專利名稱：一種甜瓜白粉病菌的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物病原菌的分離方法技術(shù)領(lǐng)域，具體的說，本發(fā)明涉及及一種甜瓜白粉病菌的分離方法技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
甜瓜是葫蘆科ifucurbitaceae)甜瓜屬{Cucumis Linn) 一年生蔓性草本植物,在國內(nèi)外廣泛栽培，是一種重要的經(jīng)濟作物。據(jù)統(tǒng)計，我國甜瓜播種面積約為15. 3萬公頃， 年總產(chǎn)量在300萬噸以上，居世界首位(劉君璞等，2000);目前，各種病蟲害對甜瓜的生產(chǎn)造成了不同程度的影響，甜瓜白粉病是甜瓜生產(chǎn)中重要的病害之一，我國露地和保護地甜瓜每年都因甜瓜白粉病造成大量減產(chǎn)，并嚴重的影響到了產(chǎn)品的品質(zhì)；據(jù)資料報道，瓜類白粉病主要由瓜單囊殼{S. fuliginea)和二孢白粉菌(萬.cichoracearum)引起,我國以瓜單囊殼危害較為普遍(呂佩珂，1996)。
甜瓜白粉病是一種廣泛發(fā)生的世界性病害，在我國各甜瓜產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生；白粉病菌主要侵染甜瓜植株的葉片，在甜瓜植株幼苗期和成株期都可發(fā)病；在適宜的條件下，甜瓜白粉病發(fā)展很快，幾天或一周時間蔓延到整個瓜田或溫室，造成葉片發(fā)黃、失去功能、漸漸枯死，嚴重影響了甜瓜果實的產(chǎn)量和品質(zhì)。
甜瓜白粉病菌的小種演替快、分化情況復(fù)雜，使其小種鑒定和相關(guān)病理研究十分困難；分離和培養(yǎng)出純化的白粉病菌，是進行甜瓜白粉病菌病理分析和抗病育種研究的前提，然而到目前為止，仍未建立分離純化甜瓜白粉病菌的技術(shù)；因此，提供一種合適的甜瓜白粉病菌的分離方法非常必要。發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)中未見有效的甜瓜白粉病菌分離方法的技術(shù)現(xiàn)狀，本發(fā)明的目的旨在于提供一種甜瓜白粉病菌的分離方法，確切的是提供一種甜瓜白粉病菌的單孢子分離方法，該方法操作簡便，而且能分離培養(yǎng)出純化的甜瓜白粉病菌。
本發(fā)明的主要技術(shù)方案采集發(fā)病的甜瓜葉片，用滅菌的刷子刷去其表面的老孢子，將病葉保溫保濕繁殖新孢子；在超凈工作臺上，將新長出的分生孢子用滅菌的洗耳球吹入水瓊脂平板上，用解剖鏡在水瓊脂平板上找到無色透明的小顆粒，即單個白粉病菌分生孢子；用特制挑針挑出單孢子接種在滅菌的感病甜瓜或黃瓜品種的直徑1. 2厘米葉碟上，將葉碟平鋪在裝入甘露醇培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中；培養(yǎng)皿放入光照培養(yǎng)箱，培養(yǎng)7天以后，長出純化的甜瓜白粉病菌菌落。
本發(fā)明具體提供一種甜瓜白粉病菌的單孢子分離方法，具體方法步驟如下。
(I)將在甜瓜田間采集的白粉病病葉，放在冰盒中，吹去表面老孢子，放入培養(yǎng)皿中，25°C光照培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)，繁殖新鮮的分生孢子；在超凈工作臺上，將新長出的分生孢子用滅菌的洗耳球吹入水瓊脂平板上，用解剖鏡在水瓊脂平板上找到無色透明的小顆粒，即單個白粉病菌分生孢子。
(2)用特制挑針挑出單孢子接種在滅菌的感病甜瓜或黃瓜品種的直徑1. 2厘米葉碟上，將葉碟平鋪在裝入甘露醇培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中；培養(yǎng)皿放入光照培養(yǎng)箱，培養(yǎng)7天以后，長出純化的甜瓜白粉病菌菌落。
(3)特制挑針制作方法將人眉毛根部用透明膠布粘在牙簽上，滅菌處理，眉毛尖用滅菌的剪刀剪掉I毫米。
(4)上述步驟(2)中的甘露醇培養(yǎng)基每升含30克甘露醇，50毫克苯并咪唑，9克瓊脂，蒸餾水定容至I升后滅菌。
(5)甜瓜白粉病菌單孢子培養(yǎng)條件光周期，12小時光照/12小時暗培養(yǎng)；光照強度，1500勒克斯；溫度，12小時光照時22°C /12小時暗培養(yǎng)時18°C。
通過實施本發(fā)明具體的發(fā)明內(nèi)容，可以達到以下有益效果本發(fā)明與傳統(tǒng)方法比較，提供的甜瓜白粉病菌的單孢子分離方法，用特制的挑針挑取單個分生孢子時不易使其破裂，而且在合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，促使單個分生孢子正常萌發(fā)，培養(yǎng)7天后，葉碟上長出純化的甜瓜白粉病菌菌落，獲得甜瓜白粉病菌純性培養(yǎng)， 此項技術(shù)的建立，為甜瓜白粉病菌病理分析和抗病育種研究提供支撐。
具體實施方式
下面，舉實施例說明本發(fā)明，但是，本發(fā)明并不限于下述的實施例。
本發(fā)明中選用的所有原輔材料和用具、設(shè)備都為本領(lǐng)域熟知選用的，但不限制本發(fā)明的實施，其他本領(lǐng) 域熟知的一些試劑和設(shè)備都可適用于本發(fā)明以下實施方式的實施。
實施例一甜瓜白粉病菌的單孢子分離方法甜瓜白粉病菌的單孢子分離方法具體步驟如下(I)將在甜瓜田間采集的白粉病病葉，放在冰盒中，吹去表面老孢子，放入培養(yǎng)皿中， 25°C光照培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)，繁殖新鮮的分生孢子；在超凈工作臺上，將新長出的分生孢子用滅菌的洗耳球吹入水瓊脂平板上，用解剖鏡在水瓊脂平板上找到無色透明的小顆粒，即單個白粉病菌分生孢子。
(2)用特制挑針挑出單孢子接種在滅菌的感病甜瓜或黃瓜品種的直徑1. 2厘米葉碟上，將葉碟平鋪在裝入甘露醇培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中；培養(yǎng)皿放入光照培養(yǎng)箱，培養(yǎng)7天以后，長出純化的甜瓜白粉病菌菌落。
(3)特制挑針制作方法將人眉毛根部用透明膠布粘在牙簽上，滅菌處理，眉毛尖用滅菌的剪刀剪掉I毫米。
(4)上述步驟(2)中的甘露醇培養(yǎng)基每升含30克甘露醇，50毫克苯并咪唑，9克瓊脂，蒸餾水定容至I升后滅菌。
(5)甜瓜白粉病菌單孢子培養(yǎng)條件光周期，12小時光照/12小時暗培養(yǎng)；光照強度，1500勒克斯；溫度，12小時光照時22°C /12小時暗培養(yǎng)時18°C。
權(quán)利要求
1.一種甜瓜白粉病菌的單孢子分離方法，其特征在于，具體分離方法步驟如下(1)將在甜瓜田間采集的白粉病病葉，放在冰盒中，吹去表面老孢子，放入培養(yǎng)皿中， 25°C光照培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)，繁殖新鮮的分生孢子；在超凈工作臺上，將新長出的分生孢子用滅菌的洗耳球吹入水瓊脂平板上，用解剖鏡在水瓊脂平板上找到無色透明的小顆粒，即單個白粉病菌分生孢子；(2)用特制挑針挑出單孢子接種在滅菌的感病甜瓜或黃瓜品種的直徑1.2厘米葉碟上，將葉碟平鋪在裝入甘露醇培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中；培養(yǎng)皿放入光照培養(yǎng)箱，培養(yǎng)7天以后， 長出純化的甜瓜白粉病菌菌落；(3)特制挑針制作方法將人眉毛根部用透明膠布粘在牙簽上，滅菌處理，眉毛尖用滅菌的剪刀剪掉I毫米；(4)上述步驟(2)中的甘露醇培養(yǎng)基每升含30克甘露醇，50毫克苯并咪唑，9克瓊脂， 蒸懼水定容至I升后滅菌；(5)甜瓜白粉病菌單孢子培養(yǎng)條件光周期，12小時光照/12小時暗培養(yǎng)；光照強度， 1500勒克斯；溫度，12小時光照時22°C /12小時暗培養(yǎng)時18°C。
全文摘要
本發(fā)明公開一種甜瓜白粉病菌的單孢子分離方法，通過采集發(fā)病的甜瓜葉片，用滅菌的刷子刷去其表面的老孢子，將病葉保溫保濕繁殖新孢子。把培養(yǎng)好的新鮮分生孢子用洗耳球吹入水瓊脂平板上，在解剖鏡下，用特制的挑針挑取單個分生孢子接種在滅菌的感病甜瓜或黃瓜品種的葉碟上。將葉碟平鋪在裝入甘露醇培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿里，蓋上培養(yǎng)皿蓋后放入光照培養(yǎng)箱，培養(yǎng)7天后即可得到純化的甜瓜白粉病菌菌落。本項發(fā)明通過特制的挑針挑出單個分生孢子，并在合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，促使單個分生孢子正常萌發(fā)，分離出的甜瓜白粉菌病原菌純、無小種交叉感染，保障了后續(xù)研究結(jié)果的準確和可靠，具有重要的實用價值。
文檔編號C12R1/645GK102994440SQ201210578048
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月27日
發(fā)明者伊鴻平, 張永兵, 張學(xué)軍, 李寐華, 季娟, 郭麗霞, 吳明珠 申請人:新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈密瓜研究中心