專利名稱：利用游動放線菌制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種利用生物催化方法制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，特別涉及一種游動放線菌(Actinoplanes sp.) ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己燒甲酸的方法。
(ニ)
背景技術：
反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸(I)又稱氨甲環(huán)酸、止血環(huán)酸，是ー種作用于纖維蛋白溶解酶系統(tǒng)的止血藥，臨床上主要用于急性或慢性、局限性或全身纖維蛋白溶解亢進所致的各種出血。也能夠競爭性地抑制酪氨酸與酪氨酸酶結(jié)合，減少黑色素的生成，而被用于黃褐斑的治療。添加于化妝品中能阻斷消弭紫外線照射導致的黑色素惡化的進程。加入牙膏可以防止牙齦出血。目前反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的規(guī)模化生產(chǎn)均采用化學法:1.環(huán)己烯法合成反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的エ藝路線(式(I))
權(quán)利要求
1.ー種利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述的方法以游動放線菌(Actinoplanes sp.) ZJB-08196經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的濕菌體為催化劑，以順反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸為底物，在pH 6.5~8.5的水或緩沖液構(gòu)成的轉(zhuǎn)化體系中進行轉(zhuǎn)化反應，反應完全后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應液，將反應液分離純化，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸。
2.如權(quán)利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述轉(zhuǎn)化體系中底物初始濃度為0.2~20 g/L。
3.如權(quán)利要求1所述利用游動放線菌制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述轉(zhuǎn)化體系中濕菌體添加量為10~200 g/L，所述濕菌體的含水量為80~90%。
4.如權(quán)利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述轉(zhuǎn)化反應是在20 40°C下轉(zhuǎn)化反應2 48小吋，反應完全后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應液。
5.如權(quán)利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述反應液分離純化的方法為:將反應液加入活性炭，煮沸脫色，過濾，濾液濃縮，取濃縮液加入無水こ醇至こ醇體積終濃度95%析晶，冷卻、過濾，晶體用無水こ醇洗滌、過濾，干燥，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸。
6.如權(quán)利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述催化劑按如下步驟制備: (1)斜面菌種培養(yǎng):將游動放線菌ZJB-08196接種于斜面培養(yǎng)基，于20~37℃下培養(yǎng)至菌落長出，獲得斜面活化菌種；所述斜面培養(yǎng)基終濃度組成為:蔗糖5 30g/L，蛋白胨.1 5 g/L，酪氨酸 0.5 2 g/L, K2HPO4*3H20 0.5 2 g/L, KCl 0.5 2 g/L, MgSO4*7H20 0.5 2 g/L，F(xiàn)eSO4*7H20 0.1 1 g/L，瓊脂 15 20 g/L，溶劑為水，初始 pH 6.0 7.5 ； (2)種子培養(yǎng):從斜面活化菌種挑取一接種環(huán)接種于種子培養(yǎng)基，在搖床轉(zhuǎn)速15(T250rpm、20~37℃條件下培養(yǎng)48~60小時，得到種子液；所述的種子培養(yǎng)基的終濃度組成為:玉米淀粉5 20 g/L，黃豆餅粉20 60 g/L，甘油5 20 g/L，碳酸鈣1 5 g/L, CaCl2 1 10 g/L,K2HPO4*3H20 0.5 2 g/L，溶劑為水，初始 pH 6.0 7.5 ； (3)發(fā)酵培養(yǎng):將種子液按照體積比廣15%接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在20~37℃、搖床轉(zhuǎn)速.150 250 rpm條件下培養(yǎng)1 7天,取發(fā)酵液于4000 12000 rpm離心,棄上清液,收集濕菌體；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的終濃度組成為:麥芽糖10 120 g/L，葡萄糖10 50 g/L，黃豆餅粉5 25 g/L，碳酸鈣2 10g/L，甘油I 10 g/L，谷氨酸鈉2 10 g/L，溶劑為水，初始pH 6.0 7.5。
7.如權(quán)利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述方法按如下步驟進行:將游動放線菌ZJB-08196經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的濕菌體和順反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸混合，用pH 7.0~8.2水或緩沖液構(gòu)成的轉(zhuǎn)化體系，在25 37°C下轉(zhuǎn)化反應2~36h，反應完全后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應液，將反應液加入活性炭，煮沸脫色，過濾，濾液濃縮，取濃縮液加入無水こ醇至こ醇體積終濃度為95%析晶，冷卻至0°C、過濾，晶體用無水こ醇洗滌、過濾，干燥，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸；所述轉(zhuǎn)化體系中底物初始濃度為.0.2~20 g/L，所述轉(zhuǎn)化體系中濕菌體添加量為10~200 g/L，所述濕菌體的含水量為80~90%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，所述的方法以游動放線菌ZJB-08196經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的濕菌體為催化劑，以順反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸為底物，在pH為6.5~8.5的水或緩沖液構(gòu)成的轉(zhuǎn)化體系中進行轉(zhuǎn)化反應，反應完全后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應液，將反應液分離純化，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸；本發(fā)明合成反應條件溫和，環(huán)境友好、操作流程簡單，具有良好的應用前景。
文檔編號C12P41/00GK103114122SQ20121059372
公開日2013年5月22日 申請日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者鄭裕國, 孫麗慧, 王遠山, 王元平 申請人:浙江工業(yè)大學, 揚州天和藥業(yè)有限公司