細(xì)胞分類系統(tǒng)和方法
【專利摘要】本文提供改進(jìn)的細(xì)胞分類系統(tǒng)和方法。這些系統(tǒng)和方法提供自穩(wěn)定分類器射流以進(jìn)行自動(dòng)化校準(zhǔn)，并解決細(xì)胞分類系統(tǒng)漂移的問(wèn)題。所提出的系統(tǒng)和方法利用細(xì)胞分類器中的電路系統(tǒng)使得可以自動(dòng)確定和設(shè)置電荷延遲間隔。這些電路可連續(xù)地設(shè)置、監(jiān)測(cè)和調(diào)節(jié)時(shí)間延遲，從而獲得完全自動(dòng)、自主、全套的自穩(wěn)定分類器射流。
【專利說(shuō)明】細(xì)胞分類系統(tǒng)和方法
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002]依據(jù)35U.S.C.§ 119(e)，本申請(qǐng)要求2011年4月29日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)第61/480，872號(hào)的提交日期的優(yōu)先權(quán)；并將所述申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容以引用的方式并入本文。
[0003]引言
[0004]本發(fā)明關(guān)于流式細(xì)胞分析儀和用于粒子(如細(xì)胞)的高速識(shí)別和分類的儀器。
[0005]流式細(xì)胞分析法是諸如細(xì)胞和構(gòu)成分子的生物粒子的分析和單離的有用方法。因此，其具有廣泛的診斷和治療應(yīng)用性。所述方法利用流體流線性偏析粒子，使其可以單行形式通過(guò)檢測(cè)設(shè)備?？筛鶕?jù)在流體流中的位置和可檢測(cè)標(biāo)記物的存在性區(qū)分個(gè)別細(xì)胞。因此，流式細(xì)胞分析儀可用于產(chǎn)生一群生物粒子的診斷概況。
[0006]已通過(guò)給流式細(xì)胞分析儀增加分類或收集能力來(lái)實(shí)現(xiàn)生物粒子的單離。在偏析流中被檢測(cè)到具有一種或多種所需特性的粒子通過(guò)機(jī)械或電學(xué)被移除而從樣品流個(gè)別地單離。這種流動(dòng)分類方法已被用于分類不同類型的細(xì)胞、針對(duì)動(dòng)物育種分離帶有X和Y染色體的精子、分類用于基因分析的染色體和從復(fù)雜生物群?jiǎn)坞x特定生物體。
[0007]常見(jiàn)流動(dòng)分類技術(shù)利用液滴分類，其中使含有線性偏析粒子的流體流斷裂成液滴和使含有受關(guān)注粒子的液滴帶電和通過(guò)電場(chǎng)，使其偏轉(zhuǎn)到收集管中。電流液滴分類系統(tǒng)能夠使流體流以每秒100，000滴的速率形成液滴，然后使液滴通過(guò)具有小于100微米直徑的噴嘴。液滴分類要求在離噴嘴尖端的固定距離處使液流斷裂成液滴。所述距離一般為離噴嘴尖端幾毫米而且可通過(guò)在預(yù)定頻率下振蕩噴嘴尖端維持流體流不被擾動(dòng)。
[0008]一般來(lái)說(shuō)，在液流中的線性偏析粒子是在通過(guò)正好位于噴嘴尖端下方的觀察點(diǎn)時(shí)被特征化。一旦粒子被識(shí)別為符合`一個(gè)或多個(gè)所需標(biāo)準(zhǔn)，便可預(yù)測(cè)到達(dá)液滴斷裂點(diǎn)并從液流斷裂成液滴的時(shí)間。理想上，在含有所選擇粒子的液滴從液流斷裂的前一刻將短暫電荷施加到流體流且隨后在液滴斷開(kāi)后立即接地。待分類的液滴在從流體流斷裂開(kāi)始保持帶有電荷，而且所有其它液滴保持不帶電。帶電液滴因電場(chǎng)而從其它液滴的下行軌線向一旁偏轉(zhuǎn)并被收集到樣品管中。不帶電液滴直接落入排水管中。
[0009]流體流中的擾動(dòng)，包括由存在于常見(jiàn)生物樣品中的粒子尺寸的差異或細(xì)胞分析儀組件的漂移導(dǎo)致的湍流會(huì)顯著影響預(yù)測(cè)含有受關(guān)注粒子的液滴的能力。對(duì)含有粒子的液滴的不正確預(yù)測(cè)可導(dǎo)致通常以少量存在于生物樣品中的有用粒子損失。甚至在準(zhǔn)確預(yù)測(cè)液滴內(nèi)含物的能力上的輕微缺陷也可使所需粒子部分被不需要的粒子污染，從而損害所述部分的品質(zhì)或?qū)е虏贿m合用于治療施與。
[0010]雖然診斷性流式細(xì)胞分析儀已經(jīng)可常用于各種不同環(huán)境，但流動(dòng)分類更為復(fù)雜而且主要限制于配有專門操作人員的核心設(shè)施?，F(xiàn)時(shí)，流動(dòng)分類器需要進(jìn)行相對(duì)復(fù)雜設(shè)置和對(duì)準(zhǔn)過(guò)程，這通常需要由訓(xùn)練有素的操作人員來(lái)完成。雖然已通過(guò)自動(dòng)化和簡(jiǎn)化大量地改進(jìn)了流動(dòng)分析儀的易用性，但對(duì)流動(dòng)分類器的大部分改進(jìn)采取的是提高分類速度和增大所使用的參數(shù)數(shù)量。速度的提高和參數(shù)數(shù)量的增加造成了復(fù)雜度增大并影響流動(dòng)分類器所需的準(zhǔn)確度。
[0011]例如，在常見(jiàn)細(xì)胞分類系統(tǒng)中，操作人員需要準(zhǔn)確地設(shè)置在激光與射流的交點(diǎn)(即，激光-射流-交點(diǎn)(LJI))處的事件(例如，細(xì)胞檢測(cè))與將電荷脈沖施加到射流之間的延遲時(shí)間。電荷脈沖與含有測(cè)定細(xì)胞的液滴從主射流分離的時(shí)間點(diǎn)應(yīng)在斷裂點(diǎn)(BOP)處重疊。現(xiàn)時(shí)，這個(gè)時(shí)間延遲調(diào)節(jié)是在分類前通過(guò)手動(dòng)完成，造成了分類的準(zhǔn)確度和純度受主觀標(biāo)準(zhǔn)影響。此外，由于時(shí)間延遲是在分類前調(diào)節(jié)，所以很容易因分類期間發(fā)生壓力和溫度變化而漂移。
[0012]發(fā)明概述
[0013]本文提供改進(jìn)的細(xì)胞分類系統(tǒng)和方法。這些系統(tǒng)和方法提供自穩(wěn)定分類射流以進(jìn)行自動(dòng)校準(zhǔn)并解決細(xì)胞分類系統(tǒng)漂移的問(wèn)題。所提出的系統(tǒng)和方法使得可以利用細(xì)胞分類器中的電路系統(tǒng)自動(dòng)確定和設(shè)置電荷延遲間隔(CDI)。這些電路可持續(xù)地設(shè)置、監(jiān)測(cè)和調(diào)節(jié)時(shí)間延遲，從而獲得完全自動(dòng)、自主、全套的自穩(wěn)定分類器射流。
[0014]本文還提出用于自動(dòng)確定射流斷裂點(diǎn)的相位(PBP)的系統(tǒng)和方法，從而使得可以知曉含有細(xì)胞的液滴何時(shí)從射流分離。通過(guò)將所提出的系統(tǒng)和方法與用于確定當(dāng)事件(例如，細(xì)胞)通過(guò)激光與細(xì)胞分類器(如美國(guó)專利第7，679，039號(hào)所描述，并將所述專利以引用其全文的方式并入本文)的射流的交點(diǎn)時(shí)液滴驅(qū)動(dòng)信號(hào)的相位的方法組合，可將測(cè)定點(diǎn)(例如，在LJI)與射流斷裂點(diǎn)(BOP)之間的距離設(shè)置并維持在獲得整數(shù)(η)液滴下。
[0015]例如，提出在固定LJI和BOP后用于確定η的方法。所有計(jì)算是在閉合反饋回路內(nèi)由實(shí)施相位和距離感測(cè)的電路系統(tǒng)完成。本文所描述的本發(fā)明組合首次獲得可自動(dòng)和自主設(shè)置其斷裂點(diǎn)、液滴延遲和定時(shí)脈沖電荷信號(hào)的設(shè)備。由于計(jì)算是在反饋回路內(nèi)完成，所以這個(gè)系統(tǒng)穩(wěn)定而且會(huì)針對(duì)溫度和壓力變化實(shí)施自主校正。
[0016]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，為了測(cè)定BOP的時(shí)間，首先，使收集液滴流的排水管絕緣。然后，利用電流到電壓轉(zhuǎn)換器(CVC)將排水管接地。在偏轉(zhuǎn)板關(guān)閉的情況下，將電荷置于液滴流上。電荷將被液滴帶到排水管。電荷將經(jīng)由CVC電路流到大地，從而產(chǎn)生在電路中讀出的電壓。只有在液滴從射流分離時(shí)將電壓施加給射流，液滴才會(huì)帶有電荷。如果采用極短脈沖(持續(xù)時(shí)間只占液滴循環(huán)`周期的一部分)將電荷置于液流上，那么液滴流只在電荷脈沖與液滴的斷裂時(shí)機(jī)一致的情況下才帶有電荷?，F(xiàn)在可調(diào)節(jié)液滴驅(qū)動(dòng)信號(hào)的振幅，使液滴斷裂點(diǎn)與射流激光交點(diǎn)相互分隔整數(shù)個(gè)液滴周期(LJI信號(hào)與電荷脈沖處于零相位差同步)，方法是周期性地實(shí)施以下過(guò)程:(1)停用偏轉(zhuǎn)板；(2)在激光射流交點(diǎn)處與信號(hào)同步地施加瞬時(shí)電荷；和(3)調(diào)節(jié)驅(qū)動(dòng)振幅以獲得最大漏極電流。
[0017]儀器可自動(dòng)且快速地調(diào)節(jié)其液滴驅(qū)動(dòng)振幅，使事件測(cè)定與液滴形成之間的時(shí)間保持恒定。一旦液滴斷裂與LJI點(diǎn)處的液滴驅(qū)動(dòng)頻率同步，便可確定事件測(cè)定與斷裂點(diǎn)之間的時(shí)間間隔長(zhǎng)度。在一個(gè)實(shí)施方案中，將液滴驅(qū)動(dòng)設(shè)置成優(yōu)選頻率f\。使事件測(cè)定與瞬時(shí)電荷之間的時(shí)間延遲維持恒定(dth增大液滴驅(qū)動(dòng)頻率，同時(shí)使液滴振幅維持恒定，直至電荷脈沖再次與BOP—致(可通過(guò)觀察漏極電流檢測(cè))。記錄這個(gè)現(xiàn)象出現(xiàn)時(shí)的頻率f2。必須保持以下關(guān)系:
[0018]dt = η I fI
[0019]dt = (η+1) If:
[0020]因此，LJI與BOP之間的液滴循環(huán)數(shù)η必須為:
[0021](?2~?ι)[0022]所有相關(guān)信號(hào)均可通過(guò)計(jì)算機(jī)調(diào)節(jié)或可在閉合反饋回路中保持穩(wěn)定。因此，可利用儀器中的電路系統(tǒng)使射流的所有性質(zhì)保持恒定。為了使所述方法更準(zhǔn)確，可在多個(gè)頻率(例如，針對(duì)n-2、n-l、n+l和n+2的那些頻率)下完成自動(dòng)延遲計(jì)算?？赏ㄟ^(guò)回歸分析確定η的準(zhǔn)確值。
[0023]附圖簡(jiǎn)述
[0024]并入本文中的附圖構(gòu)成說(shuō)明書(shū)的一部分。結(jié)合所書(shū)寫(xiě)的描述，這些圖還用于解釋根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)和方法的原理，并幫助相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員實(shí)現(xiàn)這些系統(tǒng)和方法并加以使用。
[0025]圖1是細(xì)胞分類系統(tǒng)的示意圖。
[0026]圖2是概述根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的方法的流程圖。
[0027]圖3是概述根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的方法的流程圖。
[0028]發(fā)明詳述
`[0029]下文將參考圖示細(xì)胞分類系統(tǒng)的示例性實(shí)施方案的附圖加以詳細(xì)描述。存在其他實(shí)施方案。可在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下對(duì)本文所描述的實(shí)施方案進(jìn)行修改。因此，以下詳細(xì)描述不意欲具限制性。
[0030]圖1是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的細(xì)胞分類系統(tǒng)100的示意圖。如圖1所示，液滴形成變換器(例如，壓電振蕩器)102被耦接到流體導(dǎo)管，如噴嘴101。在噴嘴101內(nèi)，鞘層流體104將樣品流體106水力聚集成液流108。在液流108內(nèi)，粒子(例如，細(xì)胞)排列成一行穿過(guò)激光-液流交點(diǎn)110 (例如，LJI)，并被照射源(例如，激光)112照射。壓電振蕩器102振動(dòng)以導(dǎo)致液流108斷裂成多個(gè)液滴109。
[0031]在操作時(shí)，事件檢測(cè)器114識(shí)別受關(guān)注粒子(或受關(guān)注細(xì)胞)何時(shí)穿過(guò)激光-液流交點(diǎn)110。事件檢測(cè)器114饋入定時(shí)電路128，經(jīng)此饋入瞬時(shí)電荷電路130。在液滴斷裂點(diǎn)，在得知定時(shí)液滴延遲(At)后，將瞬時(shí)電荷施加到液流，使受關(guān)注液滴帶上電荷。隨后通過(guò)激活偏轉(zhuǎn)板(未示出)以使液滴偏轉(zhuǎn)到收集管中的方式分類帶電液滴。然而，如圖1所示，液滴被收集到排水管接收器138中。
[0032]液滴邊界檢測(cè)器116用于自動(dòng)確定當(dāng)受關(guān)注粒子通過(guò)激光-液流交點(diǎn)110時(shí)液滴驅(qū)動(dòng)信號(hào)的相位。示例性液滴邊界檢測(cè)器描述在美國(guó)專利第7，679，039號(hào)中，所述專利是以引用其全文的方式并入本文。液滴邊界檢測(cè)器116允許儀器準(zhǔn)確地計(jì)算在液滴中每個(gè)被檢測(cè)到的粒子的位置。液滴邊界檢測(cè)器116饋入振幅信號(hào)120和相位信號(hào)118，這些信號(hào)(經(jīng)由放大器122)進(jìn)一步饋入振幅控制電路126和/或頻率控制電路124。振幅控制電路126和/或頻率控制電路124藉此控制壓電振蕩器102。
[0033]細(xì)胞分類系統(tǒng)100還包括電流到電壓轉(zhuǎn)換器(CVC) 134，其被耦接到接收器138。CVC134被構(gòu)造成檢測(cè)進(jìn)入接收器138的帶電粒子的存在性。電阻器136設(shè)置CVC134的電壓/電流比，并提供與在接收器(例如，排水管)138處觀察到的電流成比例的電壓。漏極電流是在電路單元132中被測(cè)定并被提供到處理器140。隨后，處理器140饋入頻率控制電路124。
[0034]細(xì)胞分類系統(tǒng)100可用于提供自穩(wěn)定分類器射流以實(shí)施自動(dòng)校準(zhǔn)，并解決細(xì)胞分類系統(tǒng)漂移的問(wèn)題。所述系統(tǒng)使得可以利用所提供的電路系統(tǒng)自動(dòng)確定和設(shè)置電荷延遲間隔。這些電路可持續(xù)地設(shè)置、監(jiān)測(cè)和調(diào)節(jié)時(shí)間延遲，從而獲得完全自動(dòng)、自主、全套的自穩(wěn)定分類器射流。細(xì)胞分類系統(tǒng)100可按照各種方式使用，如用于實(shí)施下文所進(jìn)一步概述的方法。
[0035]在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種細(xì)胞分類系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括:流體導(dǎo)管；照射源，其被定位成照射存在于所述流體導(dǎo)管中的流體流；電荷電路，其將電荷提供給所述流體流；接收器，其被定位成接收由所述流體流形成的一個(gè)或多個(gè)液滴；和電流檢測(cè)電路，其被耦接到所述接收器。所述系統(tǒng)還可以包括電荷延遲控制單元，其控制所述電荷電路，其中所述電荷延遲控制單元從所述電流檢測(cè)電路接收信號(hào)并基于從所述電流檢測(cè)電路接收到的信號(hào)確定電荷延遲。所述系統(tǒng)還可以包括電流到電壓轉(zhuǎn)換器，其檢測(cè)進(jìn)入所述接收器的帶電液滴的存在性。所述系統(tǒng)還可以包括積分器，其檢測(cè)每單位時(shí)間進(jìn)入所述接收器的液滴數(shù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述接收器是排水管。所述接收器可以電絕緣。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述接收器是液滴收集管。所述液滴收集管可以電絕緣。
[0036]在又一實(shí)施方案中，提供流式細(xì)胞分析儀的電荷延遲控制系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括:電荷電路，其將電荷提供給在所述流式細(xì)胞分析儀中的流體流；電流檢測(cè)電路，其被耦接到接收器，其中所述接收器被定位成接收由所述流體流形成的一個(gè)或多個(gè)液滴；和電荷延遲控制單元，其被可操作耦接到所述電流檢測(cè)電路，其中所述電荷延遲控制單元被構(gòu)造成基于由所述電流檢測(cè)電路測(cè)定的電流確定電荷延遲。所述系統(tǒng)還可以包括:電流到電壓轉(zhuǎn)換器，其檢測(cè)進(jìn)入所述接收器的帶電液滴的存在性；和/或積分器，其檢測(cè)每單位時(shí)間進(jìn)入所述接收器的液滴數(shù)。所述電荷延遲控制單元還可以被構(gòu)造成:(a)在所述流式細(xì)胞分析儀的液滴形成變換器的第一驅(qū)動(dòng)頻率下將瞬時(shí)電荷施加到所述流體流；(b)通過(guò)改變所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)振幅直至在所述接收器處檢測(cè)到最大電流以識(shí)別最佳驅(qū)動(dòng)振幅；(C)通過(guò)增大所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)頻率，同時(shí)繼續(xù)在所述第一驅(qū)動(dòng)頻率下施加所述瞬時(shí)電荷，直至在所述接收器處測(cè)得的電流恢復(fù)到所述最大電流，以識(shí)別第二驅(qū)動(dòng)頻率；和/或Cd)基于所述第一和第二驅(qū)動(dòng)頻率計(jì)算液滴延遲。
[0037]圖2是概述校準(zhǔn)細(xì)胞分類 器，和更具體來(lái)說(shuō)確定被耦接到流體噴嘴的振蕩器的最佳驅(qū)動(dòng)振幅的示例性方法200的流程圖。在步驟202中，取消激活任何偏轉(zhuǎn)板。步驟202是簡(jiǎn)化所提出的方法的任選步驟?？梢圆捎闷D(zhuǎn)板被激活的其它方法。在步驟204中，將振蕩器單元的驅(qū)動(dòng)頻率設(shè)置為恒定頻率(f\)。在步驟206中，在頻率(f\)下將瞬時(shí)電荷施加到液流。隨后在步驟208中測(cè)定在接收器處的電流。如果隨著時(shí)間測(cè)得的電流為最大(或峰值)電流，那么在步驟214中將所述振幅識(shí)別為最佳驅(qū)動(dòng)振幅。然而，如果在接收器處測(cè)得的電流不是最大(或峰值)電流，那么在步驟212中調(diào)節(jié)驅(qū)動(dòng)振幅，并重復(fù)步驟208直至識(shí)別到最佳驅(qū)動(dòng)振幅。
[0038]圖3是概述校準(zhǔn)細(xì)胞分類器和更具體來(lái)說(shuō)確定液滴周期和/或振蕩器單元的最佳驅(qū)動(dòng)頻率的示例性方法300的流程圖。在步驟302中，使最佳驅(qū)動(dòng)振幅(如步驟214所識(shí)別的振幅)維持恒定。在步驟304中，在頻率()下施加瞬時(shí)電荷。隨后在步驟306中將驅(qū)動(dòng)頻率增大到頻率(f2)。在步驟308中，再次測(cè)定在接收器處的電流。在步驟310中，確定在接收器處測(cè)得的電流是否恢復(fù)到“最大電流”，即恢復(fù)到當(dāng)驅(qū)動(dòng)頻率為時(shí)觀察到的電流。在電流恢復(fù)到最大前，將驅(qū)動(dòng)頻率連續(xù)地調(diào)節(jié)到更高頻率f2。當(dāng)在接收器處再次檢測(cè)到最大電流時(shí)，將液滴周期作為的函數(shù)計(jì)算。
[0039]在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種校準(zhǔn)細(xì)胞分類系統(tǒng)的方法，所述方法包括:(a)設(shè)置液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)頻率；(b)在所述驅(qū)動(dòng)頻率下將瞬時(shí)電荷施加到所述流體流；(c)測(cè)定接收在由所述流體流形成的液滴的接收器處的電流；和((1)通過(guò)改變所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)振幅直至在所述接收器處檢測(cè)到最大電流以識(shí)別最佳驅(qū)動(dòng)振幅。所述方法還可以包括(e)通過(guò)增大所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)頻率，同時(shí)繼續(xù)在步驟(a)的驅(qū)動(dòng)頻率下施加所述瞬時(shí)電荷，直至在所述接收器處測(cè)得的電流恢復(fù)到所述最大電流，以識(shí)別第二驅(qū)動(dòng)頻率。所述方法還可以包括:(1)基于在步驟(e)中識(shí)別的驅(qū)動(dòng)頻率和步驟(a)的驅(qū)動(dòng)頻率計(jì)算液滴延遲；(2)使所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)振幅維持恒定在所述最佳驅(qū)動(dòng)振幅下；(3)在步驟(a)前取消激活偏轉(zhuǎn)板；和/或(4)使所述接收器電絕緣。
[0040]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種使細(xì)胞分類器的驅(qū)動(dòng)頻率與液滴形成(或斷裂)頻率同步的方法。所述“驅(qū)動(dòng)頻率”是驅(qū)動(dòng)所述變換器(例如壓電元件)的頻率。所述“液滴形成頻率”或“斷裂頻率”是液滴實(shí)質(zhì)上從液流斷裂的頻率。所述驅(qū)動(dòng)頻率與所述液滴形成頻率會(huì)因外部因素(例如，溫度、壓力等的變化)而變?yōu)椴煌?。然而，?dāng)所述驅(qū)動(dòng)頻率與所述液滴形成頻率同步時(shí)，激光-射流-交點(diǎn)(LJI)與斷裂點(diǎn)(BOP)之間存在整數(shù)個(gè)液滴。系統(tǒng)的驅(qū)動(dòng)頻率為“已知”(即，被設(shè)置好的)變量，但液滴形成頻率為“未知”(即，受外部波動(dòng)影響)變量。
[0041]使所述驅(qū)動(dòng)頻率與所述液滴形成頻率同步的示例性方法包括:Ca)(如果需要)關(guān)閉所述偏轉(zhuǎn)板；(b)在所述驅(qū)動(dòng)頻率(?\)下將瞬時(shí)電荷施加到所述液流；(C)在所述驅(qū)動(dòng)頻率和所述電荷頻率維持恒定在4的情況下，改變驅(qū)動(dòng)振幅。通過(guò)改變驅(qū)動(dòng)振幅同時(shí)使驅(qū)動(dòng)頻率維持恒定，使液滴形成頻率變化。當(dāng)測(cè)得被修改的排水管(或收集管)具有最大漏極電流時(shí)，便知曉已達(dá)到最佳驅(qū)動(dòng)振幅。
[0042]然后，確定液滴延遲。為了確定液滴延遲:(1)使驅(qū)動(dòng)振幅維持恒定在以上步驟(C)所確定的最佳驅(qū)動(dòng)振幅；(2)在充電頻率維持恒定在的情況下，增大系統(tǒng)的驅(qū)動(dòng)頻率，直至在排水管處再次出現(xiàn)最大電流，此時(shí)處于驅(qū)動(dòng)頻率f2 ; (3) LJI與BOP之間的液滴數(shù)為；(4)隨后基于LJI與BOP之間 的液滴數(shù)計(jì)算液滴延遲。
[0043]結(jié)論
[0044]已針對(duì)說(shuō)明和描述的目的提供上述本發(fā)明描述。不希望將本發(fā)明局限或限制于所公開(kāi)的形式?？梢詤⒖忌鲜鼋塘x實(shí)施其它修改和變化。實(shí)施方案經(jīng)過(guò)選擇并加以描述以按照最佳方式解釋本發(fā)明的原理和其實(shí)際應(yīng)用，從而幫助本領(lǐng)域的技術(shù)人員按照最佳方式利用本發(fā)明的各種實(shí)施方案和適合預(yù)期實(shí)際用途的各種修改方案。預(yù)期隨附權(quán)利要求將包括本發(fā)明的其它替代實(shí)施方案；包括等價(jià)結(jié)構(gòu)、組分、方法和方式。
[0045]將明白希望利用【具體實(shí)施方式】章節(jié)解釋權(quán)利要求而非發(fā)明概要和說(shuō)明書(shū)摘要章節(jié)。發(fā)明概要和說(shuō)明書(shū)摘要章節(jié)可以陳述發(fā)明人所預(yù)期的一個(gè)或多個(gè)但非所有本發(fā)明的示例性實(shí)施方案，因此，不希望以任何方式限制本發(fā)明和隨附權(quán)利要求。
[0046]將理解本發(fā)明不限制于本身按照可變化方式描述的特定實(shí)施方案。還將理解本文中所使用的術(shù)語(yǔ)只為描述特定實(shí)施方案，而不是加以限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍只受隨附權(quán)利要求限制。
[0047]在提供值的范圍時(shí)，應(yīng)理解除非另外說(shuō)明，否則本發(fā)明涵蓋在那個(gè)范圍的上限與下限之間精確到下限單位的十分之一的每個(gè)中間值和在那個(gè)聲明范圍中的任何其它聲明或中間值。這些較小范圍的上限和下限可以獨(dú)立地包括在較小范圍中而且還涵蓋于本發(fā)明內(nèi)，受聲明范圍內(nèi)的任何具體排除極限限制。當(dāng)聲明范圍包括一個(gè)或兩個(gè)極限時(shí)，本發(fā)明也包括剔除極限中的一個(gè)或兩個(gè)的范圍。
[0048]某些范圍具有以術(shù)語(yǔ)“約”修飾的數(shù)值。術(shù)語(yǔ)“約”在本文中是用于給受其修飾的準(zhǔn)確數(shù)字提供字面支持，以及提供與受所述術(shù)語(yǔ)修飾的數(shù)字相近或近似的數(shù)字。在確定數(shù)字是否接近或近似于具體引述數(shù)字時(shí)，相近或近似但未引述的數(shù)字可以是在所提供的范疇內(nèi)給出具體引述數(shù)字的實(shí)質(zhì)等價(jià)內(nèi)容的數(shù)字。
[0049]除非另外說(shuō)明，否則本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有為本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所共識(shí)的相同含義。雖然也可以將類似或等價(jià)于本文所描述的任何方法和材料用于實(shí)現(xiàn)或測(cè)試本發(fā)明，但現(xiàn)在描述代表性說(shuō)明性方法和材料。
[0050]在本說(shuō)明書(shū)中引用的所有公開(kāi)和專利是以引用的方式并入本文，如同具體和個(gè)別地引用每個(gè)個(gè)別公開(kāi)或?qū)＠疫@些公開(kāi)和專利是以引用的方式并入本文以公開(kāi)和描述與所引用的公開(kāi)相關(guān)的方法和/或材料。對(duì)任何公開(kāi)的引用是為了陳述在提交日期前的公開(kāi)內(nèi)容而且不應(yīng)理解為承認(rèn)本發(fā)明不享有憑借先前發(fā)明先于這些公開(kāi)的資格。此外，所提供的
【公開(kāi)日】期可以與實(shí)際
【公開(kāi)日】期不同，這需要單獨(dú)確認(rèn)。
[0051]注意，如本文和隨附權(quán)利要求所使用，單數(shù)形式“一”和“所述”包括復(fù)數(shù)形式，除非另外明確說(shuō)明。還應(yīng)注意權(quán)利要求可以被書(shū)寫(xiě)成排除任何任選元件。因此，這份聲明希望作為使用在引述要求元件時(shí)一起使用的排他性術(shù)語(yǔ)，如“僅”、“只”和類似術(shù)語(yǔ)或使用“負(fù)面”限制的先行詞基礎(chǔ)。
[0052]將明白為簡(jiǎn)明起見(jiàn)描述在不同實(shí)施方案中的本發(fā)明的某些特征也可以采用組合形式提供在單個(gè)實(shí)施方案中。相對(duì)地，為簡(jiǎn)明起見(jiàn)描述在單個(gè)實(shí)施方案中的本發(fā)明的各個(gè)特征也可以分開(kāi)或采用任何合適子組合形式提供。實(shí)施方案的所有組合包含于本發(fā)明中而且如同個(gè)別和明確地公開(kāi)各個(gè) 和每個(gè)組合那樣被公開(kāi)，以使這些組合包含可操作方法和/或裝置/系統(tǒng)/套裝。此外，羅列在描述這些變量的實(shí)施方案中的子組合也包含于本發(fā)明中而且如同個(gè)別和明確地在本文中公開(kāi)各個(gè)和每個(gè)化學(xué)基團(tuán)的子組合那樣被公開(kāi)在本文中。
[0053]本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀本公開(kāi)內(nèi)容后將明白，在不脫離本發(fā)明的范圍或精神下，本文中所描述和說(shuō)明的每個(gè)個(gè)別實(shí)施方案具有可以與任何其它幾個(gè)實(shí)施方案的特征輕易分離或組合的組分和特征?？梢园凑帐录囊鲰樞蚧虬凑者壿嬁尚械钠渌樞?qū)嵤┤魏我龇椒ā?br> 【權(quán)利要求】
1.一種細(xì)胞分類系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括: 流體導(dǎo)管； 照射源，其被定位成用以照射存在于所述流體導(dǎo)管中的流體流； 電荷電路，其將電荷提供給所述流體流； 接收器，其被定位成用以接收由所述流體流形成的一個(gè)或多個(gè)液滴；和 電流檢測(cè)電路，其被耦接到所述接收器。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分類系統(tǒng)，其還包括: 電荷延遲控制單元，其控制所述電荷電路，其中所述電荷延遲控制單元從所述電流檢測(cè)電路接收信號(hào)并基于從所述電流檢測(cè)電路接收到的所述信號(hào)確定電荷延遲。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分類系統(tǒng)，其中所述電流檢測(cè)電路還包括: 電流到電壓轉(zhuǎn)換器，其檢測(cè)進(jìn)入所述接收器的帶電液滴的存在性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分類系統(tǒng)，其中所述電流檢測(cè)電路還包括: 積分器，其檢測(cè)每單位時(shí)間進(jìn)入所述接收器的液滴數(shù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分類系統(tǒng)，其中所述接收器是排水管。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細(xì)胞分類系統(tǒng)，其中所述排水管電絕緣。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述`的細(xì)胞分類系統(tǒng)，其中所述接收器是液滴收集管。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的細(xì)胞分類系統(tǒng)，其中所述液滴收集管電絕緣。
9.一種校準(zhǔn)細(xì)胞分類系統(tǒng)的方法，所述方法包括: (a)設(shè)置液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)頻率； (b)在所述驅(qū)動(dòng)頻率下將瞬時(shí)電荷施加到所述流體流； (c)測(cè)定在接收由所述流體流形成的液滴的接收器處的電流；和 (d)通過(guò)改變所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)振幅直至在所述接收器處檢測(cè)到最大電流，以識(shí)別最佳驅(qū)動(dòng)振幅。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其還包括: (e)通過(guò)增大所述液滴形成變換器的所述驅(qū)動(dòng)頻率，同時(shí)繼續(xù)在步驟(a)的所述驅(qū)動(dòng)頻率下施加所述瞬時(shí)電荷，直至在所述接收器處測(cè)得的電流恢復(fù)至所述最大電流，以識(shí)別第二驅(qū)動(dòng)頻率。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其還包括: 基于在步驟(e)中識(shí)別的所述驅(qū)動(dòng)頻率和步驟(a)的所述驅(qū)動(dòng)頻率計(jì)算液滴延遲。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其還包括: 使所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)振幅維持恒定在所述最佳驅(qū)動(dòng)振幅下。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其還包括: 在步驟(a)前取消激活偏轉(zhuǎn)板。
14.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其還包括: 使所述接收器電絕緣。
15.一種流式細(xì)胞分析儀的電荷延遲控制系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括: 電荷電路，其將電荷提供給在所述流式細(xì)胞分析儀中的流體流； 電流檢測(cè)電路，其被耦接到接收器，其中所述接收器被定位成用以接收由所述流體流形成的一個(gè)或多個(gè)液滴；和電荷延遲控制單元，其被可操作耦接到所述電流檢測(cè)電路，其中所述電荷延遲控制單元被構(gòu)造成基于由所述電流檢測(cè)電路測(cè)定的電流確定電荷延遲。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的電荷延遲控制系統(tǒng)，其中所述電流檢測(cè)電路還包括: 電流到電壓轉(zhuǎn)換器，其檢測(cè)進(jìn)入所述接收器的帶電液滴的存在性。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的電荷延遲控制系統(tǒng)，其中所述電流檢測(cè)電路還包括: 積分器，其檢測(cè)每單位時(shí)間進(jìn)入所述接收器的液滴數(shù)。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的電荷延遲控制系統(tǒng)，其中所述電荷延遲控制單元還被構(gòu)造成: (a)在所述流式細(xì)胞分析儀的液滴形成變換器的第一驅(qū)動(dòng)頻率下將瞬時(shí)電荷施加到所述流體流；和 (b)通過(guò)改變所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)振幅直至在所述接收器處檢測(cè)到最大電流，以識(shí)別最佳驅(qū)動(dòng)振幅。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的電荷延遲控制系統(tǒng)，其中所述電荷延遲控制單元還被構(gòu)造成通過(guò)增大所述液滴形成變換器的驅(qū)動(dòng)頻率，同時(shí)繼續(xù)在所述第一驅(qū)動(dòng)頻率下施加所述瞬時(shí)電荷，直至在所述接收器處測(cè)得的電流恢復(fù)至所述最大電流，以識(shí)別第二驅(qū)動(dòng)頻率。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的電荷延遲控制系統(tǒng)，其中所述電荷延遲控制單元還被構(gòu)造成基于所述第一和第二驅(qū)動(dòng)頻率計(jì)算液`滴延遲。
【文檔編號(hào)】C12M1/42GK103517980SQ201280019150
【公開(kāi)日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2012年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月29日
【發(fā)明者】蓋爾·范·丹·恩格 申請(qǐng)人:貝克頓·迪金森公司