類胚體形成用培養(yǎng)容器的制造方法
【專利摘要】根據(jù)本發(fā)明，提供能夠以更高的水平高效率地形成質量高的類胚體的類胚體形成用培養(yǎng)容器。本發(fā)明涉及一種類胚體形成用培養(yǎng)容器，其具有2個以上的孔，其特征在于：上述孔具有垂直方向的截面為大致U字形狀的底部和大致圓形的開口部，并且，上述底部內表面的至少曲面部分為細胞低粘附性的，并且上述底部內表面的曲率半徑（R'）為1.0mm以上3.5mm以下，上述細胞低粘附性的表面通過使用水溶性樹脂的細胞低粘附化處理或細胞非粘附化處理而形成。
【專利說明】類胚體形成用培養(yǎng)容器
【技術領域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及類胚體形成用培養(yǎng)容器。
[0002]本申請基于2011年3月30日在日本申請的特愿2011-76621號主張優(yōu)先權，在此援用其內容。
【背景技術】
[0003]胚胎干細胞(embryonic stem cell:ES細胞)是通過將胚泡的內部細胞塊接種在飼養(yǎng)細胞上、并添加白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor:LIF)進行培養(yǎng)而得到的。
[0004]維持未分化狀態(tài)無限增殖的ES細胞具有分化成各種各樣的組織細胞的多能性，因此，在使用通過分化得到的組織的移植治療、所謂的再生醫(yī)療的領域中成為各種研究的對象。
[0005]為了將ES細胞分化誘導成各種各樣的組織，最廣泛使用的是形成被稱為類胚體(embryoid body:EB體)的偽胚胎的方法，EB體的形成是在體外(in vitro)的ES細胞的分化誘導的第一步。另外，EB體的 形成需要將ES細胞以不粘附于培養(yǎng)容器的浮游狀態(tài)培養(yǎng)，在使用通常的培養(yǎng)容器的粘附培養(yǎng)中，不形成EB體，進行粘附、伸展，開始非特異性的分化。
[0006]為了以浮游狀態(tài)培養(yǎng)ES細胞,最廣泛使用的是被稱為懸滴培養(yǎng)(hanging dropculture)的方法。懸滴培養(yǎng)正如其名，是在以水滴狀垂下的培養(yǎng)液中培養(yǎng)細胞的方法。即，向多孔板的孔中添加礦物油和緩沖液，在多孔板的蓋的與各孔上重疊的位置，點上包含ES細胞的培養(yǎng)懸濁液使其成為液滴，蓋上多孔板進行培養(yǎng)。但是，在懸滴法中，存在EB體形成的成功率低、不能進行顯微鏡觀察、一次能夠形成的EB體的量少、操作繁瑣等問題。
[0007]在專利文獻I中，為了解決這些問題，提出了類胚體形成用培養(yǎng)容器的制造方法、通過上述制造方法制造的類胚體形成用培養(yǎng)容器、和該容器的用途，其中，上述類胚體形成用培養(yǎng)容器的制造方法的特征在于，包括:使水溶性樹脂覆蓋在培養(yǎng)容器內表面形成水溶性覆蓋層的水溶性樹脂覆蓋層形成工序；和在上述工序后，使上述水溶性覆蓋層固化而改性為非水溶性固化膜層的非水溶性固化膜改性工序。
[0008]現(xiàn)有技術文獻
[0009]專利文獻
[0010]專利文獻1:日本特開2008-178367號公報。

【發(fā)明內容】

[0011]發(fā)明要解決的技術問題
[0012]然而，專利文獻I中記載的技術，從由ES細胞高效率地形成質量高的類胚體的觀點出發(fā)，仍有改善的余地。
[0013]因此，本發(fā)明的目的是提供能夠以更高的水平高效率地形成質量高的類胚體的類胚體形成用培養(yǎng)容器。
[0014]用于解決技術問題的手段
[0015]因此，本發(fā)明的發(fā)明人潛心研究，結果發(fā)現(xiàn)，在具有2個以上的孔的培養(yǎng)容器中，通過將各孔的內表面使用水溶性樹脂進行細胞低粘附化處理或細胞非粘附化處理、并且形成為規(guī)定的形狀，能夠生成細胞凝集塊溶劑，其結果能夠實現(xiàn)上述目的，從而完成了本發(fā)明。
[0016]S卩，上述目的可通過下述(I)?(4)中記載的本發(fā)明來實現(xiàn)。
[0017](I) 一種類胚體形成用培養(yǎng)容器，其具有2個以上的孔，其特征在于:
[0018]上述孔具有垂直方向的截面為大致U字形狀的底部和大致圓形的開口部，并且，上述底部內表面的至少曲面部分為細胞低粘附性的，并且上述底部內表面的曲率半徑(R’ )為1.0mm以上3.5mm以下，
[0019]上述細胞低粘附性的表面通過使用水溶性樹脂的細胞低粘附化處理或細胞非粘附化處理而形成。
[0020](2)如(I)中記載的類胚體形成用培養(yǎng)容器，其特征在于，上述水溶性樹脂為由下述式(Ia)或(Ib)表示的化合物: [0021]
【權利要求】
1.一種類胚體形成用培養(yǎng)容器，其具有2個以上的孔，其特征在于: 所述孔具有垂直方向的截面為大致U字形狀的底部和大致圓形的開口部，并且，所述底部內表面的至少曲面部分為細胞低粘附性的，并且所述底部內表面的曲率半徑R’為1.0mm以上3.5mm以下， 所述細胞低粘附性的表面通過使用水溶性樹脂的細胞低粘附化處理或細胞非粘附化處理而形成。
2.如權利要求1所述的類胚體形成用培養(yǎng)容器，其特征在于: 所述水溶性樹脂為由下述式(Ia)或(Ib)表示的化合物:
3.如權利要求1或2所述的類胚體形成用培養(yǎng)容器，其特征在于: 在所述孔的最下部表面，內設有至少一個具有細胞低粘附性的表面的凹陷。
4.如權利要求1?3中任一項所述的類胚體形成用培養(yǎng)容器，其特征在于:所述各孔的內表 面整體為細胞低粘附性的。
【文檔編號】C12M3/00GK103443264SQ201280014035
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2012年3月28日 優(yōu)先權日:2011年3月30日
【發(fā)明者】佐倉武司, 塚田亮平 申請人:住友電木株式會社