一種支原體培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種支原體培養(yǎng)基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；酵母浸粉5g；苯酚紅20mg；氯化鈉5.2g；L-精氨酸0.5g；氟康唑30mg；紫番荔枝素2mg；無菌綿羊血200ml；蒸餾水加至1000ml。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、支原體分離率高的特點。
【專利說明】一種支原體培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及檢驗口腔微生物培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種支原體培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】 [0002]非淋球菌性尿道炎(nongonococcal urethritis, NGU)在性傳播疾病(sexuallytransmitted disease, STD)中所占的比例逐年升高，無論是國外還是國內(nèi)都居于首位，而解尿支原體(ureaplasma urealyticum, Uu)和人型支原體(Mycoplasmahominis, Mh)是NGU的主要病原體。因此，準確有效地檢測支原體的存在，成為診斷NGU的關(guān)鍵因素之一。Uu和Mh的檢測目前國內(nèi)大多采用液體培養(yǎng)法，培養(yǎng)基由黃變紅且液體澄清為陽性，不變色或者變色但液體渾濁為陰性。其原理是根據(jù)Uu和Mh分解培養(yǎng)基中的尿素產(chǎn)堿使PH上升，而培養(yǎng)基中的酚紅指示劑在由酸變堿過程中顏色由黃變紅，觀察顏色的變化來判斷陽性。但是能分解尿素的微生物很多，一些細菌能使顏色變紅造成假陽性，還有一些細菌和真菌(尤其是白色念珠菌)能使培養(yǎng)基變紅和渾濁，檢驗科一般會判斷陰性，但如果其中同時有支原體生長，由于渾濁就會造成假陰性的判斷。前國內(nèi)商品化的支原體培養(yǎng)基(包括液體和固體)一般添加青霉素類和多粘菌素，青霉素對大多數(shù)革蘭陽性球菌的作用較強，對腸球菌作用較差，多粘菌素為多肽類抗生素，對綠膿桿菌等革蘭氏陰性桿菌作用強大，但對G-球菌和G+細菌均無作用，這兩種對真菌都無抑制作用。所以，如果標本中有混合真菌感染，污染少量則僅變紅而不造成沉淀，可能形成假陽性的判斷；污染量多有沉淀和渾濁，可能形成假陰性的判斷。在固體培養(yǎng)基上，真菌菌落的生長，會掩蓋支原體生長的瓊脂表面，使不能觀察到支原體的典型菌落。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種適合于支原體生長的培養(yǎng)基，降低檢驗結(jié)果的假陽性和假陰性發(fā)生率。
[0004]本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是:一種支原體培養(yǎng)基，其特征在，配制1000rnl培養(yǎng)基的配方中含有:蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酚紅20mg ;氯化鈉5.2g ；L-精氨酸0.5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ;無菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至1000rnl。
[0005]優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有京尼平酸2mg。
[0006]優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的功勞木水煮液200ml。
[0007]以上各方案的固體培養(yǎng)基配方中，每1000ml培養(yǎng)基還含有瓊脂15g。
[0008]其中所述的蛋白胨提供碳氮源和能量；牛心浸粉含有各種多肽、脂肪、生長因子、激素等，這些物質(zhì)對促進支原體的繁殖和生長都是很重要的因素；酵母浸粉提供支原體生長所需的維生素B族；氯化鈉維持均衡的滲透壓，且由于支原體較其他的細菌更為耐受高滲環(huán)境，所以氯化鈉水平適當?shù)奶岣哌€有利于抑制其他細菌生長；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；無菌綿羊血提供能量環(huán)境；L-精氨酸屬氨基酸類，為營養(yǎng)劑；苯酚紅為指示劑；氟康唑可以有效的抑制白色念珠菌在其中的生長；紫番荔枝素有抑制白假絲酵母的真菌作用，且還有一定的細胞毒作用，2mg/L的濃度可以有效的抑制雜菌成長，較普通支原體培養(yǎng)集中使用的高毒醋酸鉈安全。京尼平酸能廣泛抑制革蘭氏陰、陽性菌的生長。功勞木為小檗科植物闊葉十大功勞、細葉十大功勞的莖或莖皮，現(xiàn)代研究表明，功勞木水煎劑在體外對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌均有抑制作用。
[0009]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有支原體檢出可靠的特點。
【具體實施方式】
[0010]以下結(jié)合實際情況，對本發(fā)明的【具體實施方式】作詳細說明。
[0011]實施例1液體培養(yǎng)基，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有:蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5.2g ；L-精氨酸0.5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2rng ;無菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來制備實施例2固體培養(yǎng)基。
[0012]實施例3液體培養(yǎng)基，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有:蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5.2g ;L_精氨酸0.5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ；京尼平酸2mg ;無菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來制備實施例4固體培養(yǎng)基。
[0013]實施例5液體培養(yǎng)基，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有:蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5.2g ;L_精氨酸0.5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ；濃度200g/L的功勞木水煮液200ml ;無菌綿羊血200ml ;蒸餾水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來制備實施例6固體培養(yǎng)基。實施例6固體培養(yǎng)基制備方法為:取功勞木加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得功勞木水煮液；將蛋白胨、牛心浸粉、酵母浸粉·、苯酚紅、氯化鈉、瓊脂、功勞木水煮液和蒸餾水混勻，在渦旋器上震蕩15min，過濾，濾液210°C滅菌15min，冷卻到45°C，加入無菌綿羊血、滅菌氟康唑、滅菌紫番荔枝素，混勻后滅菌蒸餾水定容到1000ml后分裝。
[0014]所述的功勞木水煮液濃度為200g/L，指的是每升功勞木水煮液中含有生藥200g。
[0015]本發(fā)明所得支原體培養(yǎng)基具有檢出可靠、支原體分離率高的特點，為臨床資料充分證明，有關(guān)資料如下。
[0016]I對象與方法
[0017]1.1培養(yǎng)基制備:共設(shè)8組，分別為實施例1~6方案組和對照I組、對照2組。對照I組為支原體肉湯液體培養(yǎng)基，對照2組為支原體肉湯固體培養(yǎng)基。
[0018]1.2標本采集培養(yǎng)方法:婦科和皮膚科門診患者的泌尿生殖道標本拭子108例。采集方法:男性患者用無菌棉球擦干尿道口后，用無菌棉拭子插入尿道口 2~3cm，輕輕旋轉(zhuǎn)后取出；女性患者清除陰道口分泌物后，用無菌棉拭子插入宮頸口 I~2cm，輕輕旋轉(zhuǎn)后取出。用拭子先接種固體培養(yǎng)基，然后用于液體培養(yǎng)基接種，36 °C培養(yǎng)。
[0019]1.3結(jié)果判定方法
[0020]1.3.1陽性確定金標準:顯微鏡下見到典型支原體生長結(jié)合生化反應(yīng)確認Utu Mh。
[0021]1.3.2液體培養(yǎng)基陽性確定標準:分別于24~48h觀察顏色由黃色變紅色，嚴格按照結(jié)果判讀表讀取結(jié)果。[0022]1.3.3固體培養(yǎng)基陽性確定標準:為24h后逐日觀察顏色的變化(黃色變?yōu)榧t色)。同時在顯微鏡下觀察典型支原體菌落:Mh煎蛋樣菌落(100~300 μ m), Uu棕褐色顆粒、棕褐色菌線或棕褐色團塊樣菌落。
[0023]2結(jié)果:108份標本最后確定陽性為41例，各組陽性例數(shù)見下表。
[0024]
【權(quán)利要求】
1.一種支原體培養(yǎng)基，其特征在，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有: 蛋白胨15g ； 牛心浸粉8g ； 氯化鈉5.2g ； L-精氨酸0.5g ； 氟康唑30mg ； 紫番荔枝素2mg ； 無菌綿羊血200ml ； 蒸餾水加至總量為1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種支原體培養(yǎng)基，其特征在于每1000ml培養(yǎng)基還含有京尼平酸2mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種支原體培養(yǎng)基，其特征在于每1000ml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的功勞木水煮 液200ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任意一種所述的一種支原體培養(yǎng)基,其特征在于每1000ml培養(yǎng)基中還含有瓊脂15g。
【文檔編號】C12R1/35GK103789393SQ201210595179
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月24日
【發(fā)明者】郭三保 申請人:郭三保