殺菌劑在液態(tài)系統(tǒng)中的應用的制作方法
【專利摘要】本公開內(nèi)容提供了微藻生長的液體培養(yǎng)系統(tǒng)中檢測有害生物的方法。本公開內(nèi)容還提供了在液體系統(tǒng)中處理和控制有害生物的方法，和在液體培養(yǎng)系統(tǒng)中增加微藻產(chǎn)量的方法。提供了用于從液體培養(yǎng)系統(tǒng)中生長、監(jiān)測、處理和收集微藻的方法。
【專利說明】殺菌劑在液態(tài)系統(tǒng)中的應用
[0001]相關(guān)申請的交叉引用
[0002]本申請要求美國臨時專利申請61/547，473的權(quán)利，該申請于2011年10月14日提交，其用于所有目的的全部內(nèi)容通過參考被引入到本文。
【技術(shù)領域】
[0003]本公開內(nèi)容包括提供在液體系統(tǒng)，如水池、池塘等提高產(chǎn)量的方法。本公開內(nèi)容還包括在這種系統(tǒng)中檢測有害生物的方法。這種系統(tǒng)對于水生生物質(zhì)的生產(chǎn)是有用的，例如藻類，特別是微藻和藍藻。用本文所述方法生產(chǎn)的水生生物質(zhì)可用于生產(chǎn)多種有用的產(chǎn)品。在一個【具體實施方式】中，生產(chǎn)的生物質(zhì)被用于油料生產(chǎn)，可以精制成各種產(chǎn)品，包括但不限于運輸燃料。
【背景技術(shù)】
[0004]微藻是單細胞非維管光合生物，通過光合作用產(chǎn)生氧氣。其中一組，微藻，有很多種原因可使其在生物技術(shù)中應用，包括他們的高增長率和容忍不同的環(huán)境條件。已有報道微藻在商業(yè)重要產(chǎn)品的多種工業(yè)過程中的應用。例如，微藻已被用于生產(chǎn)營養(yǎng)補充劑、藥物、天然染料、魚類和甲殼類動物的食物原料、農(nóng)業(yè)有害生物的生物控制，生產(chǎn)氧氣和去除氮，磷和有毒物質(zhì)的污水處理和污染控制，如塑料的生物降解或二氧化碳的吸收。
[0005]由于燃料產(chǎn)品的生產(chǎn)，微藻日益受到重視。燃料產(chǎn)品的需求日益增加，例如，油類、油類化學品、和對于石油化學品的生產(chǎn)有用的其他物質(zhì)。
[0006]一年中，微藻可以生產(chǎn)陸生植·物10倍至100倍的物質(zhì)。微藻還產(chǎn)生油(脂質(zhì))，可轉(zhuǎn)化為生物燃料的蛋白質(zhì)和淀粉。這些微藻幾乎能在任何地方生長，但最常見于40N到40S之間的緯度。已有超過100，000種已知的硅藻(一種微藻)，40，000種已知的綠色植物樣微藻，和較小數(shù)量的其他微藻品種，微藻將在幾乎任何環(huán)境下迅速生長，幾乎任何種類的水中，包括具有有限的或較差水質(zhì)的邊緣地區(qū)。
[0007]微藻可以以油或淀粉的形式儲存能量。儲存的油可以高達微藻重量的60%。已經(jīng)證實，特定的種類增強了油或淀粉的生產(chǎn)，以及生長條件已進行了檢測。也已經(jīng)開發(fā)了提取和把這些物質(zhì)轉(zhuǎn)化為燃料的過程。
[0008]因此，那里存在迫切需要開發(fā)可再生的、可持續(xù)的、并且降低對環(huán)境危害的燃料產(chǎn)品的替代方法。
[0009]發(fā)明概沭
[0010]本公開內(nèi)容包括減少真菌在液體系統(tǒng)中生長的方法，包括用微藻在液體系統(tǒng)中接種，檢測真菌；提供有效濃度的殺真菌劑，相對于未使用殺真菌劑的真菌生長而言抑制真菌的生長，生長微藻。
[0011]本公開內(nèi)容包括減少有害生物在液體系統(tǒng)中生長的方法，包括用微藻在液體系統(tǒng)中接種，檢測有害生物；提供有效濃度的殺蟲劑，相對于未使用殺蟲劑的有害生物生長而言抑制有害生物的生長，生長微藻。[0012]本公開內(nèi)容還提供了檢測真菌在微藻液體系統(tǒng)中存在的方法，包括獲得液體系統(tǒng)樣品；和檢測指不真菌的DNA序列的存在。
[0013]本公開內(nèi)容還提供了檢測有害生物在微藻液體系統(tǒng)中存在的方法，包括獲得液體系統(tǒng)樣品；和檢測指不有害生物的DNA序列的存在。
[0014]本公開內(nèi)容提供了在液體系統(tǒng)中增加微藻產(chǎn)量的方法，包括提供含有殺真菌劑的液體系統(tǒng)；和在存在殺真菌劑的液體系統(tǒng)中生長微藻至少10天。
[0015]本公開內(nèi)容提供了在液體系統(tǒng)中增加微藻產(chǎn)量的方法，包括提供液體系統(tǒng)；和在液體系統(tǒng)中生長微藻至少10天，該液體系統(tǒng)依次提供一種或多種殺真菌劑以抑制有害生物生長。
[0016]此外，本公開內(nèi)容提供了在液體微藻培育系統(tǒng)中預防真菌生長的方法，包括提供有效濃度的殺真菌劑，抑制真菌在液體中的生長，而該殺真菌劑并不明顯抑制微藻的生長；在經(jīng)殺真菌劑處理的液體中接種微藻；和生長微藻。
[0017]本公開內(nèi)容還提供了處理液體微藻培育系統(tǒng)的方法，包括檢測液體系統(tǒng)中真菌的存在；提供有效濃度殺真菌劑到液體系統(tǒng)中，抑制真菌生長，生長微藻；和至少監(jiān)測一次所述液體系統(tǒng)中的所述真菌的存在。
[0018]本公開內(nèi)容進一步提供了液體微藻培育系統(tǒng)，含有轉(zhuǎn)基因微藻和殺真菌劑。
[0019]本公開內(nèi)容進一步提供了壺菌的檢測方法，包括獲取樣品，在樣品中進行聚合酶鏈式反應，該聚合酶鏈式反應使用一對能夠擴增核苷酸分子的寡核苷酸引物，該核苷酸分子具有的序列選自由SEQ ID NOs:1至6或其互補組成的組。
[0020]序列的簡要i兌明·
[0021]SEQ ID NO:1給出了內(nèi)部序列轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)域和壺菌FDOl的5.8sRNA。
[0022]SEQ ID NO:2給出了內(nèi)部的序列轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)域和壺菌FD61的5.8sRNA。
[0023]SEQ ID NO:3給出了內(nèi)部的序列轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)域和壺菌FD95的5.8sRNA。
[0024]SEQ ID NO:4給出了內(nèi)部的序列轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)域和壺菌FD100的5.8sRNA。
[0025]SEQ ID NO:5給出了內(nèi)部的序列轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)域和壺菌FDlOl的5.8sRNA。
[0026]SEQ ID NO:6給出了內(nèi)部的序列轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)域和壺菌FDARG的5.8sRNA。
[0027]SEQ ID NO:7給出了肽核酸(PNA)抑制劑序列SE0004-PNA2的序列。
[0028]SEQ ID NO:8給出了肽核酸(PNA)抑制劑序列SE0107-PNA2的序列。
[0029]SEQ ID NO:9給出了肽核酸(PNA)抑制劑序列SE0087-PNA4的序列。
[0030]SEQ ID NO:10-37給出了用于聚合酶鏈式反應(PCR)檢測的寡核苷酸序列。
[0031]附圖的簡要i兌明
[0032]圖1是表示分離出的壺菌有害生物的進化分析結(jié)果的系譜樹。
[0033]圖2是結(jié)合了熒光增白劑(Calcofluor White)的被壺菌感染微藻培育樣品的稀釋系列的熒光測量結(jié)果的曲線圖。
[0034]圖3是被壺菌感染微藻培育樣品的稀釋系列的葉綠素熒光結(jié)果的曲線圖。
[0035]圖4提供了結(jié)合熒光增白劑的被壺菌感染的微藻培育圖像。
[0036]圖5是被壺菌感染的微藻樣品中的熒光增白劑和葉綠素的熒光比率的曲線圖。
[0037]圖6是具有熒光增白劑熒光的被壺菌感染的微藻培養(yǎng)物的CT值的結(jié)果曲線圖。
[0038]圖7是顯示了作為鼓藻有害生物的4種不同已知壺菌存在的鼓藻池塘的監(jiān)測曲線圖。
[0039]圖8是顯示了殺真菌劑氟啶胺對于未受污染微藻的生長影響的曲線圖。
[0040]圖9是顯示了使用或未使用氟啶胺培養(yǎng)的受污染微藻的生長曲線圖。(Ippm=Img/L)。
[0041]圖?ο是顯示了殺真菌劑Headline?對于未受污染微藻生長的影響曲線圖。
[0042]圖1i是使用或未使用殺真菌劑Headline?的受污染微藻的生長曲線圖。(lppm=lmg/L)o
[0043]圖12是Thimm 4寸于未受污染微藻培養(yǎng)物的生長影響的曲線圖。(lppm=lmg/L)。
[0044]圖13是使用或未使用殺真菌劑Thimmp培養(yǎng)的受污染微藻的生長曲線圖。(lppm=lmg/L)0
[0045]圖14是殺真菌劑處理對于室外開放池塘中生長的密度微藻P16的影響的曲線圖。
[0046]圖15是顯示了使用或未使用殺真菌劑處理培養(yǎng)的微藻生長曲線圖。
[0047]圖16是在室外開放池塘中生長的微藻的生長和收集的圖。
[0048]圖17是顯示了室外微藻培養(yǎng)物監(jiān)測和處理的圖。
[0049]發(fā)明詳沭
[0050]除非另有定義，本文所用的技術(shù)和科學術(shù)語與本領域技術(shù)人員所通常理解的含義相同。本領域技術(shù)人員將認`識到，許多方法可用在本發(fā)明的實踐中。實際上，本發(fā)明不以任何方式限制所描述的方法和材料。為了本公開的目的，下列術(shù)語定義如下。
[0051]“環(huán)境樣品”指的是從微藻正在生長的或可能生長的周邊環(huán)境中獲得的樣品。如本文所用，環(huán)境樣品可能取自上述提到的環(huán)境或周邊區(qū)域中的空氣、土壤、植被和水。這些樣品是按照用于采集微生物樣品的標準采集規(guī)程采集的。
[0052]如本文所用的“生長微藻”、“生長的微藻”、“微藻生長”和“培養(yǎng)微藻”是指一個或多個步驟，包括微藻在培養(yǎng)液中到當微藻處于收集步驟開始前的懸浮液中。
[0053]如本文所用的，術(shù)語“有害生物”指的是樣品培養(yǎng)液中的任何不需要的生物有機體。有害生物非限定性的例子是細菌和真菌。有害生物可能是不被需要的是因為，其降低了微藻培養(yǎng)的生長率?？商娲模泻ι锟赡苁遣槐恍枰氖且驗槠浣档土宋⒃迳L的總體程度或每體積培養(yǎng)液微藻的總產(chǎn)率。有害生物可能是不被需要的是因為其導致微藻培養(yǎng)物的死亡。有害生物可能是不被需要的是因為其改變了培養(yǎng)的微藻的基因表達。有害生物可以是單個有機體的種群或是混合的種群。
[0054]“微藻”，如本文所用，指的是非維管光合生物，例如，劃分為光合細菌的生物(包括藍細菌)，藍藻，原綠藻，紅藻，綠藻，不等鞭毛類，tribophyta,灰色藻門，chlorarachniophytes，裸藻門，裸藻，定鞭藻門，金藻門，隱藻，淀粉鞭毛藻，甲藻，腰鞭毛目，鼓藻目，pyrmnesiophyta,娃藻門，黃藻，eustigmatophyta, raphidophyta,褐藻和浮游植物。微藻還可以是微藻種，包括但不限于衣藻。萊茵衣藻，鹽藻，微綠球藻，微綠球藻occulata,柵藻二形，斜生柵藻，杜氏鹽藻，或雨生紅球。本文所公開的“微藻”可以是單細胞的非維管光合生物。在其他情況下，微藻可以是多細胞非維管光合生物的一個或多個細胞。
[0055]“真菌”如本文所用，是真菌界和芽枝霉門、壺菌門、球囊菌門、微孢子蟲門、新麗鞭毛菌門、子囊菌門、擔子菌門的一名成員。如本文所述，真菌包括壺菌綱和單毛壺菌綱以及壺菌spp.種或真菌任一組合的成員。如本文所述，真菌包括壺菌種的成員，壺菌種包含于真菌界壺菌門，真菌界含有壺菌目、裂壺菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales>Cladochytriales、集壺菌目和單毛壺菌目。
[0056]如本文所述，“減少生長”、“抑制生長”、“生長減速”和“生長抑制”指的是相對于在缺少任何處理的相同或類似條件下的有害生物繁殖數(shù)量或分裂數(shù)量而言，減少了有害生物的繁殖或分裂?！皽p少生長”、“抑制生長”、“生長減速”和“生長抑制”也可以指有害生物通過處理而被殺死或死亡。
[0057]如本文所述，“收集”指的是在培養(yǎng)系統(tǒng)，包括液體培養(yǎng)系統(tǒng)中去除或分離全部或部分微藻?？梢詮某砷L培養(yǎng)液中連續(xù)或間歇收集，或者在培養(yǎng)的末尾階段整體收集微藻。液體，如上清液，可以采用虹吸、流通或其他分離方式返回液體培養(yǎng)系統(tǒng)。相對收集數(shù)量指的是余下微藻數(shù)量與收集前含在液體培養(yǎng)系統(tǒng)中的數(shù)量相比。
[0058]如本文所述，“回收的液體”或“返回的液體”指的是從液體培養(yǎng)系統(tǒng)中收集或除去超過50%、60%、70%、80%、90%、95%或所有的微藻后余下的液體。
[0059]如本文所述，“培養(yǎng)時間”、或“生長的長度”、或“收集時間”是從液體培養(yǎng)系統(tǒng)用微藻接種的時間開始計算的。
[0060]如本文所述，術(shù)語“產(chǎn)率”指的是收集時每單位體積的微藻數(shù)量，以及可以表述為，例如，每體積培養(yǎng)液的細胞數(shù)量，每體積培養(yǎng)液的質(zhì)量，等。本文所述的產(chǎn)率還可以表述為每培養(yǎng)面積的質(zhì)量。產(chǎn)率的改變被表述為接受或未接受處理的產(chǎn)率的增加或降低所帶來的改變。
[0061]如本文所述，術(shù)語“液體系統(tǒng)”、“液體培養(yǎng)系統(tǒng)”、或“培養(yǎng)系統(tǒng)”指的是用于培養(yǎng)微藻的系統(tǒng)。液體系統(tǒng)可包括封閉的和開放的培養(yǎng)系統(tǒng)。開放的液體系統(tǒng)可包括，例如開放的或封閉的光生物反應器、半封閉·的池塘、開放的池塘，或湖泊。
[0062]如本文所述，術(shù)語“處理”指的是抑制有害生物生長的方法或組合物。處理可以包括殺死有害生物的方法或組合物。
[0063]如本文所述，術(shù)語“有效濃度”指的是，當被用于液體系統(tǒng)中生長的微藻培養(yǎng)物的持續(xù)生長，或生存時，足以控制有害生物生長或殺死有害生物的殺蟲劑或殺真菌劑的濃度。
[0064]本公開內(nèi)容提供了在液體微藻培養(yǎng)物中減少有害生物生長的方法，其中液體系統(tǒng)用微藻接種，該系統(tǒng)被監(jiān)視有害生物的存在，以及相對于未使用殺真菌劑的有害生物生長，提供有效濃度的殺真菌劑以抑制有害生物的生長，以及養(yǎng)殖微藻。本公開內(nèi)容進一步提供了液體系統(tǒng)中活的有害生物的減少。
[0065]一方面，本公開內(nèi)容提供了減少有害生物生長的方法，其中該方法測量在抑制劑存在下有害生物生長相對于在相似條件下沒有抑制劑的有害生物生長的減少。一方面，有害生物生長的減少是由有害生物死亡實現(xiàn)的。另一方面，有害生物生長的減少是由有害生物分裂抑制來實現(xiàn)的。一方面，有害生物生長減少了 99%或更多。另一方面，有害生物生長減少了 95%或更多。在又一方面，有害生物生長減少90%或更多。在另一方面，有害生物生長減少至少80%。另一方面，有害生物生長減少至少70%。另一方面，有害生物生長減少至少60%。另一方面，有害生物生長減少至少50%。另一方面。有害生物生長減少至少90-99%，至少95-99%，至少80-95 %，至少80-99%，或75-99 %。在又一個方面，一種有害生物的生長減少不低于90 %，95%或99 %。
[0066]一方面，有害生物可以是真菌界的成員。另一方面，有害生物可以是壺菌門的成員。另一方面，有害生物可以是壺菌綱的成員。又一方面，有害生物可以是壺菌spp.種的成員。另一方面，有害生物可由選自壺菌的核酸序列識別，該壺菌可用選自由SEQ ID NOs: 1-6組成的組的核酸序列來識別。
[0067]微藻培養(yǎng)物的有害生物的例子是真菌界的成員，和包括芽枝霉門、壺菌門、球囊菌門、微孢子蟲門、新麗鞭毛菌門、子囊菌門、擔子菌門。如本文所述，真菌包括壺菌綱和單毛壺菌綱以及壺菌spp.種的成員。一方面，作為真菌界成員的有害生物可由分子系統(tǒng)發(fā)育進行鑒別，例如使用James等的方法“有鞭毛真菌(壺菌門)的分子系統(tǒng)發(fā)育和一種新的門(芽枝霉門)的說明”，真菌學，98 (6): 860-71 (2006)，其全部內(nèi)容通過參考引用到本文。
[0068]另一方面,有害生物可以是壺菌門羅茲屬的成員。一方面，有害生物可以是壺菌門的壺菌目/根生壺菌屬的分支的成員。又一方面,有害生物可以是Amoeboaphelidium屬的成員。又一方面，有害生物可能與SEQ ID NOs: 1-6標不的壺菌最為系統(tǒng)上相關(guān)。另一方面，有害生物可能與壺菌門的分支系統(tǒng)上相關(guān)，壺菌門包括壺菌目、裂壺菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales、Cladochytriales、集壺菌目和單毛壺菌目。一方面，有害生物可與羅茲spp.系統(tǒng)上相關(guān)。
[0069]感染微藻培養(yǎng)物的真菌例子有壺菌綱的成員和壺菌spp.的成員。壺菌是原始的真菌，和主要是腐生的(降解幾丁質(zhì)和角蛋白)。有些種是單細胞的。與其他真菌類似，壺菌的細胞壁由幾丁質(zhì)構(gòu)成。許多壺菌種是水生的(大多在淡水中找到)。有大約1，000個壺菌種，127個屬，分布在5個目中。某些壺菌種是寄生的，可能感染植物，包括微藻。
[0070]包括在本公開內(nèi)容中的壺菌特定非限定性例子包括:Achlyogeton、Allochytridium、Allochytridium expandens、Allochytridium luteum、Allomyces、Allomyces (subgenus)、Allomyces attomyces、Allomyces catenoides、Allomycesreticulatus、Amoeboaphelid`ium protococcarum、Alphamycetaceae> Alphamyces、Alphamyces chaetiferum、Amphicypellus、Amphicypellus elegans、Anaeromyces、Anaeromyces elegans、Anaeromyces mucronatus、Angulomycetaceae> Angulomyces、Angulomyces argentinensis、Aquamycetaceae、Aquamyces、Aquamyces chlorogoni1、Arnaudovia、Arnaudovia hyponeustonica、Asterophlycti s irregularis、Asterophlyctis sarcoptoides、Batrachochytrium> Batrachochytrium dendrobatidis、Blastocladia arborata、Blastocladia caduca、Blastocladia coronata、Blastocladiacristata、Blastocladia didyma、Blastocladia elegans、Blastocladia excelsa、Blastocladia filamentosa、Blastocladia fruticosa、Blastocladia fusiformis、Blastocladia globosa var.Minutissima>Blastocladia heterosporangia>Blastocladiamammilata、Blastocladia picaria、Blastocladia pileota、Blastocladia pusilla、Blastocladia sessi I is、BI astocIadia spiciformis、BI astoe Iadie11 a、Blastocladiella anabaenae、 Blastocladiella britannica、 Blastocladiellaco1mbiensis、Blastocladiel la nova—zeylandiae、Blastocladiomycota、Blastocladiopsis elegans、 Blyttiomyces bartsch、 Blyttiomyces aureus booth、Blyttiomyces conicus、Blyttiomyces exuviae> Blyttiomyces gregarum、Blyttiomyces
【權(quán)利要求】
1.減少液體系統(tǒng)中真菌生長的方法，包括: 在所述液體培養(yǎng)物中接種微藻； 檢測所述真菌； 提供有效濃度的殺真菌劑，相對于未使用所述殺真菌劑的所述真菌的生長而言，抑制所述真菌的生長；和 使所述微藻生長。
2.如權(quán)利要求1所述方法，其中，所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
3.如權(quán)利要求1所述方法，其中，所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
4.如權(quán)利要求1所述方法，進一步提供了第二有效濃度的殺真菌劑，選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
5.如權(quán)利要求1所述方法，進一步提供了第二有效濃度的殺真菌劑，選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
6.如權(quán)利要求1所述方法，其中，所述微藻通常是基因工程改造的。
7.如權(quán)利要求1所述方法，其中，所述真菌是真菌界壺菌門的成員。
8.如權(quán)利要求7所述方法，其中所述的真菌界壺菌門成員選自由壺菌目、裂壺菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales> Cladochytriales、集壺菌目和單毛壺菌目組成的組?！?br> 9.如權(quán)利要求2所述方法，其中所述微藻選自由衣藻、微綠球藻、鏈帶藻、柵藻和螺旋藻組成的組。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是單培養(yǎng)。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生長提供的微藻產(chǎn)率大于每升(g/L)0.4克AFDff0
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述產(chǎn)率選自由大于0.5g/L、大于0.6g/L、大于0.7g/L、大于0.8g/L、大于0.9g/L和大于1.0g/L組成的組。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生長提供的微藻產(chǎn)率至少是收集自未感染且未施用殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物產(chǎn)率的80%。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述產(chǎn)率是選自由收集自未感染且未施用殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物產(chǎn)率的至少85%，至少90%，至少95%，至少97.5%，至少99%和100%組成的組。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生長提供的微藻產(chǎn)率至少比收集自具有所述真菌而又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高10%。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述產(chǎn)率選自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高至少15%，至少20%，至少25%，至少50%，至少75%和100%所組成的組。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述產(chǎn)率選自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，5.0倍，7.5倍，10倍，15倍所組成的組。
18.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述產(chǎn)率當微藻處于對數(shù)生長期時進行測量。
19.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述產(chǎn)率當微藻處于穩(wěn)定生長期時進行測量。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)具有至少10000升的體積。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)具有體積至少20，000L,40，000L, 80，000L, 100，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, I, 000，O00L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150, 000L, 10, 000 至 200, 000L, 10, 000 至 250, 000L, 10, 000 至 500, 000L, 10, 000至 600，000L, 10，000 至 1，000, 000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至100, 000L, 20, 000 至 150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 I, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至100, 000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 I, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80, 000 至 500, 000L, 80, 000 至600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 I, 000，000L, 200，000 至250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 I, 000，000L, 250，000 至500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 I, 000，000L, 500，000 至 600，000L, and500, 000至 I, 000，OOOL0
23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)具有表面積選自在面積上至少0.25英畝，至少0.5英畝，至少1.0英畝，至少1.5英畝，至少2.0英畝，至少2.5英畝，至少5.0英畝，7.5或更多英畝，0.25至0.5英畝，0.25至1.0英畝，0.25至1.5英畝，0.25至2.0英畝，0.25至2.5英畝，0.25至5.0英畝，0.25至7.5英畝，0.5至1.0英畝，0.5至1.5英畝，0.5至2.0英畝，0.5至2.5英畝，0.5至5.0英畝，0.5至7.5英畝，1.0至1.5英畝，1.0至2.0英`畝，1.0至2.5英畝，1.0至5.0英畝，1.0至7.5英畝，2.0至2.5英畝，2.0至5.0英畝，2.0至7.5英畝，2.5英畝至5.0英畝，2.5至7.5英畝，2.5至10英畝，5至12英畝，5至15英畝，5至18英畝，5至20英畝，10至25英畝，10至30英畝，10至35英畝，10至40英畝，10至45英畝，和10至50英畝。
24.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是連續(xù)的培養(yǎng)系統(tǒng)。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)提供所述微藻在對數(shù)生長期的生長。
26.在微藻液體培養(yǎng)系統(tǒng)中檢測真菌存在的方法，包括: 獲取所述液體培養(yǎng)系統(tǒng)的樣品；和 檢測提示所述真菌的DNA序列的存在。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述真菌是真菌界壺菌門的成員。
28.如權(quán)利要求27所述方法，其中所述的真菌界壺菌門成員選自由壺菌目、裂壺菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales> Cladochytriales、集壺菌目和單毛壺菌目組成的組。
29.如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述核糖體DNA序列選自由以下組成的組:NC_003053 根生壺菌屬 136 線粒體、NC_003048Hyaloraphidium curvatum 線粒體、NC_003052SpizeI1myces 毛蟲線粒體染色體 l、NC_003061Spizellomyces 毛蟲線粒體染色體 2、NC_003060Spizellomyces 毛蟲線粒體染色體 3、NC_004760Harpochytrium 屬 JEL94 線粒體、NC_004624MonobIephareIla 屬 JEL15 線粒體和 NC_004623Harpochytrium 屬 JEL105線粒體。在本公開內(nèi)容的另一個方面，有害生物可以使用PCR檢測，其放大選自SEQ ID NO:1-6的序列。
30.微藻在液體系統(tǒng)中生長的方法，包括: 用微藻接種所述液體系統(tǒng)； 接種后在所述液體系統(tǒng)中生長所述微藻至少10天； 針對真菌的存在監(jiān)測所述液體系統(tǒng)至少一次，其中所述監(jiān)測可檢測所述真菌在為每毫升至少IO6個細胞的水平(細胞/mL)，以及 從所述液體的系統(tǒng)的至少一個部分收集微藻。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述真菌是真菌界壺菌門的成員。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述的真菌界壺菌門成員選自由壺菌目、裂壺菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetales> Cladochytriales、集壺菌目和單毛壺菌目組成的組。
33.如權(quán)利要求30所述的方法，進一步包括向所述液體系統(tǒng)提供殺真菌劑。
34.如權(quán)利要求33所述方法，其中，所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
35.如權(quán)利要求33所述方法，其中，所述殺真菌劑是選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組的有效濃度的殺真菌劑。
36.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述生長天數(shù)選自以下組成的組，在所述接種后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
37.進一步包括檢測所述真菌的存在。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述檢測包括熒光增白劑與所述液體培養(yǎng)物樣品組合。
39.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述監(jiān)測能夠檢測所述真菌在由以下組成的組的水平，至少IO5細胞/mL, IO4細胞/mL, IO3細胞/mL, IO2細胞/mL,和IO1細胞/mL。
40.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述收集包括從所述液體中分離至少90%所述微藻以生成微藻貧液，和所述至少一部分是指所述液體系統(tǒng)總體積的至少2%。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述至少一部分選自由以下組成的組，占所述液體系統(tǒng)總體積的至少2.5%，至少5%，至少7.5%，至少10%，至少12.5%，至少15%，至少20%，從2%至5%，從2至7.5%，從2至20%，從2%至12.5%，從2%至15%，從2%至 20%，從 2.5%至 5%，從 2.5 至 7.5%，從 2.5%至 10%，從 2.5%至 12.5%，從 2.5%至15 % 從 2.5 到 20 %，從 5 至 7.5 %，從 5 % 至 10 %，從 5 % 至 12.5 %，從 5 % 至 15 %，從 5 %至 20%，從 7.5%至 10%，從 7.5%至 12.5%，從 7.5 至 15%，從 7.5%至 20%，從 10%至12.5%，從 10%至 15%，和 10 至 20%。
42.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述移除的液體系統(tǒng)的所述部分在所述微藻收集后返回到所述液體系統(tǒng)中。
43.如權(quán)利要求30所述的方法，進一步包括加熱所述液體系統(tǒng)至33°C，以殺死或一致所述真菌的生長。
44.如權(quán)利要求30所述的方法，進一步包括用CO2所述液體系統(tǒng)。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述CO2的補充是提供CO2的濃度在由20ppm，25ppm, 30ppm, 35ppm 組成的組。
46.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述CO2的補充是提供pH在8.8和9.2之間，和所述微藻是綠藻。
47.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述CO2的補充是提供pH在9.8和10.2之間，和所述微藻是藍綠藻。
48.如權(quán)利要求30所述的方法，進一步包括用營養(yǎng)物質(zhì)補充所述液體系統(tǒng)，營養(yǎng)物質(zhì)選自由氮，磷，鉀，鐵，鋅，鈣和鎂組成的組。
49.如權(quán)利要求48所述的方法，其中所述氮的補充選自由硝酸(HNO3),尿素，硝酸鉀(KNO3)和硝酸鈉(NaNO3)組成的組。
50.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)具有至少10000升的體積。
51.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是開放式室外系統(tǒng)。
52.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述開放式室外系統(tǒng)的體積至少具有20，000L,40,000L, 80，000L, 100，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, I, 000，000L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150，000L, 10，000 ·至 200，000L, 10，000 至 250，000L, 10，000 至 500，000L, 10，000 至600，000L, 10，000 至 1，000，000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至100, 000L, 20, 000 至 150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 I, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至100, 000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 I, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80, 000 至 500, 000L, 80, 000 至600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 I, 000，000L, 200，000 至250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 I, 000，000L, 250，000 至500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 I, 000，000L, 500，000 至 600，000L,和 500，000至 I, 000，OOOL0
53.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)具有面積選自在面積上至少0.25英畝，至少0.5英畝，至少1.0英畝，至少1.5英畝，至少2.0英畝，至少2.5英畝，至少5.0英畝，7.5或更多英畝，0.25至0.5英畝，0.25至1.0英畝，0.25至1.5英畝，0.25至2.0英畝，0.25至2.5英畝，0.25至5.0英畝，0.25至7.5英畝，0.5至1.0英畝，0.5至1.5英畝，0.5至2.0英畝，0.5至2.5英畝，0.5至5.0英畝，0.5至7.5英畝，1.0至1.5英畝，1.0至2.0英畝，1.0至2.5英畝，1.0至5.0英畝，1.0至7.5英畝，2.0至2.5英畝，2.0至5.0英畝，2.0至7.5英畝，2.5英畝至5.0英畝，2.5至7.5英畝，2.5至10英畝，5至12英畝，5至15英畝，5至18英畝，5至20英畝，10至25英畝，10至30英畝，10至35英畝，10至40英畝，10至45英畝，和10至50英畝。
54.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是連續(xù)的培養(yǎng)系統(tǒng)。
55.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)提供所述微藻在對數(shù)生長期的生長。
56.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述所述對數(shù)生長期的生長用FbwCami進行監(jiān)測。
57.如權(quán)利要求40所述的方法，進一步包括將所述微藻貧液返回到所述液體系統(tǒng)中。
58.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)維持pH在8-10.5之間。
59.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)維持溫度選自以下組成的組，在O至35°C之間，5至35°C之間，10至35°C之間，15至35°C之間，20至35°C之間，25至35°C之間，30至35°C之間，大于5°C，大于10°C，大于15°C，大于20°C和大于30°C。
60.如權(quán)利要求30所述的方法，進一步包括提供第一劑量有效濃度的殺真菌劑，所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
61.如權(quán)利要求37所述的方法，進一步包括提供第一劑量有效濃度的殺真菌劑，所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
62.如權(quán)利要求60所述的方法，進一步包括添加一種或多種附加劑量的所述殺真菌劑，以維持所述有效濃度。
63.如權(quán)利要求60所述的方法,其中所述有效濃度選自由每百萬0.5份(ppm), lppm,2ppm,5ppm, IOppm,和 IOppm 以上組成的組。
64.如權(quán)利要求60所述的方法，進一步包括連續(xù)添加所述殺真菌劑以維持所述殺真菌劑的有效濃度?！?br> 65.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述微藻經(jīng)過基因工程改造。
66.如權(quán)利要求30所述的方法,其中所述微藻選自由衣藻、微綠球藻、鏈帶藻、柵藻和螺旋藻組成的組。
67.如權(quán)利要求65所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是單培養(yǎng)。
68.如權(quán)利要求60所述的方法，進一步包括向所述液體系統(tǒng)提供有效數(shù)量的第二殺真菌劑，所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
69.如權(quán)利要求60所述的方法，進一步包括進一步包括向所述液體系統(tǒng)提供有效數(shù)量的第二殺真菌劑，所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
70.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的收集提供了微藻產(chǎn)率大于0.4克每升(g/DAFDff0
71.如權(quán)利要求70所述的方法，其中，所述產(chǎn)率選自由大于0.5g/L、大于0.6g/L、大于0.7g/L、大于0.8g/L、大于0.9g/L和大于1.0g/L組成的組。
72.如權(quán)利要求33所述的方法，其中所述生長提供的微藻產(chǎn)率至少是收集自未感染且未施用殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物產(chǎn)率的80%。
73.如權(quán)利要求72所述的方法，其中，所述產(chǎn)率是選自由收集自未感染且未施用殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物產(chǎn)率的至少85%，至少90%，至少95%，至少97.5%，至少99%和100%組成的組。
74.如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述收集提供的微藻產(chǎn)率至少比收集自具有所述真菌而又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高10%。
75.如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述產(chǎn)率選自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高至少15%，至少20%，至少25%，至少50%，至少75%和100%所組成的組。
76.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述產(chǎn)率選自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，5.0倍，7.5倍，10倍，15倍所組成的組。
77.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的收集當微藻處于對數(shù)生長期時進行測量。
78.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的收集當微藻處于晚對數(shù)生長期時進行測量。
79.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的收集當微藻處于穩(wěn)定生長期時進行測量。
80.增強微藻液體系統(tǒng)產(chǎn)率的方法,包括: 向所述液體系統(tǒng)提供優(yōu)先水平的殺真菌劑；和 在所述殺真菌劑存在的情況下，在所述液體系統(tǒng)中生長所述微藻至少10天。
81.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
82.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
83.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述生長天數(shù)選自以下組成的組，在所述接種后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
84.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述優(yōu)先水平的殺真菌劑防止真菌的生長，該真菌是壺菌門的一員。
85.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述優(yōu)先水平選自由每百萬0.5份(ppm),1.0ppm, 2.0ppm, 5.0ppm, IOppm,和 IOppm 以上組成的組。
86.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)。
87.如權(quán)利要求86所述的方法，其中所述開放式室外系統(tǒng)的體積至少具有20，000L,4O, 000L, 80，000L, 100，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, 1, 000，000L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150，000L, 10，000 至 200，000L, 10，000 至 250，000L, 10，000 至 500，000L, 10，000 至.600，000L, 10，000 至 1，000，000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至.100, 000L, 20, 000 至 150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至.500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 1, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至.100,000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至.500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 1, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至.150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80, 000 至 500, 000L, 80, 000 至.600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至.250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 1, 000，000L, 200，000 至.250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 1, 000，000L, 250，000 至.500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 1, 000，000L, 500，000 至 600，000L,和 500，000至 I, 000，OOOLo
88.如權(quán)利要求86所述的方法，其中所述開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)具有面積選自至少0.25英畝，至少0.5英畝，至少1.0英畝，至少1.5英畝，至少2.0英畝，至少2.5英畝，至少5.0英畝，7.5或更多英畝，0.25至0.5英畝，0.25至1.0英畝，0.25至1.5英畝，0.25至2.0英畝，0.25至2.5英畝，0.25至5.0英畝，0.25至7.5英畝，0.5至1.0英畝，0.5至1.5英畝，0.5至2.0英畝，0.5至2.5英畝，0.5至5.0英畝，0.5至7.5英畝，1.0至1.5英畝，1.0至2.0英畝，1.0至2.5英畝，1.0至5.0英畝，1.0至7.5英畝，2.0至2.5英畝，2.0至5.0英畝，2.0至7.5英畝，2.5英畝至5.0英畝，2.5至7.5英畝。
89.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述微藻經(jīng)過基因工程改造。
90.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述微藻選自由衣藻、微綠球藻、鏈帶藻、柵藻和螺旋藻組成的組。
91.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是單培養(yǎng)。
92.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述的生長提供了微藻產(chǎn)率大于0.4克每升(g/L) AFDff0
93.如權(quán)利要求92所述的方法，其中，所述產(chǎn)率選自由大于0.5g/L、大于0.6g/L、大于0.7g/L、大于0.8g/L、大于0.9g/L和大于1.0g/L組成的組。
94.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述生長提供的微藻產(chǎn)率至少比收集自具有所述真菌而又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高10%。
95.如權(quán)利要求94所述的方法，其中所述產(chǎn)率選自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述殺真菌劑的微·藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高至少15%，至少20%，至少25%，至少50%，至少75%和100%所組成的組。
96.如權(quán)利要求95所述的方法，其中所述產(chǎn)率選自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，5.0倍，7.5倍，10倍，15倍所組成的組。
97.如權(quán)利要求90所述的方法，其中所述的產(chǎn)率當微藻處于對數(shù)生長期時進行測量。
98.如權(quán)利要求90所述的方法，其中所述的產(chǎn)率當微藻處于穩(wěn)定生長期時進行測量。
99.增強微藻液體系統(tǒng)產(chǎn)率的方法,包括: 提供含有殺真菌劑的液體系統(tǒng)；和 在所述殺真菌劑存在的情況下，在所述液體系統(tǒng)中生長所述微藻至少10天。
100.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
101.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
102.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述微藻經(jīng)過基因工程改造。
103.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述微藻選自由衣藻、微綠球藻、鏈帶藻、柵藻和螺旋藻組成的組。
104.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述生長天數(shù)選自以下組成的組，在所述接種后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
105.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述微藻的所述產(chǎn)率大于缺少所述殺真菌劑的液體系統(tǒng)的90%。
106.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述微藻的產(chǎn)率大于0.4克每升(g/L) AFDff,以及所述微藻在對數(shù)生長期收集。
107.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述的生長提供了微藻產(chǎn)率大于0.4克每升(g/L) AFDff,以及所述微藻在穩(wěn)定期收集。
108.如權(quán)利要求106所述的方法，其中，所述產(chǎn)率選自由大于0.5g/L、大于0.6g/L、大于0.7g/L、大于0.8g/L、大于0.9g/L和大于1.0g/L組成的組。
109.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述產(chǎn)率選自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高至少15%，至少20%，至少25%，至少50%，至少75%和100%所組成的組。
110.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述產(chǎn)率選自比收集自未感染而具有所述真菌的又未施用所述殺真菌劑的微藻液體培養(yǎng)物的微藻產(chǎn)率高至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，5.0倍，7.5倍，10倍，15倍所組成的組。
111.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)。
112.如權(quán)利要求111所述的方法，其中所述開放式室外系統(tǒng)的體積至少具有20，000L,40，000L, 80，000L, 100，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, I, 000，O00L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150, 000L, 10, 000 至 200, 000L, 10, 000 至 250, 000L, 10, 000 至 500, 000L, 10, 000至 600，000L, 10，000 至 I, 000，000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至100, 000L, 20, 000 至 ·150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 I, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至100, 000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 I, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80, 000 至 500, 000L, 80, 000 至600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 I, 000，000L, 200，000 至250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 I, 000，000L, 250，000 至500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 I, 000，000L, 500，000 至 600，000L,和 500，000至 I, 000，OOOL0
113.如權(quán)利要求111所述的方法，其中所述開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)具有面積選自至少0.25英畝，至少0.5英畝，至少1.0英畝，至少1.5英畝，至少2.0英畝，至少2.5英畝，至少5.0英畝，7.5或更多英畝，0.25至0.5英畝，0.25至1.0英畝，0.25至1.5英畝，0.25至2.0英畝，0.25至2.5英畝，0.25至5.0英畝，0.25至7.5英畝，0.5至1.0英畝，0.5至1.5英畝，0.5至2.0英畝，0.5至2.5英畝，0.5至5.0英畝，0.5至7.5英畝，1.0至1.5英畝，1.0至2.0英畝，1.0至2.5英畝，1.0至5.0英畝，1.0至7.5英畝，2.0至2.5英畝，2.0至5.0英畝，2.0至7.5英畝，2.5英畝至5.0英畝，2.5至7.5英畝。
114.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述微藻經(jīng)過基因工程改造。
115.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述微藻選自由衣藻、微綠球藻、鏈帶藻、柵藻和螺旋藻組成的組。
116.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是單培養(yǎng)。
117.防止真菌在微藻液體培養(yǎng)系統(tǒng)中生長的方法，包括:向液體提供有效濃度的殺真菌劑以抑制真菌生長，其中所述殺真菌劑沒有明顯抑制微藻的生長； 用所述微藻接種所述液體；和 使所述微藻生長。
118.如權(quán)利要求117所述的方法，其中所述真菌是真菌界壺菌門的一員。
119.如權(quán)利要求117所述的方法，其中所述的真菌界壺菌門成員選自由壺菌目、裂壺菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetal es> Cladochytriales、集壺菌目和單毛壺菌目組成的組。
120.如權(quán)利要求117所述的方法，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
121.如權(quán)利要求117所述的方法，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
122.如權(quán)利要求117所述的方法，其中所述生長天數(shù)選自以下組成的組，在所述接種后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
123.如權(quán)利要 求117所述的方法，進一步包括提供一種或多種附加數(shù)量的所述殺真菌劑以維持所述殺真菌劑在所述生長過程中的有效濃度。
124.如權(quán)利要求123所述的方法，其中所述有效濃度選自由每百萬0.5份(ppm)，1.0ppm, 2.0ppm, 5.0ppm, IOppm,和 IOppm 以上組成的組。
125.處理液體系統(tǒng)中微藻培養(yǎng)物的方法，包括: 檢測所述液體系統(tǒng)中真菌的存在； 向所述液體系統(tǒng)中提供有效濃度的殺真菌劑以抑制所述真菌的生長；使微藻生長；和 所述液體系統(tǒng)對所述真菌的存在至少監(jiān)測一次。
126.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述真菌是真菌界壺菌門的一員。
127.如權(quán)利要求126所述的方法，其中所述的真菌界壺菌門成員選自由壺菌目、裂壺菌目、Rhizophydiales、Lobulomycetal es> Cladochytriales、集壺菌目和單毛壺菌目組成的組。
128.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
129.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
130.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述生長天數(shù)選自以下組成的組，在所述接種后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
131.如權(quán)利要求125所述的方法，進一步包括提供一種或多種附加數(shù)量的所述殺真菌劑以維持所述殺真菌劑在所述生長后的有效濃度。
132.如權(quán)利要求131所述的方法，其中所述有效濃度選自由每百萬0.5份(ppm)，1.0ppm, 2.0ppm, 5.0ppm, IOppm,和 IOppm 以上組成的組。
133.—種含有微藻和殺真菌劑的液體系統(tǒng)，其中所述微藻是轉(zhuǎn)基因微藻。
134.如權(quán)利要求133所述的液體系統(tǒng)，其中所述的轉(zhuǎn)基因微藻選自由衣藻、微綠球藻、鏈帶藻、柵藻和螺旋藻組成的組。
135.如權(quán)利要求133所述的液體系統(tǒng)，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、福美雙、百菌清、二噻農(nóng)、多果定、和二溴氰基乙酰胺組成的組。
136.如權(quán)利要求133所述的液體系統(tǒng)，其中所述殺真菌劑選自由氟啶胺、唑菌胺酯、多果定、和福美雙組成的組。
137.如權(quán)利要求133所述的液體系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)在使用所述微藻接種所述液體系統(tǒng)后的10天或更多天后，提供所述微藻的生長。
138.如權(quán)利要求137所述的液體系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)提供微藻的生長天數(shù)選自以下組成的組，在接種后的15天或更多，30天或更多，45天或更多，60天或更多，90天或更多，120天或更多，180天或更多，250天或更多，500天或更多，1000天或更多，1500天或更多和2000天或更多。
139.如權(quán)利要求133所述的液體系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)補充C02。
140.如權(quán)利要求131所述的液體系統(tǒng)，其中所述液體系統(tǒng)是開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)。
141.如權(quán)利要求140所述的方法，其中所述開放式室外系統(tǒng)的體積至少具有20，000L,40，000L, 80，000L, 10·0，000L, 150，000L, 200，000L, 250，000L, 500，000L, 600，000L, I, 000，O00L, 10，000 至 20，000L, 10，000 至 40，000L, 10，000 至 80，000L, 10，000 至 100，000L, 10，000至 150, 000L, 10, 000 至 200, 000L, 10, 000 至 250, 000L, 10, 000 至 500, 000L, 10, 000至 600，000L, 10，000 至 I, 000，000L, 20，000 至 40，000L, 20，000 至 80，000L, 20，000 至100, 000L, 20, 000 至 150, 000L, 20, 000 至 200, 000L, 20, 000 至 250, 000L, 20, 000 至500, 000L, 20, 000 至 600, 000L, 20, 000 至 I, 000, 000L, 40, 000 至 80，000L, 40，000 至100,000L, 40, 000 至 150, 000L, 40, 000 至 200, 000L, 40, 000 至 250, 000L, 40, 000 至500, 000L, 40, 000 至 600, 000L, 40, 000 至 I, 000, 000L, 80, 000 至 100, 000L, 80, 000 至150, 000L, 80, 000 至 200, 000L, 80, 000 至 250, 000L, 80 , 0 0 0 至 500, 000L, 80, 000 至600，000L, 80，000 至 I, 000，000L, 100，000 至 150，000L, 100，000 至 200，000L, 100，000 至250，000L, 100，000 至 500，000L, 100，000 至 600，000L, 100，000 至 I, 000，000L, 200，000 至250，000L, 200，000 至 500，000L, 200，000 至 600，000L, 200，000 至 I, 000，000L, 250，000 至500，000L, 250，000 至 600，000L, 250，000 至 I, 000，000L, 500，000 至 600，000L,和 500，000至 I, 000，OOOL0
142.如權(quán)利要求140所述的方法，其中所述開放式室外培養(yǎng)系統(tǒng)具有面積選自至少·0.25英畝，至少0.5英畝，至少1.0英畝，至少1.5英畝，至少2.0英畝，至少2.5英畝，至少5.0英畝，7.5或更多英畝，0.25至0.5英畝，0.25至1.0英畝，0.25至1.5英畝，0.25至2.0英畝，0.25至2.5英畝，0.25至5.0英畝，0.25至7.5英畝，0.5至1.0英畝，0.5至1.5英畝，0.5至2.0英畝，0.5至2.5英畝，0.5至5.0英畝，0.5至7.5英畝，1.0至1.5英畝，1.0至2.0英畝，1.0至2.5英畝，1.0至5.0英畝，1.0至7.5英畝，2.0至2.5英畝，2.0至5.0英畝，2.0至7.5英畝，2.5英畝至5.0英畝，2.5至7.5英畝。
143.如權(quán)利要求140所述的方法，其中所述液體系統(tǒng)是連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)。
144.如權(quán)利要求143所述的方法，其中所述連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)提供所述微藻在對數(shù)生長期的連續(xù)生長。
145.檢測壺菌游動孢子FD100的方法，包括: 獲取樣品； 使用一對寡核苷酸引物在所述樣品上進行聚合酶鏈式反應，該引物能夠擴增核酸分子，該核酸分子具有選自由SEQ ID NOs: 1-6,或其互補組成的組的序列。
146.如權(quán)利要求145所述的方法，其中所述寡核苷酸引物對的一個引物是兼并引物。
147.如權(quán)利要求146所述的方法，其中所述寡核苷酸引物對的兩個引物都是兼并引物。
148.如權(quán)利要求145所述的方法，進一步包括第三寡核苷酸引物。
149.如權(quán)利要求145所述的方法，其中所述寡核苷酸引物對包括SEQID N0s:28和29的序列，或其互補。`
【文檔編號】C12N1/13GK103857785SQ201280049439
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年10月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月14日
【發(fā)明者】R·麥克布賴德, C·貝恩克, K·博施, N·海普斯, C·梅納施 申請人:藍寶石能源公司