缺失d-乳酸產(chǎn)生的約氏乳桿菌菌株cncm i-1225的天然衍生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明一般地涉及益生菌領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及缺失D-乳酸產(chǎn)生的約氏乳桿菌（Lactobacillus?johnsonii）菌株CNCM?I-1225的天然衍生物。
【專利說明】缺失D-乳酸產(chǎn)生的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍
生物
[0001]本發(fā)明一般地涉及益生菌領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及缺失D-乳酸產(chǎn)生的約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)菌株 CNCM 1-1225 的天然衍生物。
[0002]人分離株約氏乳桿菌CNCM 1-1225也稱為約氏乳桿菌NCC533或者嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) La1、或者約氏乳桿菌 Ljl (Bernet-Camard, M.F.，等人，(1997) Appl.Environ.Microbiol.63，2747-2753)是目前非常成功地以商標(biāo)Lcl商品化的益生菌。
[0003]約氏乳桿菌CNCM 1-1225具有幾種明確記錄的健康益處，例如，免疫調(diào)節(jié)或病原體抑制的活性(Haller，D.，等人，2000，Infect.1mmun.68:752-759 ；Haller, D.，等人，2000，Gut47:79-87 ;或 Ibnou-Zekri, N.，等人，2003，Infect.1mmun.71:428-436)和長期的安全
使用歷史。
[0004]限制約氏乳桿菌CNCM 1-1225在一些產(chǎn)品種類，例如在用于幼兒和嬰兒的產(chǎn)品中的應(yīng)用的一個方面是從糖的發(fā)酵中主要地產(chǎn)生了 D-乳酸同分異構(gòu)體。例如，如果在MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，那么約氏乳桿菌CNCM1-1225將乳糖發(fā)酵成60%: 40%比例的D-和L-乳酸。
[0005]由于3歲以下嬰兒有限的D-乳酸消除(這可能導(dǎo)致D-乳酸中毒)，所以CODEXInfant Formula Directive對3歲以下嬰兒消費的D-乳酸和產(chǎn)生D-乳酸的細菌給出了建議。
[0006]支持該結(jié)論的證據(jù)是有限的，并且所述證據(jù)主要是基于食物中D-乳酸的存在，并且沒有基于產(chǎn)生D-乳酸細菌(其是胃腸道的天然寄居菌)的施用。
[0007]因此，幾篇文獻對該觀點`提出了質(zhì)疑(Connolly，E.等人，NTRAfoods3 (3),37-49,2004 ；Haschke-Becher, E.，等人，2008, Ann.Nutr.Metab.53:240-244, Mack, D.R.,2004,Can.J.Gastroenterol.18:671-675),但到目前為止，CODEX Infant Formula Directive的建議仍沒有改變。
[0008]CODEX基本上排除了將產(chǎn)生D-乳酸的益生菌作為嬰兒配方食品中的補充劑，但鼓勵只產(chǎn)生L-乳酸的菌株的遺傳改造。此類研發(fā)的實例是產(chǎn)生經(jīng)遺傳修飾的生物(GM0)，特別是經(jīng)遺傳修飾的約氏乳桿菌菌株，其中分離了 d-乳酸脫氫酶(D-LDH)基因(ldhD)，并通過基因替換，將IdhD基因體外截短的克隆拷貝用于失活基因組拷貝(Lapierre，L.，等人，1999, Appl.Environ.Microbiol.65:4002-4007)。
[0009]產(chǎn)生的這種經(jīng)遺傳改造的菌株僅用于實驗室目的，并且從未用于食品中，因為使用重組DNA技術(shù)，已經(jīng)改變了所述菌株的遺傳物質(zhì)，因此認為該菌株是GM0。
[0010]然而，期望存在這樣的可能性，允許約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的大量健康益處也可用于目前并不建議消費D-乳酸或者產(chǎn)生D-乳酸的細菌的個體。
[0011]因此，本領(lǐng)域存在天然益生菌菌株，特別是約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物的強烈需求，所述約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物缺失了 D-乳酸產(chǎn)生，但盡管如此仍可存活。
[0012]本發(fā)明人處理了這些需求。[0013]因此，本發(fā)明的目的是為本領(lǐng)域提供約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的衍生物，其還可以應(yīng)用于嬰幼兒產(chǎn)品，同時考慮CODEX Infant Formula Directive的當(dāng)前規(guī)則,所述約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的衍生物是天然的且不會被認為是GM0。
[0014]本發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)，他們可以通過獨立權(quán)利要求的主題實現(xiàn)本發(fā)明的目的。從屬權(quán)利要求進一步發(fā)展了本發(fā)明的理念。
[0015]本發(fā)明人研究了分離天然的(非GM0)、活的和遺傳上穩(wěn)定的約氏乳桿菌Lal的變體的可能性，所述約氏乳桿菌Lal的變體只產(chǎn)生L-乳酸。
[0016]基因組序列的改變以相對低的頻率天然地發(fā)生，例如由于損傷DNA的錯誤修復(fù)或者DNA復(fù)制錯誤而發(fā)生。
[0017]為了尋找約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的此類天然衍生物，本發(fā)明人篩選了大約21-000個約氏乳桿菌CNCM 1-1225菌落，并且已經(jīng)鑒定了兩個可以實現(xiàn)本發(fā)明的目的的天然D-乳酸缺失變體。
[0018]本發(fā)明人還測定了 MRS培養(yǎng)上清液中的D-和L-乳酸濃度，并且顯示與培養(yǎng)上清液中總的乳酸濃度相比，相對的D-乳酸濃度低于4% ;特別地，在一種情況下3.7%，并且在第二種情況下0%。
[0019]DNA序列分析鑒定了乳酸脫氫酶基因中主要的點突變，所述點突變改變了酶的氨基酸序列，因此改變了酶的催化性質(zhì)。
[0020]兩種天然衍生物都顯示是可存活的并且穩(wěn)定的，并且沒有回復(fù)突變至D-乳酸產(chǎn)生的實例。
[0021]因此，本發(fā)明的一個實施方案是約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物，其中所述約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的衍生物缺失D-乳酸產(chǎn)生。
[0022]據(jù)本發(fā)明人了解，這是第一次提供了缺失D-乳酸產(chǎn)生的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物。
[0023]對于本發(fā)明的目的，“缺失D-乳酸產(chǎn)生”指的是與總?cè)樗嵘a(chǎn)量相比，菌株產(chǎn)生少于5%，優(yōu)選地少于4%，和理想地0%的D-乳酸?？梢栽跓o細胞培養(yǎng)上清液中測量D-和L-乳酸濃度。
[0024]由約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物產(chǎn)生的乳酸的總量最初與細胞生長相關(guān)。當(dāng)細胞進入穩(wěn)定期并停止分裂時，它們繼續(xù)代謝糖并產(chǎn)生更多的乳酸。然而，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生的D-和L-乳酸的比例是恒定的。
[0025]約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的“天然”衍生物指的是不認為是GMO的菌株。例如可以通過篩選經(jīng)歷了天然發(fā)生的基因組序列改變(例如，由于損傷DNA的錯誤修復(fù)或者DNA復(fù)制錯誤)的菌落，來獲得此種天然衍生物。通過使菌落經(jīng)歷脅迫條件，例如通過應(yīng)用甲磺酸乙酯，EMS可以增加這種錯誤的天然發(fā)生。
[0026]對于本申請的目的，術(shù)語“GM0”應(yīng)當(dāng)根據(jù)2001年3月12日的DIRECTIVE2001/18/EC OF THE EUROPEAN PARLIAMENT AND OF THE COUNCIL對于故意將經(jīng)遺傳修飾的生物釋放到環(huán)境中和撤銷的Council Directive90/220/EEC定義。因此，‘經(jīng)遺傳修飾的生物(GM0)’指的是除人類之外的這樣的生物，其中遺傳物質(zhì)已經(jīng)通過非天然發(fā)生(交配和/或非天然重組)的方式而改變。 [0027]就該定義而言，至少通過使用以下技術(shù)發(fā)生遺傳修飾:[0028](I)重組核酸技術(shù)，其涉及通過將以生物之外的任一種方法產(chǎn)生的核酸分子插入到任一種病毒、細菌質(zhì)?；蚱渌d體系統(tǒng)中來形成遺傳物質(zhì)的新組合，并且將所述遺傳物質(zhì)的組合摻入到它們并非天然存在，但能繼續(xù)增殖的宿主生物中；
[0029](2)涉及將在生物之外制備的可遺傳物質(zhì)直接引入到生物中的技術(shù)，其包括顯微注射法、巨量注射法和微囊化作用；或
[0030](3)細胞融合(包括原生質(zhì)體融合)或雜交技術(shù)，其中使用并非天然存在的方法，通過融合兩個或多個細胞形成具有可遺傳的遺傳物質(zhì)的新組合的活細胞。
[0031]如果菌株具有至少99.95%，例如至少99.99%，優(yōu)選地至少99.995%的核酸同一性，那么認為菌株是約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的“衍生物”。例如，如果與約氏乳桿菌CNCM1-1225的核酸序列相比，菌株具有不超過500個，例如不超過100個，優(yōu)選地不超過50個的核酸改變，那么認為菌株是約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的衍生物。
[0032]本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物在負責(zé)D-乳酸缺失表型的d-ldh基因中顯示出突變。
[0033]因此，約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物可能具有改變的D-乳酸脫氫酶序列。例如，約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物可以包含在D-乳酸脫氫酶序列的氨基酸位置153處甘氨酸至天冬氨酸的氨基酸改變和/或在氨基酸位置204處絲氨酸至亮氨酸的氨基酸改變。
[0034]這種改變明顯地改變了 D-乳酸脫氫酶的功能，以致產(chǎn)生了極少的D-乳酸或者不會產(chǎn)生D-乳酸。
[0035]D-乳酸脫氫酶蛋白質(zhì)序列的改變基于D-乳酸脫氫酶基因的核酸序列的改變。
·[0036]使得到的酶失活的D-乳酸脫氫酶基因的核酸序列的任何天然改變都可以實現(xiàn)本發(fā)明的主題。此外，野生型序列或者一部分或整個D-乳酸脫氫酶基因內(nèi)一個或多個連續(xù)核苷酸的一個或多個缺失均可以實現(xiàn)本發(fā)明的主題。
[0037]本發(fā)明人分析了本發(fā)明約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物中D-乳酸脫氫酶基因的核酸序列。
[0038]因此，本發(fā)明還涉及約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物，其中在約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物中D-乳酸脫氫酶基因的核酸序列在核酸位置498處包含G至A的轉(zhuǎn)變和/或在核酸位置651處包含C至T的轉(zhuǎn)變。
[0039]盡管導(dǎo)致D-乳酸脫氫酶失活的此種改變在大自然中可以以低頻率自發(fā)地發(fā)生，但其是隨機的，并且可以以相同的頻率修復(fù)回親本序列(野生型)。
[0040]如果失活的基因賦予了變體生長缺陷，那么這種修復(fù)頻率可以甚至更高?？紤]到從培養(yǎng)物保藏到最終產(chǎn)物之間的多次傳代，重要的是此種改變是穩(wěn)定的，特別地因為單堿基對改變在遺傳上比缺失更不穩(wěn)定。
[0041 ] 有利地，還發(fā)現(xiàn)這些改變是穩(wěn)定的。
[0042]實現(xiàn)本發(fā)明目的的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物的兩個實例是分離的、純化的，并且詳細表征的菌株。
[0043]因此，本發(fā)明涉及約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物，其選自約氏乳桿菌CNCM 1-4434 和約氏乳桿菌 CNCM 1-4441。
[0044]約氏乳桿菌CNCM 1-4434和約氏乳桿菌CNCM 1_4441都在布達佩斯條約下于2011年 2 月 8 日保藏于 Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM),Institut Pasteur, 25Rue du Docteur Roux, F_75724Paris Cedexl5,法國。
[0045]兩株菌株都是被完全測序的。
[0046]約氏乳桿菌CNCM 1-1225在布達佩斯條約下于1992年6月30日保藏于CNCM。
[0047]約氏乳桿菌CNCM 1-4434含有總共37個核酸改變，其包括單堿基對缺失。這包括D-乳酸脫氫酶基因序列的期望改變(推測其負責(zé)該菌株缺失的D-乳酸產(chǎn)生)和原噬菌體Lj965中可以認為是‘自私’ DNA的基因的兩個改變(不可能影響細菌的生理)。剩余的基因/預(yù)測蛋白質(zhì)在大體上僅是不精確注釋的，但幾種改變影響對細菌生長更加重要的基因。存在經(jīng)預(yù)測其功能對生長是必需的6個基因的改變，所述基因即LJ1108-DNA拓撲異構(gòu)酶1、LJl 197 -青霉素結(jié)合蛋白1A、LJ1283 -乳清酸磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶、LJ1492-DNA聚合酶IIIa亞基、LJ1493-脯氨酰-tRNA合成酶和LJ1600 -肽鏈釋放因子3。全部這些功能對細菌的生長都是必需的，因為可能除LJ1283外，不能通過生長培養(yǎng)基補充它們。通過在MRS肉湯中，CNCM 1-4434以與Lal相似的速率生長，以及CNCM 1-4434在MRS和工業(yè)培養(yǎng)基中也達到的相似的最終CFU，證實各個以及積累的改變的作用對生長沒有顯著的不利影響。值得注意的最后第二個改變是LJ0854 - β_半乳糖苷酶小亞基，其不會影響乳糖發(fā)酵。
[0048]約氏乳桿菌CNCM 1-4441含有總共27個核酸改變，其包括D-乳酸脫氫酶基因的期望改變(在該菌株中負責(zé)缺失D-乳酸產(chǎn)生)，在原噬菌體Lj965和Lj928中的各一個改變和插入序列ISLjo5的轉(zhuǎn)座酶的改變。存在經(jīng)預(yù)測其功能對生長重要的3個基因的改變，所述基因即LJ1009 -延伸因子Tu、LJ1516 -信號識別顆粒蛋白和LJ1600 -肽鏈釋放因子
3。盡管這些單個以及組合的改變，在MRS和工業(yè)培養(yǎng)基中，與Lal相比，約氏乳桿菌CNCM1-4441達到了相似的最終CFU。
[0049]本發(fā)明還擴展至根據(jù)本發(fā)明的`約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物，其中約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物以在生物學(xué)上純的培養(yǎng)物存在。
[0050]根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物可以根據(jù)任何合適的方法培養(yǎng)，并可以通過例如冷凍干燥或者噴霧干燥另外地制備以添加至本發(fā)明的組合物中。
[0051]益生菌菌株約氏乳桿菌CNCM 1-1225提供了許多明確記錄的健康益處，其中一些在上文中進行了詳述。
[0052]“益生菌”指的是對宿主的健康或安康具有有益作用的微生物細胞制備物或者微生物細胞的組分。(Salminen S,等人“Probiotics:how should they be def ined”TrendsFood Sc1.Technol.1999:10107_10)。
[0053]就提供的健康益處而言，基本上可以把根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物看作生物等效物(bioequivalent)。
[0054]科學(xué)工作顯示，從約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的生物學(xué)上純的培養(yǎng)物分離的無細胞培養(yǎng)上清液也具有幾種健康益處(參見例如，Bernet-Camard, M._F.，等人，1997，APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY，第 2747 - 2753 頁)。
[0055]因此，本發(fā)明還擴展至從根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的生物學(xué)上純的天然衍生物的培養(yǎng)物分離的無細胞培養(yǎng)上清液。
[0056]由于本發(fā)明約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物和無細胞培養(yǎng)上清液具有大量健康益處，因此可以將它們用于治療或預(yù)防人體或動物體的病癥。
[0057]因此，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物和無細胞培養(yǎng)上清液的組合物，其用于制備在通過治療處理人體或動物體的方法中使用的組合物。
[0058]本發(fā)明還涉及包含根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物和無細胞培養(yǎng)上清液的組合物的用途，其用于制備藥物組合物或者藥物。
[0059]已經(jīng)對約氏乳桿菌CNCM 1-1225的益生菌相關(guān)活性進行了大量的研究，所述益生菌相關(guān)活性包括免疫調(diào)節(jié)(Haller, D.，等人，2000, Infect.Tmmun.68, 752-759 ；Haller,
D.，等人，2000，Gut47,79-87 ；Ibnou-Zekri, N.，等人，2003，Infect.1mmun.71，428-436)、病原體抑制(Bernet，M.F.，等人，1994，Gut35，483-489)和上皮細胞附著(Neeser，J.R.，等人,2000, GlycobiologylO, 1193-1199 ；Granato, D.，等人，1999, Appl.Environ.Microbiol.65，1071-1077)。
[0060]由于生物等效性，根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物和/或其無細胞培養(yǎng)上清液提供了相同的健康益處。
[0061]因此，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物和/或無細胞培養(yǎng)上清液的組合物，其用于治療或預(yù)防與減弱的免疫系統(tǒng)相關(guān)的疾病。
[0062]本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物和/或無細胞培養(yǎng)上清液的用途，其用于制備用于治療或預(yù)防與減弱的免疫系統(tǒng)相關(guān)的疾病的組合物。
[0063]與減弱的免疫系統(tǒng)·相關(guān)的疾病是本領(lǐng)域熟知的，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，哪些疾病與減弱的免疫系統(tǒng)相關(guān)。
[0064]與減弱的免疫系統(tǒng)相關(guān)的疾病的一般實例可以選自流感、鼻炎、普通感冒及其組
口 ο
[0065]還可以將包含根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物和/或無細胞培養(yǎng)上清液的組合物用于治療或預(yù)防與腸道毒性細菌(enterovirulent bacteria)或病毒的細胞附著和細胞入侵相關(guān)的疾病。
[0066]本發(fā)明還擴展至根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物和/或無細胞培養(yǎng)上清液的用途，其用于治療或預(yù)防與腸道毒性細菌或病毒的細胞附著和細胞入侵相關(guān)的疾病的組合物的制備。
[0067]腸道毒性細菌或病毒是本領(lǐng)域熟知的。歐洲食品安全局(European Food SafetyAuthority) (EFSA)已經(jīng)在2010年11月公布了此種病原體的列表。
[0068]例如，腸道毒性細菌或病毒可以選自沙門氏菌屬(Salmonella);彎曲桿菌屬(Campylobacter);利斯特氏菌屬(Listeria);大腸桿菌菌株，例如如ETEC、EHEC> EPEC或EIEC菌株；耶爾森氏菌屬(Yersinia);志賀氏菌屬(Shigella);產(chǎn)毒素細菌，如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肉毒梭狀芽胞桿菌(Clostridium botulinum)或臘狀芽抱桿菌(Bacillus cereus) ；Vibrio vulnifucus/parahaemoIyticus (副溶血弧菌)；輪狀病毒屬(rotavirus);諾瓦克病毒(norovirus);腸出血型大腸桿菌(verotoxigenic
E.coli )；阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii );產(chǎn)毒的產(chǎn)氣莢膜梭菌(toxigenicC.perfringens) (A型和B型)；食源性寄生蟲，如棘球蝴(Echinococcus)、弓形體(Toxoplasma)或賈第蟲屬(Giardia);幽門螺桿菌(Helicobacter pylori);艱難梭菌(Clostridium difficile);破傷風(fēng)梭菌(Clostridium tetani)及其組合。
[0069]本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚，哪種病癥與哪種腸道毒性細菌或病毒物種相關(guān)。
[0070]例如，與腸道毒性細菌或病毒物種的細胞附著和細胞入侵相關(guān)的疾病可以選自下呼吸道感染、胃腸道感染、中耳炎及其組合。
[0071]本發(fā)明組合物可以是任何類型的組合物，只要其適合于施用給人類或動物。
[0072]特別地，本發(fā)明組合物可以口服地、腸內(nèi)地、胃腸外地或者局部地施用。可以以通常用于選定的施用模式的任何植物制劑形式提供組合物。
[0073]可以將本發(fā)明組合物施用給任何年齡組。
[0074]優(yōu)選地，可以在寒冷的季節(jié)，例如從秋天至春天期間，施用本發(fā)明組合物。
[0075]還可以在任何時間消費本發(fā)明組合物。優(yōu)選地，在早晨消費本發(fā)明組合物，例如以增強一天的免疫系統(tǒng)。
[0076]組合物可以例如選自食品組合物、寵物食品組合物、飲料、乳制品、營養(yǎng)制劑、嬰兒配方食品、食品添加劑、營養(yǎng)制品、藥物組合物、食品成分和/或化妝品組合物。
[0077]例如，組合物可以選自酸化的乳產(chǎn)品，例如酸奶或酸奶飲料；或者基于乳的粉末。
[0078]如果以貨架穩(wěn)定粉末的形式提供組合物，那么特別優(yōu)選的是粉末狀產(chǎn)品。為了獲得貨架穩(wěn)定性，并且確保益生菌的存活，可以以少于0.2，例如0.19-0.05，優(yōu)選地少于0.15的水活度提供組合物。水活度或aw是系統(tǒng)中水的能量狀態(tài)的測量。它定義為來源于粉末/產(chǎn)品的水的蒸汽壓除以在相同溫度下純水的蒸汽壓；因此，純蒸餾水具有準(zhǔn)確地為I的水活度。`
[0079]本發(fā)明組合物可以是清潔劑、保護劑、治療或護理乳膏、護膚洗液、凝膠或泡沫，如清潔或消毒洗液、沐浴組合物或除臭組合物。
[0080]更特別地，對于用于體外局部施用的組合物，它們可以是水溶液、水-醇溶液或油性溶液、洗液或血清類型的溶液或分散劑、通過分散水相中的脂肪相(0/W)或反過來(W/0)獲得的液體或半液體稠度的乳型乳劑或者軟的、半固體或固體稠度(solid consistency)的乳膏性混懸劑或乳劑、水凝膠或無水凝膠、微乳劑、微膠囊、微?；蛘唠x子和/或非離子型的多孔分散劑。
[0081]根據(jù)本發(fā)明的局部組合物可以有利地以適合于護發(fā)的任何植物制劑形式，特別地以洗發(fā)劑、香波，特別地去頭屑洗發(fā)劑、護發(fā)素、薰衣草洋甘菊護發(fā)素(detangler)、發(fā)乳或凝膠、造型漆(styling lacquer)、卷發(fā)藥水、治療洗液、染色組合物(特別地氧化染料)的形式，任選地以染色香波、頭發(fā)重構(gòu)洗液、電燙組合物(permanent-waving composition)、抗脫發(fā)洗液或凝膠、抗寄生蟲香波或藥用香波，特別地低抗-皮脂溢香波、頭皮護理產(chǎn)品(其特別地抗刺激、抗老化或者重構(gòu)，或者活化血液循環(huán))的形式配制。
[0082]當(dāng)本發(fā)明組合物是乳劑時，相對于組合物的總重量，脂肪相以重量計可以為5%至80%，優(yōu)選地以重量計10%至50%。在組合物中以乳劑形式使用的油、乳化劑和輔助乳化劑可以選自在化妝品和/或皮膚病領(lǐng)域中常規(guī)使用的那些油、乳化劑和輔助乳化劑。相對于組合物的總重量，在組合物中，乳化劑和輔助乳化劑以重量計可以以0.3%至30%，優(yōu)選地以重量計0.5%至20%的比率存在。
[0083]當(dāng)本發(fā)明的組合物是油性凝膠或溶液時，脂肪相可以以超過組合物的總重量的90%存在。
[0084]用于局部施用的植物制劑形式還可以含有在化妝品、藥物和/或皮膚病領(lǐng)域中常用的輔助劑，例如親水性或親脂性膠凝劑、親水性或親脂性活性劑、防腐劑、抗氧化劑、溶劑、香料、填料、防曬劑、吸味劑和染料。這些多種輔助劑的量為所考慮領(lǐng)域使用的常規(guī)量，并且例如為組合物的總重量的0.01%至20%。取決于輔助劑的性質(zhì)，可以將它們引入到脂肪相中和/或水相中。
[0085]提及的可以用于本發(fā)明的脂肪物質(zhì)可以由這樣的物質(zhì)制備，所述物質(zhì)例如是礦物油例如氫化聚異丁烯和液體的礦脂、植物油例如牛油樹脂的液體部分、向日葵油和杏仁油、動物油例如鯊?fù)椤⒑铣捎?，特別地鴨子尾脂腺油(Purcellin oil)、肉豆蘧酸異丙酯和乙基己基棕櫚酸酯、不飽和脂肪酸和氟代油例如聚全氟聚醚。還可以使用脂肪醇、脂肪酸例如硬脂酸和例如蠟，特別地石蠟、巴西棕櫚蠟和蜂蠟。還可以將硅酮化合物例如硅酮油、環(huán)狀甲基硅酮和二甲硅油，以及硅酮蠟、樹脂和樹膠制備用于本發(fā)明的脂肪物質(zhì)。
[0086]提及的可以用于本發(fā)明的乳化劑可以由這樣的物質(zhì)制備，所述物質(zhì)例如是甘油硬脂酸酯、聚山梨醇60、由公司Henkel以名稱Sinnowax AO?銷售的包含33摩爾環(huán)氧乙燒的十六/十八醇/十六/十八烷基氧乙烯醚(cetylstearyl alcohol/oxy ethylenatedcetylstearyl alcohol)的混合物、由公司 Gattefosse 以名稱Tefose? 63銷售的 PEG-6/PEG-32/硬脂酸乙二醇酯的混合物、肉豆寇醚、硅酮乳化劑例如鯨蠟基二甲基硅氧烷共聚醇和山梨糖醇酐單硬脂酸 酯或三硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯或者氧乙烯化山梨糖醇酐單硬脂酸酯(20E0)。
[0087]提及的可以用于本發(fā)明的溶劑，可以由這樣的物質(zhì)制備，所述物質(zhì)是例如低級醇，特別地乙醇、異丙醇和丙二醇。
[0088]本發(fā)明組合物還可以有利地含有泉水和/或礦泉水，特別地選自Vittel水、來自Vichy 流域(basin)的水和 la Roche Posay 水。
[0089]提及的親水性膠凝劑，可以由這樣的物質(zhì)制備，所述物質(zhì)例如是羧基聚合物如卡波姆、丙烯酸共聚物如丙烯酸酯/丙烯酸烷基酯共聚合物、聚丙烯酰胺，以及特別地由公司SEPPIC以名稱Sepigel 305?銷售的聚丙烯酰胺、C13-14異鏈烷烴和Laureth-7的混合
物、多糖例如衍生物如羥烷基纖維素，特別地羥丙基纖維素和羥乙基纖維素、天然樹膠如瓜爾豆膠、豆角膠、角豆膠和黃元膠，以及粘土。
[0090]提及的親脂性膠凝劑，可以由這樣的物質(zhì)制備，所述物質(zhì)例如是改良的粘土如膨潤土、脂肪酸的金屬鹽如硬脂酸鋁、疏水性二氧化硅、乙基纖維素和聚乙烯。
[0091 ] 根據(jù)本發(fā)明的組合物還可以是構(gòu)成清潔皂或棒的固體制備物。
[0092]還可以將它們以溶液、乳膏、凝膠、乳劑或摩絲形式或者備選地以還含有壓力下的推進劑的氣溶膠組合物形式用于頭皮。
[0093]在根據(jù)本發(fā)明的口服施用的情況下，優(yōu)選的是使用可消化的支持體或運載體。取決于所考慮的組合物的類型，可消化的支持體或運載體可以具有不同的性質(zhì)。
[0094]乳、酸奶、干酪、發(fā)酵乳、基于乳的發(fā)酵產(chǎn)品、冰淇淋、基于谷物的產(chǎn)品或者基于發(fā)酵的谷物的產(chǎn)品、早餐谷物、谷物或燕麥棒、基于乳的粉末、嬰幼兒配方食品、糖果食品、巧克力或谷物類型、特別地用于家畜的動物飼料、片劑、凝膠膠囊或錠劑、液體細菌混懸劑、以干物質(zhì)形式的口服補充劑或以液體形式的口服補充劑都特別適合作為可吸收的支持體或運載體。
[0095]根據(jù)本發(fā)明待口服施用的組合物可以例如以包衣片、凝膠膠囊、凝膠、乳劑、片劑、膠囊、水凝膠、食物棒、壓縮的或者松散的粉末、液體懸浮液或溶液、糖果產(chǎn)品、發(fā)酵乳、發(fā)酵乳酪、口香糖、牙膏或噴霧溶液或者食物運載體的形式配制。
[0096]干物質(zhì)形式的藥片或錠劑、口服補充劑，以及液體形式的口服補充劑適合用作飲食或藥物支持體或者食物運載體。
[0097]特別地，可以通過產(chǎn)生糖衣片劑、凝膠膠囊、凝膠、乳劑、片劑、膠囊和允許緩釋的水凝膠的常用方法配制組合物，例如食品補充劑。
[0098]特別地，可以將根據(jù)本發(fā)明的微生物摻入到所有形式的食品補充劑或強化食品，例如食物棒或者壓縮的或未壓縮的粉末中。粉末可以稀釋于水、蘇打水、乳制品或大豆衍生物中，或者可以摻入到食物棒中。
[0099]此外，可以將本發(fā)明的微生物、其部分和/或其代謝物與下述物質(zhì)一起配制，所述物質(zhì)是此類口服組合物或食品補充劑的常用的賦形劑和組分，特別地即脂肪和/或含水組分、濕潤劑、增稠劑、防腐劑、質(zhì)地改進劑(texturing agent)、增味劑和/或涂布劑、抗氧化劑、防腐劑和食品領(lǐng)域(sector)中常規(guī)使用的染料。
[0100]用于口服組合物，以及特別地用于食品補充劑的制劑和賦形劑是本領(lǐng)域已知的，且不是本文中詳細描述的主題。
[0101]在治療應(yīng)用中，以足以至少部分治愈或者抑制疾病及其并發(fā)癥的癥狀的量施用組合物。將足夠?qū)崿F(xiàn)該目的的量定義為“治療有效劑量”。用于該目的有效量取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的許多因素，例如疾病的嚴(yán)重性和患者的體重和一般狀態(tài)。
·[0102]在預(yù)防性應(yīng)用中，以足以至少部分降低發(fā)展成疾病的風(fēng)險的量將根據(jù)本發(fā)明的組合物施用給對易感染特定疾病或者另外地處于特定疾病風(fēng)險的患者。將此種量定義為“預(yù)防有效劑量”。同樣，精確的量取決于患者特異的多種因素，例如患者的健康狀態(tài)和體重。
[0103]本發(fā)明組合物以治療或預(yù)防有效量包含本發(fā)明約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的至少一種天然衍生物和/或無細胞培養(yǎng)上清液。
[0104]本領(lǐng)域技術(shù)人員能相應(yīng)地調(diào)整劑量。
[0105]例如，組合物可以以每日劑量106_1012cfu，例如108_1010cfu的量包含根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225。
[0106]以前的工作還顯示，可以將非復(fù)制性約氏乳桿菌CNCM 1-1225用于治療或預(yù)防與免疫系統(tǒng)相關(guān)的疾病包括感染，參見WO 2010/133475，將其全部并入本文作為參考。發(fā)現(xiàn)，約氏乳桿菌CNCM 1-1225強烈地誘導(dǎo)了組成型hBDl表達，并且與約氏乳桿菌CNCM 1-1225活的對應(yīng)物相比，經(jīng)熱處理的約氏乳桿菌CNCM 1-1225更強烈地上調(diào)hBDl。
[0107]因此，根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225還可以以非復(fù)制的形式存在。
[0108]約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的“非復(fù)制性”天然衍生物包括已經(jīng)受到熱處理的衍生物。這包括滅活的、死的、無生活力的和/或以碎片如DNA、代謝物、胞質(zhì)化合物和/或細胞壁物質(zhì)存在的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物。
[0109]“非復(fù)制性”指的是通過經(jīng)典的平板接種方法可以檢測的無生活力的細胞和/或菌落形成單位。在微生物書中概述了這些經(jīng)典的平板接種方法:James Monroe Jay, MartinJ.Loessnerj David A.Golden.2005.Modern food microbiology.7th edition, SpringerScience, New York, N.Y.790p。通常地,存活細胞的缺失可以按照以下顯示:用不同濃度細菌制備物(“非復(fù)制”的樣品)接種并且在適合的條件(有氧和/或厭氧空氣中持續(xù)至少24小時)下培育后，在瓊脂平板上沒有可見的菌落或者在液體生長培養(yǎng)基中沒有增加的濁度。顯而易見，非復(fù)制性微生物不會形成菌落，因此，應(yīng)將該術(shù)語理解為從106-1012cfu/g可復(fù)制的細菌獲得的的非復(fù)制的微生物的量。
[0110]組合物還可以以每日劑量0.005mg - 5000mg,例如0.5mg-50mg的量包含根據(jù)本發(fā)明的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物。
[0111]本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不背離所公開的本發(fā)明范圍的情況下，他們可以自由地組合本文中所述的本發(fā)明的全部特征。特別地，可以將用于描述本發(fā)明的用途的特征應(yīng)用于本發(fā)明的食品，反之亦然。
[0112]本發(fā)明的其他優(yōu)點和特征從以下實施例和附圖中是顯而易見的。
[0113]圖1顯示了用甲磺酸乙酯處理的約氏乳桿菌CNCM 1-1225的‘存活曲線’。
[0114]圖2顯示了從G堿基的氧化到DNA鏈的分離的天然突變的分子過程，其產(chǎn)生了親本和經(jīng)修飾的DNA類型的混合物，以及混合的親本和經(jīng)修飾的克隆。
[0115]圖3顯示約氏乳桿菌CNCM 1-1225D-乳酸脫氫酶基因的基因序列(SEQ ID N0:1),并圈出了經(jīng)鑒定的在約氏乳桿菌CNCM 1-4434和約氏乳桿菌CNCM 1-4441中的相應(yīng)基因中的改變。還顯示了由于約氏乳桿菌CNCM 1-4434和約氏乳桿菌CNCM 1-4441的相應(yīng)改變而翻譯的D-乳酸脫氫酶(SEQ ID NO:2)。
[0116]圖4A顯示約氏乳桿菌CNCM 1-4434D-乳酸脫氫酶基因的基因序列(SEQ IDN0:6)，框出位置611處的堿基并且與親本菌株約氏乳桿菌CNCM 1-1225相比所述堿基(C)發(fā)生改變。`
[0117]圖4B顯示約氏乳桿菌CNCM 1-4434D-乳酸脫氫酶基因的蛋白質(zhì)序列(SEQ IDNO:8)，框出位置204處的氨基酸并且與親本菌株約氏乳桿菌CNCM 1-1225相比所述氨基酸
(S)發(fā)生改變。
[0118]圖5A顯示約氏乳桿菌CNCM 1-4441D-乳酸脫氫酶基因的基因序列(SEQ IDNO:7)，框出位置458處的堿基并且與親本菌株約氏乳桿菌CNCM 1-1225相比所述堿基(G)發(fā)生改變。
[0119]圖5B顯示約氏乳桿菌CNCM 1-4441D-乳酸脫氫酶基因的基因序列(SEQ IDNO: 9)，框出位置153處的氨基酸并且與親本菌株約氏乳桿菌CNCM 1-1225相比所述氨基酸發(fā)生改變(G)。
[0120]實施例1.用甲磺酸乙酯處理約氏乳桿菌CNCM 1-1225培養(yǎng)物。用Dulbecco’s磷酸緩沖鹽水洗滌100 μ I含大約108個菌落形成單位的16個小時的約氏乳桿菌CNCM 1-1225培養(yǎng)物的樣品3次。最后，將細胞懸浮在Iml PBS中，加入O、10 μ I甲磺酸乙酯并在37°C，在沒有振蕩的情況培養(yǎng)。在PBS中洗滌經(jīng)處理的細胞2次，測定經(jīng)處理的和未處理培養(yǎng)物的CFU，并對存活者作圖，以產(chǎn)生圖1中所述的‘存活曲線’。最初靶向了產(chǎn)生1%存活者的條件并包括(bracket)之前和之后的時間點，稀釋細胞，并在MRS平板上將細胞接種為單個菌落。然后，剩余的經(jīng)處理的細胞用于接種10ml MRS肉湯，并在37°C培養(yǎng)16小時。然后，稀釋培養(yǎng)物，并鋪展在MRS平板上，以產(chǎn)生用于篩選的單個菌落。[0121]如圖2中所示，當(dāng)通過DNA復(fù)制解析時，在細菌中，主要通過雙鏈DNA中鳥苷(G)殘基的氧化，天然地發(fā)生突變，通常產(chǎn)生單堿基對改變。取決于所測序的DNA鏈，這導(dǎo)致G至腺苷(A)和胞苷(C)至胸苷(T)改變的天然突變譜。甲磺酸乙酯起著化學(xué)氧化G堿基的作用，導(dǎo)致與天然突變相同的突變譜，即取決于所測序的DNA鏈，產(chǎn)生G至A和C至T的突變。這隨后通過D-乳酸脫氫酶基因和基因組序列的DNA測序進行了確證，其中大多數(shù)觀察到的改變都是G至A或C至T。
[0122]實施例2.篩選缺失D-乳酸產(chǎn)生菌株的各個菌落。將經(jīng)甲磺酸乙酯處理的各個菌落接種到含200 μ I MRS肉湯的96孔板中，并在37°C培養(yǎng)24小時，以形成最小的培養(yǎng)物。使用Tecan sunrise酶標(biāo)儀(microplate reader),通過620nm處的吸光度估計培養(yǎng)物的生長。將10 μ I的培養(yǎng)上清液與190 μ I反應(yīng)混合物混合，在室溫溫育I小時，所述反應(yīng)混合物含IOOmM Tris HCl pH9,2.5mM EDTA pH8.0，20U/ml D-乳酸脫氫酶(來自腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroide)), lmg/ml NAD ( β -煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)加上 3% 水合肼(hydrazinium hydroxide)。然后使用 Tecan sunrise 酶標(biāo)儀測量 320nm(形成 β-NADH)的吸光度，并將數(shù)據(jù)輸出至excel用于分析。在每一平板上，將僅含MRS的對照和含5%、25%、50%或100%濃度的約氏乳桿菌CNCM 1-1225培養(yǎng)上清液作為歸一化數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)。
[0123]進行分離的菌落的表型分析，以確定培養(yǎng)后培養(yǎng)基中D-乳酸的存在或者不存在。當(dāng)篩選各個菌落中的D-乳酸的存在時，還清楚的是含有50%的D-乳酸產(chǎn)生者和50%的非D-乳酸產(chǎn)生者的‘混合’培養(yǎng)物將導(dǎo)致培養(yǎng)物為D-乳酸存在的‘陽性’。因此，認為我們靶向的D-乳酸缺失表型為D-乳酸產(chǎn)生表型的‘隱性’。這是重要的，當(dāng)我們將圖2中所示的誘變的示意圖考慮為單個氧化的G堿基時，會導(dǎo)致最終的菌落為親本和改變個體的混合物，因此在表型上為D-乳酸陽 性。在這種情況下，對于分離缺失D-乳酸產(chǎn)生的菌株，在甲磺酸乙酯處理后在MRS肉湯中的培養(yǎng)是必要的。篩選了大約21，000個經(jīng)甲磺酸乙酯處理的單個菌落后，分離了 15個缺失D-乳酸產(chǎn)生的菌落，并進行了進一步分析。
[0124]實施例3.測定培養(yǎng)基中D-乳酸水平。在37°C，在MRS肉湯中培養(yǎng)培養(yǎng)物16個小時，并通過離心去除細菌。為了測定D-乳酸濃度，將無細胞培養(yǎng)上清液稀釋于水中，如上所述進行分析，并將所述結(jié)果與用D-乳酸鈉稀釋液制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較。通過用兔肌肉L-乳酸脫氫酶交換D-乳酸脫氫酶，并使用L-乳酸鈉作為標(biāo)準(zhǔn)，以相同的方式測定L-乳酸濃度。對CNCM 1-4431和CNCM 1-4434進行的這種分析的結(jié)果顯示于表1中，并且包括了對照:約氏乳桿菌CNCM 1-1225、具有GMO失活的D-乳酸脫氫酶基因的約氏乳桿菌NCC9006，以及認為是L-乳酸產(chǎn)生菌株的類干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei )NCC2461和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)NCC4007。
[0125]類干酪乳桿菌NCC2461 (登記號=CNCM 1-2116)于1999年I月12日在布達佩斯條約下保藏于CNCM (地址已經(jīng)提及)。鼠李糖乳桿菌NCC4007 (登記號:CGMCC1.3724)于2004年10月在布達佩斯條約下保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(China GeneralMicrobiological Culture Collection Center)(CGMCC),微生物學(xué)研究所(Institute ofMicrobiology),中國科學(xué)院(Chinese Academy of Sciences),北辰西路(West BeichenRoad) I 號，朝陽區(qū)(Chaoyang District),北京 100101,中國。如在 Lapierre 等人，標(biāo)題為“D-Lactate Dehydrogenase Gene (IdhD) Inactivation and Resulting MetabolicEffects in the Lactobacillus johnsonii Strains Laland N312:(Appl.Environ.Microbiol.1999,65 (9):4002)的文章中所述，約氏乳桿菌NCC9006是來源于約氏乳桿菌Lal的菌株。
[0126]表1.從無細胞培養(yǎng)物中測定的CNCM 1-1225、CNCM 1-4431和CNCM 1-4434的D-和L-乳酸的值。對照包括菌株NCC9006 (具有GMO失活的D-乳酸脫氫酶基因的約氏乳桿菌菌株)、認為是L-乳酸產(chǎn)生菌株的類干酪乳桿菌NCC2461和鼠李糖乳桿菌NCC4007。實驗一式三份地進行，并表示為平均值加上括號內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)差。
[0127]
【權(quán)利要求】
1.約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物，其中所述約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的衍生物缺失D-乳酸產(chǎn)生。
2.權(quán)利要求1的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物，其中所述約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物的D-乳酸脫氫酶序列在氨基酸位置153處包含甘氨酸至天冬氨酸的氨基酸改變和/或在氨基酸位置204處包含絲氨酸至亮氨酸的氨基酸改變。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物，其中所述約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物中的D-乳酸脫氫酶基因的核酸序列在核酸位置498處包含G至A的轉(zhuǎn)變和/或在核酸位置651處包含C至T的轉(zhuǎn)變。
4.權(quán)利要求1-3中任一項的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物，其選自約氏乳桿菌菌株CNCM 1-4434和約氏乳桿菌菌株CNCM 1-4441。
5.權(quán)利要求1-4中任一項的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物，其中所述約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物以生物學(xué)上純的培養(yǎng)物存在。
6.無細胞培養(yǎng)上清液，其分離自權(quán)利要求1-4中任一項的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物的生物學(xué)上純的培養(yǎng)物。
7.包含權(quán)利要求1-5中任一項的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物和/或權(quán)利要求6的無細胞培養(yǎng)上清液的組合物的用途，用于制備在通過治療處理人體或動物體的方法中使用的組合物。
8.包含權(quán)利要求1-5中任一項的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物和/或權(quán)利要求6的無細胞培養(yǎng)上清液的組合物的用途，用于治療或預(yù)防與減弱的免疫系統(tǒng)相關(guān)的病癥。
9.權(quán)利要求8的組合物的用途，其中所述與減弱的免疫系統(tǒng)相關(guān)的病癥選自流感、鼻炎、普通感冒及其組合。
10.包含權(quán)利要求1-5中任一項的約氏乳桿菌菌株CNCM1-1225的天然衍生物和/或權(quán)利要求6的無細胞培養(yǎng)上清液的組合物的用途，用于治療或預(yù)防與腸道毒性細菌或病毒的細胞附著和細胞入侵相關(guān)的疾病。
11.權(quán)利要求10的組合物的用途，其中所述與腸道毒性細菌或病毒物種的細胞附著和細胞入侵相關(guān)的疾病選自下呼吸道感染、胃腸道感染、中耳炎及其組合，并且其中所述腸道毒性物種優(yōu)選地選自沙門氏菌屬(Salmonella);彎曲桿菌屬(Campylobacter);利斯特氏菌屬(Listeria);大腸桿菌菌株，如ETEC、EHEC, EPEC或EIEC菌株；耶爾森氏菌屬(Yersinia);志賀氏菌屬(Shigella);產(chǎn)毒素細菌，如金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、肉毒梭狀芽胞桿菌(Clostridium botulinum)或臘狀芽抱桿菌(Bacilluscereus) ；Vibrio vulnifucus/parahaemoIyticus (副溶血弧菌);輪狀病毒屬(rotavirus);諾瓦克病毒(norovirus)；腸出血型大腸桿菌(verotoxigenic E.coli)；阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii);產(chǎn)毒的產(chǎn)氣莢膜梭菌(toxigenic C.perfringens) (A 型和B型)；食源性寄生蟲，如棘球蝴(Echinococcus)、弓形體(Toxoplasma)或賈第蟲屬(Giardia);幽門螺桿菌(Helicobacter pylori);艱難梭菌(Clostridium difficile);破傷風(fēng)梭菌(Clostridium tetani)及其組合。
12.權(quán)利要求7-11中任一項的組合物的用途，其中所述組合物選自食品組合物、寵物食品組合物、飲料、乳制品、營養(yǎng)制劑、嬰兒配方食品、食品添加劑、營養(yǎng)制品、藥物組合物、食品成分和/或化妝品組合物。
13.權(quán)利要求7-12中任一項的組合物的用途，其中所述組合物選自酸化的乳制品，例如酸奶或酸奶飲料；或者基于乳的粉末。
14.權(quán)利要求7-13中任一項的組合物的用途，其中所述組合物以每日劑量IO6-1O12Cfu的量包含權(quán)利要求1-5中任一項的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物。
15.權(quán)利要求7-14中任一項的組合物的用途，其含有每日劑量約0.005mg - 5000mg權(quán)利要求1-5中任一項的約氏乳桿菌菌株CNCM 1-1225的天然衍生物。
【文檔編號】C12N1/20GK103582698SQ201280025966
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年3月29日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月29日
【發(fā)明者】R-D·普里德莫爾, F·法塔, M·戴雷, I·揚科維奇 申請人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司