用于雜草控制的方法和組合物的制作方法【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供用于增強(qiáng)雜草控制的新穎組合物。具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)雜草種類(lèi)中的二氫蝶酸合成酶的方法和組合物。本發(fā)明還提供了增強(qiáng)雜草控制的組合物與方法的組合?！緦?zhuān)利說(shuō)明】用于雜草控制的方法和組合物[0001]本申請(qǐng)依據(jù)35USC§119(e)要求2011年9月13日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/534,097的權(quán)益，該案以引用的方式整體并入本文中。文檔中所含的名為“40_21(58641)Bseqlisting,txt”的序列表為513，100個(gè)字節(jié)(在操作系統(tǒng)MS-Windows中測(cè)量)并且于2012年9月4日創(chuàng)建，與本案一起提交并以引用的方式并入本文中。[0002]表1是作為本美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)的一部分經(jīng)由USPTO的EFS系統(tǒng)與本案一起提供，其文件名為“40_21(58641)Btablel.doxc”，大小為39，989個(gè)字節(jié)(在MS-.Windows?中測(cè)量)。表1(文件“40_21(58641)Btablel.doxc”)包含54個(gè)序列并且以引用的方式整體并入本文中。[0003]表2是作為本美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)的一部分經(jīng)由USPTO的EFS系統(tǒng)與本案一起提供，其文件名為“40_21(58641)Btable2.doxc”，大小為107，841個(gè)字節(jié)(以MS-.Windows?:測(cè)量)。表2(文件“40_21(58641)Btable2.dox”)包含848個(gè)序列并且以引用的方式整體并入本文中。[0004]表3是作為本美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)的一部分經(jīng)由USPTO的EFS系統(tǒng)與本案一起提供，其文件名為“40_21(58641)Btable3.doxc”，大小為21，718個(gè)字節(jié)(在MS-.Windows?中測(cè)量)。表3(文件“40_21(58641)Btable3.doxc”)包含269個(gè)序列并且以引用的方式整體并入本文中。[0005]領(lǐng)域[0006]所述方法和組合物大體上涉及雜草管理領(lǐng)域。更具體地說(shuō)，涉及植物中的7，8-二氫蝶酸合成酶抑制劑(DHPS)基因以及含有供調(diào)節(jié)和/或調(diào)控其表達(dá)的多核苷酸分子的組合物。還提供了可用于雜草控制的方法和組合物。[0007]背景[0008]雜草是在農(nóng)藝環(huán)境中與耕種的植物競(jìng)爭(zhēng)的植物，并且農(nóng)場(chǎng)主每年在作物損失和控制雜草嘗試方面要花費(fèi)上億美元。雜草還充當(dāng)作物疾病和蟲(chóng)害的宿主。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中由雜草引起的損失包括作物產(chǎn)量降低、作物質(zhì)量下降、灌溉成本增加、收割成本增加、土地價(jià)值降低、損傷牲畜以及由雜草攜帶的昆蟲(chóng)和病害所引起的作物損害。雜草造成這些影響的主要手段有:1)與作物競(jìng)爭(zhēng)水、養(yǎng)分、陽(yáng)光以及供生長(zhǎng)和發(fā)育的其它必需要素；2)產(chǎn)生有毒或刺激性化學(xué)物質(zhì)，這些化學(xué)物質(zhì)引起了人類(lèi)或動(dòng)物健康問(wèn)題；3)產(chǎn)生極大量的種子或營(yíng)養(yǎng)繁殖部分或兩者，從而污染了農(nóng)業(yè)產(chǎn)品并且使這些物種在農(nóng)業(yè)用地中長(zhǎng)期存在；以及4)在農(nóng)業(yè)和非農(nóng)業(yè)用地上產(chǎn)生大量必須除掉的植被。耐除草劑的雜草是幾乎所有正在使用的除草劑所面臨的一個(gè)問(wèn)題，需要有效地管理這些雜草。目前有超過(guò)365種雜草生物型被除草劑抗性行動(dòng)委員會(huì)(HerbicideResistanceActionCommittee,HRAC)、北美除草劑抗性行動(dòng)委員會(huì)(NorthAmericanHerbicideResistanceActionCommittee,NAHRAC)和美國(guó)治草科學(xué)學(xué)會(huì)(WeedScienceSocietyofAmerica,WSSA)鑒別為對(duì)一種或多種除草劑具有除草劑抗性。[0009]7,8-二氫蝶酸合成酶抑制劑(DHPS)是一種涉及葉酸合成的酶，而葉酸合成是嘌呤核苷酸生物合成所需的。這種酶是包括氨基甲酸酯化學(xué)品家族在內(nèi)的除草劑的靶。[0010]發(fā)明概述[0011]在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種植物控制方法，該方法包括向植物或植物部分外部施用一種包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中該多核苷酸與DHPS(二氫蝶酸合成酶，DHP或DHPS)基因序列或其片段，或與所述DHPS基因序列或其片段的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述DHPS基因序列選自SEQIDNO:1_54或其多核苷酸片段。作為此類(lèi)施用的結(jié)果，使得相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，該植物生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力有所降低，或該植物對(duì)DHPS抑制劑除草劑更敏感。以此方式，使已經(jīng)對(duì)施用含DHPS抑制劑的除草劑產(chǎn)生抗性的植物更易于受這些除草劑的除草作用影響，由此加強(qiáng)這些除草劑的作用。該多核苷酸片段為至少18個(gè)連續(xù)核苷酸、至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、至少20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQIDNO:1_54的DHPS基因序列至少85%同一，并且該轉(zhuǎn)移劑包含一種有機(jī)硅酮組合物或化合物。該多核苷酸片段可以是有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA雜交體。該組合物可以包括各種組分，這些組分包括超過(guò)一個(gè)多核苷酸片段、DHPS抑制劑除草劑和/或增強(qiáng)該組合物的植物控制活性的其它除草劑。[0012]在另一個(gè)方面中，提供了用于調(diào)節(jié)植物物種中DHPS基因表達(dá)的多核苷酸分子和方法。該方法降低、阻遏或以其它方式延遲植物中DHPS基因的表達(dá)，包括向該植物外部施用一種包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中該多核苷酸與DHPS基因序列或其片段，或與該DHPS基因序列或其片段的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中該DHPS基因序列選自SEQIDNO:1-54或其多核苷酸片段。該多核苷酸片段為至少18個(gè)連續(xù)核苷酸、至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、至少20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQIDNO:1-54的DHPS基因序列至少85%同一，并且該轉(zhuǎn)移劑是一種有機(jī)硅酮化合物。該多核苷酸片段可以是有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA雜交體。包含SEQIDN055-1175的多核苷酸分子是該DHPS基因的片段。[0013]在又一方面中，該多核苷酸分子組合物可以與其它除草用化合物組合以提供對(duì)于耕種植物的田地中不想要的植物的額外控制。[0014]在又一方面中，該多核苷酸分子組合物可以與任一種或多種其它的農(nóng)用化學(xué)品組合，以形成多組分殺蟲(chóng)劑，從而得到甚至更廣譜的農(nóng)業(yè)保護(hù)，這些農(nóng)用化學(xué)品諸如為殺昆蟲(chóng)劑、殺真菌劑、殺線蟲(chóng)劑、殺細(xì)菌劑、殺螨劑、生長(zhǎng)調(diào)控劑、化學(xué)絕育劑、化學(xué)信息素、驅(qū)避劑、引誘劑、信息素、取食刺激劑、生物殺蟲(chóng)劑、微生物殺蟲(chóng)劑或其它生物活性化合物。[0015]附圖簡(jiǎn)述[0016]以下圖式形成了本說(shuō)明書(shū)的一部分并且被包括用來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明某些方法、組合物或結(jié)果。通過(guò)參照一個(gè)或多個(gè)附圖并結(jié)合本文所呈現(xiàn)的具體實(shí)施方案的詳細(xì)說(shuō)明，可以更好地對(duì)其進(jìn)行理解。由以下【專(zhuān)利附圖】【附圖說(shuō)明】，可以更完整地理解本發(fā)明:[0017]圖1.用寡核苷酸組隨后Prowl(二甲戍樂(lè)靈(pendimethalin))進(jìn)行處理[0018]圖2.用3個(gè)寡核苷酸組隨后Prowl除草劑以121b/ac用量處理長(zhǎng)芒莧(PalmerAmaranth)[0019]發(fā)明詳述[0020]本發(fā)明提供了調(diào)控、阻遏或延遲7，8-二氫蝶酸合成酶(DHPS)基因表達(dá)并且增強(qiáng)對(duì)似雜草植物物種和重要的是DHPS抑制劑抗性雜草生物型的控制的方法和含多核苷酸的組合物。該方法的各個(gè)方面可以用于管理農(nóng)藝和其它耕種環(huán)境中的各種似雜草植物。[0021]提供以下定義和方法來(lái)更好地定義本發(fā)明并且指導(dǎo)本領(lǐng)域技術(shù)人員。除非另作注釋?zhuān)駝t各術(shù)語(yǔ)應(yīng)根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)用法來(lái)理解。在一個(gè)術(shù)語(yǔ)以單數(shù)形式提供的情況下，本發(fā)明人也預(yù)期由該術(shù)語(yǔ)的復(fù)數(shù)形式所描述的各個(gè)方面。[0022]“不可轉(zhuǎn)錄的”多核苷酸意思指，這些多核苷酸不包含完整的聚合酶II轉(zhuǎn)錄單元。[0023]如本文所使用，“溶液”是指均勻混合物和不均勻混合物，諸如懸浮液、膠體、膠束及乳液。[0024]似雜草植物是與耕種的植物競(jìng)爭(zhēng)的植物，特別重要的那些包括但不限于，作物生產(chǎn)中的重要入侵性和有害的雜草及除草劑抗性生物型，諸如莧屬物種(Amaranthusspecies)-白覓(A.albus)、北美覓(A.blitoides)、綠穗覓(A.hybridus)、長(zhǎng)芒覓(A.palmeri)、鮑威氏覓(A.powellii)、反枝覓(A.retrofIexus)、剌覓(A.spinosus)、糙果覓(A.tuberculatus)及皺果覓(A.viridis);豚草屬物種(Ambrosiaspecies)-三裂葉豚草(A.trifida)、美洲豚草(A.artemisifolia);黑麥草屬物種(Loliumspecies)-多花黑麥草(L.multiflorum)、硬直黑麥草(L.rigidium)、多年生黑麥草(L.perenne);馬唐屬物種(Digitariaspecies)-兩耳草(D.1nsularis);大戟屬物種(Euphorbiaspecies)-白荀猩猩草(E.heterophylla);地膚屬物種(Kochiaspecies)-掃帚草(K.scoparia);高梁屬(Sorghumspecies)-約翰遜草(S.halepense);白酒草屬(Conyzaspecies)-香絲草(C.bonariensis)、小蓬草(C.canadensis)、蘇門(mén)白酒草(C.sumatrensis)；虎尾草屬物種(Chlorisspecies)-截頭虎尾草(C.truncate);稗草屬物種(Echinocholaspecies)-光頭稗(E.colona)、大骨草(E.crus-galli);穆屬物種(Eleusinespecies)-牛筋草(E.1ndica);早熟禾屬物種(Poaspecies)-—年生早熟禾(P.annua);車(chē)前屬物種(Plantagospecies)-長(zhǎng)葉車(chē)前草(P.1anceolata);燕麥屬物種(Avenaspecies)-野燕麥(A.fatua);藜草屬物種(Chenopodiumspecies)-灰蓼頭草(C.album);狗尾草屬物種(Setariaspecies)-灰藜(S.viridis)、苘麻(Abutilontheophrasti)、番薯屬物種(Ipomoeaspecies)、田菁屬物種(Sesbaniaspecies)、決明屬物種(Cassiaspecies)、黃花穩(wěn)屬物種(Sidaspecies)、臂形草屬物種(Brachiariaspecies)及煎屬物種(Solanumspecies)。[0025]耕種區(qū)中所見(jiàn)的其它似雜草植物物種包括大穗看麥娘(Alopecurusmyosuroides)、不實(shí)燕麥(Avenasterilis)、長(zhǎng)穎燕麥(AvenasterilisIudoviciana)、車(chē)前臂形草(Brachiariaplantaginea)、雙雄雀麥(Bromusdiandrus)、硬雀麥(Bromusrigids)、洋狗尾草(Cynosurusechinatus)、升馬唐(Digitariaciliaris)、止血馬唐(Digitariaischaemum)、馬唐(Digitariasanguinalis)、稻稗(Echinochloaoryzicola)、水稗(Echinochloaphyllopogon)、路易斯安納野黍(Eriochloapunctata)、大麥草(Hordeumglaucum)、墻大麥(HordeumIeporinum)、田間鴨嘴草(Ischaemumrugosum)、千金子(Leptochloachinensis)、歐黑麥草(Loliumpersicum)、小藹草(Phalarisminor)、變形藹草(Phalarisparadoxa)、筒軸茅(Rottboelliaexalta)、大狗尾草(Setariafaberi)、巨狗尾草(Setariaviridisvarrobusta-albaschreiber)、狗尾草變種(Setariaviridisvarrobusta-purpurea)、Snowdeniapolystachea、蘇丹高梁(Sorghumsudanese)、澤?寫(xiě)(Alismaplantago-aquatica)、凹頭覓(Amaranthuslividus)、青覓(Amaranthusquitensis)、耳基水覓(Ammaniaauriculata)、紅花水覓(Ammaniacoccinea)、臭春黃菊(Anthemiscotula)、阿披拉草(Aperaspica-venti)、圓葉虎耳(Bacoparotundifolia)、三葉鬼針草(Bidenspilosa)、Bidenssubalternans、非洲芥末(Brassicatournefortii)、旱雀麥(Bromustectorum)、小果亞麻莽(Camelinamicrocarpa)、茼蒿(Chrysanthemumcoronarium)、田野寬絲子(Cuscutacampestris)、異型莎草(Cyperusdifformis)、Damasoniumminus、播娘嵩(Descurainiasophia)、細(xì)葉二行芥(Diplotaxistenuifolia)、車(chē)前葉藍(lán)薊(Echiumplantagineum)、三蕊溝繁縷(Elatinetriandravarpedicellata)、白荀猩猩草、卷莖蓼(Fallopiaconvolvulus)、水風(fēng)草(Fimbristylismiliacea)、鼠由辧花(Galeopststetraht)、鋸鋸藤(Galiumspurium)、向日葵(Helianthusannuus)、假蒼耳(Ivaxanthifolia)、單剛毛狗尾草(Ixophorusunisetus)、變色牽牛(Ipomoeaindica)、圓葉牽牛(Ipomoeapurpurea)、毛莖墓(Ipomoeasepiaria)、雍菜(Ipomoeaaquatic)、三裂葉墓(Ipomoeatriloba)、毒萬(wàn)苣(Lactucaserriola)、黃花域葉草(Limnocharisflava)、直立石龍尾(Limnophilaerecta)、無(wú)柄花石龍尾(Limnophilasessilif1ra)、美洲母草(Linderniadubia)、美洲母草主變種(Linderniadubiavarmajor)、狹葉母草(Linderniamicrantha)、陌上草(Linderniaprocumbens)、冰葉曰中花(MesembryanthemumcrystalIinum)雨久花(Monochoriakorsakowii)、甲鳥(niǎo)舌草(Monochoriavaginalis)、球果芥(Nesliapaniculata)、虞美人(Papaverrhoeas)、銀膠菊(Partheniumhysterophorus)、Pentziasuffruticosa、小子藹草(Phalarisminor)、野蘿卜(Raphanusraphanistrum)、秋冬蘿卜(Raphanussativus)、皺果莽(Rapistrumrugosum)、印度節(jié)節(jié)菜原變種(Rotalaindicavaruliginosa)、冠果草(Sagittariaguyanensis)、蒙特登慈姑(Sagittariamontevidensis)、矮慈姑(Sagittariapygmaea)、俄國(guó)大薊(Salsolaiberica)、螢藺歐萬(wàn)斯變種(Scirpusjuncoidesvarohwianus)、北水毛花(Scirpusmucronatus)、金色狗尾草(SetariaIutescens)、剌金午時(shí)花(Sidaspinosa)、野芥(Sinapisarvensis)、戟葉柿娘蒿(Sisymbriumorientale)、大蒜芥(Sisymbriumthellungii)、東方龍葵(Solanumptycanthum)、花葉潰苦菜(Sonchusasper)、苦苣菜(Sonchusoleraceus)、甜高梁(Sorghumbicolor)、繁縷(Stellariamedia)、薪蓂(Thlaspiarvense)、蒼耳(Xanthiumstrumarium)、南非金蓋草(Arctothecacalendula)、蘇門(mén)白酒草、革命菜(Crassocephalumcrepidiodes)、萼距花(Cupheacarthagenenis)、Epilobiumadenocaulon、費(fèi)城飛蓮(Erigeronphiladelphicus)、紫萍(Landoltiapunctata)、北美獨(dú)行菜(Lepidiumvirginicum)、雨久花(Monochoriakorsakowii)、少花龍葵(Solanumamericanum)、龍葵(Solanumnigrum)、歐洲福克斯泰爾羊茅(Vulpiabromoides)、黃鶴菜(Youngiajaponica)、下輪葉黑藻(HydrillaverticiIlata)、垂花飛廉(Carduusnutans)、意大利薊(Carduuspycnocephalus)、黃星薊(Centaureasolstitialis)、絲路薊(Cirsiumarvense)、節(jié)節(jié)草(Commelinadiffusa)、田方定花(Convolvulusarvensis)、野古月蘿卜(Daucuscarota)、止血馬唐、孔雀稗(Echinochloacrus-pavonis)、水風(fēng)草、融辧花、鋸鋸藤、直立石龍尾、淡甘菊(Matricariaperforate)、虞美人、烏頭葉毛茛(Ranunculusacris)、翅果假吐金菊(Solivasessilis)、尖辧花(Sphenocleazeylanica)、繁縷、三叉針茅(Nassellatrichotoma)、智利針草(Stipaneesiana)、匍匍翦股穎(Agrostisstolonifera)、扁蓄寥(Polygonumaviculare)、日本看麥娘(Alopecurusjaponicus)、茼草(Beckmanniasyzigachne)、旱雀麥、孟仁草(Chlorisinflate)>Echinochloaerecta、馬齒覓(Portulacaoleracea)及歐洲千里光(Seneciovulgaris)。據(jù)信，所有植物在其基因組中都含有DHPS基因，該基因可以被分離出來(lái)，并且根據(jù)這些方法制造出可用于調(diào)控、抑制或延遲這些植物中靶DHPS基因的表達(dá)以及經(jīng)過(guò)處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育的多核苷酸。[0026]一些耕種的植物當(dāng)出現(xiàn)在不想要的環(huán)境中時(shí)也可以是似雜草植物。舉例來(lái)說(shuō)，在大豆田中生長(zhǎng)的玉米植物。具有一種或多種除草劑耐藥性的轉(zhuǎn)基因作物將需要專(zhuān)門(mén)的管理方法來(lái)控制雜草和自生作物。[0027]“觸發(fā)因子”或“觸發(fā)多核苷酸”是與靶基因多核苷酸同源或互補(bǔ)的多核苷酸分子。這些觸發(fā)多核苷酸分子當(dāng)與轉(zhuǎn)移劑一起局部施用到植物表面時(shí)，將調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，由此相對(duì)于未用含觸發(fā)因子分子的組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力受到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因含所述多核苷酸的組合物而對(duì)DHPS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。[0028]預(yù)期這些組合物將含有一種或多種多核苷酸和一種或多種除草劑，包括但不限于，DHPS基因觸發(fā)多核苷酸和DHPS抑制劑除草劑以及任一種或多種其它除草劑靶基因觸發(fā)多核苷酸和相關(guān)除草劑，及任一種或多種其它必需基因觸發(fā)多核苷酸。必需基因是植物中提供有機(jī)體或細(xì)胞生長(zhǎng)或存活必需的或者植物正常生長(zhǎng)和發(fā)育所涉及的關(guān)鍵酶或其它蛋白質(zhì)的基因，例如生物合成酶、代謝酶、受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、結(jié)構(gòu)基因產(chǎn)物、轉(zhuǎn)錄因子或轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白；或調(diào)控性RNA，諸如微RNA的基因(Meinke等，TrendsPlantSc1.2008年9月；13(9):483-91)。抑制必需基因使除草劑影響不同于受抑制的必需基因的基因產(chǎn)物的功能的作用增強(qiáng)。這些組合物可以包括各種調(diào)節(jié)除DHPS基因外的必需基因的表達(dá)的觸發(fā)多核苷酸。[0029]針對(duì)植物耐藥性的轉(zhuǎn)基因已經(jīng)得到證實(shí)的除草劑包括但不限于:類(lèi)生長(zhǎng)素除草劑、草甘膦(glyphosate)、草銨膦(glufosinate)、磺酰脲類(lèi)、咪唑啉酮類(lèi)、溴苯腈(bromoxynil)、茅草枯(delapon)、麥草畏(dicamba)、環(huán)己二酮(cyclohezanedione)、原口卜啉原氧化酶抑制劑類(lèi)(protoporphyrionogenoxidaseinhibitors)、4_輕苯基-丙酮酸雙加氧酶抑制劑類(lèi)除草劑。舉例來(lái)說(shuō)，編碼除草劑耐藥性中所涉及的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因及其多核苷酸分子是本領(lǐng)域已知的，并且包括但不限于，5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)，例如，更完整地描述于美國(guó)專(zhuān)利號(hào)7，807，791(SEQIDNO:5)、6，248，876B1、5，627，061、5，804，425、5，633，435、5，145，783、4，971，908、5，392，910、5，188，642、4，940，835,5,866，775,6,225，114BU6,130，366,5,390，667,4,535，060,4,769，061、5，633，448,5,510，471;美國(guó)專(zhuān)利號(hào)RE36,449;美國(guó)專(zhuān)利號(hào)RE37,287E及5，491，288中；對(duì)磺酰脲和/或咪唑啉酮的耐藥性，例如，更完整地描述于美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，605，011、5，013，659,5,141，870,5,767，361,5,739，180,5,304，732,4,761，373,5,339，107、5，928，937及5，378,824;及國(guó)際公布W096/33270中；植物中對(duì)于羥苯基丙酮酸雙加氧酶抑制性除草劑的耐藥性描述于美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6，245，968BU6,268，549及6，069，115-M國(guó)專(zhuān)利公布20110191897及US7,392，379SEQIDNO:3；US7,935，869；US7,304，209，SEQIDNO:1、3、5及15中；芳氧基鏈烷酸酯雙加氧酶多核苷酸，其賦予對(duì)2，4_D和其它苯氧基生長(zhǎng)素除草劑，以及對(duì)芳氧基苯氧基丙酸酯除草劑的耐藥性，如例如W02005/107437；US7,838，733SEQIDNO:5；)中所描述的；及耐麥草畏的多核苷酸，如例如Herman等(2005)J.Biol.Chem.280=24759-24767中所描述的。耐除草劑性狀的其它實(shí)例包括由編碼外源膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶的多核苷酸所賦予的那些，如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，969，213,5,489，520、5，550，398,5,874，265,5,919，675,5,561，236,5,648，477,5,639，024,6,177，616及5，879，903中所描述。含有外源膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶的植物可以對(duì)抑制谷氨酰胺合成酶的草銨膦除草劑展現(xiàn)出改善的耐藥性。此外，耐除草劑多核苷酸包括由賦予改變的原卟啉原氧化酶(protox)活性的多核苷酸所賦予的那些，如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6，288，306BU6,282，837B1及5，767，373;以及W001/12825中所描述。含有這些多核苷酸的植物對(duì)于靶向protox酶的多種除草劑(又稱(chēng)為protox抑制劑)中的任一種可以展現(xiàn)出改善的耐藥性。編碼草甘膦氧化還原酶和草甘膦-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶的多核苷酸(G0X描述于美國(guó)專(zhuān)利5，393，175中并且GAT描述于美國(guó)專(zhuān)利公布20030083480中；麥草畏單加氧酶，美國(guó)專(zhuān)利公布20030135879，全部以引用的方式并入本文中)；編碼溴苯腈腈水解酶的多核苷酸分子(Bxn描述于美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4，810，648，以引用的方式并入本文中；針對(duì)溴苯腈耐藥性)；編碼八氫番茄紅素脫氫酶的多核苷酸分子(crtl)(描述于Misawa等(1993)PlantJ.4:833-840和Misawa等(1994)PlantJ.6:481-489中；針對(duì)達(dá)草滅(norfIurazon)耐藥性)；編碼乙酰乳酸合成酶的多核苷酸分子(AHAS,也稱(chēng)為ALS)(描述于Sathasiivan等(1990)Nucl.AcidsRes.18:398-2193中；針對(duì)磺酰脲除草劑耐藥性)；&bar基因(描述于DeBlock等(1987)EMBOJ.6=2513-2519中；針對(duì)草銨膦和雙丙氨磷(bialaphos)耐藥性)。耐除草劑基因的轉(zhuǎn)基因編碼區(qū)和調(diào)控元件是可包括在這些組合物中的多核苷酸觸發(fā)因子和除草劑的靶。[0030]DHPS抑制劑除草劑包括但不限于，氨基甲酸酯類(lèi)及黃草靈。有絲分裂抑制劑除草齊抱括但不限于，二硝基苯胺除草劑類(lèi)，例如氟草胺、地樂(lè)胺、敵樂(lè)安、丁氟消草、黃草消、二甲戊樂(lè)靈及氟樂(lè)靈。其它有絲分裂抑制劑除草劑還包括但不限于，氨基磷酸酯類(lèi)、吡啶類(lèi)、苯甲酰胺類(lèi)及苯二羧酸類(lèi)。[0031]許多具有類(lèi)似或不同作用模式的可用除草劑(本文中稱(chēng)為共除草劑)可以添加到這些組合物中，例如包括但不限于以下的除草劑家族成員:酰胺除草劑類(lèi)、芳香酸除草劑類(lèi)、含砷除草劑類(lèi)、苯并噻唑除草劑類(lèi)、苯甲?；h(huán)己二酮除草劑類(lèi)、烷基磺酸苯并呋喃基酯除草劑類(lèi)、氨基甲酸酯除草劑類(lèi)、環(huán)己烯肟除草劑類(lèi)、環(huán)丙基異噁唑除草劑類(lèi)、二甲酰亞胺除草劑類(lèi)、二硝基苯胺除草劑類(lèi)、二硝基苯酚除草劑類(lèi)、二苯基醚除草劑類(lèi)、二硫代氨基甲酸酯除草劑類(lèi)、鹵代脂肪烴除草劑類(lèi)、咪唑啉酮除草劑類(lèi)、無(wú)機(jī)除草劑類(lèi)、腈除草劑類(lèi)、有機(jī)磷除草劑類(lèi)、噁二唑酮除草劑類(lèi)、噁唑除草劑類(lèi)、苯氧基除草劑類(lèi)、苯二胺除草劑類(lèi)、吡唑除草劑類(lèi)、噠嗪除草劑類(lèi)、噠嗪酮除草劑類(lèi)、吡啶除草劑類(lèi)、嘧啶二胺除草劑類(lèi)、嘧啶氧基苯甲胺除草劑類(lèi)、季銨除草劑類(lèi)、硫代氨基甲酸酯除草劑類(lèi)、硫代碳酸酯除草劑類(lèi)、硫脲除草劑類(lèi)、三嗪除草劑類(lèi)、三嗪酮除草劑類(lèi)、三唑除草劑類(lèi)、三唑酮除草劑類(lèi)、三唑并嘧啶除草劑類(lèi)、尿嘧啶除草劑類(lèi)及脲除草劑類(lèi)。具體地說(shuō)，可以使包含這些多核苷酸的組合物中添加的除草劑的使用量降低。另外添加的除草劑的使用量可以降低10%-25%、26%-50%,51%-75%或更多，并且這些可增強(qiáng)多核苷酸與除草劑的組合物的活性的除草劑涵蓋在本文中。這些家族的代表性共除草劑包括但不限于，乙草胺(acetochlor)、氟鎖草醚(acifluorfen)、氟羧草醚鈉（acifluorfen_sodium)、苯草醚（aclonifen)、丙烯醒(&(^016丨10、草不綠(81&出1(^)、禾草滅(過(guò)11017(1^^)、烯丙醇、莠滅凈(80^廿710、氨唑草酮（30^03^^201^)、氨基啼橫?。?0^(108。1€證010、氯氨卩比卩定酸（30^=0^7以1丨(1)、氨基三唑(8爪^_廿016)、橫胺酸銨（ammonium8“€&0^七6)、莎稗憐（&1^1(^08)、黃草靈（88^30^、阿特拉通（3七以如10、阿特拉津（3七以211^)、四唑啼磺隆（32仏8“€證010、80?(^、氟丁酰草胺、草除靈（benazolin)、氟草胺（benfluralin)、呋草黃（benfuresate)、節(jié)啼橫隆(bensulfuron)、甲基節(jié)啼磺隆(bensulfuron-methyl)、地散憐(bensulide)、噻草平(bentazone)、雙苯啼草酮、苯并雙環(huán)酮（benzobicyclon)、卩比草酮（benzofenap)、治草醚、雙丙氨憐（bilanafos)、雙草醚（bispyribac)、雙草醚鈉（bispyribac_sodium)、硼砂03〇以1)、除草定0^00^。丨1)、溴丁酰草胺0^(^(^此1(16)、溴苯腈、去草胺（butachlor)、W芬草、抑草磷（butamifos)、地樂(lè)胺（butralin)、丁苯草酮（butroxydim)、丁草敵(butylate)、二甲胂酸(cacodylicacid)、氯酸?丐、唑草胺(cafenstrole)、長(zhǎng)殺草(carbetamide)、唑草酮（carfentrazone)、唑酮草酯、00￡六、0￡?0、整形醇（chlorflurenol)、整形素（出10忖1證6仙116也71)、殺草敏（出10『丨(132010、氯啼橫?。ǔ?(^^^證010、乙基氯嘧磺隆(出10『^^證0^也71)、氯醋酸(chloroacetic8(^(1)、綠麥?。╟hlorotoluron)、氯苯胺靈（出10印『(^^0^、綠黃?。ǔ?0^口1€證010、敵草索（(^1(^也31)、氯酞酸二甲酯(chlorthal_dimethyl)、卩引哚酮草酯、環(huán)庚草醚(cinmethylin)、西速隆(cinosulfuron)、落草胺（cisanilide)、烯草酮（clethodim)、炔草酸（clodinafop)、炔草酯(clodinafop-propargyl)、異草酮（clomazone)、稗草胺（clomeprop)、二氯卩比卩定酸(。1(^7以1丨(1)、氯酯橫草胺（。10以1^“30^、氯甲酯橫草胺（cloransulam-methyl)、CMA、4-CPB、CPMF、4_CPP、CPPC、甲酷、節(jié)草隆(cumyluron)、氨腈(cyanamide)、氰乙酰肼(。乂&仙2丨1^)、草滅特(0又(}10&〖6)、環(huán)丙啼橫隆(。又。108。1€&0^^010、噻草酮(cycloxydim)、氰氟草酸（〔71^1(^(^)、氰氟草酯（071^1(^(^43此71)、2，4~0、3，4~0八、殺草?。╠aimuro)、茅草枯（(1&13口010、棉隆（(1&200^0、2，4-08、3，4-08、2，4-0￡8、甜菜安（(1680^(11。}^0^、麥草畏、敵草臆（dichlobenil)、鄰二氯苯（ortho-dichlorobenzen)、對(duì)二氯苯(para-dichlorobenzene)、滴丙酸(dichlorprop)、滴丙酸-P(dichlorprop-P)、禾草靈(diclofop)、甲基禾草靈(diclofop-methyl)、雙氯磺草胺(diclosulam)、燕麥枯(difenzoquat)、野燕枯甲基硫酸酯（difenzoquatmetilsulfate)、卩比氟草胺、二氟卩比隆(diflufenzopyr)、惡唑?。╠imefuron)、哌草丹（dimepiperate)、二甲草胺(dimethachlor)、異戊乙凈（dimethametryn)、二甲吩草胺（dimethenamid)、二甲吩草胺-?(犯爪6也6仙0^(1-?)、噻節(jié)因（犯0^也1卩110、二甲基砷酸（dimethylarsinicacid)jj(樂(lè)安(dinitramine)4_*?)(犯打(^64)、草乃敵:(犯卩1^仙0^(1)、殺草快(犯9皿丨）、二溴敵草快(diquat(1讓『00^(16)、氟硫草定（犯也丨(^7『）、敵草?。╠iuron)、DN0C、3，4_DP、DSMA、￡8￡卩、草多索（61^0也&1)、￡?1^、禾草畏（68?！?0&40、丁氟消草（6也31€1。以1丨10、胺苯橫?。╡thametsulfuron)、甲基胺苯橫?。╡thametsulfuron_methyl)、乙呋草黃(ethofumesate)、氯氟草醚(ethoxyfen)、乙氧啼磺隆(ethoxysulfuron)、乙氧苯草胺(etobenzanid)、精惡唑禾草靈（fenoxaprop-P)、乙基精惡唑禾草靈(fenoxaprop-P_ethyl)、四唑草胺（fentrazamide)、硫酸亞鐵、麥草伏甲酯（flamprop_M)、口定啼磺?。█1&238“化『010、雙氟磺草胺（€10以8“30^、卩比氟禾草靈&1皿21€(^)、丁基批氟禾草靈(fluazifop-butyl)、精吡氟禾草靈(fluazifop-P)、丁基精吡氟禾草靈(fluazifop-P-butyl)、氟酮橫隆(fIucarbazone)、氟酮橫隆鈉(flucarbazone-sodium)、氟批磺隆(flucetosulfuron)、氯乙氟靈(fIuchloralin)、氟噻草胺(fIufenacet)、氟_嗪草酮(flufenpyr)、氟_嗪草酯(flufenpyr-ethyl)、唑啼磺草胺(fIumetsulam)、氟烯草酸(flumiclorac)、氟烯草酸戊酯、丙炔氟草胺、伏草隆(fIuometuron)、乙羧氟草醚、乙羧氟草醚乙酯、氟丙酸(flupropanate)、吡羧啼磺隆(fIupyrsulfuron)、氟P定啼磺隆鈉(flupyrsulfuron-methyΙ-sodium)、抑草丁(flurenol)、氟卩定酮、氟咯草酮、氟草煙(fIuoroxypyr)、呋草酮、氟螨嗪(fIuthiacet)、氟噻甲草酯、氟磺胺草醚(fomesafen)、甲酰胺磺隆(foramsulfuron)、調(diào)節(jié)膦(fosamine)、草銨膦(glufosinate)、草銨膦銨鹽(glufosinate-ammonium)、草甘膦、氯吡啼磺隆(halosulfuron)、甲基氯吡啼磺隆(halosulfuron-methyl)、氟批甲禾靈(haloxyfop)、氟批甲禾靈-P(haloxyfop-P)、HC-252、環(huán)嗪酮(hexazinone)、咪草酸(imazamethabenz)、咪草酸甲酯(imazamethabenz-methyl)、甲氧咪草煙(imazamox)、甲咪唑煙酸(imazapic)、滅草煙(imazapyr)、咪唑喹啉酸(imazaquin)、咪草煙(imazethapyr)、唑礎(chǔ)啼橫隆(imazosulfuron)、節(jié)草酮(indanofan)、碘甲焼、碘甲磺隆、碘甲磺隆鈉鹽(iodosulfuron-methyΙ-sodium)、碘苯臆(ioxynil)、異丙隆(isoproturon)、異惡隆(isouron)、異惡酰草胺(isoxaben)、異噁氯草酮(isoxachlortole)、異噁唑草酮(isoxafIutole)、特胺靈(karbutilate)、乳氟禾草靈(Iactofen)、環(huán)草唳(Ienacil)^lJS隆(Iinuron)、MAA、MAMA、MCPAΛMCPA-硫代乙酯、MCPB、氯苯氧丙酸(mecoprop)、氯苯氧丙酸-P(mecoprop-P)、苯噻酰草胺(mefenacet)、氟草磺(mefIuidide)、甲磺胺磺隆(mesosulfuron)、甲基甲橫胺橫隆(mesosulfuron-methyl)、硝橫草酮(mesotrione)、威百畝(metam)、惡唑酸草胺(metamifop)、苯嗪草酮(metamitron)、吡唑草胺(metazachlor)、甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、甲基砷酸、甲基殺草隆(methyldymron)、異硫氰酸甲酯、甲氧苯草隆(metobenzuron)、異丙甲草胺(metolachlor)、精異丙甲草胺(S-metolachlor)、橫草唑胺(metosulam)、甲氧隆(metoxuron)、嗪草酮(metribuzin)、甲橫隆(metsulfuron)、甲基甲橫隆(metsulfuron-methyl)、MK_66、草達(dá)滅(molinate)、綠谷隆(monoIinuron)ΛMSMAΛ萘丙胺(naproanilide)、敵草胺(napropamide)、抑草生(naptalam)、草不隆(neburon)、煙啼磺隆(nicosulfuron)、壬酸、達(dá)草滅、油酸(脂肪酸)、坪草丹(orbencarb)、甲啼卩定橫隆(orthosulfamuron)、黃草消(oryzalin)、丙塊惡草酮、惡草靈、環(huán)氧啼磺隆(oxasulfuron)、惡嗪草酮(oxaziclomefone)、乙氧氟草醚、百草枯(paraquat)、百草枯二氯化物(paraquatdichloride)、克草猛(pebulate)、二甲戊樂(lè)靈(pendimethalin)、五氟磺草胺(penoxsulam)、五氯酷(pentachlorophenol)、甲氯酰草胺(pentanochlor)、環(huán)戊惡草酮、烯草胺(pethoxamid)、石油油料(petroliumoils)、苯敵草(phenmedipham)、乙基甜菜寧(phenmedipham-ethyl)、毒莠定(picloram)、氟吡酰草胺、唑啉草酯(pinoxaden)、派草磷(piperophos)、亞砷酸鉀、疊氮化鉀、丙草胺(pretilachlor)、氟啼磺隆(primisulfuron)、甲基氟啼磺隆(primisulfuron-methyl)、氨基丙樂(lè)靈(prodiamine)、氟唑草胺、環(huán)苯草酮(profoxydim)、撲滅通(prometon)、撲草凈(prometryn)、毒草安(propachlor)、敵草索(propanil)、喔草酯(propaquizafop)、撲滅津(propazine)、苯胺靈(propham)、異丙草胺(propisochlor)、丙苯磺隆(propoxycarbazone)、丙苯橫隆鈉(propoxycarbazone-sodium)、塊苯酸草胺(propyzamide)、節(jié)草丹(prosulfocarb)、氟橫隆(prosulfuron)、雙唑草臆(pyraclonil)、哌芬草(pyraflufen)、吡草醚(pyraflufen-ethyl)、吡唑特(pyrazolynate)、吡啼橫隆(pyrazosulfuron)、乙基批啼橫隆(pyrazosulfuron-ethyl)、節(jié)草唑(pyrazoxyfen)、啼唳月虧草醚(pyribenzoxim)、稗草丹(pyributicarb)、草醇(pyridafol)、草特(pyridate)、環(huán)酯草醚(pyriftalid)、啼草醚(pyriminobac)、甲基啼草醚(pyriminobac-methyl)、批啼沙泛(pyrimisulfan)、啼硫苯甲酸(pyrithiobac)、啼硫苯甲酸鈉(pyrithiobac-sodium)、二氯喹啉酸(quinclorac)、氯甲喹啉酸(quinmerac)、滅藻醌(quinoclamine)、喹禾靈(quizalofop)、喹禾靈-P(quizalofop-P)、諷啼橫隆(rimsulfuron)、稀禾定(sethoxydim)、環(huán)草隆(siduron)、西瑪津(simazine)、西草凈(simetryn)、SM、亞砷酸鈉、疊氮化鈉、氯酸鈉、磺草酮(sulcotrione)、甲磺草胺(sulfentrazone)、甲啼橫隆(sulfometuron)、甲基甲啼橫隆(sulfometuron-methyl)、草硫膦(sulfosate)、磺酰磺隆(sulfosulfuron)、硫酸、煤焦油、2，3，6-TBA、TCA、三氯醋酸鈉(TCA-sodium)、特丁隆(tebuthiuron)、吡喃草酮(tepraloxydim)、特草定(terbacil)、特丁通(terbumeton)、特丁津(terbuthylazine)、特丁凈(terbutryn)、噻吩草胺(thenylchlor)、噻草卩定(thiazopyr)、噻吩磺隆(thifensulfuron)、甲基噻吩橫隆(thifensulfuron-methyI)、禾草丹(thiobencarb)、仲草丹(tiocarbazil)、苯吡唑草酮(topramezone)、三甲苯草酮(tralkoxydim)、野麥畏(tr1-allate)、醚苯橫隆(triasulfuron)、三嗪氟草胺(triaziflam)、苯橫隆(tribenuron)、甲基苯橫隆(tribenuron-methyl)、殺草畏(tricamba)、綠草定(triclopyr)、草達(dá)津(trietazine)、三氟唳磺隆(trif1xysulfuron)、三氟卩定磺隆鈉(trifloxysulfuron-sodium)、氟樂(lè)靈(trifluralin)、氟胺橫隆(triflusulfuron)、甲基氟胺橫隆(triflusulfuron-methyl)、三輕嗪(trihydroxytriazine)、三氟甲磺隆(tritosulfuron)、[3_[2_氯_4_氟-5-(-甲基-6-二氟甲基_2，4-二氧代-，2，3，4-四氫啼卩定-3-基)苯氧基]-2_吡卩定氧基]乙酸乙酯(CASRN353292-3-6)、4-[(4，5-二氫-3-甲氧基-4-甲基-5-氧代)-H-，2，4-三唑-基羰基-氨磺?；鵠-5-甲基噻吩-3-甲酸(BAY636)、BAY747(CASRN33504-84-2)、苯吡唑草酮(CASRN2063-68-8)、4-羥基-3-[[2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]_6_(三氟甲基)_3_吡啶基]羰基]-雙環(huán)[3.2.]辛-3-烯-2-酮(CASRN35200-68-5)及4-羥基-3-[[2-(3-甲氧基丙基)_6_(二氟甲基)_3_吡卩定基]擬基]-雙環(huán)[3.2.]羊-3-烯-2-酮。此外，還包括未指定作用模式的除草化合物，如以下專(zhuān)利中所描述:CN101279950A、CN101279951A、DE10000600A1、DE10116399A1、DE102004054666A1、DE102005014638A1、DE102005014906A1、DE102007012168A1、DE102010042866A1、DE10204951A1、DE10234875A1、DE10234876A1、DE10256353A1、DE10256354A1、DE10256367A1、EP1157991A2、EP1238586A1、EP2147919A1、EP2160098A2、JP03968012B2、JP2001253874A、JP2002080454A、JP2002138075A、JP2002145707A、JP2002220389A、JP2003064059A、JP2003096059A、JP2004051628A、JP2004107228A、JP2005008583A、JP2005239675A、JP2005314407A、JP2006232824A、JP2006282552A、JP2007153847A、JP2007161701A、JP2007182404A、JP2008074840A、JP2008074841A、JP2008133207A、JP2008133218A、JP2008169121A、JP2009067739A、JP2009114128A、JP2009126792A、JP2009137851A、US20060111241A1、US20090036311A1、US20090054240A1,US20090215628A1、US2010009956IAUUS20100152443AKUS20110105329AUUS20110201501AUW02001055066A2,ff02001056975AUff02001056979AUW02001090071A2,W02001090080AUW02002002540AUW02002028182AUW02002040473AUW02002044173A2,W02003000679A2,W02003006422AUW02003013247AUW02003016308AUW02003020704AUW02003022051AUW02003022831AUW02003022843AUW02003029243A2,W02003037085AUW02003037878AUW02003045878A2,W02003050087A2,W02003051823AUW02003051824AUW02003051846A2、W02003076409AUW02003087067AUW02003090539AUW02003091217AUW02003093269A2,W02003104206A2,W02004002947AUW02004002981A2,W02004011429AUW02004029060AUW02004035545A2,W02004035563AUW02004035564AUW02004037787AUW02004067518AUW02004067527AUW02004077950AUW02005000824AUW02005007627AUW02005040152AUW02005047233AUW0200504728IAUW02005061443A2,W02005061464AUW02005068434AUW02005070889AUW02005089551AUW02005095335AUW02006006569AUW02006024820AUW02006029828AUW02006029829AUW02006037945AUW02006050803AUW02006090792AUW02006123088A2,W02006125687AUW02006125688AUW02007003294AUW02007026834AUW02007071900AUW02007077201AUW02007077247AUW02007096576AUW02007119434AUW02007134984AUW02008009908AUW02008029084AUW02008059948AUW02008071918AUW02008074991A1、W02008084073AUW02008100426A2、W02008102908AUW02008152072A2,W02008152073A2,W02009000757A1、W02009005297A2,W02009035150A2,W02009063180AUW02009068170A2,W02009068171A2,W02009086041AUW02009090401A2,W02009090402A2,W02009115788AUW02009116558AUW02009152995AUW02009158258AUW02010012649AUW02010012649AUW02010026989AUW02010034153AUW02010049270AUW02010049369AUW02010049405AUW02010049414AUW02010063422A1、W02010069802AUW02010078906A2,W02010078912AUW02010104217AUW02010108611AUW02010112826A3、W02010116122A3、W02010119906AUW02010130970AUW02011003776A2、W02011035874A1、W02011065451A1，全部以引用的方式并入本文中。[0032]通過(guò)將該組合物直接施用(諸如通過(guò)噴霧)到正在生長(zhǎng)的植物的表面，來(lái)對(duì)需要植物控制的農(nóng)田進(jìn)行處理。舉例來(lái)說(shuō)，應(yīng)用該方法，通過(guò)向具有作物的田地噴灑該組合物來(lái)控制該田地中的雜草。該組合物可以作為桶混合劑、連續(xù)的組分處理(一般為含有多核苷酸的組合物隨后除草劑)或來(lái)自單獨(dú)容器的該組合物的一種或多種組分的同時(shí)處理或混合來(lái)提供。田地的處理可以根據(jù)需要進(jìn)行以提供雜草控制，并且該組合物各組分可以被調(diào)整成通過(guò)利用能夠選擇性靶向有待控制的特定物種或植物科的特定多核苷酸或多核苷酸組合物來(lái)靶向特定雜草種類(lèi)或雜草科。該組合物可以根據(jù)施用到田地的時(shí)間，例如在種植前、種植時(shí)、種植后、收獲后，以有效使用量施用。DHPS抑制劑除草劑可以向田地按500到3000gai/ha(每公頃的活性成分量)或更高量施用。取決于田地中的雜草范圍所需觸發(fā)分子的數(shù)量，該組合物的多核苷酸可以按每英畝I到30克的比率施用。[0033]需要雜草控制的作物包括但不限于，i)玉米、大豆、棉花、油菜、甜菜、苜蓿、甘蔗、稻米及小麥；ii)蔬菜類(lèi)植物，包括但不限于，馬鈴薯、甜椒、辣椒、瓜、西瓜、黃瓜、茄子、花椰菜、椰菜、萵苣、菠菜、洋蔥、豌豆、胡蘿卜、甜玉米、大白菜、韭蔥、茴香、南瓜、倭瓜或葫蘆、蘿卜、球芽甘藍(lán)、粘果酸漿、青刀豆、干豆或秋葵；iii)烹飪用植物，包括但不限于，羅勒、歐芹、咖啡樹(shù)或荼樹(shù)；或iv)水果類(lèi)植物，包括但不限于，蘋(píng)果樹(shù)、梨樹(shù)、櫻桃樹(shù)、桃樹(shù)、李樹(shù)、杏樹(shù)、香蕉、車(chē)前草、鮮食葡萄、釀酒葡萄、柑橘、鱷梨樹(shù)、芒果或漿果；v)生長(zhǎng)用于觀賞或商業(yè)用途的樹(shù)，包括但不限于，果樹(shù)或堅(jiān)果樹(shù)；或Vi)觀賞性植物(例如觀賞性開(kāi)花植物或灌木或草坪草)。本文提供的方法和組合物還可以施用于通過(guò)插條、克隆或嫁接方法產(chǎn)生的植物(即，不是由種子生長(zhǎng)的植物)，包括果樹(shù)和植物，包括但不限于，柑橘、蘋(píng)果樹(shù)、鱷梨樹(shù)、番茄、茄子、黃瓜、瓜類(lèi)、西瓜和葡萄，以及各種觀賞性植物。[0034]殺蟲(chóng)混合物[0035]這些多核苷酸組合物還可以作為與各種農(nóng)業(yè)化學(xué)品和/或殺昆蟲(chóng)劑、殺螨劑以及殺真菌劑、殺蟲(chóng)劑和生物殺蟲(chóng)劑的混合物來(lái)使用。實(shí)例包括但不限于，甲基谷硫磷(azinphos-methyl)、高滅磷(acephate)、異噁唑磷(isoxathion)、異丙胺磷(isofenphos)、乙硫憐(ethion)、乙啼硫憐(etrimfos)、諷吸憐(oxydemeton-methyl)、異亞諷憐(oxydeprofos)、喹硫憐(quinalphos)、毒死蜱(chlorpyrifos)、甲基毒死蜱(chlorpyrifos-methyl)、毒蟲(chóng)畏(chlorfenvinphos)、殺螟臆(cyanophos)、蔬果憐(dioxabenzofos)、二氯松(dichlorvos)、二硫松(disulfoton)、甲基毒蟲(chóng)畏(dimethyIvinphos)、樂(lè)果(dimethoate)、硫丙磷(sulprofos)、二嗪憐(diazinon)、甲基乙拌憐(thiometon)、殺蟲(chóng)威(tetrachlorvinphos)、雙硫憐(temephos)、丁基啼卩定憐(tebupirimfos)、特丁硫憐(terbufos)、二溴憐(naled)、姆滅多(vamidothion)、吡唑硫憐(pyraclofos)、PJi嗪硫磷(pyridafenthion)、甲基啼卩定磷(pirimiphos-methyl)、殺螟硫磷(fenitrothion)、倍硫憐(fenthion)、稻豐散(phenthoate)、吡氟硫憐(fIupyrazophos)、丙硫磷(prothiofos)、丙蟲(chóng)磷(propaphos)、丙溴磷(profenofos)、辛硫磷(phoxime)、伏殺硫磷(phosalone)、亞胺硫磷(phosmet)、安果(formothion)、甲拌磷(phorate)、馬拉硫憐(malathion)、滅蟲(chóng)牙憐(mecarbam)、線蟲(chóng)靈(mesulfenfos)、甲胺憐(methamidophos)、殺撲憐(methidathion)、對(duì)硫憐(parathion)、甲基對(duì)硫憐(methylparathion)、久效憐(monocrotophos)、敵百蟲(chóng)(trichlorphon)、EPN、異唑憐(isazophos)、衣胺憐(isamidofos)、硫線憐(cadusafos)、苯基胺憐(diamidaphos)、除線憐(dichlofenthion)、蟲(chóng)線磷(thionazin)、克線磷(fenamiphos)、噻唑硫磷(fosthiazate)、丁硫環(huán)磷(fosthietan)、憐蟲(chóng)威(phosphocarb)、DSP、滅線憐(ethoprophos)、棉鈴?fù)?alanycarb)、涕滅威(aldicarb)、異丙威(isoprocarb)、乙硫苯威(ethiofencarb)、西維因(carbafyl)、丁呋喃(carbosulfan)、滅殺威(xylylcarb)、硫雙威(thiodicarb)、抗蟲(chóng)牙威(pirimicarb)、仲丁威(fenobucarb)、呋線威(furathiocarb)、殘殺威(propoxur)、惡蟲(chóng)威(bendiocarb)、丙硫克百威(benfuracarb)、滅多威(methomyl)、速滅威(metolcarb)、XMC、克百威(carbofuran)、涕滅砜威(aldoxycarb)、殺線威(oxamyl)、氟丙菊酯(acrinathrin)、丙烯菊酯(allethrin)、氰戊菊酯(esfenvalerate)、烯炔菊酯(empenthrin)、擬除蟲(chóng)菊酯(cycloprothrin)、三氟氯氰菊酯(cyhalothrin)、gamma-氯氟氰菊酯(gamma-cyhalothrin)、入-氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、氟氯氰菊酯(cyfIuthrin)、β-氟氯氰菊酯(beta-cyfIuthrin)、氣氛菊酯(cypermethrin)、ct_氣氛菊酯(alpha—cypermethrin)、氯氰菊酯(zeta-cypermethrin)、氟娃菊酯(silafluofen)、胺菊酯(tetramethrin)、七氟菊酯(tefluthrin)、溴氰菊酯(deltamethrin)、四溴菊酯(tralomethrin)、聯(lián)苯菊酯(bifenthrin)、苯醚菊(酯phenothrin)、氰戊菊酯(fenvalerate)、甲氰菊\(chéng)Ie/?iif\.，/JnlatitT'It\ιCL，/i*iat4L~HC\eri/鰹鉺郟，賽氍?,Sr氍?,(①SozgqUiiJ朝氍fr掛fcKE,(q-1SMXOPUT)錫鉺梃，(UOJnJi§JT3JP)蔭#h,(uilp!3JJPT3ZT3)_*&,(XoJd§jIT3H)蓄stf,(SOHdUfSlU)藥^?,(qjsofuq^lu)錫握f(shuō)r,(UmqJSI)0s^,(UOJn§Jn1-H)歧IMEM,(UiOIeq=IU)fc^fe,(ΧΘΙ-HdluooUiOmITqOd)蓉傘?*悔搬餓，(SmUOZSq)#S掛，(STMJedOJd)#S^,(X0SJH^X8H)匾S響，(UJZSJnIJ)*sM,(ET3UJSnIJ)鍇盤(pán)M,(ET-1ASJgnJJ)觀S#,(3+Jlssh&①J)觀S勃，(fsos+JogJ)錫0掛,(UJnbT3ZT3§J)I?s#,(USPJU^JAd)蓄S#,(SSHd)喊磐留，(fnesusq)迦|萑掛播，(IAJIIq)S弗崁，(PSAdgJnqfn)鍇S習(xí)，(§tps+J①P)蔭磐弗M川,(SJISEaIJdS)^sfrs,(§JO^JPOJJds)^S?,(ui13xaf,。)瓚氐川，(-1OIIPOSJP)喊磐纏，(OPTXOUiTnnqSJ)瓚X掛，(SJZfnSJOP)*?Ξ,5--^,(3Ι0ΖΤ3Χ0ΡΘ)SSN],(ZT3SET3)卷^釤，(SEnIJOPJI)遍Is鍇鵝，QtOUJnbSe)OOEJ^細(xì)繳！er(F3SOUJds)軺梂^,辰((--χSnnu細(xì)Η-Ι迴肽斕mfeua,(fnmldxnsaui8JU)X扣螞氍握，(①UOUfnOJ)匾繼酬，(USl^aJAd)餵寐鉺纏,(aJOJ.sl^a)鵝鉺N],(UUCUdU)鰹鉺M,(3IOJdo+JST3)鰹鉺齧N],(fne^doJdoEOJq)迦lsfraoJ8lp)姊gs弗M川，(fnexlzu①qalojlp)姊gS弗稍N],(UosgJJOIlP)餵磐弗,(UT3JJnsop§)Efclfe,(fnlesJJii錫窗勃，(S2&se喊鉺S,(asjdojp^)觀>0鉺裝，(SaJdOl^i)觀鉺裝，(UJZaJOJdnq)匾修響，(UaJAXOJdJJAd)蓄螌趙，(aulzlalA。)wg_s,(IKJOSJOJP)蓄鉺掛，(ΘριζοιΙΘ,μJi)萑齧鉺Mfr,(apJZ0§J〇3)萑齧鉺域，(①PTgSJS①P)萑鉺S,(①PTgsJIOJlP)隹齧鉺氐，(UOJnSJnI)蔭MEM,(UOJrlEnucdxan)(UoJnXOUaJnU)(UojnXOIOAOnU)(UOJnZ-BnU)蔭蜜盤(pán),(ualonstsle蔭鉺M川釤，(UamEnIJSOU)蔭滅蛾,(UOJnI義U)蔭M掛釤，(UOJnEnSJP)蔭^弗，(UOJnZUaqnJJfn)蔭掛M,(UOJniqnSP)蔭鉺0,(UojnsnlJJOJlP)蔭盤(pán)M,(UAdUfmU)鍇鉺盤(pán)裝，修鉺響,(PTJdOJgJi)鋈鉺響，(USnJfnOUJP)趙鉺惡，(UJPJUT^I^OJ。)^鉺響，(PjJdOPePJeJ)鋈鉺習(xí)，(PTJdJETnSe)|5鉺習(xí)，(CnnJnSUaq)懲鉺艱，(ι?υΛοοι?)ig響鉺，(dinJT33Efc?弗，(XSdgJOl^fJ)觀寐蓄，(USiSJ)迦I寐￥dtf,(USiR)迦I?Μ,(fnm^JH^OOJqnlJ)餵寐M郟,(?ηιΙ?Ληυ)觀寐贓鍇滅,(asujju^onlj)0?^?Μ,(USSTTSd)觀寐K茲，(USiSnJ)觀寐4κ?茲，(UTJiedOJdSJ)迦g罔SCAI<6ε?ο8%εο?Zo唑醇(bitertanol)、四氟醚唑(tetraconazole)、滅菌唑(triticonazole)、粉唑醇(fIutriafol)、戊菌唑（penconazole)、烯唑醇（diniconazole)、臆苯唑（fenbuconazole)、糖菌唑(bromuconazole)、亞胺唑(imibenconazole)、娃氟唑(simeconazole)、臆菌唑(myclobutanil)、土菌消（hymexazole)、烯菌靈（imazalil)、福拉比(furametpyr)、噻呋滅(thifIuzamide)、氯唑靈(etridiazole)、惡咪唑(oxpoconazole)、惡咪唑延胡索酸鹽(oxpoconazolefumarate)、稻痕酯(pefurazoate)、丙硫菌唑(prothioconazole)、P定斑月虧(pyrifenox)、氯苯啼卩定醇（fenafimol)、氟苯啼卩定醇(nuarimol)、乙啼酷磺酸酉旨(bupirimate)、啼菌胺（mepanipyrim)、啼菌環(huán)胺（cyprodinil)、啼霉胺（pyrimethanil)、甲霜靈（metalaxyl)、精甲霜靈（mefenoxam)、惡霜靈（oxadixyl)、苯霜靈（benalaxyl)、托布津（thiophanate)、甲基硫菌靈（thiophanate-methyl)、苯菌靈(benomyl)、多菌靈(carbendazim)、麥穗寧(fuberidazole)、噻菌靈（thiabendazole)、代森猛鋒(manzeb)、甲基代森鋅（propineb)、代森鋅（zineb)、代森聯(lián)（metiram)、代森猛（maneb)、福美鋒(ziram)、福美雙(thiuram)、百菌清(chlorothalonil)、噻唑菌胺(ethaboxam)、氧化萎銹靈（oxycarboxin)、萎銹靈（carboxin)、氟酰胺（fIutolaniI)、娃噻菌胺(silthiofam)、滅鎊胺（mepronil)、烯酸嗎啉（dimethomorph)、苯鎊唳（fenpropidin)、粉鎊啉（fenpropimorph)、葚抱菌素（spiroxamine)、十三嗎啉（tridemorph)、十二環(huán)嗎啉(dodemorph)、氟嗎啉（fIumorph)、臆啼菌酯(azoxystrobin)、醚菌酉旨(kresoxim-methyl)、苯氧菌胺（metominostrobin)、月虧醚菌胺（orysastrobin)、氟啼菌酯（fIuoxastrobin)、布洛芬(trifIoxystrobin)、醚菌胺(dimoxystrobin)、百克敏(pyraclostrobin)、P定氧菌酯(picoxystrobin)、異菌脲(iprodione)、腐霉利(procymidone)、乙烯菌核利(vinclozolin)、克氯得（chlozolinate)、氟硫滅（fIusulfamide)、棉隆、異硫氰酸甲酯、氯化苦(chloropicrin)、石黃菌威(methasulfocarb)、惡霉靈(hydroxyisoxazoIe)、輕基異卩惡唑鉀、氯唑靈（echlomezol)、D-D、氨基甲酸酯（carbam)、堿式氯化銅、堿式硫酸銅、壬基苯酌橫酸銅(coppernonylphenolsulfonate)、輕基喹啉銅(oxinecopper)、DBEDC、無(wú)水硫酸銅、五水硫酸銅、氫氧化銅、無(wú)機(jī)硫、可濕性硫、石硫合劑（limesulfur)、硫酸鋅、三苯錫（fentin)、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、次氯酸鈉、銀、敵痕磷（edifenphos)、甲基立枯憐(tolclofos-methyl)、福賽得(fosetyl)、異稻痕凈(iprobenfos)、消螨普(dinocap)、卩比啼磷(pyrazophos)、加普胺(carpropamid)、四氯苯酞(fthalide)、三環(huán)唑(tricyclazole)、百快隆(pyroquilon)、雙氯氰菌胺(diclocymet)、芬太尼(fenoxanil)、春雷霉素（kasugamycin)、井_霉素（validamycin)、多氧霉素（polyoxins)、殺稻痕素S(blasticidenS)、土霉素（oxytetracycline)、滅粉霉素（mildiomycin)、鏈霉素（streptomycin)、菜籽油、機(jī)械油、苯噻菌胺（benthiavalicarbisopropyl)、丙森鋅(iprovalicarb)、霜霉威(propamocarb)、乙霉威(diethofencarb)、唑呋草(fIuoroimide)、氟菌臆(fludioxanil)、拌種咯（fenpiclonil)、喹氧靈（quinoxyfen)、P惡喹酸(oxolinicacid)、百菌清（chlorothalonil)、克菌丹(captan)、滅菌丹(folpet)、烯丙苯噻唑（probenazole)、阿拉酸式苯-S-甲基（acibenzolar-S_methyl)、噻酸菌胺(tiadinil)、環(huán)氟菌胺（cyfIufenamid)、環(huán)酸菌胺（fenhexamid)、二氟林（diflumetorim)、苯菌酮（metrafenone)、氟卩比菌胺(picobenzamide)、丙氧喹啉(proquinazid)、惡唑菌酮（famoxadone)、氰霜唑（cyazofamid)、咪唑菌酮（fenamidone)、苯酸菌胺(zoxamide)、唳酰菌胺(boscalid)、霜脲氰(cymoxanil)、二氰蒽醌(dithianon)、氟唳胺(fluazinam)、抑菌靈(dichlofluanide)、嗪胺靈(triforine)、稻痕靈(isoprothiolane)、嘧菌腙(ferimzone)、咕菌酮(diclomezine)、葉枯酞(tecloftalam)、戍菌隆(pencycuron)、滅螨猛(chinomethionat)、雙狐辛胺乙酸鹽(iminoctadineacetate)、雙胍辛胺燒苯磺酸鹽(iminoctadinealbesilate)、代森銨(ambam)、福代鋅(polycarbamate)、噻二嗪(thiadiazine)、地茂散(chloroneb)、二甲基二硫代氨基甲酸鎮(zhèn)(nickeldimethyldithiocarbamate)、雙辛狐胺(guazatine)、十二烷基狐乙酸鹽(dodecylguanidine-acetate)、五氯硝基苯(quintozene)、甲苯氟石黃胺(tolylfIuanid)>敵菌靈(anilazine)、間硝酞異丙酯(nitrothalisopropyl)、種衣酯(fenitropan)、甲菌定(dimethirimol)、苯并噻唑、肝素蛋白、氟聯(lián)苯菌(fIumetover)、雙炔酰菌胺(mandipropamide)及批噻菌胺(penthiopyrad)。[0036]多核苷酸[0037]如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“DNA”、“DNA分子”、“DNA多核苷酸分子”是指基因組或合成來(lái)源的單鏈DNA(ssDNA)或雙鏈DNA(dsDNA)分子，諸如，脫氧核糖核苷酸堿基的聚合物或DNA多核苷酸分子。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“DNA序列”、“DNA核苷酸序列”或“DNA多核苷酸序列”是指DNA分子的核苷酸序列。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“RNA”、“RNA分子”、“RNA多核苷酸分子”是指基因組或合成來(lái)源的單鏈RNA(ssRNA)或雙鏈RNA(dsRNA)分子，諸如，包含單鏈或雙鏈區(qū)的核糖核苷酸堿基的聚合物。除非另作說(shuō)明，否則所給的在本說(shuō)明書(shū)正文中的核苷酸序列是從左向右，即，5’至3’方向讀取。本文中使用的命名是按美國(guó)聯(lián)邦法規(guī)(UnitedStatesCodeofFederalRegulations)§1.822第37款所規(guī)定的并且在WIPO標(biāo)準(zhǔn)ST.25(1998)，附錄2，表1和表3中有所闡述。[0038]如本文所使用，“多核苷酸”是指含有多個(gè)核苷酸的DNA或RNA分子，并且一般是指“寡核苷酸”(典型地長(zhǎng)度為50個(gè)或更少核苷酸的多核苷酸分子)和具有51個(gè)或更多個(gè)核苷酸的多核苷酸兩者。實(shí)施方案包括了包括以下的組合物:長(zhǎng)度為18-25個(gè)核苷酸(18聚體、19聚體、20聚體、21聚體、22聚體、23聚體、24聚體或25聚體)的寡核苷酸，例如表3的寡核苷酸(SEQIDNO:907-1175)或其片段；或長(zhǎng)度為26個(gè)或更多個(gè)核苷酸的中等長(zhǎng)度多核苷酸(具有26、27、28、29、30、39、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、39、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約160、約170、約180、約190、約200、約210、約220、約230、約240、約250、約260、約270、約280、約290或約300個(gè)核苷酸的多核苷酸)，例如表2的多核苷酸(SEQIDNO=55-906)或其片段；或長(zhǎng)度大于約300個(gè)核苷酸的較長(zhǎng)多核苷酸(例如長(zhǎng)度在約300到約400個(gè)核苷酸之間、在約400到約500個(gè)核苷酸之間、在約500到約600個(gè)核苷酸之間、在約600到約700個(gè)核苷酸之間、在約700到約800個(gè)核苷酸之間、在約800到約900個(gè)核苷酸之間、在約900到約1000個(gè)核苷酸之間、在約300到約500個(gè)核苷酸之間、在約300到約600個(gè)核苷酸之間、在約300到約700個(gè)核苷酸之間、在約300到約800個(gè)核苷酸之間、在約300到約900個(gè)核苷酸之間，或?yàn)榧s1000個(gè)核苷酸，或長(zhǎng)度甚至超過(guò)約1000個(gè)核苷酸的多核苷酸，例如最多靶基因的整個(gè)長(zhǎng)度，包括該靶基因的編碼或非編碼或者編碼與非編碼部分在內(nèi))，例如表1的多核苷酸(SEQIDNO:1-54)，其中所選與SEQIDNO:1-54同源或互補(bǔ)的多核苷酸或其片段抑制、阻遏或以其它方式延遲靶DHPS基因的表達(dá)。靶基因包含植物細(xì)胞中靶基因的表達(dá)受這些方法和組合物調(diào)節(jié)的任何多核苷酸分子或其片段。在多核苷酸為雙鏈的情況下，其長(zhǎng)度可以類(lèi)似地按照堿基對(duì)來(lái)描述?？梢允构押塑账岷投嗪塑账崤c基因的相鄰遺傳元件，例如橫跨內(nèi)含子與外顯子的接合區(qū)、啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄區(qū)的接合區(qū)、5’前導(dǎo)序列與編碼序列的接合區(qū)、3’非翻譯區(qū)與編碼序列的接合區(qū)基本上同一或基本上互補(bǔ)。[0039]各種實(shí)施方案中所使用的多核苷酸組合物包括了含寡核苷酸或多核苷酸或兩者的混合物，包括RNA或DNA或RNA/DNA雜交體，或者化學(xué)修飾的寡核苷酸或多核苷酸或其混合物的組合物。在一些實(shí)施方案中，該多核苷酸可以是核糖核苷酸與脫氧核糖核苷酸的組合，例如主要由核糖核苷酸組成但具有一個(gè)或多個(gè)末端脫氧核糖核苷酸的合成多核苷酸，或主要由脫氧核糖核苷酸組成但具有一個(gè)或多個(gè)末端雙脫氧核糖核苷酸的合成多核苷酸。在一些實(shí)施方案中，該多核苷酸包括非經(jīng)典核苷酸，諸如肌苷、硫尿核苷或假尿苷。在一些實(shí)施方案中，該多核苷酸包括化學(xué)修飾的核苷酸。化學(xué)修飾的寡核苷酸或多核苷酸的實(shí)例是本領(lǐng)域中眾所周知的；參見(jiàn)例如，美國(guó)專(zhuān)利公布20110171287、美國(guó)專(zhuān)利公布20110171176及美國(guó)專(zhuān)利公布20110152353、美國(guó)專(zhuān)利公布20110152339、美國(guó)專(zhuān)利公布20110160082，以引用的方式并入本文中。舉例來(lái)說(shuō)，包括但不限于，寡核苷酸或多核苷酸的天然存在的磷酸二酯主鏈可以用硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵修飾部分或完全地進(jìn)行修飾，經(jīng)過(guò)修飾的核苷堿基或經(jīng)過(guò)修飾的糖可以用于寡核苷酸或多核苷酸合成中，并且寡核苷酸或多核苷酸可以用熒光部分(例如，熒光素或羅丹明(rhodamine))或其它標(biāo)記(例如生物素)進(jìn)行標(biāo)記。[0040]這些多核苷酸可以是單鏈或雙鏈RNA，或單鏈或雙鏈DNA，或雙鏈DNA/RNA雜交體，或其經(jīng)過(guò)修飾的類(lèi)似物，并且可以具有寡核苷酸長(zhǎng)度或更長(zhǎng)。在更特定的實(shí)施方案中，在植物細(xì)胞中提供單鏈RNA的多核苷酸選自:(a)單鏈RNA分子(ssRNA)；(b)自雜交形成雙鏈RNA分子的單鏈RNA分子；(c)雙鏈RNA分子(dsRNA)；(d)單鏈DNA分子(ssDNA)；(e)自雜交形成雙鏈DNA分子的單鏈DNA分子'及(f)轉(zhuǎn)錄成RNA分子的單鏈DNA分子，包括經(jīng)過(guò)修飾的PolIII基因；(g)雙鏈DNA分子(dsDNA)；(h)轉(zhuǎn)錄成RNA分子的雙鏈DNA分子，包括經(jīng)過(guò)修飾的PolIII基因；(i)雜交的雙鏈RNA/DNA分子；或其組合。在一些實(shí)施方案中，這些多核苷酸包括化學(xué)修飾的核苷酸或非經(jīng)典核苷酸。在一些實(shí)施方案中，這些寡核苷酸可以為平末端的，或可以包含至少一條或兩條鏈的1-5個(gè)核苷酸的3'突出。該寡核苷酸的其它配置是本領(lǐng)域中已知的并且涵蓋于本文中。在該方法的實(shí)施方案中，這些多核苷酸包括通過(guò)分子內(nèi)雜交形成的雙鏈DNA、通過(guò)分子間雜交形成的雙鏈DNA、通過(guò)分子內(nèi)雜交形成的雙鏈RNA或通過(guò)分子間雜交形成的雙鏈RNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些多核苷酸包括自雜交形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的單鏈DNA或單鏈RNA，其具有至少部分雙鏈的結(jié)構(gòu)，包括至少一個(gè)將與由有待抑制的基因所轉(zhuǎn)錄的RNA雜交的區(qū)段。不希望受任何機(jī)制的束縛，據(jù)信這些多核苷酸產(chǎn)生或?qū)a(chǎn)生具有至少一個(gè)將與由有待抑制的基因所轉(zhuǎn)錄的RNA雜交的區(qū)段的單鏈RNA。在某些其它實(shí)施方案中，這些多核苷酸另外包括啟動(dòng)子，一般是在植物中起作用的啟動(dòng)子，例如polII啟動(dòng)子、polIII啟動(dòng)子、polIV啟動(dòng)子或polV啟動(dòng)子。[0041]術(shù)語(yǔ)“基因”是指這樣一些組分，其包含染色體DNA、質(zhì)粒DNA、cDNA、內(nèi)含子和外顯子DNA、人工DNA多核苷酸，或編碼肽、多肽、蛋白質(zhì)或RNA轉(zhuǎn)錄物分子的其它DNA，以及側(cè)接涉及表達(dá)調(diào)控的編碼序列的遺傳元件，諸如啟動(dòng)子區(qū)、5’前導(dǎo)區(qū)、3’非翻譯區(qū)，這些遺傳元件可以作為天然基因或轉(zhuǎn)基因存在于植物基因組中。該基因或其片段被分離出來(lái)并且經(jīng)歷多核苷酸測(cè)序方法，這些方法將測(cè)定包含該基因的核苷酸的次序。該基因的任何組分都是觸發(fā)寡核苷酸和多核苷酸的潛在靶。[0042]這些多核苷酸分子被設(shè)計(jì)成通過(guò)誘導(dǎo)植物中內(nèi)源DHPS基因的調(diào)控或抑制來(lái)調(diào)節(jié)表達(dá)，并且被設(shè)計(jì)成具有與植物內(nèi)源DHPS基因(包括在植物中提供除草劑耐藥性DHPS酶的轉(zhuǎn)基因)的核苷酸序列或與由植物內(nèi)源DHPS基因轉(zhuǎn)錄的RNA序列基本上同一或基本上互補(bǔ)的核苷酸序列，這些核苷酸序列可以是編碼序列或非編碼序列。調(diào)節(jié)表達(dá)的有效分子被稱(chēng)為“觸發(fā)分子或觸發(fā)多核苷酸”?！盎旧贤弧被颉盎旧匣パa(bǔ)”意思指觸發(fā)多核苷酸(或雙鏈多核苷酸的至少一條鏈或其部分，或單鏈多核苷酸的一部分)被設(shè)計(jì)成與內(nèi)源基因非編碼序列或與由該內(nèi)源基因轉(zhuǎn)錄的RNA(稱(chēng)為信使RNA或RNA轉(zhuǎn)錄物)雜交，以實(shí)現(xiàn)對(duì)該內(nèi)源基因表達(dá)的調(diào)控或抑制。觸發(fā)分子是通過(guò)用反義或有義多核苷酸的部分重疊的探針或非重疊探針“鋪蓋(tiling)”這些基因靶來(lái)鑒別，這些反義或有義多核苷酸與內(nèi)源基因的核苷酸序列基本上同一或基本上互補(bǔ)?？梢詫⒍鄠€(gè)靶序列對(duì)準(zhǔn)并且將共有同源性的序列區(qū)域鑒別為多個(gè)靶的潛在觸發(fā)分子。各種長(zhǎng)度(例如18-25個(gè)核苷酸、26-50個(gè)核苷酸、51-100個(gè)核苷酸、101-200個(gè)核苷酸、201-300個(gè)核苷酸或更長(zhǎng))的多個(gè)觸發(fā)分子可以匯集于少許處理中以便研究覆蓋了一部分基因序列(例如，編碼區(qū)的一部分對(duì)非編碼區(qū)的一部分，或基因的5’部分對(duì)3’部分)或包括靶基因的編碼區(qū)和非編碼區(qū)在內(nèi)的整個(gè)基因序列的多核苷酸分子。所匯集的觸發(fā)分子的多核苷酸分子可以分成更小的集合或單個(gè)分子，以便鑒別出提供希望的作用的觸發(fā)分子。[0043]靶基因RNA和DNA多核苷酸分子(表1，SEQIDNO:1_54)是通過(guò)許多可用的方法和設(shè)備進(jìn)行測(cè)序。一些測(cè)序技術(shù)是可商購(gòu)的，諸如Affymetrix公司(加利福尼亞州森尼維爾(Sunnyvale,Calif.))的雜交測(cè)序平臺(tái)(sequencing-by-hybridizationplatform)以及454LifeSciences(康涅狄克州布萊德福德(Bradford,Conn.))、Illumina/Solexa(加利福尼州海沃德(Hayward,Calif.))和HelicosBiosciences(馬薩諸塞州劍橋(Cambridge,Mass.))的合成測(cè)序平臺(tái)(sequencing-by-synthesisplatform),及AppliedBiosystems(加利福尼亞州福斯特市(FosterCity,Calif.))的連接測(cè)序平臺(tái)(sequencing-by-ligationplatform),如下文所描述。除使用HelicosBiosciences的合成測(cè)序法進(jìn)行的單分子測(cè)序外，該方法還涵蓋其它單分子測(cè)序技術(shù)，并且包括PacificBiosciences的SMRT?技術(shù)、1nTorrent?技術(shù)以及由例如OxfordNanoporeTechnologies開(kāi)發(fā)的納米孔測(cè)序技術(shù)。包含DHPS靶基因的DNA或RNA可以使用與SEQIDNO:1-54或其片段基本上互補(bǔ)或基本上同源的引物或探針進(jìn)行分離。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)基因片段可以使用與SEQIDNO:1-54或其片段基本上互補(bǔ)或基本上同源的引物來(lái)產(chǎn)生，該基因片段可用于從植物基因組中分離出DHPS基因。[0044]功能性單鏈多核苷酸功能的實(shí)施方案具有的序列互補(bǔ)性無(wú)需為100%，但至少足以允許與由靶基因或靶基因的DNA轉(zhuǎn)錄的RNA雜交，從而形成雙鏈體以允許基因沉默機(jī)制。因此，在實(shí)施方案中，多核苷酸片段被設(shè)計(jì)成與靶DHPS基因序列或由該靶基因轉(zhuǎn)錄的信使RNA中的18個(gè)或更多個(gè)連續(xù)核苷酸的序列基本上同一或基本上互補(bǔ)?！盎旧贤弧币馑贾府?dāng)與靶基因或由該靶基因轉(zhuǎn)錄的RNA中的18個(gè)或更多個(gè)連續(xù)核苷酸的序列相比較時(shí)，具有100%序列同一性，或至少約83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性；“基本上互補(bǔ)”意思指當(dāng)與靶基因或由該靶基因轉(zhuǎn)錄的RNA中的18個(gè)或更多個(gè)連續(xù)核苷酸的序列相比較時(shí)，具有100%序列互補(bǔ)性，或至少約83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列互補(bǔ)性。在一些實(shí)施方案中，多核苷酸分子被設(shè)計(jì)成與指定靶基因的一個(gè)等位基因或一個(gè)家族成員(基因的編碼或非編碼序列)具有100%序列同一性或互補(bǔ)性；在其它實(shí)施方案中，這些多核苷酸分子被設(shè)計(jì)成與指定靶基因的多個(gè)等位基因或家族成員具有100%序列同一性或互補(bǔ)性。序列表SEQIDNO:1-1222或者表1、2或3中的觸發(fā)多核苷酸序列可以與一部分DHPS靶基因序列互補(bǔ)或同源。[0045]在某些實(shí)施方案中，組合物中使用的與靶基因或轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)的多核苷酸將包含該組合物中的優(yōu)勢(shì)核酸。因此，在某些實(shí)施方案中，與靶基因或轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)的多核苷酸將包含該組合物中所提供的至少約50%、75%、95%、98%或100%的核酸(以質(zhì)量或摩爾濃度計(jì))。然而，在某些實(shí)施方案中，與靶基因或轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)的多核苷酸可以包含該組合物中所提供的至少約1%到約50%、約10%到約50%、約20%到約50%或約30%到約50%的核酸(以質(zhì)量或摩爾濃度計(jì))。還提供了這樣一些組合物，其中與靶基因或轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)的多核苷酸可以包含該組合物中所提供的至少約1%到100%、約10%到100%、約20%到約100%、約30%到約50%或約50%到100%的核酸(以質(zhì)量或摩爾濃度計(jì))。[0046]“同一性”是指兩個(gè)多核酸或蛋白質(zhì)序列之間的相似性程度。這兩個(gè)序列的比對(duì)是通過(guò)適合計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行的。廣泛使用并且得到認(rèn)可的用于進(jìn)行序列比對(duì)的計(jì)算機(jī)程序是CLUSTALffvl.6(Thompson等，Nucl.AcidsRes.,22:3973-3980,1994)?匹配堿基或氨基酸的數(shù)量除以堿基或氨基酸總數(shù)，并乘以100，得到同一性百分比。舉例來(lái)說(shuō)，如果兩個(gè)有580個(gè)堿基對(duì)的序列具有145個(gè)匹配堿基，那么它們將為25%同一的。如果比較的兩個(gè)序列具有不同長(zhǎng)度，那么匹配的數(shù)量除以?xún)蓚€(gè)長(zhǎng)度中較短的長(zhǎng)度。舉例來(lái)說(shuō)，如果一個(gè)有200個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)與一個(gè)有400個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)之間有100個(gè)匹配的氨基酸，那么它們相對(duì)于較短的序列具有50%同一性如果較短的序列的長(zhǎng)度不到150個(gè)堿基或50個(gè)氨基酸，那么匹配的數(shù)量除以150(對(duì)于核酸堿基)或50(對(duì)于氨基酸)，并乘以100，得到同一性百分比。[0047]針對(duì)特定基因家族成員的觸發(fā)分子可以由一種植物或多種植物的基因家族的編碼和/或非編碼序列，通過(guò)比對(duì)并從比對(duì)序列的最小同源區(qū)中選出200-300個(gè)多核苷酸片段來(lái)鑒別，并且使用局部施用的多核苷酸(有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA)進(jìn)行評(píng)估以確定這些分子在誘導(dǎo)除草表型方面的相對(duì)功效。這些有效區(qū)段進(jìn)一步細(xì)分成50-60個(gè)多核苷酸片段，根據(jù)最小同源性區(qū)分優(yōu)先次序，并使用局部施用的多核苷酸進(jìn)行再評(píng)估。這50-60個(gè)有效多核苷酸片段細(xì)分成19-30個(gè)多核苷酸片段，根據(jù)最小同源性區(qū)分優(yōu)先次序，并再次針對(duì)產(chǎn)率/質(zhì)量表型的誘導(dǎo)進(jìn)行評(píng)估。一旦確定了相對(duì)功效，就單獨(dú)地利用這些片段，或結(jié)合一種或多種其它片段對(duì)其再次評(píng)估，以確定用于提供產(chǎn)率/質(zhì)量表型的觸發(fā)組合物或觸發(fā)多核苷酸的混合物。[0048]用于廣譜活性的觸發(fā)分子可以由一種植物或多種植物的基因家族的編碼和/或非編碼序列，通過(guò)比對(duì)并從比對(duì)序列的最高同源性區(qū)域中選出200-300個(gè)多核苷酸片段來(lái)鑒別，并且使用局部施用的多核苷酸(有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA)進(jìn)行評(píng)估以確定這些分子在誘導(dǎo)產(chǎn)率/質(zhì)量表型方面的相對(duì)功效。這些有效區(qū)段進(jìn)一步細(xì)分成50-60個(gè)多核苷酸片段，根據(jù)最高同源性區(qū)分優(yōu)先次序，并使用局部施用的多核苷酸進(jìn)行再評(píng)估。這50-60個(gè)有效多核苷酸片段細(xì)分成19-30個(gè)多核苷酸片段，根據(jù)最高同源性區(qū)分優(yōu)先次序，并再次針對(duì)產(chǎn)率/質(zhì)量表型的誘導(dǎo)進(jìn)行評(píng)估。一旦確定了相對(duì)功效，就利用單獨(dú)這些片段或其與一種或多種其它片段的組合，以確定用于提供產(chǎn)率/質(zhì)量表型的觸發(fā)組合物或觸發(fā)多核苷酸的混合物。[0049]制備多核苷酸的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。本領(lǐng)域中已知化學(xué)合成、體內(nèi)合成及體外合成方法和組合物，并且包括各種病毒元件、微生物細(xì)胞、經(jīng)過(guò)修飾的聚合酶及經(jīng)過(guò)修飾的核苷酸。市面上的寡核苷酸制劑通常在有義鏈的3’端上提供兩個(gè)脫氧核糖核苷酸。較長(zhǎng)的多核苷酸分子可以由可商購(gòu)的試劑盒來(lái)合成，例如AppliedBiosystems/Ambion(德克薩斯州奧斯汀(Austin，TX))的試劑盒在微生物表達(dá)盒中在5’端上連接有DNA,該微生物表達(dá)盒包括一個(gè)細(xì)菌T7聚合酶啟動(dòng)子，其產(chǎn)生能組裝成dsRNA的RNA鏈；及由各種制造商提供的試劑盒，包括T7RiboMaxExpress(威斯康星州麥迪遜的Promega)、AmpliScribeT7_Flash(威斯康星州麥迪遜的Epicentre)及TranscriptAidT7HighYield(馬里蘭州格倫伯尼(GlenBumie,MD)的Fermentas)。dsRNA分子可以由微生物表達(dá)盒在具有經(jīng)過(guò)調(diào)控或不足的RNA酶III酶活性的細(xì)菌細(xì)胞中產(chǎn)生(Ongvarrasopone等，ScienceAsia33:35-39；Yin,Appl.Microbiol.Biotechnol84:323-333,2009；Liu等，BMCBiotechnologylO:85，2010)，或使用各種病毒載體產(chǎn)生以產(chǎn)生足量的dsRNA。將DHPS基因片段插入微生物表達(dá)盒中表達(dá)這些片段以產(chǎn)生可用于本文所描述的方法中的ssRNA或dsRNA的位置中，以調(diào)控靶DHPS基因的表達(dá)。較長(zhǎng)的多核苷酸分子還可以由多個(gè)RNA或DNA片段組裝。在一些實(shí)施方案中，設(shè)計(jì)參數(shù),諸如Reynolds評(píng)分(Reynolds等，NatureBiotechnology22,326-330(2004))；Tuschl規(guī)則(Pei和Tuschl,NatureMethods3(9):670-676,2006)、i評(píng)分(NucleicAcidsRes35:el23，2007)、1-ScoreDesigner工具和相關(guān)算法(NucleicAcidsRes32:936-948,2004;BiochemBiophysResCommun316:1050-1058,2004；NucleicAcidsRes32:893-901,2004;CellCycle3:790-5,2004；NatBiotechnol23:995-1001,2005；NucleicAcidsRes35:e27,2007；BMCBioinformatics7:520,2006；NucleicAcidsRes35:el23,2007;NatBiotechnol22:326-330,2004),是本領(lǐng)域中已知的并且可以用于選擇有效進(jìn)行基因沉默的多核苷酸序列。在一些實(shí)施方案中，使用多核苷酸序列的隨機(jī)設(shè)計(jì)或經(jīng)驗(yàn)選擇來(lái)選擇有效進(jìn)行基因沉默的多核苷酸序列。在一些實(shí)施方案中，針對(duì)預(yù)定植物的基因組DNA來(lái)篩選多核苷酸序列以使其它基因的無(wú)意沉默減到最少。[0050]多核苷酸組合物呈組合物形式是有用的，所述組合物諸如為在相同溶液中或在提供滲透增強(qiáng)劑的單獨(dú)施用的溶液中的單獨(dú)的或與其它組分一起組合的低濃度多核苷酸分子的溶液。盡管可用于這些方法中的多核苷酸分子的濃度和劑量不存在上限，但對(duì)于功效來(lái)說(shuō)，一般需要較低的有效濃度和劑量。這些濃度可以根據(jù)噴藥量或施用到植物葉子或其它植物部分表面(諸如花瓣、莖、塊莖、果實(shí)、花粉囊、花粉或種子)的處理進(jìn)行調(diào)整。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用25聚體寡核苷酸分子對(duì)草本植物進(jìn)行的有用處理是每株植物約I納摩爾(nmOl)寡核苷酸分子,例如每株植物約0.05到lnmol。有關(guān)草本植物的其它實(shí)施方案包括每株植物約0.05到約IOOnmol,或約0.1到約20nmol,或約Inmol到約IOnmol多核苷酸的有用范圍。極大的植物、樹(shù)或藤本植物可能相應(yīng)地需要較大量的多核苷酸。當(dāng)使用能加工成多個(gè)寡核苷酸的長(zhǎng)dsRNA分子時(shí)，可以使用較低的濃度。為了說(shuō)明實(shí)施方案，當(dāng)應(yīng)用于寡核苷酸分子時(shí)，任意地使用因子Ix來(lái)表不每株植物0.8nmol多核苷酸分子的處理；10X表每株植物8nmol多核苷酸分子；并且IOOX表不每株植物80nmol多核苷酸分子。[0051]觸發(fā)多核苷酸和寡核苷酸分子組合物呈組合物形式是有用的，所述組合物諸如包含在相同溶液中或在還提供轉(zhuǎn)移劑的單獨(dú)施用的液體中的單獨(dú)的或與其它組分(例如一種或多種除草劑分子)一起組合的這些多核苷酸分子的液體。如本文所使用，轉(zhuǎn)移劑是當(dāng)與多核苷酸組合于局部施用于靶植物表面的組合物中時(shí)使該多核苷酸能夠進(jìn)入植物細(xì)胞的一種試劑。在某些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)移劑是調(diào)節(jié)植物組織的表面(例如葉、莖、根、花或果實(shí))以使多核苷酸分子能滲透入植物細(xì)胞中的一種試劑。通過(guò)向植物組織預(yù)先或同時(shí)施用多核苷酸-轉(zhuǎn)移劑可以有助于將多核苷酸轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中。在一些實(shí)施方案中，該轉(zhuǎn)移劑是在施用了多核苷酸組合物之后施用。多核苷酸轉(zhuǎn)移劑為多核苷酸穿過(guò)角質(zhì)層蠟質(zhì)屏障、氣孔和/或細(xì)胞壁或膜屏障進(jìn)入植物細(xì)胞中提供了一條途徑。有助于多核苷酸轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中的適合轉(zhuǎn)移劑包括增加植物外部的滲透性或增加植物細(xì)胞對(duì)寡核苷酸或多核苷酸的滲透性的試劑。這些有助于組合物轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中的試劑包括化學(xué)試劑，或物理試劑，或其組合。用于調(diào)節(jié)或轉(zhuǎn)移的化學(xué)試劑包括(a)表面活性劑、(b)有機(jī)溶劑或含水溶液或有機(jī)溶劑的含水混合物、(C)氧化劑、⑷酸、(e)堿、(f)油、(g)酶，或其組合。該方法的實(shí)施方案可以任選地包括溫育步驟、中和步驟(例如，中和酸、堿或氧化劑，或者使酶失活)、沖洗步驟或其組合。用于調(diào)節(jié)植物對(duì)多核苷酸的滲透的試劑或處理的實(shí)施方案包括乳液、反相乳液、脂質(zhì)體及其它類(lèi)膠束組合物。用于調(diào)節(jié)植物對(duì)多核苷酸的滲透的試劑或處理的實(shí)施方案包括平衡離子或已知與核酸分子結(jié)合的其它分子，例如無(wú)機(jī)銨離子、烷基銨離子、鋰離子、多胺(諸如精胺、亞精胺或腐胺)及其它陽(yáng)離子?？捎糜谡{(diào)節(jié)植物對(duì)多核苷酸的滲透的有機(jī)溶劑包括DMSO、DMF、吡啶、N-吡咯烷、六甲基磷酰胺、乙腈、二噁烷、聚丙二醇，與水可混溶或?qū)⒘姿岷塑账崛芙庥诜撬到y(tǒng)(諸如用于合成反應(yīng)中)中的其它溶劑?？梢允褂煤虿缓砻婊钚詣┗蛉榛瘎┑奶烊粊?lái)源或合成的油，例如可以使用植物來(lái)源的油、作物油(諸如第9版《除草劑佐劑綱要》(9thCompendiumofHerbicideAdjuvants)中所列的那些，在國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)(網(wǎng)絡(luò))的herbicide,adjuvants,com上公開(kāi)可用)，例如石臘油、多元醇脂肪酸酯，或具有用酰胺或多胺(諸如聚乙烯亞胺或N-吡咯烷)修飾的短鏈分子的油。轉(zhuǎn)移劑包括但不限于，有機(jī)硅酮制劑。[0052]配體可以拴系于多核苷酸，例如dsRNA、ssRNA、dsDNA或ssDNA。一般說(shuō)來(lái)，配體可以包括修飾劑，例如用于增強(qiáng)吸收；診斷化合物或報(bào)告基團(tuán)，例如用于監(jiān)測(cè)分布；交聯(lián)劑；賦予核酸酶抗性的部分；及天然或不常見(jiàn)核堿基。一般實(shí)例包括親脂性試劑類(lèi)、脂質(zhì)類(lèi)(例如膽固醇、膽汁酸或脂肪酸(例如石膽酸-油?；?、月桂?；⒍榛?、硬脂?；⒆貦磅；?、肉豆蘧酰基油?；?、亞油酰基))、類(lèi)固醇(例如烏蘇醇、龍舌藍(lán)皂苷配基、薯蕷皂苷配基)、職類(lèi)(例如三職類(lèi)，例如薩灑阜草配基(sarsasapogenin)、無(wú)羈職(Friedelin)、表無(wú)羈萜衍生化的石膽酸)、維生素類(lèi)(例如葉酸、維生素A、生物素、吡哆醛)、碳水化合物類(lèi)、蛋白質(zhì)類(lèi)、蛋白質(zhì)結(jié)合劑類(lèi)、整合素靶向性分子類(lèi)、聚陽(yáng)離子類(lèi)、肽類(lèi)、多胺類(lèi)及肽模擬物類(lèi)。該配體還可以是重組或合成分子，諸如合成聚合物，例如聚乙二醇(PEG)、PEG-40K、PEG-20K及PEG-5K。配體的其它實(shí)例包括親脂性分子，例如膽固醇、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睪酮、甘油(例如其酯和醚，例如C1(l、Cn、C12,C13、C14,C15,C16,C17,C18,C19或C2tl烷基；例如月桂?；⒍榛?、硬脂酰基、油?；?、亞油酰基1，3_雙-0(十六烷基)甘油、1，3-雙-O(十八烷基)甘油)、香葉基氧己基、十六烷基甘油、龍腦、薄荷醇、I，3-丙二醇、十七烷基、棕櫚酸、肉豆蘧酸、03-(油?；?石膽酸、03-(油?；?膽烯酸、十二烷酰基、石膽基、5.β._膽留烷基、N，N-二硬脂基-石膽酰胺、1，2_二-O-硬脂?；视王?、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪)及PEG(例如PEG-5K、PEG-20K、PEG-40K)。優(yōu)選的親脂性部分包括脂質(zhì)、膽固醇、油?；?、視黃基或膽固醇基殘基。[0053]將配體與dsRNA結(jié)合可以增強(qiáng)其細(xì)胞吸收，已經(jīng)結(jié)合于寡核苷酸的親脂性化合物包括1-芘丁酸、I，3-雙-0-(十六烷基)甘油及薄荷醇。用于受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用的配體的一個(gè)實(shí)例是葉酸。葉酸通過(guò)葉酸酯受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。帶有葉酸的dsRNA化合物將經(jīng)由葉酸酯受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用有效轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中。已經(jīng)結(jié)合于寡核苷酸的其它配體包括聚乙二醇、碳水化合物簇、交聯(lián)劑、卟啉結(jié)合物、遞送肽及脂質(zhì)(諸如膽固醇)。在某些情形中，陽(yáng)離子配體結(jié)合于寡核苷酸引起對(duì)核酸酶抗性的改善。陽(yáng)離子配體的代表性實(shí)例是丙基銨和二甲基丙基銨。值得關(guān)注的是，據(jù)報(bào)導(dǎo)，當(dāng)該陽(yáng)離子配體分散于整個(gè)反義寡核苷酸時(shí)，該寡核苷酸能保持其與mRNA的高結(jié)合親和力。參見(jiàn)M.ManoharanAntisense&NucleicAcidDrugDevelopment2002,12,103及其中的參考文獻(xiàn)。[0054]生物遞送可以通過(guò)多種方法實(shí)現(xiàn)，包括但不限于，(I)向脂質(zhì)體裝載本文提供的dsRNA酸分子及(2)將dsRNA分子與脂質(zhì)或脂質(zhì)體絡(luò)合以形成核酸-脂質(zhì)或核酸_脂質(zhì)體絡(luò)合物。該脂質(zhì)體可以由常用于體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞的陽(yáng)離子和中性脂質(zhì)構(gòu)成。陽(yáng)離子脂質(zhì)可以與帶負(fù)電的核酸絡(luò)合(例如，電荷結(jié)合)以形成脂質(zhì)體。陽(yáng)離子脂質(zhì)體的實(shí)例包括但不限于，lipofectin、lipofectamine、Iipofectace及D0TAP。用于形成脂質(zhì)體的程序是本領(lǐng)域中眾所周知的。脂質(zhì)體組合物可以例如由磷脂酰膽堿、二肉豆蘧?；字Ｄ憠A、二棕櫚?；字Ｄ憠A、二肉豆蘧?；柞；视?、二油?；字Ｒ掖及坊虬渖窠?jīng)鞘磷脂(DHSM)的脂質(zhì)體形成。多種親脂性試劑是可商購(gòu)的，包括Lipofectin.RTM.(加利福尼亞州卡爾斯巴德(Carlsbad,Calif.)的Invitrogen/LifeTechnologies)和Effectene?(加利福尼亞州瓦倫西亞(Valencia，Calif.)的Qiagen)。此外，可以使用可商購(gòu)的陽(yáng)離子脂質(zhì)，諸如DDAB或D0TAP，對(duì)全身性遞送方法進(jìn)行優(yōu)化，這些脂質(zhì)各自可以與中性脂質(zhì)(諸如DOPE或膽固醇)混合。在一些情況下，可以使用諸如Templeton等,NatureBiotechnology,15:647-652(1997)所描述的脂質(zhì)體。在其它實(shí)施方案中，可以使用聚陽(yáng)離子(諸如聚乙烯亞胺)來(lái)實(shí)現(xiàn)體內(nèi)和離體遞送(Boletta等，J.AmSoc.Nephrol.7:1728,1996)。有關(guān)使用脂質(zhì)體遞送核酸的其它信息可見(jiàn)于美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6，271，359、PCT公布W096/40964及Morrissey,D.等，2005,NatureBiotechnol.23(8):1002-7中。[0055]在某些實(shí)施方案中，可以使用以Silwet?L-77表面活性劑商購(gòu)的有機(jī)硅酮制劑來(lái)制備多核苷酸組合物，該表面活性劑具有CAS編號(hào)27306-78-1和EPA編號(hào):CAL.REG.N0.5905-50073-AA,并且目前可從MomentivePerformanceMaterials(紐約州奧爾巴尼(Albany,NewYork))獲得。在使用SilwetL-77有機(jī)硅酮制劑作為植物葉或其它植物表面的噴藥前處理的某些實(shí)施方案中，新鮮制備的以重量計(jì)在約0.015到約2%(wt%)范圍內(nèi)(例如約0.01wt%、0.015wt%,0.02wt%,0.025wt%,0.03wt%,0.035wt%,0.04wt%,0.045wt%,0.05wt%,0.055wt%,0.06wt%,0.065wt%,0.07wt%,0.075wt%,0.08wt%、0.085wt%、0.09wt%、0.095wt%、0.1wt%、0.2wt%、0.3wt%、0.4wt%、0.5wt%、0.6wt%、0.7wt%、0.8wt%、0.9wt%、1.0wt%、1.1wt%、1.2wt%、1.3wt%、1.4wt%、1.5wt%、1.6wt%、1.7wt%、1.8wt%、1.9wt%、2.0wt%、2.1wt%、2.2wt%、2.3wt%、2.5wt%)的濃度可有效準(zhǔn)備葉或其它植物表面以便將多核苷酸分子通過(guò)局部施用于該表面轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中。在本文提供的方法和組合物的某些實(shí)施方案中，使用或提供的組合物包含多核苷酸分子以及包含以重量計(jì)在約0.015到約2%(wt%)范圍內(nèi)(例如約0.01wt%、0.015wt%,0.02wt%,0.025wt%,0.03wt%,0.035wt%,0.04wt%,0.045wt%,0.05wt%、0.055wt%、0.06wt%,0.065wt%,0.07wt%,0.075wt%,0.08wt%,0.085wt%,0.09wt%、0.095wt%>0.1wt%>0.2wt%>0.3wt%>0.4wt%>0.5wt%>0.6wt%>0.7wt%>0.8wt%>0.9wt%>1.0wt%>1.1wt%>1.2wt%>1.3wt%>1.4wt%>1.5wt%>1.6wt%>1.7wt%、1.8wt%>1.9wt%>2.0wt%>2.1wt%>2.2wt%>2.3wt%>2.5wt%)的SilwetL-77的有機(jī)娃酮制劑。[0056]在某些實(shí)施方案中，可以使用所提供的任何可商購(gòu)的有機(jī)硅酮制劑作為多核苷酸組合物中的轉(zhuǎn)移劑，諸如以下的fceakthruS32UBreakthruS200(目錄號(hào)67674-67-3)、Breakthru0E441(目錄號(hào)68937-55-3)JreakthruS278(目錄號(hào)27306-78-1)JreakthruS243、BreakthruS233(目錄號(hào)134180-76-0),都可從制造商EvonikGoldschmidt(德國(guó))獲得；Silwet?HS429、Silwet?HS312、Silwet?HS508、Silwet?HS604(紐約州奧爾巴尼的MomentivePerformanceMaterials)。在使用有機(jī)娃酮制劑作為植物葉或其它表面的噴藥前處理的某些實(shí)施方案中，新鮮制備的以重量計(jì)在約0.015到約2%(wt%)范圍內(nèi)(例如約0.01wt%、0.015wt%,0.02wt%,0.025wt%,0.03wt%,0.035wt%,0.04wt%,0.045wt%,0.05wt%,0.055wt%,0.06wt%,0.065wt%,0.07wt%,0.075wt%,0.08wt%、0.085wt%>0.09wt%>0.095wt%>0.1wt%>0.2wt%>0.3wt%>0.4wt%>0.5wt%>0.6wt%>0.7wt%>0.8wt%>0.9wt%>1.0wt%>1.1wt%>1.2wt%>1.3wt%>1.4wt%>1.5wt%、1.6wt%>1.7wt%>1.8wt%>1.9wt%>2.0wt%>2.1wt%>2.2wt%>2.3wt%>2.5wt%)的濃度可有效準(zhǔn)備葉或其它植物表面以便將多核苷酸分子通過(guò)局部施用于該表面上而轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中。在本文提供的方法和組合物的某些實(shí)施方案中，使用或提供的組合物包含多核苷酸分子以及以重量計(jì)在約0.015到約2%(wt%)范圍內(nèi)(例如約0.01wt%、0.015wt%,0.02wt%,0.025wt%,0.03wt%,0.035wt%,0.04wt%,0.045wt%,0.05wt%,0.055wt%,0.06wt%,0.065wt%,0.07wt%,0.075wt%,0.08wt%,0.085wt%,0.09wt%、0.095wt%>0.1wt%>0.2wt%>0.3wt%>0.4wt%>0.5wt%>0.6wt%>0.7wt%>0.8wt%>0.9wt%>1.0wt%>1.1wt%>1.2wt%>1.3wt%>1.4wt%>1.5wt%>1.6wt%>1.7wt%、1.8wt%>1.9wt%>2.0wt%>2.1wt%>2.2wt%>2.3wt%>2.5wt%)的有機(jī)娃酮制劑。[0057]本文提供的方法和組合物中所使用的有機(jī)硅酮制劑可以包含一種或多種有效有機(jī)硅酮化合物。如本文所使用，短語(yǔ)“有效有機(jī)硅酮化合物”是用于描述在使多核苷酸能夠進(jìn)入植物細(xì)胞中的有機(jī)硅酮制劑中所發(fā)現(xiàn)的任何有機(jī)硅酮化合物。在某些實(shí)施方案中，有效有機(jī)硅酮化合物可以使多核苷酸以允許多核苷酸介導(dǎo)的抑制植物細(xì)胞中靶基因表達(dá)的方式進(jìn)入植物細(xì)胞中。一般說(shuō)來(lái)，有效有機(jī)硅酮化合物包括但不限于，可以包含以下的化合物:i)共價(jià)連接的三硅氧烷頭基；ii)共價(jià)連接的烷基連接基，包括但不限于，正丙基連接基；iii)共價(jià)連接的聚二醇鏈；iv)端基。這些有效有機(jī)硅酮化合物的三硅氧烷頭基包括但不限于，七甲基三硅氧烷。烷基連接基可以包括但不限于，正丙基連接基。聚二醇鏈包括但不限于，聚乙二醇或聚丙二醇。聚二醇鏈可以包含一種提供平均鏈長(zhǎng)度“η”為約“7.5”的混合物。在某些實(shí)施方案中，平均鏈長(zhǎng)度“η”可以在約5到約14間變化。端基可以包括但不限于，烷基，諸如甲基。據(jù)信，有效有機(jī)硅酮化合物包括但不限于，三硅氧烷乙氧化物表面活性劑或聚環(huán)氧烷改性的七甲基三硅氧烷。[0058]【權(quán)利要求】1.一種植物控制方法，包括:用包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物處理植物，其中所述多核苷酸與DHPS基因序列或其片段，或與所述DHPS基因序列或其片段的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述DHPS基因序列選自SEQIDNO:1_54或其多核苷酸片段，由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，所述植物生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)DHPS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)移劑包含有機(jī)硅酮表面活性劑組合物或其中所含的化合物。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸片段為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQIDNO:1_54的DHPS基因序列至少85%同一。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述多核苷酸片段選自有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA雜交體。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述植物選自:長(zhǎng)芒莧、西部莧、綠穗莧、凹頭莧、皺果莧、三裂葉豚草、小蓬草、馬唐、白苞猩猩草、掃帚草、多花黑麥草。6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物另外包含所述DHPS抑制劑或有絲分裂抑制劑除草劑并且向植物外部施用所述組合物。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述組合物另外包含一種或多種與所述DHPS抑制劑或有絲分裂抑制劑除草劑不同的共除草劑。8.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述組合物包含所述多核苷酸片段中兩個(gè)或更多個(gè)的任何組合并且向植物外部施用所述組合物。9.一種包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中所述多核苷酸與DHPS基因序列,或與所述DHPS基因序列的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述DHPS基因序列選自SEQIDNO:1-54或其多核苷酸片段，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)DHPS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述轉(zhuǎn)移劑是有機(jī)硅酮組合物。11.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸片段為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQIDNO:1_54的DHPS基因序列至少85%同一。12.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸選自SEQIDNO:55-906013.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸選自SEQIDN0:907-1222。14.如權(quán)利要求9所述的組合物，另外包含DHPS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑。15.如權(quán)利要求14所述的組合物，其中所述DHPS抑制劑分子選自氨基甲酸酯類(lèi)和黃草靈。16.如權(quán)利要求14所述的組合物，其中所述有絲分裂抑制劑分子選自二硝基苯胺除草劑類(lèi)。17.如權(quán)利要求14所述的組合物，另外包含共除草劑。18.一種減少植物中DHPS基因的表達(dá)的方法，包括:向植物外部施用包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中所述多核苷酸與DHPS基因序列，或與所述DHPS基因序列的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述DHPS基因序列選自SEQIDNO:1_54或其多核苷酸片段，由此所述DHPS基因的所述表達(dá)相對(duì)于未施用所述組合物的植物有所減少。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)移劑包含有機(jī)硅酮化合物。20.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述多核苷酸片段為19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQIDNO:1_54的DHPS基因序列至少85%同一。21.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述多核苷酸分子選自有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA雜交體。22.—種微生物表達(dá)盒，包含長(zhǎng)度為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸并且與選自SEQIDNO:1_54的DHPS基因序列至少85%同一的多核苷酸片段。23.一種制備多核苷酸的方法，包括a)將如權(quán)利要求21所述的微生物表達(dá)盒轉(zhuǎn)化到微生物中山)使所述微生物生長(zhǎng)；c)從所述微生物收獲多核苷酸，其中所述多核苷酸為至少18個(gè)連續(xù)核苷酸、至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、至少20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQIDNO:1-54的DHPS基因序列至少85%同一。24.一種鑒別當(dāng)外部處理植物時(shí)可用于調(diào)節(jié)DHPS基因表達(dá)的多核苷酸的方法，包括:a)提供多種多核苷酸，所述多核苷酸包含與長(zhǎng)度為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸并且與選自SEQIDNO:1_54的DHPS基因序列至少85%同一的多核苷酸片段基本上同一或基本上互補(bǔ)的區(qū)域；b)用所述多核苷酸中的一種或多種和轉(zhuǎn)移劑外部處理所述植物；c)針對(duì)DHPS基因表達(dá)的調(diào)節(jié)對(duì)所述植物或提取物進(jìn)行分析，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)DHPS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述植物選自:長(zhǎng)芒莧、西部莧、綠穗莧、凹頭莧、皺果莧、三裂葉豚草、小蓬草、馬唐、白苞猩猩草、掃帚草、多花黑麥草。26.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述DHPS基因表達(dá)相對(duì)于未用所述多核苷酸片段和轉(zhuǎn)移劑處理的植物有所減少。27.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)移劑是有機(jī)硅酮化合物。28.—種包含多核苷酸與DHPS抑制劑或有絲分裂抑制劑除草劑和共除草劑的混合物的農(nóng)用化學(xué)組合物，其中所述多核苷酸與一部分DHPS基因序列，或與所述DHPS基因序列的一部分RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述DHPS基因序列選自SEQIDNO:1-54或其多核苷酸片段，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)DHPS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。29.如權(quán)利要求28所述的農(nóng)用化學(xué)組合物，其中所述共除草劑選自:酰胺除草劑類(lèi)、含砷除草劑類(lèi)、苯并噻唑除草劑類(lèi)、苯甲酰基環(huán)己二酮除草劑類(lèi)、烷基磺酸苯并呋喃基酯除草劑類(lèi)、環(huán)己烯肟除草劑類(lèi)、環(huán)丙基異噁唑除草劑類(lèi)、二甲酰亞胺除草劑類(lèi)、二硝基苯胺除草劑類(lèi)、二硝基苯酚除草劑類(lèi)、二苯基醚除草劑類(lèi)、二硫代氨基甲酸酯除草劑類(lèi)、甘氨酸除草劑類(lèi)、鹵代脂肪烴除草劑類(lèi)、咪唑啉酮除草劑類(lèi)、無(wú)機(jī)除草劑類(lèi)、腈除草劑類(lèi)、有機(jī)磷除草劑類(lèi)、噁二唑酮除草劑類(lèi)、噁唑除草劑類(lèi)、苯氧基除草劑類(lèi)、苯二胺除草劑類(lèi)、吡唑除草劑類(lèi)、噠嗪除草劑類(lèi)、噠嗪酮除草劑類(lèi)、吡啶除草劑類(lèi)、嘧啶二胺除草劑類(lèi)、嘧啶氧基苯甲胺除草劑類(lèi)、季銨除草劑類(lèi)、硫代氨基甲酸酯除草劑類(lèi)、硫代碳酸酯除草劑類(lèi)、硫脲除草劑類(lèi)、三嗪除草劑類(lèi)、三嗪酮除草劑類(lèi)、三唑除草劑類(lèi)、三唑酮除草劑類(lèi)、三唑并嘧啶除草劑類(lèi)、尿嘧啶除草劑類(lèi)及脲除草劑類(lèi)。30.一種包含多核苷酸與DHPS抑制劑除草劑和殺蟲(chóng)劑的混合物的農(nóng)用化學(xué)組合物，其中所述多核苷酸與一部分DHPS基因序列，或與所述DHPS基因序列的一部分RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述DHPS基因序列選自SEQIDNO:1_54或其多核苷酸片段，由此具有需要雜草和蟲(chóng)害控制的作物的田地用所述組合物進(jìn)行處理，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)DHPS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。31.如權(quán)利要求30所述的農(nóng)用化學(xué)組合物，其中所述殺蟲(chóng)劑選自:殺昆蟲(chóng)劑、殺真菌劑、殺線蟲(chóng)劑、殺細(xì)菌劑、殺螨劑、生長(zhǎng)調(diào)控劑、化學(xué)絕育劑、化學(xué)信息素、驅(qū)避劑、引誘劑、信息素、取食刺激劑及生物殺蟲(chóng)劑。32.—種包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中所述多核苷酸與DHPS基因序列，或與所述DHPS基因序列的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述多核苷酸選自SEQIDNO:1176和1186或其補(bǔ)體或多核苷酸片段，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)DHPS抑制劑除草劑或有絲分裂抑制劑除草劑更敏感。【文檔編號(hào)】C12N15/82GK103958539SQ201280055409【公開(kāi)日】2014年7月30日申請(qǐng)日期:2012年9月13日優(yōu)先權(quán)日:2011年9月13日【發(fā)明者】D·阿德,J·J·芬內(nèi)斯,李兆隆,R·H·沙,N·陶,C·M·泰勒,J·C·泰勒申請(qǐng)人:孟山都技術(shù)公司