專利名稱：一種硫酸新霉素的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物制藥領(lǐng)域，涉及一種硫酸新霉素的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
硫酸新霉素生產(chǎn)工藝中，發(fā)酵過(guò)程大量使用糧食加工類的原材料，其中，由碎米經(jīng)粉碎、過(guò)篩所得的米粉，在發(fā)酵培養(yǎng)基中所占比例最大。由于碎米原料來(lái)源不穩(wěn)定，加工工藝相比其他原材料較為簡(jiǎn)單，加工過(guò)程中操作人員勞動(dòng)強(qiáng)度大，噪音大、粉塵多，工作環(huán)境惡劣。同時(shí)，碎米加工后的米粉顆粒度較粗，一方面降低了米粉被微生物吸收利用的程度；另一方面過(guò)多的剩余干物質(zhì)給清潔生產(chǎn)帶來(lái)了較大的難度，增加了企業(yè)的環(huán)保壓力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供硫酸新霉素一種新的生產(chǎn)方法，用淀粉代替米粉，直接投料，減少加工環(huán)節(jié)，為提高和穩(wěn)定發(fā)酵生產(chǎn)水平奠定基礎(chǔ)。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，包括以下步驟:I)從砂土管中取砂土放入無(wú)菌水中，充分搖均，制成孢子懸浮液；用吸管吸取孢子懸浮液，按0.05ml/支涂布于斜面培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-12天，溫度控制在28±2°C，斜面長(zhǎng)好后放入2-8°C的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫?)向步驟I)所得的斜面放入玻璃珠，進(jìn)行振搖，將斜面上的孢子打下，后加入適量無(wú)菌水洗下孢子，倒入已滅好菌的玻璃瓶中，放入2-8°C的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫?br>
3)將步驟2)所得的物料接入滅菌后的種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，溫度控制在35±5°C，罐壓為0.02 0.1Mpa，培養(yǎng)35-45小時(shí)，得到菌絲；4)以重量計(jì)，稱取淀粉4.5-5.5份、花生餅粉2.6-3.0份、黃豆餅粉0.4-0.6份、葡萄糖1.4份、酵母粉0.5份及無(wú)機(jī)鹽I份，投入至發(fā)酵罐內(nèi)配制發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加水?dāng)嚢枞芙饩鶆?，過(guò)濾滅菌，然后將步驟3)長(zhǎng)好的菌絲接入發(fā)酵罐內(nèi)，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度為35±5°C，罐壓為0.02 0.1Mpa，發(fā)酵時(shí)間為130h以上；5)發(fā)酵完成后將發(fā)酵液放入吸附罐內(nèi)，加入732樹脂進(jìn)行吸附，然后進(jìn)行解吸，收集解吸液進(jìn)行濃縮和轉(zhuǎn)鹽精制得硫酸新霉素精制液，后噴粉制成成品。步驟I)中所述的斜面培養(yǎng)基中含葡萄糖1.0被％，牛肉膏0.2被％，瓊脂1.8 2.2wt%，磷酸氫二鉀0.05wt%, D L天冬素0.05wt%, pH為7.5 8.0 ;配制好后分裝在容器中，于0.104Mpa, 121°C濕熱滅菌30分鐘，稍冷后制成斜面，28±2°C培養(yǎng)箱空白培養(yǎng)6 7天，無(wú)菌備用。優(yōu)選的，步驟4)中淀粉為5份。步驟5)中將發(fā)酵液放入吸附罐內(nèi)，攪拌并調(diào)節(jié)pH為6.Γ7.0，加水稀釋發(fā)酵液生物效價(jià)至13000 μ /ml以下，溫度控制在40±3°C，再加入732樹脂進(jìn)行吸附。步驟5)中按每暈升發(fā)酵液交換9 11萬(wàn)單位新霉素的量加入732樹脂進(jìn)行吸附。
步驟5)中具體解吸步驟為:a、先用飲用水洗凈樹脂；b、用0.12^0.15mol/L鹽酸和0.4mol/L氯化銨配制的洗滌劑洗滌飽和樹脂；C、用飲用水洗滌至ρΗ6.0-7.0d、通入0.06 0.09mol/L氨水洗飽和樹脂，出口效價(jià)控制在500_1500u/ml ；e、飲用水正向洗滌至pH為8.0-10.0，然后再用飲用水反洗30分鐘以上；f、通入2.5 3.0moI/L氨水進(jìn)行解吸，串入700柱脫色，當(dāng)脫色柱出口效價(jià)大于1000 μ /ml時(shí)開始收集解吸液，待高單位過(guò)后，效價(jià)低于4000u/ml時(shí)結(jié)束收集。步驟5)中解吸及液濃縮時(shí)工藝參數(shù):真空度■.( -0.07Mpa ；濃縮溫度:彡80°C;解吸液流速:(3000L/h。步驟5)中轉(zhuǎn)鹽步驟具體為攪拌下緩慢加入冷卻的5.5 6.5mol/L硫酸，控制溫度低于60°C，不斷監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)鹽液的pH值，pH值在6.0—6.8時(shí)終止反應(yīng)。本發(fā)明提供的一種硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，具有的有益效果為:1、減少物料損耗任何物料在經(jīng)過(guò)加工后，都會(huì)存在物料的損耗，碎米本身是供應(yīng)商在大米生產(chǎn)區(qū)的糧食加工廠收購(gòu)而來(lái)，由于生產(chǎn)需求量大，供應(yīng)商往往會(huì)在不同的糧食加工廠收購(gòu)合并，然后運(yùn)輸至生產(chǎn)倉(cāng)庫(kù)，再轉(zhuǎn)運(yùn)至粉碎工序進(jìn)行物料粉碎，制得米粉。根據(jù)近幾年的碎米采購(gòu)量與米粉使用量的數(shù)據(jù)分析，購(gòu)進(jìn)的碎米量?jī)H有90%用于發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，其余部分都在轉(zhuǎn)運(yùn)、粉碎、過(guò)篩、包裝等過(guò)程中損耗了。采用淀粉替代米粉，代替比例為5%，可以避免這一損耗，由于淀粉的生產(chǎn)來(lái)自于大型的糧食加工企業(yè)，其生產(chǎn)工藝、人員、設(shè)備、管理等諸多方面都優(yōu)于出產(chǎn)碎米的加工廠，購(gòu)進(jìn)的淀粉直接轉(zhuǎn)運(yùn)至發(fā)酵車間配料崗位投料，減少了因物料運(yùn)輸、粉碎加工、包裝等過(guò)程中的損耗，且便于物料管理，有力保障生產(chǎn)。2、減輕勞動(dòng)強(qiáng)度采用米粉配制發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基時(shí)需要先把米粉運(yùn)出去粉碎成粉末再運(yùn)回來(lái)，采用淀粉代替后省掉了該工序，從而減輕了勞動(dòng)強(qiáng)度。3、改善工作環(huán)境將碎米磨成粉體時(shí)，粉塵較大，采用淀粉代替后，能夠改善工作環(huán)境。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不受其限制。實(shí)施例1:一種硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，具體步驟為:I)從砂土管中取砂土放入無(wú)菌水中，充分搖均，制成孢子懸浮液；用吸管吸取孢子懸浮液，按0.05ml/支涂布 于斜面培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-12天，溫度控制在28±2°C，斜面長(zhǎng)好后放入2-8°C的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫?)向步驟I)所得的斜面放入玻璃珠，進(jìn)行振搖，將斜面上的孢子打下，后加入適量無(wú)菌水洗下孢子，倒入已滅好菌的玻璃瓶中，放入2_8°C的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫?br> 3)將步驟2)所得的物料接入滅菌后的種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，溫度控制在35±5°C，罐壓為0.02 0.1Mpa，培養(yǎng)35-45小時(shí)，得到菌絲；4)以重量計(jì)，稱取淀粉5份、花生餅粉2.8份、黃豆餅粉0.5份、葡萄糖1.4份、酵母粉0.5份及無(wú)機(jī)鹽I份，投入至發(fā)酵罐內(nèi)配制發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加水?dāng)嚢枞芙饩鶆?，過(guò)濾滅菌，然后將步驟3)長(zhǎng)好的菌絲接入發(fā)酵罐內(nèi)，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度為35±5°C，罐壓為0.02 0.1Mpa，發(fā)酵時(shí)間為140h ；5)發(fā)酵完成后將發(fā)酵液放入吸附罐內(nèi)，加入732樹脂進(jìn)行吸附，然后進(jìn)行解吸，收集解吸液進(jìn)行濃縮和轉(zhuǎn)鹽精制得硫酸新霉素精制液，后噴粉制成成品。所述步驟I)中所述的斜面培養(yǎng)基中含葡萄糖1.0wt %,牛肉膏0.2wt %,瓊脂1.8 2.2wt%，磷酸氫二鉀0.05wt%, D L天冬素0.05wt%, pH為7.5 8.0 ;配制好后分裝在容器中，于0.104Mpa, 121°C濕熱滅菌30分鐘，稍冷后制成斜面，28±2°C培養(yǎng)箱空白培養(yǎng)6 7天，無(wú)菌備用。所述步驟5)中將發(fā)酵液放入吸附罐內(nèi)，攪拌并調(diào)節(jié)pH為6.Γ7.0，加水稀釋發(fā)酵液生物效價(jià)至13000μ/πι1以下，溫度控制在40±3°C，再加入732樹脂進(jìn)行吸附。步驟5)中按每暈升發(fā)酵液交換9 11萬(wàn)單位新霉素的量加入732樹脂進(jìn)行吸附。步驟5)中具體解吸步驟為:a、先用飲用水洗凈樹脂；b、用0.12^0.15mol/L鹽酸和0.4mol/L氯化銨配制的洗滌劑洗滌飽和樹脂；c、用飲用水洗滌至ρΗ6.0-7.0d、通入0.06^0.09mol/L氨水洗飽和樹脂，出口效價(jià)控制在500_1500u/ml ；e、飲用水正向洗滌至pH為8.0-10.0，然后再用飲用水反洗30分鐘以上；f、通入2.5 3.0moI/L氨水進(jìn)行解吸，串入700柱脫色，當(dāng)脫色柱出口效價(jià)大于1000 μ /ml時(shí)開始收集解吸液，待高單位過(guò)后，效價(jià)低于4000u/ml時(shí)結(jié)束收集。步驟5)中解吸及液濃縮時(shí)工藝參數(shù):真空度■.( -0.07Mpa ；濃縮溫度:彡80°C; 解吸液流速:(3000L/h。步驟5)中轉(zhuǎn)鹽步驟具體為攪拌下緩慢加入冷卻的5.5 6.5mol/L硫酸，控制溫度低于60°C，不斷監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)鹽液的pH值，pH值在6.0—6.8時(shí)終止反應(yīng)。實(shí)施例2:以重量計(jì)，稱取淀粉4.5份、花生餅粉2.6份、黃豆餅粉0.4份、葡萄糖1.4份、酵母粉0.5份及無(wú)機(jī)鹽I份，投入至發(fā)酵罐內(nèi)配制發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加水?dāng)嚢枞芙饩鶆?，過(guò)濾滅菌，然后將步驟3)長(zhǎng)好的菌絲接入發(fā)酵罐內(nèi)，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度為35±5°C，罐壓為0.02 0.1Mpa，發(fā)酵時(shí)間為130h ；其余步驟均同實(shí)施例1。對(duì)比例1:以重量計(jì)，稱取米粉4.5份、花生餅粉2.6份、黃豆餅粉0.4份、葡萄糖1.4份、酵母粉0.5份及無(wú)機(jī)鹽I份，投入至發(fā)酵罐內(nèi)配制發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加水?dāng)嚢枞芙饩鶆?，過(guò)濾滅菌，然后將步驟3)長(zhǎng)好的菌絲接入發(fā)酵罐內(nèi)，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度為35±5°C，罐壓為0.02 0.1Mpa，發(fā)酵時(shí)間為130h ；其余步驟均同實(shí)施例1。
將對(duì)比例1與實(shí)施例2的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果見表1:
權(quán)利要求
1.一種硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，其特征在于包括以下步驟: 1)從砂土管中取砂土放入無(wú)菌水中，充分搖均，制成孢子懸浮液；用吸管吸取孢子懸浮液，按0.05ml/支涂布于斜面培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-12天，溫度控制在28 ± 2°C，斜面長(zhǎng)好后放入2-8°C的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫? 2)向步驟I)所得的斜面放入玻璃珠，進(jìn)行振搖，將斜面上的孢子打下，后加入適量無(wú)菌水洗下孢子，倒入已滅好菌的玻璃瓶中，放入2-8°C的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫? 3)將步驟2)所得的物料接入滅菌后的種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，溫度控制在35±5°C，罐壓為0.02 0.1Mpa，培養(yǎng)35-45小時(shí)，得到菌絲； 4)以重量計(jì)，稱取淀粉4.5-5.5份、花生餅粉2.6-3.0份、黃豆餅粉0.4-0.6份、葡萄糖1.4份、酵母粉0.5份及無(wú)機(jī)鹽I份，投入至發(fā)酵罐內(nèi)配制發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加水?dāng)嚢枞芙饩鶆?，過(guò)濾滅菌，然后將步驟3)長(zhǎng)好的菌絲接入發(fā)酵罐內(nèi)，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度為35±5°C，罐壓為0.02 0.1Mpa，發(fā)酵時(shí)間為130h以上； 5)發(fā)酵完成后將發(fā)酵液放入吸附罐內(nèi)，加入732樹脂進(jìn)行吸附，然后進(jìn)行解吸，收集解吸液進(jìn)行濃縮和轉(zhuǎn)鹽精制得硫酸新霉素精制液，后噴粉制成成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟I)中所述的斜面培養(yǎng)基中含葡萄糖1.0wt%，牛肉膏0.2 wt%，瓊脂1.8 2.2 wt%，磷酸氫二鉀0.05 wt%,D L天冬素0.05 wt%,pH為7.5 8.0 ;配制好后分裝在容器中，于0.104Mpa，121°C濕熱滅菌30分鐘，稍冷后制成斜面，28 ±2°C培養(yǎng)箱空白培養(yǎng)6 7天，無(wú)菌備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟4)中淀粉為5份。
4.根據(jù)權(quán)利 要求1所述的硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟5)中將發(fā)酵液放入吸附罐內(nèi)，攪拌并調(diào)節(jié)PH為6.Γ7.0，加水稀釋發(fā)酵液生物效價(jià)至13000 μ /ml以下，溫度控制在40±3°C，再加入732樹脂進(jìn)行吸附。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟5)中按每毫升發(fā)酵液交換9 11萬(wàn)單位新霉素的量加入732樹脂進(jìn)行吸附。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟5)中具體解吸步驟為: a、先用飲用水洗凈樹脂； b、用0.12^0.15 mol/L鹽酸和0.4 mol/L氯化銨配制的洗滌劑洗滌飽和樹脂； C、用飲用水洗滌至pH6.0-7.0 d、通入(λ06^0.09 mol/L氨水洗飽和樹脂，出口效價(jià)控制在500_1500u/ml ； e、飲用水正向洗滌至pH為8.0-10.0，然后再用飲用水反洗30分鐘以上； f、通入2.5 3.0 mol/L氨水進(jìn)行解吸，串入700柱脫色，當(dāng)脫色柱出口效價(jià)大于1000 μ /ml時(shí)開始收集解吸液，待高單位過(guò)后，效價(jià)低于4000u/ml時(shí)結(jié)束收集。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟5)中解吸及液濃縮時(shí)工藝參數(shù):真空度:彡一 0.07Mpa ； 濃縮溫度80°C ; 解吸液流速■.( 3000 L/h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟5)中轉(zhuǎn)鹽步驟具體為攪拌下緩慢加入冷卻的5.5 6.5 mol/L硫酸，控制溫度低于60°C，不斷監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)鹽液的pH值，pH值在6.0—6.8時(shí)終 止反應(yīng)。
全文摘要
一種硫酸新霉素的生產(chǎn)方法，通過(guò)孢子的接種培養(yǎng)制得孢子懸浮液，孢子懸浮液再經(jīng)發(fā)酵、吸附、解吸及濃縮精制過(guò)程制得，在配制發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基時(shí)，采用淀粉替代傳統(tǒng)工藝中的米粉，代替比例為5%，通過(guò)該措施能夠減少物料損耗，降低勞動(dòng)強(qiáng)度，而且能夠改善工作環(huán)境，有力保障生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P19/52GK103074401SQ201210584060
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月30日
發(fā)明者沈聯(lián)兵, 何連明, 周云 申請(qǐng)人:宜昌三峽制藥有限公司