Gcgr表達的反義調(diào)節(jié)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供用于降低GCGR?mRNA和蛋白質(zhì)在動物體內(nèi)的表達的方法、化合物以及組合物。此類方法、化合物以及組合物可用于治療、預防、延遲或改善代謝疾病，例如糖尿病，或其癥狀。
【專利說明】GCGR表達的反義調(diào)節(jié)
[0001]序列表
[0002]本申請是與序列表一起以電子格式提交的。該序列表以創(chuàng)建于2012年9月19日的命名為B10L0161USSEQ.txt的文件提供，其大小為60Kb。該序列表的電子格式的信息以全文引用的方式并入本文中。
[0003]領域
[0004]本文提供用于降低GCGR mRNA和蛋白質(zhì)在動物體內(nèi)的表達的方法、化合物以及組合物。此類方法、化合物以及組合物可用于例如治療、預防、延遲或改善與代謝病癥相關的疾病，特別是與糖尿病相關的病癥。
[0005]背景
[0006]胰島素和胰高血糖素是參與調(diào)控葡萄糖體內(nèi)平衡和代謝的兩種胰腺激素。胰高血糖素是從胰島的α細胞分泌的并且通過調(diào)節(jié)肝葡萄糖產(chǎn)生來調(diào)控葡萄糖體內(nèi)平衡(Quesada等人，J.Endocrinol.2008.199:5_19)。胰高血糖素的主要功能是對抗胰島素的作用。
[0007]葡萄糖代謝失調(diào)可能是由有缺陷的胰島素分泌和/或作用、或受損的餐后胰高血糖素抑制造成的(Shah 等人,Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.1999.277:E283_E290)。糖尿病受試者中的餐后胰高血糖素分泌的抑制已經(jīng)顯示出大幅降低血糖，這表明胰高血糖素顯著有助于在具有2型糖尿病的受試者中可見的高血糖(Shah等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.2000.85:4053-4059)。
[0008]2型糖尿病的特征為胰島素分泌和/或作用受損，并且許多受試者還展現(xiàn)出在空腹和餐后狀態(tài)下不當?shù)难h(huán)胰高血糖素`水平。胰高血糖素/胰島素比率增大可能是2型糖尿病患者中可見的高血糖的重要決定因素(Baron等人，Diabetes.1987.36:274-283)。具有T2DM的受試者中缺乏餐后胰高血糖素分泌的抑制在餐后高血糖的發(fā)病機理中也起到重要的作用(Henkel 等人，Metabolism.2005.54:1168-1173)。
[0009]胰高血糖素通過活化其受體GCGR而對靶標組織發(fā)揮其作用。胰高血糖素受體是一種作為B族G蛋白偶聯(lián)受體家族成員的62kDa蛋白質(zhì)(Brubaker等人，Recept.Channels.2002.8:179-88)。GCGR活化導致G蛋白(Gs α和Gq)的信號轉(zhuǎn)導，由此Gsa活化腺苷酸環(huán)化酶，這造成cAMP產(chǎn)生，從而導致蛋白激酶A的水平增加。肝臟中的GCGR信號傳導通過誘導糖原分解和糖質(zhì)新生以及抑制糖原生成而導致肝葡萄糖產(chǎn)生增加(Jiang 和 Zhang.Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.2003.284:E671-E678)0 GCGR 也在肝外組織中表達，所述肝外組織包括心臟、腸平滑肌、腎臟、大腦以及脂肪組織(Hansen等人，Peptides.1995.16:1163-1166)。
[0010]GCGR的反義抑制相比于傳統(tǒng)的小分子抑制劑的獨特優(yōu)勢在于:反義抑制劑不依賴于化合物與蛋白質(zhì)的競爭性結(jié)合并且直接通過降低GCGR的表達來抑制活性。教示GCGR反義抑制劑的代表性美國專利包括美國專利N0.7，750，142，其通過全文引用的方式并入本文中。反義技術作為降低某些基因產(chǎn)物表達的有效手段而出現(xiàn)并且可因此被證實可獨特地用于多種用于調(diào)節(jié)GCGR的治療、診斷以及研究應用中。[0011]目前缺乏可接受的用于治療代謝病癥的選擇。因此本文的目的在于提供用于治療此類疾病和病癥的化合物和方法。本發(fā)明涉及GCGR基因表達的新穎高效抑制劑的發(fā)現(xiàn)。
[0012]本申請中引用的所有文獻或文獻的部分，包括但不限于專利、專利申請、文章、書籍以及論文，特此通過引用本文討論的文獻部分以及其全文的方式明確地并入。
[0013]概述
[0014]本文提供用于調(diào)節(jié)GCGR的表達以及治療、預防、延遲或改善與代謝病癥相關的疾病、特別是與糖尿病相關的病癥和/或其癥狀的方法、化合物以及組合物。
[0015]詳述
[0016]應理解的是，本文所述的前述一般描述和下列詳細描述都只是示例性和說明性而非限制性的，如所要求的一樣。本文中，除非另外明確說明，否則單數(shù)的使用包括復數(shù)。如本文所用，除非另外說明，否則“或”的使用意指“和/或”。此外，術語“包括(including) ”以及其他形式如“包括(includes)”和“包括(included) ”的使用不具限制性。此外，除非另外明確說明，否則術語如“要素”或“成分”涵蓋包括一個單元的要素和成分以及包括不止一個子單元的要素和成分。
[0017]本文使用的章節(jié)標題僅用于組織目的而不應理解為限制所述的主題。本申請中引用的所有文獻或文獻的部分，包括但不限于專利、專利申請、文章、書籍以及論文，特此通過引用本文討論的文獻 部分以及其全文的方式明確地并入。
[0018]定義
[0019]除非提供具體的定義，否則關于本文所述的分析化學、合成有機化學、以及醫(yī)學和制藥化學所用的命名法以及其程序和技術是本領域中眾所周知并且常用的。標準技術可以用于化學合成和化學分析。在許可時，本申請中引用的所有文獻或文獻的部分，包括但不限于所有專利、申請、公開申請和其他期刊出版物、可通過諸如國家生物技術信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)等數(shù)據(jù)庫獲得的GENBANK登錄號和相關序列信息以及在整個本文公開內(nèi)容中提及的其他數(shù)據(jù)通過引用本文討論的文獻部分以及其全文的方式并入。
[0020]除非另外指出，否則下列術語具有下列含義:
[0021]“2’ -O-甲氧基乙基”(又為2’ -MOE和2’ -O(CH2)2-OCH3)是指呋喃糖基環(huán)的2’位置的O-甲氧基-乙基修飾。被2’ -O-甲氧基乙基修飾的糖為修飾糖。
[0022]“2’-O-甲氧基乙基核苷酸”意指包含被2’-O-甲氧基乙基修飾的糖部分的核苷酸。
[0023]“3’靶標位點”是指與特定反義化合物的3’最末端核苷酸互補的靶標核酸的核苷酸。
[0024]“5’靶標位點”是指與特定反義化合物的5’最末端核苷酸互補的靶標核酸的核苷酸。
[0025]“5-甲基胞嘧啶”意指用連接至5’位置的甲基修飾的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修飾的核堿基。
[0026]“約”意指在數(shù)值的土 10%內(nèi)。例如，如果陳述“標志物可能增加約50%”，則暗示著該標志物可能增加45%-55%之間。
[0027]“活性藥物劑”意指當施用至個體時提供治療益處的藥物組合物中的一種或多種物質(zhì)。例如，在某些實施方案中，靶向GCGR的反義寡核苷酸是一種活性藥物劑。
[0028]“活性靶標區(qū)域”或“靶標區(qū)域”意指一種或多種活性反義化合物所靶向的區(qū)域。“活性反義化合物”意指降低靶標核酸水平或蛋白質(zhì)水平的反義化合物。
[0029]“肥胖”或“肥胖癥”是指相對于瘦體重處于肥胖或身體脂肪或脂肪組織量過高的狀態(tài)。身體脂肪量包括對于脂肪在整個身體內(nèi)的分布以及脂肪組織沉積物的大小和質(zhì)量的關注。身體脂肪分布可以通過皮褶測量、腰臀圍比、或諸如超聲、計算機斷層掃描或磁共振成像等技術來估算。根據(jù)疾病控制與預防中心(Center for Disease Control andPrevention)，身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)為30或更大的個體被視為肥胖的。如本文所用的術語“肥胖癥”包括由于脂肪組織在體內(nèi)過量積聚而導致身體脂肪增加超過身體需求的病狀。術語“肥胖癥”包括但不限于下列病狀:成年發(fā)病型肥胖癥；營養(yǎng)性肥胖癥；內(nèi)源性或炎性肥胖癥；內(nèi)分泌肥胖癥；家族性肥胖癥；胰島功能亢進性肥胖癥；增生肥大性肥胖癥；性腺機能減退性肥胖癥；甲狀腺機能減退性肥胖癥；終身性肥胖癥；病態(tài)肥胖癥與外源性肥胖癥。
[0030]“同時施用”是指兩種劑以任何方式共同施用，其中兩者的藥理學作用同時在患者中顯現(xiàn)。同時施用不需要兩種劑以單一藥物組合物、以相同的劑型或通過相同的施用途徑來施用。兩種劑的作用不需同時親自顯現(xiàn)。所述作用僅需要在一段時間內(nèi)重疊并且無需在時間上共同延伸。
[0031]“施用”意指向動物提供劑，并且包括但不限于由醫(yī)學專業(yè)人員施用和自己施用。
[0032]“劑”意指當施用至動物時可以提供治療益處的活性物質(zhì)?！暗谝粍币庵副疚奶峁┑闹委熜曰衔铩＠?，第一劑可以是靶向GCGR的反義寡核苷酸?！暗诙币庵副疚乃龅牡诙委熜曰衔?例如靶向GCGR的第二反義寡核苷酸)和/或非GCGR治療性化合物。
[0033]“改善”是指相關疾病、病癥或病狀的至少一種指標、體征或癥狀的減輕?？梢酝ㄟ^本領域技術人員已知的主觀或客觀措施來測定指標的嚴重程度。
[0034]“動物”是指人類或非人類動物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬，以及非人
靈長類動物，包括但不限于猴子和黑猩猩。
[0035]“反義活性”意指可歸因于反義化合物與其靶標核酸的雜交的任何可檢測或可測量的活性。在某些實施方案中，反義活性是靶標核酸或由此種靶標核酸編碼的蛋白質(zhì)的量或表達的降低。
[0036]“反義化合物”意指能夠通過氫鍵鍵合與靶標核酸進行雜交的寡聚化合物。
[0037]“反義抑制”意指與不存在反義化合物的情況下的靶標核酸水平或靶標蛋白水平相比，靶標核酸水平或靶標蛋白水平在與靶標核酸互補的反義化合物存在下的降低。
[0038]“反義寡核苷酸”意指具有允許與靶標核酸的相應區(qū)域或區(qū)段雜交的核堿基序列的單鏈寡核苷酸。
[0039]“雙環(huán)糖”意指通過兩個非成對的環(huán)原子橋聯(lián)而修飾的呋喃糖基環(huán)。雙環(huán)糖是修飾的糖。
[0040]“雙環(huán)核酸”或“BNA”是指如下的核苷或核苷酸，其中該核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括連接該呋喃糖環(huán)上的兩個碳原子的橋聯(lián)，從而形成雙環(huán)系統(tǒng)。
[0041]“帽部分”或“端帽部分”意指已經(jīng)在反義化合物的任一末端處并入的化學修飾。 [0042]“化學相異區(qū)域”是指反義化合物的一個區(qū)域在某些方面在化學上不同于同一反義化合物的另一個區(qū)域。例如，具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的區(qū)域與具有不含2’-O-甲氧基乙基修飾的核苷酸的區(qū)域在化學上相異。
[0043]“嵌合反義化合物”意指具有至少兩個化學上相異區(qū)域的反義化合物。
[0044]“共同施用”意指向個體施用兩種或更多種劑。所述兩種或更多種劑可以處于單一藥物組合物中，或可以處于單獨的藥物組合物中。兩種或更多種劑各自可以通過相同或不同的施用途徑來施用。共同施用涵蓋平行或依序施用。
[0045]“膽固醇”是可見于所有動物組織的細胞膜中的甾醇分子。膽固醇必須在動物的血漿中由脂蛋白轉(zhuǎn)運，包括極低密度脂蛋白(VLDL)、中間密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)以及高密度脂蛋白(HDL)?！把獫{膽固醇”是指血漿或血清中存在的所有被酯化和/或未被酯化的脂蛋白(VDL、IDL、LDL, HDL)膽固醇的總和。
[0046]“互補性”意指第一核酸與第二核酸的核堿基之間配對的能力。
[0047]“連續(xù)核堿基”意指彼此直接相鄰的核堿基。
[0048]“脫氧核糖核苷酸”意指在核苷酸的糖部分的2’位置具有氫的核苷酸。脫氧核糖核苷酸可用多種取代基中的任一者修飾。
[0049]“糖尿病(diabetes mellitus/diabetes) ”是一種特征為由胰島素水平不足或胰島素敏感性降低所導致的代謝紊亂和異常高血糖(高血糖癥)的綜合征。特征性癥狀是由于高血糖水平所致的尿量過多(多尿)、試圖補償排尿增加的過度口渴和液體攝入量增加(煩渴)、由于高血糖對眼睛光學器件的影響所致的視力模糊、不明原因的體重減輕、以及嗜睡。
[0050]“糖尿病性血脂異?！被颉熬哂醒惓５?型糖尿病”意指特征為2型糖尿病、HDL-C降低、甘油三酯升高以及小而密的LDL粒子升高的病狀。
[0051]“稀釋劑”意指組合物中缺乏藥理學活性、但在藥學上為必需或需要的成分。例如，注射組合物中的稀釋劑可以是液體`，例如鹽水溶液。
[0052]“血脂異常”是指脂質(zhì)和/或脂蛋白代謝病癥，包括脂質(zhì)和/或脂蛋白過度產(chǎn)生或缺乏。血脂異?？审w現(xiàn)為脂質(zhì)如膽固醇和甘油三酯以及脂蛋白如低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的升聞。
[0053]“劑量單位”意指提供藥物劑的形式，例如丸劑、片劑或本領域中已知的其他劑量單位。在某些實施方案中，劑量單位是含有凍干的反義寡核苷酸的小瓶。在某些實施方案中，劑量單位是含有重配的反義寡核苷酸的小瓶。
[0054]“劑量”意指以單次施用或以指定時段提供的藥物劑的指定量。在某些實施方案中，劑量可以一個、兩個或更多個大丸劑、片劑或注射劑施用。例如，在需要皮下施用的某些實施方案中，所需劑量需要不易由單次注射供應的容量，因此，可以使用兩次或更多次注射來達到所需劑量。在某些實施方案中，通過在延長的時段內(nèi)或連續(xù)地輸液來施用藥物劑。劑量可以稱為每小時、每天、每周或每個月的藥物劑的量。
[0055]“有效量”或“治療有效量”意指足以在需要劑的個體中實現(xiàn)所需的生理學結(jié)果的活性藥物劑的量。取決于有待治療的個體的健康和身體狀況、有待治療的個體的分類群、組合物的配制、個體的醫(yī)學病況的評估以及其他相關因素，不同個體之間的有效量可能不同。
[0056]“完全互補”或“ 100%互補”意指第一核酸的核堿基序列的每個核堿基都在第二核酸的第二核堿基序列中具有互補的核堿基。在某些實施方案中，第一核酸是反義化合物并且靶標核酸是第二核酸。
[0057]“缺口聚體(gapmer) ”意指一種嵌合反義化合物,其中，具有多個支持RNA酶H裂解的核苷的內(nèi)部區(qū)域定位于具有一個或多個核苷的外部區(qū)域之間，其中構(gòu)成該內(nèi)部區(qū)域的核苷在化學上相異于構(gòu)成所述外部區(qū)域的一個或多個核苷。該內(nèi)部區(qū)域可以被稱為“缺口區(qū)段”，而所述外部區(qū)域可以被稱為“側(cè)翼區(qū)段”。
[0058]“缺口加寬的”意指具有定位于具有一至六個核苷的5’和3’側(cè)翼區(qū)段之間并且與其直接相鄰的含12個或更多個連續(xù)的2’ -脫氧核糖核苷的缺口區(qū)段的嵌合反義化合物。
[0059]“胰高血糖素受體”或“GCGR”意指GCGR的任何核酸或蛋白質(zhì)。
[0060]“GCGR表達”意指從編碼GCGR的基因轉(zhuǎn)錄的mRNA的水平或從mRNA翻譯的蛋白質(zhì)的水平?？梢岳帽绢I域已知的方法如Northern或Western印跡法來測定GCGR表達。
[0061]“GCGR核酸”意指任何編碼GCGR的核酸。例如，在某些實施方案中，GCGR核酸包括編碼GCGR的DNA序列、從編碼GCGR的DNA轉(zhuǎn)錄的RNA序列(包括包含內(nèi)含子和外顯子的基因組DNA)，以及編碼GCGR的mRNA序列?！癎CGR mRNA”意指編碼GCGR蛋白的mRNA。
[0062]“葡萄糖”是被細胞用作能量來源和炎性中間物的單糖?！把獫{葡萄糖”是指存在于血漿中的葡萄糖。
[0063]“雜交”意指互補的核酸分子的粘接。在某些實施方案中，互補的核酸分子包括反義化合物和靶標核酸。
[0064]“高脂血癥”或“高脂血”是一種特征為血清脂質(zhì)或循環(huán)(血漿)脂質(zhì)升高的病狀。這種病狀體現(xiàn)為脂肪濃度異常高。循環(huán)血液中的脂質(zhì)部分是膽固醇、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白以及甘油三酯。
[0065]“高甘油三酯血癥”意指特征為甘油三酯水平升高的病狀。
[0066]“鑒定”或“選擇具有代謝問題的動物”意指鑒定或選擇已經(jīng)被診斷出具有代謝疾病或代謝病癥的受試者；或者，鑒定或選擇具有代謝疾病的任何癥狀的受試者，所述癥狀包括但不限于代謝綜合征、高血糖癥、高甘油三酯血癥、高血壓、胰島素抵抗增加、胰島素敏感性降低、超過正常體重、和/或超過正常身體脂肪或其任何組合?？衫萌魏畏椒▉韺崿F(xiàn)此種鑒定，包括但不限于標準的臨床試驗或評估，例如測量血清或循環(huán)(血漿)血糖、測量血清或循環(huán)(血漿)甘油三酯、測量血壓、測量身體脂肪、測量體重等。
[0067]“直接相鄰”意指在直接相鄰的要素之間不存在任何插入的要素。
[0068]“個體”或“受試者”或“動物”意指被選擇用于處理或治療的人類或非人動物。
[0069]“抑制表達或活性”是指降低或阻斷RNA或蛋白質(zhì)的表達或活性并且未必指示表達或活性的完全消除。
[0070]“胰島素抵抗”被定義為正常量的胰島素不足以從脂肪、肌肉和肝細胞產(chǎn)生正常的胰島素反應的病狀。脂肪細胞中的胰島素抵抗導致儲存的甘油三酸脂的水解，這使血漿中的游離脂肪酸升高。肌肉中的胰島素抵抗降低了葡萄糖攝取，而肝臟中的胰島素抵抗降低了葡萄糖儲存，這兩種作用使血糖升高。由于胰島素抵抗所致的胰島素和葡萄糖的高血漿水平通常導致代謝綜合征和2型糖尿病。
[0071]“胰島素敏感性”是個體處理葡萄糖的有效性的量度。具有高胰島素敏感性的個體會有效地處理葡萄糖，而具有低胰島素敏感性的個體不會有效地處理葡萄糖。
[0072]“核苷間鍵聯(lián)”是指核苷之間的化學鍵。
[0073]“靜脈內(nèi)施用”意指施用至靜脈中。
[0074]“連接的核苷”意指鍵合在一起的相鄰的核苷。[0075]“降脂療法”或“降脂劑”意指提供至受試者以降低受試者中的一種或多種脂質(zhì)的治療方案。在某些實施方案中，提供降脂療法以降低受試者中ΑροΒ、總膽固醇、LDL-C、乂0^-(:、101^(:、非冊1^(:、甘油三酯、小而密的0^粒子以及14)(&)的一者或多者。降脂療法的例子包括他汀類、貝特類以及MTP抑制劑。
[0076]“主要風險因素”是指促進特定疾病或病狀的高風險的因素。在某些實施方案中，冠狀動脈心臟病的主要風險因素包括但不限于抽煙、高血壓、低HDL-C、冠狀動脈心臟病家族史、年齡以及本文公開的其他因素。
[0077]“代謝疾病”或“代謝病癥”是指特征為代謝功能改變或紊亂的病狀?！按x的”和“代謝”是本領域中眾所周知的術語并且一般包括在活有機體內(nèi)發(fā)生的完全范圍的生物化學過程。代謝疾病或病癥包括但不限于肥胖癥、糖尿病、高血糖癥、前驅(qū)糖尿病、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、代謝綜合征、胰島素抵抗、糖尿病性血脂異常、或高甘油三酯血癥或其組
口 ο
[0078]“代謝綜合征”意指特征為代謝起源的脂質(zhì)和非脂質(zhì)心血管風險因素的簇集的病狀。在某些實施方案中，通過下列因素中的任意3種的存在來鑒定代謝綜合征:男性腰圍大于102cm或女性腰圍大于88cm ;血清甘油三酯為至少150mg/dL ;男性中HDL-C小于40mg/dL或女性中HDL-C小于50mg/dL ;血壓為至少130/85mmHg ;以及空腹葡萄糖為至少IlOmg/dL。這些決定因素可以在臨床實踐中容易地測量(JAMA，2001，285:2486-2497)。
[0079]“錯配”或“非互補性核堿基”是指當?shù)谝缓怂岬暮藟A基不能與第二核酸或靶標核酸的相應核堿基配對的情形。
[0080]“混合型血脂 異?！币庵柑卣鳛槟懝檀忌吆透视腿ド叩牟?。
[0081]“修飾的核苷間鍵聯(lián)”是指天然存在的核苷間鍵(即磷酸二酯核苷間鍵)的取代或任何改變。
[0082]“修飾的核堿基”是指除了腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶之外的任何核苷堿基?！拔葱揎椀暮藟A基”意指嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)，以及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。
[0083]“修飾的核苷”意指獨立地具有修飾的糖部分或修飾的核堿基的核苷。
[0084]“修飾的核苷酸”意指獨立地具有修飾的糖部分、修飾的核苷間鍵聯(lián)或修飾的核堿基的核苷酸?！靶揎椀暮塑铡币庵釜毩⒌鼐哂行揎椀奶遣糠只蛐揎椀暮藟A基的核苷。
[0085]“修飾的寡核苷酸”意指包含至少一個修飾的核苷酸的寡核苷酸。
[0086]“修飾的糖”是指從天然糖的取代或改變。
[0087]“基序”意指反義化合物中的化學相異區(qū)域的模式。
[0088]“天然存在的核苷間鍵聯(lián)”意指3’至5’磷酸二酯鍵聯(lián)。
[0089]“天然糖部分”意指以DNA (2’ -H)或RNA (2’ -0H)存在的糖。
[0090]“非酒精性脂肪肝疾病”或“NAFLD”意指特征為并非由于過量酒精使用(例如，酒精消耗超過20克/天)所致的肝臟的脂肪炎癥的病狀。在某些實施方案中，NAFLD與胰島素抵抗和代謝綜合征有關。NAFLD涵蓋從肝細胞中單純的甘油三酯積聚(肝脂肪變性)至具有炎癥的肝脂肪變性(脂肪性肝炎)、纖維化以及肝硬化的疾病譜。
[0091]“非酒精性脂肪性肝炎”(NASH)由NAFLD進展發(fā)生，晚于甘油三酯沉積。NASH的發(fā)展需要能夠誘發(fā)壞死、炎癥和纖維化的“第二次擊中(second hit)”。第二次擊中的候選者可以分組成以下寬泛類別:造成氧化應激增加的因素和促進促炎性細胞因子表達的因素。
[0092]“核酸”是指由單聚核苷酸構(gòu)成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)、單鏈核酸、雙鏈核酸、小的干擾核糖核酸(siRNA)以及微RNA(miRNA)。核酸還可以包括這些要素于單一分子中的組合。
[0093]“核堿基”意指能夠與另一個核酸的堿基配對的雜環(huán)部分。
[0094]“核堿基序列”意指不依賴于任何糖、鍵聯(lián)或核堿基修飾的連續(xù)核堿基的次序。
[0095]“核苷”意指與糖連接的核堿基。
[0096]“核苷模擬物”包括用于替代糖或糖與堿基但未必替代寡聚化合物的一個或多個位置處的鍵聯(lián)的那些結(jié)構(gòu)，例如具有嗎啉基、環(huán)己烯基、環(huán)己基、四氫吡喃基、雙環(huán)或三環(huán)糖模擬物例如非呋喃糖單元的核苷模擬物。
[0097]“核苷酸”意指具有共價連接至核苷的糖部分的磷酸酯基的核苷。
[0098]“核苷酸模擬物”包括用于替代核苷和寡聚化合物的一個或多個位置處的鍵聯(lián)的那些結(jié)構(gòu)，例如肽核酸或嗎啉基(由-N(H)-C(=0)-0-或其他非磷酸二酯鍵聯(lián)連接的嗎啉基)。
[0099]“寡聚化合物”或“寡聚物”是指包含兩個或更多個子結(jié)構(gòu)并且能夠與核酸分子的一個區(qū)域雜交的聚合物結(jié)構(gòu)。在某些實施方案中，寡聚化合物是寡核苷。在某些實施方案中，寡聚化合物是寡核苷酸。在某些實施方案中，寡聚化合物是反義化合物。在某些實施方案中，寡聚化合物是反義寡核苷酸。在某些實施方案中，寡聚化合物是嵌合寡核苷酸。
[0100]“寡核苷酸”意指連接的核苷的聚合物，其中每一者可以彼此獨立地被修飾或未被修飾。
`[0101]“腸胃外施用”意指通過注射或輸液施用。腸胃外施用包括皮下施用、靜脈內(nèi)施用、肌肉內(nèi)施用、動脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用或顱內(nèi)施用，例如鞘內(nèi)施用或腦室內(nèi)施用。施用可以是連續(xù)的、或長期的、或短期或間歇的。
[0102]“肽”意指通過酰胺鍵將至少兩個氨基酸連接而形成的分子。肽是指多肽和蛋白質(zhì)。
[0103]“藥物劑”意指當施用至個體時提供治療益處的物質(zhì)。例如，在某些實施方案中，靶向GCGR的反義寡核苷酸是藥物劑。
[0104]“藥物組合物”意指適于施用至個體的物質(zhì)的混合物。例如，藥物組合物可以包含一種或多種活性劑和無菌水溶液。
[0105]“藥學上可接受的載體”意指不會干擾寡核苷酸的結(jié)構(gòu)的介質(zhì)或稀釋劑。某些此類載體使得藥物組合物能夠被配制成例如用于被受試者經(jīng)口攝取的片劑、丸劑、糖衣丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液以及錠劑。例如，藥學上可接受的載體可以是無菌水溶液。
[0106]“藥學上可接受的衍生物”涵蓋藥學上可接受的本文所述化合物的鹽、綴合物、前藥或異構(gòu)體。
[0107]“藥學上可接受的鹽”意指生理學上和藥學上可接受的反義化合物的鹽，即，保留親本寡核苷酸的所需生物活性并且不會賦予其不希望的毒理學作用的鹽。
[0108]“硫代磷酸酯鍵聯(lián)”意指核苷之間的鍵聯(lián)，其中通過用硫原子置換一個非橋聯(lián)氧原子來修飾磷酸二酯鍵。硫代磷酸酯鍵聯(lián)是修飾的核苷間鍵聯(lián)。[0109]“部分”意指核酸的限定數(shù)目的連續(xù)的(即連接的)核堿基。在某些實施方案中，一個部分是靶標核酸的限定數(shù)目的連續(xù)核堿基。在某些實施方案中，一個部分是反義化合物的限定數(shù)目的連續(xù)核堿基。
[0110]“預防”是指延遲或阻止疾病、病癥或病狀的發(fā)作或發(fā)展，持續(xù)從數(shù)分鐘至無限期的一段時間。預防還意指降低患上疾病、病癥或病狀的風險。
[0111]“前藥”意指以非活性形式制備的治療劑，其通過內(nèi)源性酶或其他化學劑或條件的作用而在體內(nèi)或其細胞內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性形式。
[0112]“副作用”意指除所需作用以外的可歸因于治療的生理反應。在某些實施方案中，副作用包括注射部位反應、肝功能測試異常、腎功能異常、肝毒性、腎毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、肌病以及不適感。例如，血清中的轉(zhuǎn)氨酶水平增加可以指示肝毒性或肝功能異常。例如，膽紅素增加可以指示肝毒性或肝功能異常。
[0113]“單鏈寡核苷酸”意指不與互補鏈雜交的寡核苷酸。
[0114]“可特異性雜交”是指在需要特異性結(jié)合的條件下(即在體內(nèi)測定法和治療性處理情況下的生理條件下)，在反義寡核苷酸與靶標核酸之間具有足夠程度的互補性以誘發(fā)所需作用并且同時展現(xiàn)對非靶標核酸的作用最小或無作用的反義化合物。
[0115]“他汀類”意指抑制HMG-CoA還原酶的活性的藥劑。
[0116]“皮下施用”意指在皮膚下方施用。
[0117]“靶向”或“靶向的”意指將與靶標核酸特異性雜交并誘發(fā)所需作用的反義化合物的設計和選擇的過程。
[0118]“靶標核酸”、“靶標RNA”和“靶標RNA轉(zhuǎn)錄物”都是指能夠被反義化合物靶向的核`酸。
[0119]“靶標區(qū)段”意指反義化合物所靶向的靶標核酸的核苷酸的序列。“5’靶標位點”是指靶標區(qū)段的5’最末端核苷酸?！?’靶標位點”是指靶標區(qū)段的3’最末端核苷酸。
[0120]“治療有效量”意指向個體提供治療益處的劑的量。
[0121]“治療性生活方式改變”意指意欲降低脂肪/脂肪組織質(zhì)量和/或膽固醇的飲食和生活方式改變。此種改變可以降低患上心臟病的風險，并且可包括關于每日總熱量、總脂肪、飽和脂肪、多不飽和脂肪、單不飽和脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)、膽固醇、不溶性纖維的飲食攝入的建議，以及關于體育活動的建議。
[0122]“甘油三酯”或“TG”意指由與三個脂肪酸分子組合的甘油構(gòu)成的脂質(zhì)或中性脂肪。
[0123]“2型糖尿病”(也稱為“2型糖尿病”或“糖尿病，第2型”，并且之前稱為“第2型糖尿病”、“非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM) ”、“肥胖癥相關性糖尿病”或“成年發(fā)病型糖尿病”)是主要特征為胰島素抵抗、相對胰島素缺乏以及高血糖癥的代謝病癥。
[0124]“治療”是指向動物施用藥物組合物以實現(xiàn)疾病、病癥或病狀的改變或改善。
[0125]“未修飾的核苷酸”意指由天然存在的核堿基、糖部分以及核苷間鍵聯(lián)構(gòu)成的核苷酸。在某些實施方案中，未修飾的核苷酸是RNA核苷酸(即β -D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即β-D-脫氧核糖核苷)。
[0126]某些實施方案
[0127]某些實施方案提供用于抑制GCGR表達的方法、化合物以及組合物。
[0128]某些實施方案提供靶向GCGR核酸的反義化合物。在某些實施方案中，GCGR核酸是以GENBANK登錄N0.NM_000160.3 (以SEQ ID NO:1并入本文)或GENBANK登錄No:NW_926918.1 (從核苷酸 16865000 至 16885000 截短)(以 SEQ ID NO:2 并入本文)所示的序列中的任一者。在某些實施方案中GCGR具有如SEQ ID NO:3所示的恒河猴序列。
[0129]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由12至30個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0130]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物由12至30個連接的核苷組成并且具有包含 SEQ ID N0:4-115 中的任一者的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0131]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物由12至30個連接的核苷組成并且具有包含SEQ ID 勵:11、17、31、80或85中的任一者的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0132]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物為或包含ISIS NO:449884,459014、398471、448766 或 459157。
[0133]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物由12至30個連接的核苷組成并且具有包含 SEQ ID NO: 11 的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 個連續(xù)核堿
基的核喊基序列。
[0134]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物由12至30個連接的核苷組成并且具有包含 SEQ ID NO:8 0 的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 個連續(xù)核堿
基的核堿基序列。
[0135]在某些實施方案中，該化合物或組合物為或包含ISIS NO: 4498840
[0136]在某些實施方案中，該化合物或組合物為或包含ISIS N0:459014。
[0137]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由15至30個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0138]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物由15至30個連接的核苷組成并且具有包含 SEQ ID N0:4-115 中的任一者的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0139]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物由15至30個連接的核苷組成并且具有包含 SEQ ID 勵:11、17、31、80或85中的任一者的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0140]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物為或包含ISISN0:449884、459014、398471、448766 或 459157。
[0141]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物由15至30個連接的核苷并且具有包含 SEQ ID NO: 11 的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 個連續(xù)核堿基的
核堿基序列。
[0142]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物由15至30個連接的核苷組成并且具有包含 SEQ ID NO:80 的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 個連續(xù)核堿
基的核喊基序列。
[0143]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物為或包含ISIS NO:449884ο
[0144]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物為或包含ISIS N0:459014。[0145]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由16至21個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0146]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由16至21個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115中的任一者的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0147]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由16至21個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11、17、31、80或85中的任一者的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0148]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由16至21個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0149]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由16至21個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0150]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至35個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0151]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至35個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且 具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0152]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由20至35個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0153]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物可以由17至35個連接的核苷組成并且具有包含 SEQ ID NO: 11 的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 個連續(xù)
核堿基的核堿基序列。
[0154]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物可以由17至35個連接的核苷組成并且具有包含 SEQ ID NO:80 的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 個連續(xù)
核堿基的核堿基序列。
[0155]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至30個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0156]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0157]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0158]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID NO: 11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。[0159]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0160]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至25個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0161]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至25個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0162]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至25個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:ll、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0163]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至25個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID NO: 11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0164]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至25個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0165]在某些實施方案中，本文所述的化合物或組合物包含由17至24個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0166]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至24個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0167]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至24個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0168]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至24個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID NO: 11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0169]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至24個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0170]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至23個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0171]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至23個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0172]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至23個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。[0173]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至23個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID NO: 11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0174]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至23個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0175]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至22個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0176]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至22個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、
18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0177]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至22個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、
14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0178]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至22個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID NO: 11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0179]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至22個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0180]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至21個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0181]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至21個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、
18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0182]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至21個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、
14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0183]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至21個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID勵:11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0184]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17至21個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0185]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由20個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0186]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由20個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。[0187]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由20個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:ll、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、14、
15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0188]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由20個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID NO: 11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0189]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由20個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID NO:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0190]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17個核苷組成并具有與SEQ ID NO: 1-3中的任一者的相等長度部分互補的核堿基序列的修飾寡核苷酸。
[0191]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:4-115的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0192]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:ll、17、31、80或85的至少8、9、10、11、12、13、14、
15、16或17個連續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0193]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含S EQ ID NO: 11的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個連
續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0194]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含由17個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸并且具有包含SEQ ID N0:80的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個連
續(xù)核堿基的核堿基序列。
[0195]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物包含修飾寡核苷酸的鹽。
[0196]在某些實施方案中，本文提供的化合物或組合物進一步包含藥學上可接受的載體或稀釋劑。
[0197]在某些實施方案中，修飾寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID N0:l_3中的任一者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%互補性，如對整個修飾寡核苷
酸所測量。
[0198]在某些實施方案中，修飾寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID N0:4_115中的任一者具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性，如對整個修飾寡核
苷酸所測量。
[0199]在某些實施方案中，修飾寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO: 11、17、31、80或85中的任一者具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 同一性，如對整
個修飾寡核苷酸所測量。
[0200]在某些實施方案中，修飾寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO: 11具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性，如對整個修飾寡核苷酸所測量。
[0201]在某些實施方案中，修飾寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID N0:80具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性，如對整個修飾寡核苷酸所測量。[0202]在某些實施方案中，反義化合物或修飾寡核苷酸靶向GCGR核酸的一個區(qū)域。在某些實施方案中，靶向GCGR核酸的一個區(qū)域的此類化合物或寡核苷酸具有與該區(qū)域的相等長度核堿基部分互補的連續(xù)核堿基部分。例如，該部分可以是與本文所述區(qū)域的相等長度部分互補的至少一個含8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基的部分。在某些實施方案中，此類化合物或寡核苷酸靶向SEQ ID N0:2的下列核苷酸區(qū)域:6691-6707、7267-7280、7267-7283、7267-7284、7267-7285、7267-7286、7267-7287、7267-7457、7268-7284、7268-7285、7268-7286、7268-7287、7269-7285、7269-7286、7269-7287、7270-7285、7270-7286、7270-7287、7271-7287、7291-7312、7292-7308、
7292-7309、7292-7310、7292-7311、7292-7312、7293-7309、7293-7310、7293-7311、
7293-7312、7294-7310、7294-7311、7294-7312、7295-7310、7295-7311、7295-7312、7296-7312、7316-7332、7316-7333、7316-7334、7316-7335、7316-7336、7317-7333、7317-7334、7317-7335、7317-7336、7318-7334、7318-7335、7318-7336、7319-7334、7319-7335、7319-7336、7320-7336、7339-7405、7339-7406、7339-7407、7339-7408、7339-7409、7341-7354、7341-7357、7341-7358、7341-7359、7341-7360、7341-7361、7342-7358、7342-7359、7342-7360、7342-7361、7343-7359、7343-7360、7343-7361、7344-7360、7344-7361、7345-7361、7347-7456、7365-7381、7365-7382、7365-7383、7365-7384、7365-7385、7366-7382、7366-7383、7366-7384、7366-7385、7367-7383、
7367-7384、7367-7385、7368-7383、7368-7384、7368-7385、7369-7385、7388-7382、7389-7407、7389-7408、7389-7409、7390-7406、7390-7407、7390-7408、7390-7409、
7391-7407、7391-7408、7391-7409、7392-7407、7392-7408、7392-7409、7393-7409、7413-7433、7414-7430、7414-7431、7414-7432、7414-7433、7415-7431、7415-7432、
7415-7433、7416-7432、`7416-7433、7417-7433、7437-7453、7437-7454、7437-7455、7437-7456、7437-7457、7438-7454、7438-7455、7438-7456、7438-7457、7439-7455、
7439-7456、7439-7457、7440-7455、7440-7456、7440-7457、7441-7457、7740-7756、7782-7798、7782-7801、7782-7913、7783-7799、7785-7801、7785-7913、7897-7913、8030-8049、8132-8151、8133-8152、8133-8155、8133-8156、8133-8157、8133-8159、8139-8155,8139-8156,8139-8157,8139-8159,8140-8156,8140-8157,8140-8159,8141-8157、8141-8159、8141-8160、8143-8159、8144-8160、8386-8402、8448-8464、8454-8473、9002-9019、9002-9020、9002-9021、9002-9026、9003-9019、9003-9020、9003-9021、9003-9026、9004-9020、9004-9021、9004-9026、9008-9027、9010-9026、9130-9146、9245-9264、9246-9262、9249-9265、9592-9611、9804-9823、9808-9824、10667-10683、10667-10684、10667-10695、10668-10684、10668-10695、10676-10683、10676-10684、10676-10695、10718-10734、10772-10788、11667-11686、11667-11691、11667-11695、11675-11691、11675-11695、11676-11695、11724-11741、11724-11743、11725-11741、11725-11743、11818-11834、11819-11835、11819-11838、11819-11842、11826-11842、11962-11978、12025-12044、12025-12046、12025-12049、12025-12051、
12025-12052、12026-12042、12026-12044、12026-12046、12026-12047、12026-12048、
12026-12049、12026-12050、12026-12051、12026-12055、12027-12046、12027-12049、
12027-12051、12027-12052、12028-12044、12028-12046、12028-12047、12028-12048、
【權利要求】
1.一種化合物，其包含由12至30個連接的核苷組成并具有包含如下部分的核堿基序列的修飾寡核苷酸，所述部分由與SEQ ID NO:2的核苷酸7267-7283、7270-7286、7292-7308、7295-7311、7316-7332、7319-7335、7341-7357、7344-7360、7437-7453、7365-7381、7368-7384、7389-7405、7392-7408、7416-7432、7440-7456、7783-7799、8133-8152,8144-8160,9804-9823,10718-10734 或 15743-15762 的相等長度部分互補的至少8個連續(xù)核堿基組成，其中所述修飾寡核苷酸是靶向SEQID NO:2。
2.一種化合物，其包含修飾寡核苷酸，所述修飾寡核苷酸由12至30個連接的核苷組成并具有包含SEQ ID N0:ll、80、17、102、31、81、82或85的至少一個含8個核酸堿基的部分的核堿基序列，其中所述修飾寡核苷酸是靶向SEQ ID NO:2。
3.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其由單鏈修飾寡核苷酸組成。
4.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸與SEQIDNO: 2具有至少96%互補性。
5.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸與SEQIDNO: 2具有至少97%互補性。
6.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸與SEQIDNO: 2具有至少98%互補性。
7.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸與SEQIDNO: 2具有至少99%互補性。
8.根據(jù)權利要求1所 述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸與SEQIDNO: 2具有100%互補性。
9.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中至少一個核苷間鍵聯(lián)是修飾的核苷間鍵聯(lián)。
10.根據(jù)權利要求9所述的化合物，其中每一核苷間鍵聯(lián)是硫代磷酸酯核苷間鍵聯(lián)。
11.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸的至少一個核苷包含修飾的糖。
12.根據(jù)權利要求10所述的化合物，其中所述至少一個修飾的糖是雙環(huán)糖。
13.根據(jù)權利要求12所述的化合物，其中所述至少一個雙環(huán)糖各包含4’ -CH2-N(R) -0-2'橋聯(lián)，其中R獨立地為H、C1_C12烷基或保護基。
14.根據(jù)權利要求12所述的化合物，其中所述至少一個雙環(huán)糖各包含4’-CH(CH3)-0-2’ 橋聯(lián)。
15.根據(jù)權利要求11所述的化合物，其中至少一個修飾的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
16.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中至少一個核苷包含修飾的核堿基。
17.根據(jù)權利要求16所述的化合物，其中所述修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。
18.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸包含: 由連接的脫氧核苷組成的缺口區(qū)段； 由連接的核苷組成的5’側(cè)翼區(qū)段；以及 由連接的核苷組成的3’側(cè)翼區(qū)段； 其中所述缺口區(qū)段定位于所述5’側(cè)翼區(qū)段與所述3’側(cè)翼區(qū)段之間，并且其中每一側(cè)翼區(qū)段的每個核苷包含修飾的糖。
19.根據(jù)權利要求1718所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸包含:由十個連接的脫氧核苷組成的缺口區(qū)段； 由三個連接的核苷組成的5’側(cè)翼區(qū)段；以及 由四個連接的核苷組成的3’側(cè)翼區(qū)段； 其中所述缺口區(qū)段定位于所述5’側(cè)翼區(qū)段與所述3’側(cè)翼區(qū)段之間，并且其中每一側(cè)翼區(qū)段的每個核苷包含修飾的糖。
20.根據(jù)權利要求17所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸包含: 由十個連接的脫氧核苷組成的缺口區(qū)段； 由三個連接的核苷組成的5’側(cè)翼區(qū)段；以及 由四個連接的核苷組成的3’側(cè)翼區(qū)段； 其中所述缺口區(qū)段定位于所述5’側(cè)翼區(qū)段與所述3’側(cè)翼區(qū)段之間，其中每一側(cè)翼區(qū)段的每個核苷包含2’ -O-甲氧基乙基修飾的糖；并且其中每一核苷間鍵聯(lián)是硫代磷酸酯鍵聯(lián)。
21.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由17個連接的核苷組成。
22.根據(jù)權利要求18所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由17個連接的核苷組成。
23.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由17至35個連接的核苷組成。
24.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由17至25個連接的核苷組成。
25.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由17至24個連接的核苷組成。
26.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由17至23個連接的核苷組成。
27.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由17至22個連接的核苷組成。
28.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由17至21個連接的核苷組成。
29.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由SEQID NO: 11或80的核堿基序列組成。
30.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸由SEQID NO: 11或80的核堿基序列組成并包含: 由十個連接的脫氧核苷組成的缺口區(qū)段； 由五個連接的核苷組成的5’側(cè)翼區(qū)段； 由五個連接的核苷組成的3’側(cè)翼區(qū)段； 其中所述缺口區(qū)段定位于所述5’側(cè)翼區(qū)段與所述3’側(cè)翼區(qū)段之間，其中每一側(cè)翼區(qū)段的每個核苷包含2’ -O-甲氧基乙基修飾的糖，其中所述修飾寡核苷酸的每一核苷間鍵聯(lián)是硫代磷酸酯鍵聯(lián)，并且其中所述修飾寡核苷酸的每一胞苷殘基是5-甲基胞苷。
31.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中所述修飾寡核苷酸具有包含如下部分的核堿基序列，所述部分由與SEQ ID NO:2的核苷酸7267-7283、7270-7286、7292-7308、7295-7311、7316-7332、7319-7335、7341-7357、7344-7360、7437-7453、7365-7381、7368-7384、7389-7405、7392-7408、7416-7432、7440-7456、7783-7799、8133-8152、8144-8160,9804-9823,10718-10734或15743-15762的相等長度部分互補的至少17個連續(xù)核堿基組成， 并且其中所述修飾寡核苷酸與SEQ ID NO: 2具有至少96%互補性。
32.—種組合物，其包含根據(jù)權利要求1至30中任一項所述的化合物或其鹽以及至少一種藥學上可接受的載體或稀釋劑。
33.一種方法，其包括向動物施用根據(jù)權利要求1至30中任一項所述的化合物或組合物。
34.根據(jù)權利要求33所述的方法，其中所述動物是人類。
35.根據(jù)權利要求33所述的方法，其中施用所述化合物可預防、治療、改善或減緩代謝疾病或病狀的進展。
36.根據(jù)權利要求35所述的方法，其中所述疾病或病狀是糖尿病。
37.根據(jù)權利要求35所述的方法，其中所述疾病或病狀是2型糖尿病。
38.一種降低動物體內(nèi)的血糖水平的方法，其包括向所述動物施用根據(jù)權利要求1所述的化合物。
39.根據(jù)權利要求38所述的方法，其中所述動物是人類。
40.根據(jù)權利要求38所述的方法，其中所述血糖水平是血漿葡萄糖水平或血清葡萄糖水平。
41.根據(jù)權利要求38所述的方法，其中所述動物是糖尿病動物。
42.一種預防或延遲動物體內(nèi)與GCGR相關的疾病或病狀的發(fā)作的方法，其包括向所述動物施用治療或預防有效量的根據(jù)權利要求1所述的化合物。
43.根據(jù)權利要求42所述的方法，其中所述動物是人類。
44.根據(jù)權利要求42所述的方法，其中所述疾病或病狀是糖尿病。
45.根據(jù)權利要求42所述的方法，其中所述疾病或病狀是2型糖尿病。
46.一種預防或延遲動物體內(nèi)血糖水平增加的發(fā)作的方法，其包括向所述動物施用治療或預防有效量的根據(jù)權利要求1所述的化合物。
47.根據(jù)權利要求46所述的方法，其中所述動物是人類。
48.根據(jù)權利要求46所述的方法，其中所述血糖水平是血漿葡萄糖水平或血清葡萄糖水平。
49.根據(jù)權利要求46所述的方法，其中所述動物是糖尿病動物。
50.根據(jù)權利要求31所述的方法，其包括共同施用所述化合物或組合物與第二劑。
51.根據(jù)權利要求50所述的方法，其中所述化合物或組合物與所述第二劑是同時施用的。
【文檔編號】C12N15/113GK103814132SQ201280045717
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年9月20日 優(yōu)先權日:2011年9月20日
【發(fā)明者】蘇珊·M·弗賴爾, 桑杰·巴諾特 申請人:Isis制藥公司