專利名稱：小鼠抗人β-Catenin單克隆抗體及分泌該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以原核表達(dá)的β-Catenin蛋白免疫小鼠獲得的分泌β-Catenin單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株13C6，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
Catenin即連接素,是連接粘附蛋白和肌動(dòng)蛋白的一種細(xì)胞骨架蛋白，也是一組與隹丐粘蛋白(cadherin)在細(xì)胞膜內(nèi)起作用的粘附蛋白，分為α、β、γ三種亞型,在細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和形態(tài)形成等方面起重要的作用。β-Catenin是由定位于人染色體3q21.3，全長(zhǎng)23.2kb的原癌基因編碼的一種可溶性蛋白，相對(duì)分子量約為92kDa，在個(gè)體進(jìn)化上具有高度保守性。β -Catenin最早作為一種黏附因子被發(fā)現(xiàn),后來(lái)人們發(fā)現(xiàn)β -Catenin還是一種多功能的蛋白質(zhì)。β-Catenin主要位于細(xì)胞膜，而在胞漿中游離量較少，廣泛存在于各種類型的細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞中；在參與這些細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等方面發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用。β -Catenin的功能主要為介導(dǎo)細(xì)胞間黏附和參與基因的表達(dá)，作為上皮鈣黏素-鏈接素系統(tǒng)(E-cad/Cat)和Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵分子，具有雙重功能:其一是連接E-鈣粘蛋白(E-cadherin)形成上皮鈣黏素-鏈接素系統(tǒng)(E-cad/Cat)，調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附系統(tǒng)，影響細(xì)胞的粘附性、運(yùn)動(dòng)性，進(jìn)而影響組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)的發(fā)生；其二是作為關(guān)鍵成員參與Wnt信號(hào)路徑的傳導(dǎo)。結(jié)合型的β-Catenin與細(xì)胞膜上的E-cad胞質(zhì)區(qū)結(jié)合,介導(dǎo)同型細(xì)胞間的黏附；游離型 的β-Catenin與Wnt蛋白、GSK-3 β、APC、Axin等共同構(gòu)成Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞 的增殖。Wnt/β -Catenin是生物進(jìn)化中一條極為保守的信號(hào)通路，對(duì)胚胎的正常發(fā)育起重要調(diào)控作用，fct信號(hào)通路異常激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。β -Catenin作為關(guān)鍵成員參與fct信信號(hào)通路的傳導(dǎo)，是此路徑的關(guān)鍵調(diào)控位點(diǎn)，與多種腫瘤密切相關(guān)，包括黑色素瘤、乳腺癌、直腸癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌和肝癌等。以結(jié)直腸癌為例。在正常上皮細(xì)胞中，β-Catenin的水平極低，主要分布與細(xì)胞與細(xì)胞接觸間的細(xì)胞膜上，APC基因及β-Catenin基因的突變會(huì)使β-Catenin蛋白的濃度升高，并異位聚與細(xì)胞漿和細(xì)胞核上。有研究結(jié)果表明，在正常粘膜及癌旁粘膜中，β -Catenin陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞膜；但在腺癌中，其陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞漿，而細(xì)胞膜陽(yáng)性卻明顯下降。β -Catenin在胞漿的陽(yáng)性表達(dá)率與分化程度有關(guān)，分化程度越高，其陽(yáng)性表達(dá)率也越高，而且β-Catenin的表達(dá)程度與浸潤(rùn)深度有關(guān)，越靠近漿膜層，其陽(yáng)性表達(dá)程度越高。因此，檢測(cè)β-Catenin在細(xì)胞中的定位，可為患者的預(yù)后估計(jì)提供參考。目前，國(guó)內(nèi)外已經(jīng)獲得了多種β-Catenin的單克隆抗體，但一直以來(lái)都需要表達(dá)量更多，親和性更好，稀釋度更高，具有更多優(yōu)良特性的單克隆抗體。獲得活性高的β -Catenin的單克隆抗體對(duì)于臨床診斷和科學(xué)研究具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高親和性的、用于科研或臨床、可用于科研或臨床免疫組化檢測(cè)β-Catenin表達(dá)的小鼠抗人β-Catenin單克隆抗體及分泌該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案:(I)根據(jù)β -Catenin的基因序列(ΝΜ_001098209.1)的編碼框，設(shè)計(jì)I對(duì)特異引物，Trizol Reagent試劑提取人脂肪組織總RNA，將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA并以cDNA為模板PCR擴(kuò)增β-Catenin基因，構(gòu)建重組表達(dá)載體PET28a-0-Catenin，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)，IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)并親和純化蛋白作為抗原。(2)采用經(jīng)典的細(xì)胞融合技術(shù)制備β -Catenin單克隆抗體。親和層析純化抗體蛋白，SDS-PAGE測(cè)定抗體純度，直接ELISA法測(cè)定純化抗體的滴度。(3)通過(guò)免疫組織化學(xué)分析β -Catenin單克隆抗體染色人乳腺癌和人結(jié)腸腺癌石蠟切片。(4)根據(jù)抗體基因的恒定區(qū)序列合成特異性引物，PCR擴(kuò)增單克隆抗體β -Catenin重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，回收目的片段，克隆到pGEM_T載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌TGl細(xì)胞后篩選陽(yáng)性克隆，抽提質(zhì)粒后測(cè)序確定了單克隆抗體β -Catenin的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列。本發(fā)明提供的以 原核表達(dá)的β-Catenin蛋白為抗原、免疫小鼠獲得的分泌β-Catenin單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，名稱為13C6，分類命名為小鼠抗β-Catenin雜交瘤細(xì)胞系，該細(xì)胞株13C6已于2012年11月15日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏編號(hào)為CGMCC N0.6854。本發(fā)明還提供了所述雜交瘤細(xì)胞株13C6，CGMCC N0.6854產(chǎn)生的單克隆抗體。該抗體包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID NO:9，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID NO =IO0本發(fā)明還提供了一種DNA分子SEQ ID NO:7和DNA分子SEQ ID NO:8，DNA分子SEQ ID NO:7編碼重鏈可變區(qū)氨基酸序列SEQ ID NO:9 ;DNA分子SEQ ID NO:8編碼輕鏈可變區(qū)氨基酸序列SEQ ID NO: 10。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果:本發(fā)明應(yīng)用重組人的β-Catenin蛋白為免疫抗原，免疫Balb/c小鼠，采用經(jīng)典的細(xì)胞融合技術(shù)，通過(guò)ELISA篩選，獲得一株能穩(wěn)定分泌抗β -Catenin的雜交瘤細(xì)胞株，命名為13C6，亞型鑒定為IgGl，將雜交瘤細(xì)胞株擴(kuò)大培養(yǎng)后收集上清，采用Protein A親和層析法對(duì)β -Catenin單抗進(jìn)行純化。SDS-PAGE結(jié)果顯示，純化后抗體純度在95%以上；ELISA滴度測(cè)定結(jié)果顯示，單抗的滴度均在1: 10000以上。人乳腺癌和人結(jié)腸腺癌石蠟切片經(jīng)抗β -Catenin抗體免疫組化染色，可于光鏡下觀察到細(xì)胞膜或胞漿中出現(xiàn)均勻著色的黃到棕黃色顆粒，背景清晰，無(wú)非特異性著色。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果上來(lái)看，本發(fā)明制備了高效價(jià)，高特異性的β-Catenin單克隆抗體,用該抗體檢測(cè)證實(shí),其對(duì)細(xì)胞中的β-Catenin蛋白具有高識(shí)別能力，可用于科研或臨床免疫組化檢測(cè)β -Catenin表達(dá)。


圖1SDS-PAGE分析純化后的β -Catenin單克隆抗體。圖2ELISA法測(cè)定β -Catenin單克隆抗體滴度。圖3是免疫組織化學(xué)檢測(cè)分析β -Catenin單克隆抗體染色人乳腺癌石蠟切片。圖4是免疫組織化學(xué)檢測(cè)分析β -Catenin單克隆抗體染色人結(jié)腸腺癌石蠟切片。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所用方法如無(wú)特別說(shuō)明均為常施方法。實(shí)施例1:雜交瘤細(xì)胞株13C6及其產(chǎn)生的單克隆抗體的獲得1、抗原制備(I)獲得目的基因在該實(shí)施例中，根據(jù)β -Catenin的基因序列(ΝΜ_001098209.1)的編碼框，設(shè)計(jì)I對(duì)特異引物:引物1:5' -CGGATCCATGGCTACTCAA GCTGATTTG-3' (SEQIDN0:1)引物2:5' -GGCTCGAGAAT`C AGGTCAGTAT GA-3' ； (SEQ ID NO:2)Trizol Reagent試劑提取人脂肪組織總RNA，將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA并以cDNA為模板PCR擴(kuò)增β -Catenin基因。(2)構(gòu)建重組表達(dá)載體將步驟(I)獲得的PCR產(chǎn)物雙酶切后回收，在T4DNA連接酶作用下連接入表達(dá)載體 PET28a，構(gòu)建重組質(zhì)粒 PET28a- β -Catenin。(3)獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種將步驟(2)獲得的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)，用含有硫酸卡那霉素的固體培養(yǎng)基篩選，挑取單斑，堿裂解法小量抽提質(zhì)粒，雙酶切初步鑒定。測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確，進(jìn)入下步操作。以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。(4)誘導(dǎo)表達(dá)和蛋白純化將步驟(2)提取的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)，用含有硫酸卡那霉素的固體培養(yǎng)基篩選，挑選單克隆至IOml含有硫酸卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，37 °C，220rpm培養(yǎng)10h，取5ml液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至250ml的大瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)至OD值為0.8，加入
0.2mMIPTG誘導(dǎo)表達(dá)，16°C誘導(dǎo)過(guò)夜，收集菌液超聲，取上清用N1-NTA瓊脂糖親和層析法純化 β -Catenin 蛋白。2、單抗的制備和純化(I)、免疫動(dòng)物—般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行三次免疫注射。首次免疫。純化的重組蛋白i3_Catenin(用適量生理鹽水稀釋)+完全弗氏佐劑，IOOug/只，頸背部皮下多點(diǎn)注射；二次免疫(間隔兩周)。純化的重組蛋白β -Catenin (用適量生理鹽水稀釋)+不完全弗氏佐劑，IOOug/只，頸背部皮下多點(diǎn)注射；
三次免疫(間隔兩周)。純化的重組蛋白β-Catenin(用適量生理鹽水稀釋)，不完全弗氏佐劑，IOOug/只，頸背部皮下多點(diǎn)注射；三次免疫后7 10天采血，用建立的ELISA法檢測(cè)效價(jià)，選擇效價(jià)最高者用于細(xì)胞融合。加強(qiáng)免疫(融合前3天)，用純化的重組蛋白50ug腹腔注射。3天后，取脾臟融
合ο(2)、細(xì)胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠，無(wú)菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合(I: 5 I: 10)，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞。采用HAT選擇性培養(yǎng)基，進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)和篩選。

用ELISA方法檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清:以純化的β -Catenin蛋白(10 μ g/ml)包被酶標(biāo)板，每孔100 μ l，4°c包板過(guò)夜。甩掉包被液，加入200 μ I 5%的脫脂奶粉，37°C封閉Ih后，洗滌3次，加雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)上清100 μ I (陰性對(duì)照為PBS100 μ I)，37°C孵育I小時(shí)。洗滌3遍后，加酶標(biāo)記二抗(羊抗鼠IgG-HRP)，37°C孵育I小時(shí)，去掉酶標(biāo)二抗，洗滌3遍，加底物顯色劑50 μ I，室溫靜置5分鐘，加終止液50 μ I。用酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm波長(zhǎng)處的OD值。OD值明顯高于陰性對(duì)照2倍以上者定為陽(yáng)性。最后篩選得到一株分泌性能最佳的抗β-Catenin雜交瘤細(xì)胞株，命名為13C6，亞型鑒定為IgGl。將選出的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株13C6克隆化培養(yǎng)(有限稀釋法)，獲得能產(chǎn)生高效價(jià)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞克隆。將雜交瘤細(xì)胞株擴(kuò)大培養(yǎng)，并凍存保種。所述的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞為抗人β-Catenin雜交瘤細(xì)胞系13C6，該細(xì)胞系已保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC N0.6854。(3)單克隆抗體的大量制備與純化將步驟⑵獲得的細(xì)胞株13C6接種至Balb/c小鼠腹腔，制備腹水，然后從腹水中提取抗體。單克隆抗體β-Catenin的純化:采用Protein A親和層析法。首先制備proteinA親和柱，用PBS平衡柱子后，取抗β -Catenin的腹水過(guò)柱，然后用PBS洗至OD值接近于零，以50mmol/LPH2.5的甘氨酸-HCl溶液(PH)洗脫，收集峰值區(qū)的洗脫液，經(jīng)透析濃縮后備用。SDS-PAGE結(jié)果顯示，純化后抗體純度在95%以上(參見(jiàn)圖1)。 (4)直接ELISA法測(cè)定純化抗體的滴度以純化的β-Catenin蛋白(10 μ g/ml)包被酶標(biāo)板，每孔100 μ 1,4 °C包板過(guò)夜。甩掉包被液，加入200 μ I 5%的脫脂奶粉，37°C封閉Ih后，洗滌3次，將純化的抗體按I: 200，I: 400，I: 800，I: 1600，I: 3200，I: 6400，I: 12800 進(jìn)行稀釋，以每孔100 μ I加入酶標(biāo)板中(陰性對(duì)照為PBS100 μ I)，37°C孵育I小時(shí)。洗滌3遍后，加酶標(biāo)記二抗(羊抗鼠IgG-HRP)，37°C孵育I小時(shí)，去掉酶標(biāo)二抗，洗滌3遍，加底物顯色劑50 μ 1，室溫靜置5分鐘，加終止液50 μ I。用酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm波長(zhǎng)處的OD值。ELISA滴度測(cè)定結(jié)果顯示，單抗的滴度均在1: 10000以上(參見(jiàn)圖2)。實(shí)施例2:單克隆抗體免疫組化應(yīng)用檢測(cè)用β-Catenin單抗，按常規(guī)法作病理切片，對(duì)人乳腺癌、結(jié)腸腺癌石蠟切片進(jìn)行免疫組化染色。具體方法為:(I)脫蠟切片依次置于二甲苯1、I1、III脫蠟每次5分鐘，移至無(wú)水乙醇1、II中各浸泡4分鐘，移至95%酒精中浸泡4分鐘，移至85%酒精中浸泡4分鐘，再移至70%酒精中浸泡4分鐘，流水沖洗2分鐘。(2)抗原修復(fù)將已沖洗干凈組織切片放入高壓鍋內(nèi)，加入約3000ml左右的檸檬酸鹽抗原修復(fù)液(pH6.0)，高火加熱煮沸后調(diào)至低火保持沸騰噴氣3分鐘，關(guān)掉電磁爐開(kāi)關(guān)，兩分鐘后將高壓鍋移至冷水中冷卻，待高壓鍋內(nèi)抗原修復(fù)液完全冷卻后，打開(kāi)高壓鍋將組織切片用流水沖洗干凈移至蒸餾水中浸泡2分鐘。(3)阻斷 3 % H2O2中浸泡10分鐘，流水沖洗蒸餾水沖洗。取出切片，擦干組織周圍的水，用免疫組化筆在組織塊周圍畫(huà)一圓圈注意圈接頭要接好，防止抗體跑出圈外造成假陰性。PBS緩沖液沖洗。(4)滴加一抗甩去待測(cè)組織切片上多余的PBS，滴加一抗，其中一抗為實(shí)施例1步驟(3)制備并純化的⑶20單克隆抗體，稀釋度為1: 1000。放置在孵育盒內(nèi)4°C冰箱中過(guò)夜孵育約12小時(shí)。(5)滴加二抗將孵育盒從冰箱取出，恢復(fù)至室溫后取出切片，用PBS洗3次，每次5分鐘。滴加通用型二抗-HRP聚合物。將切片放入孵育濕盒中，蓋上蓋子，連孵育盒一起放入37°C恒溫箱中孵育30分鐘。(6)顯色、襯染、封片取出切片，擦掉組織周圍的多余的PBS，加入DAB顯色液中顯色3_5分鐘，在顯微鏡下控制染色的強(qiáng)度。待強(qiáng)度適中后將切片置自來(lái)水中終止顯色，再用流水沖洗5-10分鐘，蘇木素染液復(fù)染I分鐘，0.5%鹽酸酒精分化3秒鐘，流水沖洗5-10分鐘，脫水、透明、封片、鏡檢。結(jié)果判定:按照國(guó)外學(xué)者對(duì)組織中β -Catenin的判定標(biāo)準(zhǔn)，β -Catenin蛋白陽(yáng)性反應(yīng)為黃到棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞膜和胞漿。人乳腺癌(參見(jiàn)圖4)、人結(jié)腸腺癌石蠟切片經(jīng)抗β -Catenin抗體免疫組化染色，可于光鏡下觀察到細(xì)胞膜或胞漿中出現(xiàn)均勻著色的黃到棕黃色顆粒，背景清晰， 無(wú)非特異性著色。說(shuō)明此β-Catenin小鼠單克隆抗體可以特異性的應(yīng)用于免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例3:單克隆抗體可變區(qū)測(cè)序根據(jù)抗體基因的恒定區(qū)序列合成以下引物:zh07 5' -GGGGATATCCACCATGGRATGSAGCTGKGTMATSCTCTT-3/ (SEQ IDNO:3)zhrll 5' -GACHGATGGGGSTGTYGTGCTAGCTGNRGAGACDGTGA-3' (SEQID NO:4)zlOl 5' -GGGGATATCCACCATGGAGACAGACACACTCCTGCTAT-3' (SEQ IDNO:5)zlr05 5' -GGATACAGTTGGTGCAGTCGACTTACGTTTKATTTCCARCTT-3' (SEQID NO:6)Trizol Reagent試劑分別提取5 X IO6雜交瘤細(xì)胞13C6的總RNA，將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。用zh08和zhrll為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增單克隆抗體β -Catenin重鏈可變區(qū),用zlOl和zlr05為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增單克隆抗體β-Catenin輕鏈可變區(qū)，PCR反應(yīng)均采用熱啟動(dòng)，反應(yīng)條件:94°C 5分鐘；94°C 45秒，60°C 45秒，72°C I分10秒，30個(gè)循環(huán)；72°C 7分鐘。PCR產(chǎn)物經(jīng)I %瓊脂糖凝膠電泳分離后回收純化目的片段(輕鏈長(zhǎng)度391bp，重鏈長(zhǎng)度420bp)?？寺〉絇GEM-T(Promega)載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌TGl細(xì)胞后在IPTGIX-gal平板上進(jìn)行篩選，取白色菌斑接種于含有氨韋青霉素的LB液體培養(yǎng)基中擴(kuò)增。篩選陽(yáng)性克隆，用QIAGEN的質(zhì)粒抽提試劑盒抽提質(zhì)粒并進(jìn)行測(cè)序,確定了單克隆抗體β -Catenin的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列。單克隆抗體β -Catenin可變區(qū)的DNA序列和氨基酸序列:單克隆抗體β-Catenin重鏈可變區(qū)DNA序列(5' —3'，419bp)(SEQ ID NO:7)；單克隆抗體β-Catenin 的輕鏈可變區(qū) DNA 序列(5' —3'，359bp) (SEQ ID NO:8)；單克隆抗體β -Catenin重鏈可變區(qū)的推斷氨基酸序列(139氨基酸)(SEQ ID NO: 9)；單克隆抗體β -Catenin輕鏈可變區(qū)的推斷氨基酸序列(130氨基酸)(SEQ IOIDNO:10)。
權(quán)利要求
1.一種以原核表達(dá)的β-Catenin蛋白免疫小鼠獲得的分泌β-Catenin單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株13C6，保藏編號(hào)為CGMCC N0.6854。
2.一種由權(quán)利要求1所述的雜交瘤細(xì)胞株13C6產(chǎn)生的單克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的單克隆抗體，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID NO:9，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID NO:10ο
4.一種DNA分子SEQ ID NO:7，它編碼權(quán)利要求3中所述的重鏈可變區(qū)氨基酸序列SEQIDNO:9ο
5.一種DNA分子SEQ ID NO:8，它編碼權(quán)利要求3中所述的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列SEQID NO:10 ο
全文摘要
一種小鼠抗人β-Catenin單克隆抗體及分泌該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。所述的分泌β-Catenin單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株克隆號(hào)為13C6，保藏編號(hào)為CGMCC No.6854。本發(fā)明還提供了所述雜交瘤細(xì)胞株13C6產(chǎn)生的單克隆抗體。該抗體包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID NO9，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID NO10。本發(fā)明還提供了一種DNA分子SEQ ID NO7，它編碼重鏈可變區(qū)氨基酸序列SEQ ID NO9；一種DNA分子SEQ ID NO8，它編碼輕鏈可變區(qū)氨基酸序列SEQ ID NO10。該抗體可用于科研或臨床免疫組化檢測(cè)β-Catenin表達(dá)。
文檔編號(hào)C12N5/20GK103173413SQ20121052828
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2012年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月7日
發(fā)明者張林剛, 郗日沫, 尹芝南 申請(qǐng)人:天津三箭生物技術(shù)有限公司