成植物體內(nèi)抗病信號(hào)分子、參于信號(hào)傳導(dǎo)、阻止信號(hào)傳導(dǎo)或參于防衛(wèi)反應(yīng)等。這類基因在植物體內(nèi)表達(dá)量的升高或減少與植物的抗病性相關(guān)聯(lián)。目前，人們對(duì)抗病相關(guān)基因的認(rèn)識(shí)有限。根據(jù)已有報(bào)道，絕大多數(shù)抗病相關(guān)基因單獨(dú)作用時(shí)的抗性能力可能比抗病基因小，尤其是抗性QRL需要多個(gè)微效抗病相關(guān)基因共同作用起到抗病的效果。但根據(jù)下述原因，它們是值得大力開發(fā)的基因資源(1)由于絕大多數(shù)抗病相關(guān)基因的產(chǎn)物不需要直接與病原物相互作用，這類基因是具有持久抗性的基因資源；(2)大多數(shù)抗病相關(guān)基因參與的抗病反應(yīng)沒有病原特異性，因此它們是具有廣譜抗性的基因資源；(3)這類基因的資源豐富。目前鑒定的許多抗性相關(guān)基因如0sWRKY13，0sDR8, GH3-8，0sMPK6等，這些基因在各自的QTL 中均發(fā)揮著重要的作用(Wang等，2010)?，F(xiàn)在，對(duì)于水稻條斑病的抗性研究，科學(xué)家更多的精力集中在水稻條斑病抗性數(shù)量位點(diǎn)(QTL)的發(fā)掘上。比如，水稻5號(hào)染色體短臂上的抗性QTL qBlsr5a的精細(xì)定位有可能在水稻條斑病抗性的遺傳改良上具有較大的應(yīng)用前景 (韓慶典等，2008)。水稻中雖然鑒定了很多抗細(xì)菌性條斑病的相關(guān)數(shù)量位點(diǎn)(QTL)(李小輝， 2005 ;鄧云，2007)，但是，這些基因在水稻抗病反應(yīng)中的作用機(jī)理、以及單個(gè)抗病相關(guān)基因是否會(huì)引起水稻抗病表型的改變都不清楚?？剐訯TL qBlsr5a的精細(xì)定位有可能為抗條斑病帶來很好的契機(jī)，L0C_05g01380和L0C_05g01444基因是此QTL的兩個(gè)重要的候選基因， 預(yù)測(cè)對(duì)QTL qBlsr5a的抗病貢獻(xiàn)更大(韓慶典等，2008)，但其功能作用有待進(jìn)一步考證。
水稻是世界上重要的糧食作物，但病害的影響常常造成其產(chǎn)量和品質(zhì)的下降。因此，了解病害的發(fā)病機(jī)制，有助于利用高效途徑改良水稻品種的抗性，控制病害的發(fā)生，減少或避免植物病害所帶來的損失。
分離克隆抗病相關(guān)基因是對(duì)水稻抗病機(jī)理研究的前提。同時(shí)，與抗病基因的應(yīng)用相比，抗病相關(guān)基因的應(yīng)用能提供植物更為廣譜及長(zhǎng)效的抗性。通過超量表達(dá)作為抗病反應(yīng)正調(diào)控因子的抗病相關(guān)基因的功能進(jìn)行水稻品種的改良，將進(jìn)一步增強(qiáng)植物的抗病性， 拓寬植物的抗譜。這些方面是采用常規(guī)植物育種和改良技術(shù)所不能達(dá)到的。因此如何獲得一種切實(shí)可靠的水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因成為亟待解決的問題之一。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的情況，提供了一個(gè)水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因編碼序列，編碼核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示，其所編碼的氨基酸序列如SEQ ID No. 3所示,該編碼序列所在的基因0sDRxoc6,其核苷酸序列如SEQ ID No. I所示，以及該基因的分離克隆方法和功能驗(yàn)證及應(yīng)用，該OsDRxoce基因位于水稻細(xì)菌性條斑病抗性 QTL qBlsr5a，該基因沒有內(nèi)含子，它是水稻抗病反應(yīng)中的正調(diào)控因子。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)抑制 0sDRxoc6基因表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病的抗性水平顯著降低，而超量表達(dá)該基因的轉(zhuǎn)基因植株抗病能力顯著提高。
發(fā)明人首先提供了一個(gè)從水稻中分離獲得的水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因 0sDRxoc6,其核苷酸序列如SEQ ID No. I所示。更進(jìn)一步的,發(fā)明人發(fā)現(xiàn)其中的DNA編碼序列SEQ ID NO. 2所示，該基因的編碼序列由930個(gè)核苷酸組成，沒有內(nèi)含子。對(duì)上述序列進(jìn)行分析表明它是一個(gè)編碼多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的水稻基因，其所編碼的氨基酸序列如序列表SEQ IDN0. 3所示，共編碼309個(gè)氨基酸。
發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，除了上述的相關(guān)基因0sDRXOC6，其核苷酸序列如SEQ ID No. I所示之外，其核苷酸序列基本上相當(dāng)于SEQ ID NO. I所示的核苷酸序列，或者其功能相當(dāng)于SEQ ID NO. I所示序列的亞片段也具有與之類似的功能,如超量表達(dá)序列表SEQ ID NO. I所示序列可以增強(qiáng)水稻對(duì)條斑病的抗性。
同理，在SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列中添加、取代，插入或缺失一個(gè)或多個(gè)核苷酸而生成的突變體、等位基因或衍生物的核苷酸序列；或在SEQ ID No. 3所示的氨基酸序列中添加、取代，插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸或其他的同源序列而生成的具有相同功能的氨基酸序列或衍生物，也具有與上述相同的功能。
更進(jìn)一步的一種蛋白質(zhì)或其功能類似物，其氨基酸序列與SEQ ID No. 3所示，或在 SEQ IDNo. 3所示的氨基酸序列中添加、取代，插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸或其他的同源序列而生成的具有相同功能的氨基酸序列或衍生物，也是具有上述的功能的。
同時(shí)本發(fā)明的發(fā)明人提供了上述基因的分離方法，同時(shí)還可以采用已經(jīng)克隆的本發(fā)明所提供的OsDRxoce基因作探針，從cDNA和基因組文庫(kù)中篩選到本發(fā)明的基因或同源基因。同樣，米用PCR (polymerase chain reaction)技術(shù)，也可以從基因組、mRNA和cDNA中擴(kuò)增得到本發(fā)明的OsDRxoce基因以及任何感興趣的一段DNA或與其同源的一段DNA。采用以上技術(shù)，可以分離得到包含OsDRxoce基因的序列或者包含一段OsDRxoce基因的序列， 將這一序列與合適的載體連接，可以轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞超量表達(dá)其自身的0sDRXOC6基因，產(chǎn)生抗病轉(zhuǎn)基因植物。采用這種轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)造抗病植物是傳統(tǒng)育種技術(shù)所不能達(dá)到的。
綜上所述，本發(fā)明的發(fā)明人在國(guó)際上首次提供了一個(gè)水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因0sDRXOC6，以及該基因的分離克隆方法和功能驗(yàn)證及應(yīng)用。該0sDRXOC6基因沒有內(nèi)含子，它是水稻抗病反應(yīng)中的正調(diào)控因子，該基因的DNA編碼序列SEQ ID NO. 2包含在如序列表SEQ IDN0. I所示的片段中或者基本上相當(dāng)于SEQ ID NO. I所示的DNA序列，或者其功能相當(dāng)于SEQ IDN0. I所示序列的亞片段。發(fā)明人還通過利用超表達(dá)和RNA干擾技術(shù)RNA interference, RNAi)使目標(biāo)基因在植物體內(nèi)過量表達(dá)和沉默，來鑒定該基因在抗病反應(yīng)過程中所起作用，最終發(fā)現(xiàn)抑制表達(dá)0sDRXOC6基因的轉(zhuǎn)基因植株對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病的抗性水平明顯降低，而超量表達(dá)該基因的轉(zhuǎn)基因植株抗病能力顯著提高。


圖I.本發(fā)明分離水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因0sDRxoc6以及驗(yàn)證0sDRxoc6基因功能的流程圖2. 0sDRxoc6基因在感病品種ZHll和抗病品種Acc8558中的本底表達(dá)水平差異示意圖；圖中可見Acc8558中基因的表達(dá)量明顯高于ZHll體內(nèi)的表達(dá)量；
圖3. 0sDRxoc6基因在抗病品種Acc8558中接種條斑病菌RS105后的表達(dá)模式分析不意圖；圖中可見接菌8h后基因的表達(dá)量最聞；
圖4. 0sDRxoc6基因在感病品種ZHll中接種RS105后的表達(dá)模式分析示意圖；圖中可見接種8h時(shí)基因表達(dá)量最高，24h和48h時(shí)也表現(xiàn)出很高的誘導(dǎo)表達(dá)水平；
圖5. 0sDRxoc6基因抑制片段在中花11基因組DNA中的PCR分離擴(kuò)增示意圖；其中獲得目的基因抑制表達(dá)條帶大小570bp，M為Marker 2000 ；
圖6. 0sDRxoc6基因完整片段在Acc8558基因組DNA中的PCR分離擴(kuò)增示意圖；其中超量表達(dá)條帶大小1151bp, M為Marker 2000 ；
圖7. 0sDRxoc6基因抑制載體的構(gòu)建，改造后攜帶表達(dá)0sDRxoc6雙鏈RNA片段 (570bp)的 pCAMIA1301 載體，即表達(dá)載體 DS1301: :0sDRxoc6。RB 和 LB 代表 pCAMIA1301 載體(Sun等，2004)上的T-DNA右和左邊界；⑶S代表pCAMIA1301載體上的β —葡萄糖苷酸酶基因(標(biāo)記基因)；Hpt代表潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(篩選基因)；35S代表pMCG161載體構(gòu)件上的花椰菜花葉病毒啟動(dòng)子；AdhI代表pMCG161載體構(gòu)件上的玉米乙醇脫氫酶基因內(nèi)含子I ;0CS代表pMCG161載體構(gòu)件上的章魚堿合成酸基因終止子；Waxy-a代表pMCG161載體構(gòu)件上的水稻W(wǎng)axy基因內(nèi)含子。
圖8. 0sDRxoc6基因超量表達(dá)載體的構(gòu)建，攜帶完整0sDRxoc6基因的表達(dá)載體 PU1301,即重組表達(dá)載體pU1301: :0sDRxoc6。RB和LB代表PU1301載體上的T-DNA右和左邊界；OTS代表PU1301載體上的β —葡萄糖苷酸酶基因(標(biāo)記基因)；Hpt代表潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(篩選基因)；Ubiquitin promoter代表玉米泛素超量表達(dá)啟動(dòng)子；Terminator 代表PU1301載體上轉(zhuǎn)錄的終止端。
圖9. 0sDRxoc6基因表達(dá)載體的雙酶切檢測(cè)，抑制表達(dá)載體DS1301: : 0sDRxoc6第一鏈構(gòu)建的雙酶切檢測(cè)，用KpnI和BamHI雙酶切得到目的基因片段，M為Marker 2000 ；
圖10. 0sDRxoc6基因表達(dá)載體的雙酶切檢測(cè)，抑制表達(dá)載體DS1301: :0sDRxoc6用 SpeI和SacI雙酶切檢測(cè)的第二鏈構(gòu)建，M為Marker 2000 ；
圖11. 0sDRxoc6基因表達(dá)載體的雙酶切檢測(cè)，超量表達(dá)載體PU1301: :0sDRxoc6 構(gòu)建的雙酶切檢測(cè)，用KpnI和BamHI雙酶切得到完整的超量目的基因片段，M為Marker 2000 ；
圖12. 0sDRxoc6基因表達(dá)載體的Acc8558和中花11水稻品種的遺傳轉(zhuǎn)化植株結(jié)果示意灰度圖中(A)Acc8558水稻材料的誘導(dǎo)愈傷和導(dǎo)入抑制表達(dá)載體DS1301: : 0sDRxoc6 的Acc8558轉(zhuǎn)基因苗，即⑶45R ； (B)中花11水稻品種的愈傷組織和導(dǎo)入抑制表達(dá)載體 DS1301: :0sDRxoc6的中花11轉(zhuǎn)基因苗，即CD44R ； (C)中花11水稻品種的愈傷組織和轉(zhuǎn)入超量表達(dá)載體TO1301: :0sDRxoc6的中花11轉(zhuǎn)基因苗，即CD43R。
圖13.為含抑制表達(dá)載體DS1301: :0sDRxoc6的Acc8558遺傳轉(zhuǎn)化植株(CD45R)部分陽(yáng)性植株的PCR檢測(cè)示意圖14.為含抑制表達(dá)載體DS1301: :0sDRxoc6的中花11遺傳轉(zhuǎn)化植株(CD44R)部分陽(yáng)性植株的PCR檢測(cè)示意圖15.為含超量表達(dá)載體pU1301: :0sDRxoc6的中花11遺傳轉(zhuǎn)化植株(CD43R)部分陽(yáng)性植株的PCR檢測(cè)示意圖16.為pU1301: :0sDRxoc6的中花11轉(zhuǎn)化植株(CD43R)陽(yáng)性植株的GUS染色檢測(cè)結(jié)果示意灰度圖17-22.陽(yáng)性TO代遺傳轉(zhuǎn)化植株和野生型植株接菌后病斑檢測(cè)以及用 Real-timeRT-PCR技術(shù)檢測(cè)0sDRxoc6基因在對(duì)照材料和TO代遺傳轉(zhuǎn)化陽(yáng)性植株中的表達(dá)量的結(jié)果示意圖；Acc8558和中花11陽(yáng)性TO代遺傳轉(zhuǎn)化植株(CD43R、CD44R和CD45R)接種水稻細(xì)菌性條斑病菌RS105，兩周后形成的病斑與野生型植株(對(duì)照)相比，具有顯著差異；
圖17中Acc8558 TO代陽(yáng)性遺傳轉(zhuǎn)化植株CD45R的病斑明顯長(zhǎng)于野生Acc8558，即抗病水平降低；
圖18中0sDRxoc6基因在⑶45R陽(yáng)性植株中表達(dá)量明顯受到抑制；
圖19和圖21中中花11陽(yáng)性TO代遺傳轉(zhuǎn)化植株⑶43R的株系⑶43R-18的病斑長(zhǎng)度顯著短于野生型水稻材料中花11，即抗性增強(qiáng)；而CD44R陽(yáng)性株系的病斑明顯長(zhǎng)于野生型中花11，表現(xiàn)對(duì)病原菌更加敏感；
圖20和圖22中0sDRxoc6基因在⑶44R和⑶43R典型陽(yáng)性植株中表達(dá)量分別顯著降低和提高。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例中進(jìn)一步定義本發(fā)明，根據(jù)以上的描述和這些實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定本發(fā)明的基本特征，并且在不偏離本發(fā)明精神和范圍的情況下，可以對(duì)本發(fā)明作出各種改變和修改，以使其適用各種用途和條件。除特殊注明外，本發(fā)明所采用的均為本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)；
實(shí)施例I 0sDRxoc6基因結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與分析
以0sDRxoc6基因的DNA編碼序列SEQ ID No. 2作模板，用BLAST方法檢索核苷酸數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)SEQ ID No. 2序列定位在水稻品種日本晴5號(hào)染色體的短臂上，與Genebank 預(yù)測(cè)的L0C_05g01380基因在同一個(gè)位點(diǎn)，位于水稻細(xì)菌性條斑病抗性QTL qBlsr5a中。根據(jù)編碼序列SEQ ID No. 2，可獲得SEQ ID No. 3的氨基酸序列，由309個(gè)氨基酸組成。
實(shí)施例2 0sDRxoc6基因在不同水稻品種中的表達(dá)模式分析
I. 0sDRxoc6基因在抗病品種Acc8558和感病品種中花11中的本底表達(dá)
為檢測(cè)0sDRxoc6基因在抗感病品種中本底表達(dá)水平是否有差異，驗(yàn)證其是否與抗病有關(guān)，本發(fā)明采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)分析了 0sDRXOc6基因在水稻抗病品種 Acc8558和感病品種ZHll中的本底表達(dá)差異。取水稻植株葉片抽提總RNA，1-5 μ g總RNA 用DNaseI (Invitrogen,美國(guó))處理30分鐘以去除基因組DNA污染，然后參照Z(yǔ)hou (Zhou 等,2002)的方法,使用oligo (dT) 15寡聚引物和SuperScriptII反轉(zhuǎn)錄酶(Invitrogen)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。采用定量PCR分析試劑盒SYBR 'OtK n PCR Master Mix (大連Takara公司),在 ABI7500Real-Time PCR system (Applied Biosystems,美國(guó))上進(jìn)行定量 RT-PCR 反應(yīng)，水稻內(nèi)源肌動(dòng)蛋白基因Actin的表達(dá)量用于RNA樣品的均一化評(píng)價(jià)，利用2_ΛΛετ相對(duì)定量的方法比較分析基因表達(dá)量(Qiu等，2007)。定量RT-PCR技術(shù)中的0sDRxoc6基因特異PCR引物 0sDRxoc6-863F/0sDRxoc6-954R 和肌動(dòng)蛋白基因 PCR 引物 OsActinFl/OsActinRl 序列詳見表I。結(jié)果顯示，在抗病品種Acc8558中，0sDRxoc6基因的本底表達(dá)量要比感病品種ZHl I 的表達(dá)量高出11倍以上(如圖2)，說明0sDRXOC6有可能與細(xì)菌性條斑病抗性相關(guān)。
2. 0sDRxoc6基因在不同水稻品種接菌后的表達(dá)模式分析
為了進(jìn)一步證實(shí)0sDRXOC6基因參與抗病反應(yīng)的調(diào)控，我們采用上述定量RT-PCR 技術(shù)分析了 0sDRXOC6基因在不同水稻品種中接種水稻條斑病菌RS105后的表達(dá)模式。細(xì)菌性條病菌采用注射的方法進(jìn)行接種。接種后分不同時(shí)間點(diǎn)0h、8h、24h和48h取接種葉片抽提總RNA，按上述方法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和定量分析。分析結(jié)果顯示，在接種RS105后8h，0sDRxoc6 基因在Acc8558和ZHll中的表達(dá)量達(dá)到最高；尤其在感病材料ZHll中，接菌8h時(shí)的表達(dá)量最高，24h和48h時(shí)相較Oh的表達(dá)量，仍然有較高的表達(dá)水平(圖3和圖4)。這些結(jié)果證實(shí)0sDRXOC6基因可能作為抗病反應(yīng)的正調(diào)控基因參與水稻對(duì)條斑病的抗性調(diào)控。
實(shí)施例3 0sDRXOC6基因的分離和植物表達(dá)載體的構(gòu)建
I. 0sDRxoc6 基因的分離
以感病水稻品種中花11的基因組DNA為模板，通過PCR技術(shù)，利用引物 0sDRxoc6Fl/0sDRxoc6Rl擴(kuò)增獲得0sDRxoc6基因的部分抑制表達(dá)DNA片段，其序列如序列表SEQ ID NO. 4所示(SEQ ID NO. 2序列第11至580bp處)，1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其大小570bp (圖5);以抗病水稻品種Acc8558的基因組DNA為模板，0sDRxoc6F2/0sDRxoc6R2 組合引物擴(kuò)增完整的超量表達(dá)片段，1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)得到大小1151bp目的條帶 (圖6)，其序列如序列表SEQ ID NO. I所示。引物序列見表I
表I.相關(guān)引物序列
權(quán)利要求
1.一種水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因，其特征在于 其編碼核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示，或如下所示的核苷酸序列 在SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列中添加、取代，插入或缺失一個(gè)或多個(gè)核苷酸而生成的突變體、等位基因或衍生物的核苷酸序列； 其所編碼的氨基酸序列如SEQ ID No. 3所示，或如下所示的氨基酸序列 在SEQ ID No. 3所示的氨基酸序列中添加、取代，插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸或其他的同源序列而生成的具有相同功能的氨基酸序列或衍生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因，其特征在于該基因?yàn)镺sDRxoc6，其核苷酸序列如SEQ ID No. I所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因，其特征在于該基因的其核苷酸序列基本上相當(dāng)于SEQ ID NO. I所示的核苷酸序列，或者其功能相當(dāng)于SEQ ID NO. I所示序列的亞片段。
4.一種蛋白質(zhì)或其功能類似物，其氨基酸序列與SEQ ID No. 3所示，或在SEQ ID No. 3所示的氨基酸序列中添加、取代，插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸或其他的同源序列而生成的具有相同功能的氨基酸序列或衍生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，提供了一個(gè)水稻抗細(xì)菌性條斑病相關(guān)基因編碼序列，編碼核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，其所編碼的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，該編碼序列所在的基因OsDRxoc6，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，以及該基因的分離克隆方法和功能驗(yàn)證及應(yīng)用，該OsDRxoc6基因位于水稻細(xì)菌性條斑病抗性QTL qBlsr5a，該基因沒有內(nèi)含子，它是水稻抗病反應(yīng)中的正調(diào)控因子。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)抑制OsDRxoc6基因表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病的抗性水平顯著降低，而超量表達(dá)該基因的轉(zhuǎn)基因植株抗病能力顯著提高。
文檔編號(hào)C12N15/29GK102978215SQ20121051922
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月6日
發(fā)明者丁新華, 儲(chǔ)昭輝, 常清樂 申請(qǐng)人:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)