包含20-碳脂肪酸的組合物及其制備和使用方法
【專利摘要】本公開內容提供了用于由植物種子油產生20-碳脂肪酸的方法，該方法包括：a)提供包含脂肪酸的植物種子油，其中該脂肪酸包括18-碳脂肪酸；和b)使該脂肪酸延長兩個碳原子，以產生包含20-碳脂肪酸的組合物。
【專利說明】包含20-碳脂肪酸的組合物及其制備和使用方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明總體涉及包含20-碳脂肪酸的組合物及其制造和使用方法。


【發(fā)明內容】

[0002] 本公開內容提供了用于由包含18-碳脂肪酸的油（例如植物種子油）產生包含 20-碳脂肪酸的組合物的方法。該方法一般涉及使兩種或更多種不同的18-碳脂肪酸延長 兩個碳原子，其中20-碳脂肪酸由18-碳脂肪酸產生。在一些實施例中，超過一種18-碳脂 肪酸在單個反應（例如單罐反應）中延長兩個碳原子。在一些實施例中，18-碳脂肪酸包含 十八碳四烯酸（"SDA"）、α亞麻酸（"ALA"）和γ亞麻酸（gamoleic acid)(也稱為γ 亞麻酸（gamma-linolenic acid)或GLA)。在一些實施例中，20-碳脂肪酸包含二十碳四烯 酸（"ETA"）、二十碳三烯酸（"ETE"）和二高-Y-亞麻酸（"DGLA"）。
[0003] 在多個實施例中，該方法包括步驟（a)提供包含18-碳脂肪酸和/或18-碳脂肪 酸甘油三酯的油（例如植物種子油例如黑醋栗油），（b)使18-碳脂肪酸酯和/或18-碳脂 肪酸甘油三酯皂化，以形成包含18-碳游離脂肪酸的組合物，（c)任選使18-碳脂肪酸中的 一種或多種濃縮，（d)延長18-碳游離脂肪酸，以產生包含20-碳脂肪酸的組合物，和（e)任 選使20-碳脂肪酸中的一種或多種濃縮，以產生包含20-碳脂肪酸的富集的組合物。
[0004] 在一些實施例中，包含18-碳游離脂肪酸的組合物通過包括至少一個結晶步驟的 方法在步驟（c)中濃縮。在一些實施例中，步驟（c)包括：（i)使用第一溶劑系統(tǒng)的第一結 晶步驟，和（ii)使用第二溶劑系統(tǒng)的第二結晶步驟。在一些實施例中，第一和第二溶劑系 統(tǒng)是相同的。在一些實施例中，第一和第二溶劑系統(tǒng)是不同的。在一些實施例中，第一溶劑 系統(tǒng)包含丙酮、水和非極性非質子溶劑例如庚烷。在一些實施例中，第二溶劑系統(tǒng)包含非 極性非質子溶劑例如庚烷。在一些實施例中，與在步驟（C)前的組合物相比較，在步驟（C) 后的組合物包含更多18-碳脂肪酸化合物。在一些實施例中，在步驟（c)后的組合物中的 18-碳脂肪酸量是在步驟（c)前的組合物中的18-碳脂肪酸量的約1. 1倍至約10倍。在一 些實施例中，該組合物包含約18% -約80%、例如約50%或更多量的18-碳脂肪酸。在一 些實施例中，組合物中的亞油酸量減少約25 %或更多，例如約50%。
[0005] 在一些實施例中，油中的脂肪酸包含Ω -3和Ω -6脂肪酸的混合物。
[0006] 在一些實施例中，油中的兩種或更多種18-碳脂肪酸和/或18-碳脂肪酸甘油三 酯同步延長。
[0007] 在一些實施例中，步驟（d)中的18-碳游離脂肪酸的延長通過下述發(fā)生： (i) 18-碳游離脂肪酸的酯化，以形成18-碳脂肪酸酯；（ii) 18-碳脂肪酸酯的還原，以形成 18-碳脂肪酸伯醇；（iii)在18-碳脂肪酸伯醇上的伯醇基序轉換為伯離去基團（例如甲磺 酸酯），以形成18-碳脂肪酸親電子試劑；（iv)所得的18-碳脂肪酸親電子試劑與親核試劑 例如去質子化丙二酸二甲酯（DMM:-)反應；和（v)如果親核試劑是DMM:-或相似的去質 子化二酯，則二酯水解以形成相應二酸，隨后脫羧以形成包含20-碳游離脂肪酸的組合物。 在一些實施例中，該組合物包含至少約35%、例如約50% 20-碳游離酸。
[0008] 在一些實施例中，18-碳脂肪酸和/或18-碳脂肪酸甘油三酯包含SDA、GLA和ALA 中的一種或多種。
[0009] 在一些實施例中，20-碳脂肪酸包含ETA、ETE和DGLA中的一種或多種。
[0010] 在一些實施例中，該方法還包括在脂肪酸延長兩個碳原子之前，從油中提取至少 一部分18-碳脂肪酸。在一些實施例中，提取步驟包括有機溶劑提取或C02超臨界流體提 ?。╟o2-sfe)。
[0011] 在一些實施例中，該方法還包括使20-碳脂肪酸純化或濃縮。在一些實施例中，使 20-碳脂肪酸純化的步驟包括尿素分餾、低溫結晶、色譜分離例如HPLC或蒸餾。
[0012] 在一些實施例中，至少一部分18-碳脂肪酸通過使18-碳脂肪酸與酶例如延長酶 接觸而延長兩個碳原子。
[0013] 在一些實施例中，至少一部分18-碳脂肪酸通過例如下述化學延長兩個碳原子： 使18-碳脂肪酸與還原劑接觸，使所得的伯醇溴化，使溴化物與C 2延長塊（elongation block)例如任選取代的噁唑啉偶聯，并且轉換延長的噁唑啉，以形成20-碳脂肪酸。
[0014] 在一些實施例中，使20-碳脂肪酸濃縮或純化，以產生具有至少30%、至少40%、 至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或超過90%純度的20-碳脂肪酸。
[0015] 在一些實施例中，純化的20-碳脂肪酸隨后與15-脂氧合酶接觸或暴露于15-脂 氧合酶。在一些實施例中，由與15-脂氧合酶接觸或暴露于15-脂氧合酶產生的脂肪酸是 15-HETrE和/或15-0H-ETA。在一個實施例中，通過與15-脂氧合酶接觸或暴露于15-脂 氧合酶產生的15-HETrE與15-0H-ETA的比為約10:1至約1:10或5:1至約1:5。
[0016] 在一些實施例中，包含18-碳脂肪酸和/或18-碳脂肪酸甘油三酯的油是選自 下述的植物種子油：藍薊種子油、黑醋栗種子油、琉璃苣種子油、月見草種子油、假鶴虱 (hackelia)種子油、毛束草種子油、擬紫草（buglossoides)種子油及其組合。
[0017] 在一些實施例中，該方法還包括使20-碳脂肪酸脫臭。在一些實施例中，脫臭包括 使20-碳脂肪酸與二氧化硅和炭的混合物混合，或使20-碳脂肪酸經過硅藻土濾器。
[0018] 在一些實施例中，該方法還包括酯化（例如使一種或多種18-碳脂肪酸或20-碳 脂肪酸與醇和酸接觸），以產生脂肪酸酯。在一個實施例中，由所述酯化的脂肪酸濃縮酯 化的20-碳脂肪酸。在其他實施例中，由所述酯化的脂肪酸濃縮DGLA酯、ETE酯、ETA酯、 15-HETrE 酯和 / 或 15-0H-ETA 酯。
[0019] 在一些實施例中，酯化的脂肪酸（例如DGLA、ETE、ETA、15-HETrE和15-0H-ETA酯） 選自烷基酯、雜烷基酯、芳基酯、雜芳基酯、甲酯、乙酯、丙酯、異丙酯、丁酯、異丁酯、叔丁酯 及其組合。
[0020] 在一些實施例中，產生的20-碳脂肪酸與起始18-碳脂肪酸的比保持與起始油中 所述比基本上相同。在其他實施例中，產生的20-碳脂肪酸與起始18-碳脂肪酸的比為約 1:10至約10:1、約1:5至約5:1、約1:2至約2:1或約1:1。在一個實施例中，DGLA:ETA的 比保持與起始油中GLA: SDA的比基本上相同。在一個實施例中，DGLA: ETE: ETA的比保持與 起始油中GLA: ALA: SDA的比基本上相同。在另一個實施例中，DGLA與ETE和ETA的總和的 比保持與起始油中GLA與ALA和SDA的總和的比基本上相同。在另一個實施例中，與起始 油中GLA與ALA和SDA的總和的比相比較，DGLA與ETE和ETA的總和的比增加。在另一個 實施例中，15-HETrE: 15-0H-ETA的比保持與起始油中GLA:SDA的比基本上相同。
[0021] 本公開內容還提供了包含通過本文公開的方法中的任一種產生的脂肪酸的組合 物。在一些實施例中，該組合物包含至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、 至少80%、至少90%、或超過90% DGLA。在一些實施例中，該組合物包含至少30%、至少 40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %、或超過90 % ETA。在一些實施 例中，該組合物包含至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少 90 %、或超過90 % ETE。在一些實施例中，該組合物包含至少30 %、至少40 %、至少50 %、至 少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或超過90% 15-HETrE。在一些實施例中，該組合 物包含至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %、或超過 90% 15-0H-ETA。
[0022] 在一個實施例中，本公開內容提供了通過下述用于產生包含DGLA和ETA的組合物 的方法：提供包含脂肪酸的植物種子油，其中該脂肪酸包括SDA和GLA ;從植物種子油中提 取SDA和GLA ;使SDA和GLA延長（在相同反應容器中同時、基本上同步或同步）兩個碳原 子，其中DGLA和ETA由SDA和GLA產生；并且使DGLA和/或ETA純化和/或濃縮。
[0023] 在另一個實施例中，本公開內容提供了通過下述用于產生包含DGLA、ETE和ETA的 組合物的方法：提供包含脂肪酸的植物種子油，其中該脂肪酸包括ALA、SDA和GLA ;從植物 種子油中提取ALA、SDA和GLA ;使ALA、SDA和GLA延長（在相同反應容器中同時、基本上同 步或同步）兩個碳原子，以分別產生ETE、ETA和DGLA ;并且使DGLA、ETA和/或ETA純化和 /或濃縮。
[0024] 在另一個實施例中，本公開內容提供了通過下述用于產生包含15-HETrE和 15-0H-ETA的組合物的方法：提供包含脂肪酸的植物種子油，其中該脂肪酸包括SDA和GLA ; 從植物種子油中提取SDA和GLA ;使SDA和GLA延長（在相同反應容器中同時、基本上同步 或同步）兩個碳原子，其中DGLA和ETA由SDA和GLA產生；使DGLA和ETA與15-脂氧合酶 接觸或暴露于15-脂氧合酶，以形成15-HETrE和/或15-0H-ETA，并且使15-HETrE和/或 15-0H-ETA純化/濃縮。
[0025] 本公開內容還提供了通過所述方法產生的化合物、組合物和藥物組合物。在一些 實施例中，該組合物包含至少50重量％的DGLA、ETE、ETA或其組合。在一些實施例中，該組 合物包含約1:8至約8:1、例如約1:1的DGLA與ETA的比。在一些實施例中，該組合物包含 約1:8至約8:1、例如約1:1的DGLA與ETE和ETA的總和的比。在一些實施例中，該組合物 包含至少50重量％的15-HETrE、15-0H-ETA或其組合。在一些實施例中，該組合物包含約 1:8 至約 8:1、例如約 1:1 的 15-HETrE 與 15-0H-ETA 的比。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1描述了用于由包含18-碳脂肪酸和/或18-碳脂肪酸甘油三酯的油產生 20-碳脂肪酸的方法的一個實施例的流程圖。

【具體實施方式】
[0027] 雖然本公開內容能夠以多種形式體現，但在下述理解的情況下而作出幾個實施例 的下文描述：本公開內容應視為公開內容的例證，并且不預期使公開內容限制于舉例說明 的具體實施例。標題僅為了方便起見而提供，并且不應解釋為以任何方式限制公開內容。在 任何標題下舉例說明的實施例可與在任何其他標題下舉例說明的實施例組合。
[0028] 除非另有明確說明，否則在本專利申請中指定的多個定量值的數值的使用陳述為 近似值，如同在所述范圍內的最小值和最大值兩者前面有單詞"約"一樣。另外，范圍的公 開內容預期作為連續(xù)范圍，包括在所述的最小值和最大值之間的每一個值以及可由此類值 形成的任何范圍。本文還公開的是可通過公開的數值除以任何其他公開的數值形成的任何 和所有比（和任何此類比的范圍）。相應地，技術人員應當理解許多此類比、范圍和比的范 圍可明確源自本文呈現的數值，并且在所有情況下，此類比、范圍和比的范圍代表本公開內 容的多個實施例。
[0029] 二高-亞麻酸也稱為順式-8, 11，14-二十碳三烯酸或C20:3c〇6("DGLA"）是γ 亞麻酸（gamma-1 inolenic acid)也稱為 γ 亞麻酸（gamoleic acid)或 C18:3c〇6("GLA"） 的延長產物。GLA是來自多種植物例如藍薊、黑醋栗、琉璃苣、月見草、假鶴虱、毛束草和擬紫 草（僅舉幾例）的天然油的組分。如本文使用的，術語"GLA"指GLA甘油三酯、游離酸（例 如順式-6, 9, 12-十八碳三烯酸）和/或其藥學可接受的酯、衍生物、綴合物或鹽，或前述任 何的混合物。在一些實施例中，GLA以(；_ 4烷基酯的形式例如甲酯或乙酯形式。如本文使用 的，術語"DGLA"指DGLA游離酸（例如順式-8, 11，14-二十碳三烯酸）和/或其藥學可接 受的酯、衍生物、綴合物或鹽，或前述任何的混合物。在一些實施例中，DGLA以(V 4烷基酯的 形式例如甲酯或乙酯形式。
[0030] 十八碳四烯酸也稱為全順式-6,9，12，15_十八碳四烯酸或(：18:4(〇3("504")。如 本文使用的，術語"SDA"指SDA甘油三酯、游離酸和/或其藥學可接受的酯、衍生物、綴合物 或鹽，或前述任何的混合物。在一些實施例中，SDA以（V 4烷基酯的形式例如甲酯或乙酯形 式。
[0031] 15-羥基二十碳-8⑵，11⑵，13 (E)-三烯酸（" 15-HETrE"）是DGLA的衍生 物。如本文使用的，術語"15-HETrE"指以其游離酸形式的15-HETrE(例如15-羥基二十 碳-8 (Z)，11 (Z)，13 (E)-三烯酸）和/或其藥學可接受的酯、衍生物、綴合物或鹽，或前述任 何的混合物。
[0032] 二十碳四烯酸（"ETA"）也稱為全順式-8, 11，14, 17-二十碳四烯酸或20:4ω3， 是十八碳四烯酸的延長產物。如本文使用的，術語"ETA"指ETA游離酸和/或其藥學可接 受的酯、衍生物、綴合物或鹽，或前述任何的混合物。在一些實施例中，ETA以Ch烷基酯的 形式例如甲酯或乙酯形式。
[0033] 15-羥基二十碳四烯酸（15-羥基-5, 8, 11，13-二十碳四烯酸在本文中稱為 " 15-0H-ETA"）是ETA的衍生物。如本文使用的，術語" 15-0H-ETA"指15-0H-ETA游離酸 和/或其藥學可接受的酯、衍生物、綴合物或鹽，或前述任何的混合物。在一些實施例中， 15-0H-ETA以（；_ 4烷基酯的形式例如甲酯或乙酯形式。
[0034] α亞麻酸也稱為全順式-9, 12, 15-十八碳三烯酸或18:3 ω 3 ("ALA")。如本文使 用的，術語"ALA"指ALA甘油三酯、游離酸和/或其藥學可接受的酯、衍生物、綴合物或鹽， 或前述任何的混合物。在一些實施例中，ALA以(；_ 4烷基酯的形式例如甲酯或乙酯形式。
[0035] 二十碳三烯酸（"ETE"）也稱為全順式-11，14, 17-二十碳三烯酸或20:3 ω 3,是 ALA的延長產物。如本文使用的，術語"ΕΤΕ"指ΕΤΕ游離酸和/或其藥學可接受的酯、衍生 物、綴合物或鹽，或前述任何的混合物。在一些實施例中，ETE以(^ 4烷基酯的形式例如甲酯 或乙酯形式。
[0036] 如本文使用的，術語"DGLA衍生物"和"DGLA的衍生物"指由DGLA的化學轉換形成 的化合物，包括但不限于15-HETrE及其酯、衍生物、綴合物或鹽，或前述任何的混合物。本 領域技術人員根據化學結構及其他性質將容易識別給定化合物是否是DGLA衍生物。
[0037] 本文公開的任何組合物的脂肪酸含量均可通過本領域已知的任何合適方法進行 測定。例如且非限制性地，本文公開的組合物的脂肪酸含量可通過氣相色譜法進行測定。 在一個實施例中，用于測定組合物的脂肪酸含量的方法包括將組合物的樣品（例如1 μ L丸 齊U)注射到氣相色譜系統(tǒng)內，所述氣相色譜系統(tǒng)配備置于室/烘箱內具有〇. 5_膜厚度的 DB-FFAP30mx250 μ m柱，設為300°C的FID檢測器，具有約1. OmL/分鐘流速的惰性載氣（例 如氦）。柱的溫度可維持在環(huán)境溫度下，或可隨著時間過去從例如約180°C的初始溫度增加 到（例如"傾斜上升（ramped)"）例如約250°C的最終更高溫度，經過幾分鐘的過程（例如 經過7分鐘70°C的傾斜上升，或約10°C /分鐘）。然而，本領域技術人員將認識到其他GC 柱和條件可容易取代本文公開的示例性條件。
[0038] 在一個實施例中，DGLA、ETE、ETA、15-0H-ETA和/或15-HETrE在用于如本文 公開的方法或組合物前進行脫臭。在一個實施例中，使含有（l)DGLA和ETA的油或含有 (2) 15-HETrE和15-0H-ETA的油或含有（3)DGLA、ETE和ETA的油與二氧化硅和炭混合。在 一個實施例中，二氧化硅和炭以約1:1至約50:1的比，例如約1:1、約2:1、約3:1、約4:1、 約 5:1、約 6:1、約 7:1、約 8:1、約 9:1、約 10:1、約 12:1、約 14:1、約 15:1、約 16:1、約 18:1、 約20:1、約25:1、約30:1、約35:1、約40:1、約45:1、或約50:1。在一個實施例中，DGLA(或 15-0H-ETA或15-HETrE)與二氧化硅/炭的比為約1:1至約50:1，例如約1:1、約2:1、約 3:1、約 4:1、約 5:1、約 6:1、約 7:1、約 8:1、約 9:1、約 10:1、約 12:1、約 14:1、約 15:1、約 16:1、約 18:1、約 20:1、約 25:1、約 30:1、約 35:1、約 40:1、約 45:1、或約 50:1。在一個實施 例中，粗制DGLA、15-0H-ETA和/或15-HETrE已通過在硅藻土濾器上過濾進行脫臭。在另 一個實施例中，卵磷脂用于脂肪酸的脫臭中。
[0039] 18-碳脂肪酸的延長
[0040] 在一些實施例中，至少一部分18-碳脂肪酸通過使18-碳脂肪酸與酶例如延長酶 接觸而延長兩個碳原子。
[0041] 在一些實施例中，至少一部分18-碳脂肪酸通過例如下述化學延長兩個碳原子： 使18-碳脂肪酸與還原劑接觸，以形成伯醇，使所得的伯醇溴化，使溴化物與C 2延長塊例如 任選取代的噁唑啉偶聯，并且轉換延長的噁唑啉，以形成20-碳脂肪酸。
[0042] 在一個此類實施例中，18-碳脂肪酸首先用氫化鋁鋰處理，以形成相應的18-碳伯 醇。18-碳伯醇隨后用二溴三苯基膦（Ph 3PBr2)處理。所得的溴化物隨后通過用2, 4, 4-三 甲基-2-噁唑啉和正丁基鋰的混合物處理進行延長，以形成受二甲基噁唑啉保護的20-碳 脂肪酸。用鹽酸處理獲得20-碳脂肪酸甲酯。相應的20-碳脂肪酸可通過常規(guī)水解方法例 如通過用Κ0Η處理隨后為酸性反應（work-up)而形成。
[0043] 在一些實施例中，至少一部分18-碳脂肪酸通過例如下述化學延長兩個碳原子： 使18-碳脂肪酸轉換為其相應的18-碳脂肪酸酯，使18-碳脂肪酸酯與還原劑接觸，以形成 伯醇，使所得的伯醇甲磺?；?，以形成甲磺酸酯，使甲磺酸酯與C 2延長塊例如丙二酸二烷基 酯偶聯，以形成20-碳α取代的脂肪酸衍生物，使20-碳α取代的脂肪酸衍生物水解，以形 成20-碳α羧化脂肪酸衍生物，并且使20-碳α取代的脂肪酸衍生物脫羧，以形成20-碳 脂肪酸。
[0044] 在一個此類實施例中，使18-碳游離脂肪酸酯化，以形成18-碳脂肪酸酯例如甲 酯。該酯用氫化鋁鋰處理，以形成18-碳伯醇，其隨后用甲磺酰氯（甲磺酰氯）處理，以形 成18-碳伯甲磺酸酯。18-碳伯甲磺酸酯隨后用含有去質子化丙二酸二甲酯的溶液處理，以 形成20-碳二酯。使20-碳二酯水解且隨后脫羧，以形成20-碳游離脂肪酸。
[0045] 18-碳脂肪酸的富集
[0046] 在一些實施例中，使包含18-碳脂肪酸的油（例如植物種子油）這樣富集，使得富 集的油含有比執(zhí)行富集方法前相對更多的18-碳脂肪酸。隨后延長富集的油中的18-碳脂 肪酸，以形成20-碳脂肪酸。在一個此類實施例中，用于富集油的方法包括從油中分離具有 多于或少于18碳的至少一部分脂肪酸（例如棕櫚酸）。在一個實施例中，與富集前在油中 的GLA和/或SDA量相比較，富集增加油中GLA和/或SDA的相對量（與油中存在的所有 脂肪酸相比較）。
[0047] 在一個實施例中，包含18-碳脂肪酸的油通過這樣的方法進行富集，所述方法包 括選擇性結晶除GLA和SDA外的至少一部分脂肪酸，并且從油中分離結晶的脂肪酸，以形 成第一富集的油。在一些實施例中，該方法包括使油與溶劑系統(tǒng)接觸，所述溶劑系統(tǒng)包含 丙酮和任選的水。在一些實施例中，溶劑系統(tǒng)包含以下述體積比的丙酮和水：約99. 9:0. 1 至約 90:10,例如約 99. 9:0. 1、約 99. 8:0. 2、約 99. 7:0. 3、約 99. 6:0. 4、約 99. 5:0. 5、 約 99. 4:0. 6、約 99. 3:0. 7、約 99. 2:0. 8、約 99. 1:0. 9、約 99:1、約 98. 5:1. 5、約 98:2、約 97. 5:2. 5、約 97:3、約 96. 5:3. 5、約 96:4、約 95. 5:4. 5、約 95:5、約 94. 5:5. 5、約 94:6、約 93. 5:6. 5、約 93:7、約 92. 5:7. 5、約 92:8、約 91. 5:8. 5、約 91:9、約 90. 5:9. 5、或約 90:10。 在一些實施例中，溶劑系統(tǒng)包含以下述體積比的丙酮、水和非極性非質子溶劑例如庚烷：約 92:4:4 至約 99:0. 5:0. 5,例如約 92:4:4、約 94:3:3、約 96:2:2、約 98:1:1、約 98. 5:1:0. 5、 或約 99:0. 5:0. 5。
[0048] 在一個實施例中，使油與溶劑系統(tǒng)以下述油：溶劑系統(tǒng)體積比接觸：約1:99至約 50:50,例如約 1:99、約 2:98、約 3:97、約 4:96、約 5:95、約 6:94、約 7:93、約 8:92、約 9:91、 約 10:90、約 15:85、約 20:80、約 25:75、約 30:70、約 35:65、約 40:60、約 45:55 或約 50:50。 [0049] 在油與第一溶劑系統(tǒng)接觸后，允許混合物靜置足夠時間以允許結晶發(fā)生。任選地， 使混合物冷卻至-78°C至約10°C的溫度，例如約-78°C、約-65°C、約-60°C、約-55°C、 約-50°C、約 _45°C、約 _40°C、約 _35°C、約 _30°C、約 _25°C、約 _20°C、約 _15°C、 約-10°C、約-5°C、約0°C、約4°C、約5或約10°C。晶體通過本領域技術人員已知的任何 合適方法（例如過濾、冷過濾等）與富集的油分離。
[0050] 在一些實施例中，該方法包括用第二溶劑系統(tǒng)處理油或第一富集的油，以產生第 二富集的油。在一些實施例中，第二溶劑系統(tǒng)包含非極性非質子溶劑例如庚烷。在一些實 施例中，使油或第一富集的油與溶劑系統(tǒng)以下述油：溶劑系統(tǒng)體積比接觸：約1:99至約 50:50,例如約 1:99、約 2:98、約 3:97、約 4:96、約 5:95、約 6:94、約 7:93、約 8:92、約 9:91、 約 10:90、約 15:85、約 20:80、約 25:75、約 30:70、約 35:65、約 40:60、約 45:55 或約 50:50。
[0051] 在油或第一富集的油與第二溶劑系統(tǒng)接觸后，允許混合物靜置足夠時間以允許 結晶發(fā)生。任選地，使混合物冷卻至_78°C至約10°C的溫度，例如約_78°C、約_65°C、 約-60°C、約-55°C、約-50°C、約-45°C、約-40°C、約-35°C、約-30°C、約-25°C、 約-20°C、約-15°C、約-KTC、約-5°C、約0°C、約4°C、約5或約10°C。晶體通過本領域 技術人員已知的任何合適方法（例如過濾、冷過濾等）與第二富集的油分離。
[0052] 在一個實施例中，油通過包括下述的方法富集18-碳脂肪酸化合物：
[0053] ⑴使油與包含丙酮、水和庚烷的第一溶劑系統(tǒng)以約98. 5:1:0. 5的體積比接觸， 其中油與溶劑系統(tǒng)的體積比為約10:90 ;
[0054] (ii)使所得的混合物冷卻至約_60°C的溫度；
[0055] (iii)使所得的冷卻的混合物冷過濾，以產生第一富集的油，所述第一富集的油具 有比油相對更多的GLA和SDA ;
[0056] (iv)使第一富集的油與包含非極性非質子溶劑例如庚烷的第二溶劑系統(tǒng)接觸，其 中第一富集的油：溶劑系統(tǒng)的體積比為約10:90 ;
[0057] (v)使所得的混合物冷卻至約_60°C的溫度；和
[0058] (vi)使所得的冷卻的混合物冷過濾，以產生第二富集的油，其中該第二富集的油 中存在的GLA和SDA的量（相對于組合物中的所有脂肪酸）大于相應的第一富集的油和油 中。
[0059] 在一些實施例中，GLA的相對量增加約3 %至約500 %，例如約3 %、約4%、約5 %、 約 6%、約 7%、約 8%、約 9%、約 10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約 35%、約 40%、 約 45 %、約 50 %、約 55 %、約 60 %、約 65 %、約 70 %、約 75 %、約 80 %、約 85 %、約 90 %、 約 95%、約 100%、約 105%、約 110%、約 115%、約 120%、約 125%、約 150%、約 175%、約 200%、約 225%、約 250%、約 275%、約 300%、約 325%、約 350%、約 375%、約 400%、約 425%、約 450%、約 475%或約 500%。
[0060] 在一些實施例中，與富集的油中存在的所有脂肪酸相比較，富集的油包含至少約 15% GLA，例如富集的油中存在的所有脂肪酸的至少約15%、至少約16%、至少約17%、至 少約18%、至少約19%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、 至少約45 %、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約 75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、或超過約95%。
[0061] 在一些實施例中，SDA的相對量增加約3 %至約500 %，例如約3 %、約4 %、約5 %、 約 6%、約 7%、約 8%、約 9%、約 10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約 35%、約 40%、 約 45 %、約 50 %、約 55 %、約 60 %、約 65 %、約 70 %、約 75 %、約 80 %、約 85 %、約 90 %、 約 95%、約 100%、約 105%、約 110%、約 115%、約 120%、約 125%、約 150%、約 175%、約 200%、約 225%、約 250%、約 275%、約 300%、約 325%、約 350%、約 375%、約 400%、約 425%、約 450%、約 475%或約 500%。
[0062] 在一些實施例中，與富集的油中存在的所有脂肪酸相比較，富集的油包含至少約 2% SDA，例如富集的油中存在的所有脂肪酸的至少約2%、至少約3%、至少約4%、至少 約5 %、至少約6 %、至少約7 %、至少約8 %、至少約9 %、至少約10 %、至少約11 %、至少約 12 %、至少約13 %、至少約14 %、至少約15 %、至少約16 %、至少約17 %、至少約18 %、至少 約19 %、至少約20 %、至少約21 %、至少約22 %、至少約23 %、至少約24%、至少約25 %、或 超過約25%。
[0063] 在一些實施例中，富集的油中GLA與SDA的比（GLA:SDA)小于、約等于或大于執(zhí)行 富集前油中GLA與SDA的比。在一些實施例中，富集的油具有下述GLA:SDA比：約1:1至約 20:1，例如約 1:1、約 2:1、約 3:1、約 4:1、約 5:1、約 6:1、約 7:1、約 8:1、約 9:1、約 10:1、約 11:1、約 12:1、約 13:1、約 14:1、約 15:1、約 16:1、約 17:1、約 18:1、約 19:1 或約 20:1。 [0064] 20-碳脂肪酸的富集
[0065] 在一些實施例中，對包含18-碳脂肪酸的油（例如植物種子油）實施延長方法，并 且隨后使所得的包含20-碳脂肪酸的組合物這樣富集，使得富集的組合物含有比執(zhí)行富集 方法前相對更多的20-碳脂肪酸。無論包含18-碳脂肪酸和/或18-碳脂肪酸甘油三酯的 油是否如先前描述的富集，20-碳脂肪酸組合物的富集均可發(fā)生。
[0066] 在一個實施例中，通過從油中分離具有多于或少于20碳的至少一部分脂肪酸（例 如GLA和/或SDA)，來富集包含20-碳脂肪酸的組合物。在一個實施例中，與富集前在組合 物中的DGLA和/或ETA量相比較，富集增加油中DGLA和/或ETA的相對量（與組合物中 存在的所有脂肪酸相比較）。
[0067] 在一個實施例中，根據包括下述的方法富集包含20-碳脂肪酸的組合物：使組合 物與包含非極性非質子溶劑例如庚烷的溶劑系統(tǒng)接觸，使所得的混合物冷卻至約_78°C至 約l〇°C的溫度共允許晶體形成的足夠時間，并且通過任何合適方法包括例如冷過濾，從包 含20-碳脂肪酸的富集的組合物中分離晶體。
[0068] 在一些實施例中，對富集的20-碳脂肪酸組合物實施進一步的純化。在一個實施 例中，進一步純化包括色譜分離（例如正相色譜法，其使用硅膠和以98:2:1環(huán)己烷：乙醚： 乙酸開始的溶劑系統(tǒng)，并且緩慢增加溶劑系統(tǒng)中的醚量，直至一種或多種20-碳脂肪酸洗 脫時）。在另一個實施例中，進一步純化包括使富集的20-碳脂肪酸組合物與包含非極性 非質子溶劑例如庚烷的第二溶劑系統(tǒng)接觸，使所得的混合物冷卻至約-78°C至約10°C的溫 度，并且通過任何合適方法包括例如冷過濾，從包含20-碳脂肪酸的富集的組合物中分離 晶體。
[0069] 在一個實施例中，富集的20-碳脂肪酸組合物具有的20-碳Ω-6脂肪酸與20-碳 Ω-3脂肪酸的比大于起始油中18-碳Ω-6脂肪酸與18-碳Ω-3脂肪酸的比。在一個實 施例中，包含20-碳脂肪酸的組合物具有下述Ω-6脂肪酸與Ω-3脂肪酸的比：約1:1至約 10:1,例如約 1:1、約 1. 5:1、約 2:1、約 2. 5:1、約 3:1、約 3. 5:1、約 4:1、約 4. 5:1、約 5:1、約 5. 5:1、約 6:1、約 6. 5:1、約 7:1、約 7. 5:1、約 8:1、約 8. 5:1、約 9:1、約 9. 5:1 或約 10:1。在 一個實施例中，組合物中的Ω-6脂肪酸與Ω-3脂肪酸的比為約5:1。
[0070] 相應地，在由圖1示意性表示的一個實施例中，含有GLA和SDA(例如按重量計 18. 1%)的油通過下述冬化方法進行富集：使油與約9質量當量的溶劑系統(tǒng)接觸，所述溶劑 系統(tǒng)由丙酮與1%的添加水和〇. 5%的添加庚烷組成，并且使混合物冷卻至-60°C。所得的 富集油還通過下述在冬化步驟中富集：使富集的油與庚烷接觸，冷卻至-60°C，并且收集兩 次富集的油。在圖1的右手途徑中所示的一個實施例中，兩次富集的油通過制備型HPLC進 行純化，以提供包含GLA和SDA的純化組合物。隨后使該材料酯化以形成甲酯，還原以形成 伯醇，甲磺?；孕纬刹谆撬狨?，通過添加丙二酸二酯延長，水解以形成相應二酸，并且 脫羧以形成包含DGLA和ETA的組合物（約70 %脂肪酸）。
[0071] 在圖1的左手途徑中所示的可替代實施例中，使兩次富集的油酯化、還原、甲磺酰 化、延長、水解且脫羧，以產生包含DGLA和ETA的組合物（約70%脂肪酸）。該組合物隨后 通過制備型HPLC進行純化，以產生包含DGLA和SDA的純化組合物。
[0072] 藥物組合物
[0073] 在多個實施例中，本發(fā)明提供了包含DGLA、ETE、ETA、15-0H-ETA、15-HETrE或其混 合物的藥物組合物，例如可經口遞送的組合物。在一個實施例中，該組合物包含治療有效量 的DGLA、ETE、ETA、15-0H-ETA、15-HETrE或其組合。在一個實施例中，藥物組合物包含按重 量計約0.1%至約99%、約1%至約95%、約5%至約90%的DGLA、ETE、ETA、15-0H-ETA、 15-HETrE或其組合。
[0074] 在一個實施例中，藥物組合物包含按重量計約至少約70%、至少約80%或至少約 90 %的DGLA、ETE、ETA、15-0H-ETA、15-HETrE或其組合。在一個實施例中，藥物組合物包含 按重量計至少約50 %、至少約60 %、至少約70 %、至少約80 %或至少約90 %的DGLA和ETA。 在另一個實施例中，藥物組合物包含按重量計至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少 約80 %或至少約90 %的DGLA、ETE和ETA。在一個實施例中，藥物組合物包含按重量計至少 約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%或至少約90%的15-0H-ETA和15-HETrE。
[0075] 在一個實施例中，藥物組合物還包含另外的活性劑。在一個實施例中，藥物組合物 包含的另外活性劑的量小于一般公認的該試劑的治療有效量。在一個實施例中，藥物組合 物包含的另外活性劑的量等于或大于一般公認的該試劑的治療有效量。
[0076] 依照公開內容使用的組合物可配制為一種或多種劑量單位。術語"劑量單位"和 "單元劑量"在本文中指藥物組合物的一部分，其含有適合于單次施用以提供療效的治療試 劑的量。此類單元劑量可每天施用一次到多（即1至約10、1至8、1至6、1至4或1至2) 次，或根據需要的多次，以引發(fā)治療應答。
[0077] 在一些實施例中，本發(fā)明的組合物以可經口遞送的劑型或單元劑量的形式。合適 劑型的非限制性例子包括片劑（例如懸浮片劑、咀嚼懸浮片劑、快速分散片劑、嚼用片等）、 囊片、膠囊（例如軟或硬明膠膠囊或者HPMC膠囊）、錠劑、囊劑、扁囊劑、含片、微丸、懸浮液、 酏劑、糖漿劑或合理地適于經口施用的任何其他固體劑型。
[0078] 作為另外一種選擇，本發(fā)明的組合物還可配制用于直腸、局部或腸胃外（例如皮 下、肌內、靜脈內和真皮內或輸注）遞送。
[0079] 在另一個實施例中，本發(fā)明的組合物包含一種或多種藥學可接受的賦形劑。術語 "藥學可接受的賦形劑"在本文中意指自身不是治療試劑的任何物質，其用作載體或媒介物 用于將治療試劑遞送至受試者，或者加入藥物組合物中以改善其處理或貯存特性，或者允 許或促進單位劑量的組合物的形成，并且不產生無法接受的毒性或與組合物中的其他組分 的相互作用。僅作為例子，根據本公開內容的藥物組合物可包含下述中的一種或多種：抗氧 化齊?、表面活性劑、防腐劑、調味劑、共溶劑、粘度助劑、懸浮助劑和親脂相。
[0080] 在一個實施例中，藥物組合物包含一種或多種抗氧化劑例如抗壞血酸、棕櫚酸、抗 壞血酸棕櫚酸酯、α生育酚、艾地苯醌、泛醌、阿魏酸、輔酶Q10、番茄紅素、綠茶、兒茶素、沒 食子兒茶素-3-沒食子酸酯（EGCG)、綠茶多酚（GTP)、水飛薊素、咖啡豆、白藜蘆醇、葡萄籽、 石槽提取物、染料木黃酮（genisten)、碧蘿]Ε、煙酰胺等等。在一個實施例中，藥物組合物包 含約0. 01重量％至約2重量％的抗氧化劑，例如約0. 01重量％、約0. 02重量％、約0. 03 重量％、約0. 04重量％、約0. 05重量％、約0. 06重量％、約0. 07重量％、約0. 08重量％、 約0.09重量％、約0. 1重量％、約0. 11重量％、約0. 12重量％、約0. 13重量％、約0. 14重 量％、約0. 15重量％、約0. 16重量％、約0. 17重量％、約0. 18重量％、約0. 19重量％、約 0. 2重量％、約0. 21重量％、約0. 22重量％、約0. 23重量％、約0. 24重量％、約0. 25重 量％、約0. 26重量％、約0. 27重量％、約0. 28重量％、約0. 29重量％、約0. 3重量％、約 0. 31重量％、約0. 32重量％、約0. 33重量％、約0. 34重量％、約0. 35重量％、約0. 36重 量％、約0. 37重量％、約0. 38重量％、約0. 39重量％、約0. 4重量％、約0. 41重量％、約 0. 42重量％、約0. 43重量％、約0. 44重量％、約0. 45重量％、約0. 46重量％、約0. 47重 量％、約0. 48重量％、約0. 49重量％、約0. 5重量％、約0. 51重量％、約0. 52重量％、約 0. 53重量％、約0. 54重量％、約0. 55重量％、約0. 56重量％、約0. 57重量％、約0. 58重 量％、約0. 59重量％、約0. 6重量％、約0. 61重量％、約0. 62重量％、約0. 63重量％、約 0. 64重量％、約0. 65重量％、約0. 66重量％、約0. 67重量％、約0. 68重量％、約0. 69重 量％、約0. 7重量％、約0. 71重量％、約0. 72重量％、約0. 73重量％、約0. 74重量％、約 0. 75重量％、約0. 76重量％、約0. 77重量％、約0. 78重量％、約0. 79重量％、約0. 8重 量％、約0. 81重量％、約0. 82重量％、約0. 83重量％、約0. 84重量％、約0. 85重量％、約 0. 86重量％、約0. 87重量％、約0. 88重量％、約0. 89重量％、約0. 9重量％、約0. 91重 量％、約0. 92重量％、約0. 93重量％、約0. 94重量％、約0. 95重量％、約0. 96重量％、約 0. 97重量％、約0. 98重量％、約0. 99重量％、約1重量％、約1. 1重量％、約1. 2重量％、約 1. 3重量％、約1. 4重量％、約1. 5重量％、約1. 6重量％、約1. 7重量％、約1. 8重量％、約 1. 9重量％、或約2重量％的一種或多種抗氧化劑。
[0081] 本文公開的組合物和制劑可用于治療疾病和/或障礙，包括但不限于炎性疾病、 心血管疾病、呼吸性疾病、神經學疾病、癌癥、精神病和皮膚疾病。在一個實施例中，該方法 包括每天一次、每天兩次、每天三次或每天超過三次給受試者施用如本文公開的藥物組合 物。
[0082] 如本文使用的，"治療"疾病、障礙或病癥包括至少部分：（1)預防該疾病、障礙或病 癥，即引起該疾病、障礙或病癥的臨床癥狀在哺乳動物中不發(fā)展，所述哺乳動物暴露于或傾 向于該疾病、障礙或病癥，但仍未經歷或展示該疾病、障礙或病癥的癥狀；(2)抑制該疾病、 障礙或病癥，即阻止或減少該疾病、障礙或病癥或其臨床癥狀的發(fā)展；或（3)緩解該疾病、 障礙或病癥，即引起該疾病、障礙或病癥或其臨床癥狀的消退。與給定疾病或障礙相關的術 語"預防"意指：如果未發(fā)生，則預防疾病發(fā)展的開始，預防疾病或障礙在受試者中的發(fā)生， 所述受試者可能傾向于該障礙或疾病，但仍未診斷為具有該障礙或疾病，和/或如果已存 在，則預防進一步的疾病/障礙發(fā)展。
[0083] 如本文使用的，"有效量"指對受試者賦予療效所需的活性組合物的量。如本文使 用的，"治療有效量"指待施用的試劑或化合物的足夠量，其在一定程度上緩解待治療的疾 病、障礙或病癥的一種或多種癥狀。在一些實施例中，結果是疾病的體征、癥狀或原因的減 少和/或緩和，或生物系統(tǒng)的任何其他所需改變。例如，在一些實施例中，用于治療用途的 "有效量"是包括如本文公開的化合物的組合物的量，所述量是提供疾病癥狀中的臨床顯著 降低所需的，而無不適當的不利副作用。在一些實施例中，在任何個別情況下的適當的"有 效量"使用技術例如劑量遞增研究進行測定。術語"治療有效量"包括例如預防有效量。在 其他實施例中，本文公開的化合物例如式（A)或式（I)的化合物的"有效量"是有效實現所 需藥理學效應或治療改善的量，而無不適當的不利副作用。在其他實施例中，應當理解由于 受試者的新陳代謝、年齡、重量、一般狀況中的變化，待治療的病癥，待治療病癥的嚴重性， 和開處方醫(yī)生的判斷，"有效量"或"治療有效量"從受試者到受試者不等。在本文上下文中 的術語"藥學可接受的"意指所討論的物質對受試者不產生無法接受的毒性或與組合物的 其他組分的相互作用。
[0084] 無需進一步描述，認為使用先前描述和下述舉例說明性實例，本領域普通技術人 員可制備且利用本公開內容的試劑，并且實踐請求保護的方法。提供下述工作實例以促進 本公開內容的實踐，并且不應解釋為以任何方式限制公開內容的剩余部分。
[0085] 實例
[0086] 實例1.富含18-碳脂肪酸的纟目合物的制各
[0087] 通過使油在68°C下在溶于乙醇/水（1:1)的3· 75M氫氧化鈉中與5mM乙二胺四 乙酸二鈉一起加熱三小時，使十克黑醋栗種子油皂化。在冷卻后，用3M鹽酸使溶液酸化至 pH?2。用庚烷提取有機組分，在硫酸鎂上干燥，并且濃縮以提供得率>90%的游離脂肪酸。 當通過氣相色譜法分析時，黑醋栗種子油測定為由根據下表1的游離脂肪酸組成。起始油 中18-碳Ω -6脂肪酸與18-碳Ω -3脂肪酸的比為63. 60:14. 78或約4. 3:1。
[0088] 表1.黑醋栗種子油的纟目成。
[0089]

【權利要求】
1. 一種用于由包含18-碳脂肪酸的植物種子油產生20-碳脂肪酸的方法，所述方法包 括使所述植物種子油中存在的至少一部分18-碳脂肪酸延長兩個碳原子，以產生20-碳脂 肪酸。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述延長步驟包括使所述18-碳脂肪酸與酶接觸。
3. 根據權利要求2所述的方法，其中所述酶包含延長酶。
4. 根據權利要求3所述的方法，所述方法還包括使至少一部分所述20-碳脂肪酸酯化 的步驟。
5. 根據權利要求1所述的方法，其中所述18-碳脂肪酸包括多種不同的18-碳脂肪酸。
6. 權利要求1-5中任一項所述的方法，其中所述18-碳脂肪酸包含SDA、GLA和ALA中 的一種或多種，并且所述20-碳脂肪酸包含ETA、ETE和DGLA中的一種或多種。
7. 根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括在所述延長步驟前，從所述植物種子 油中提取所述18-碳脂肪酸的步驟。
8. 根據權利要求7所述的方法，其中所述18-碳脂肪酸通過有機溶劑提取或超臨界流 體提取從所述植物種子油中提取。
9. 根據權利要求8所述的方法，其中所述超臨界流體提取包括C02超臨界流體提取 (C02-SFE)。
10. 權利要求1-9中任一項所述的方法，所述方法還包括任選通過尿素分餾、低溫結 晶、色譜分離、HPLC或蒸餾來純化所述20-碳脂肪酸。
11. 根據權利要求10所述的方法，其中使所述20-碳脂肪酸純化，以產生具有按重量計 至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %或超過90 %純 度的20-碳脂肪酸。
12. 根據權利要求1所述的方法，其中所述植物種子油選自：藍薊種子油、黑醋栗種子 油、琉璃苣種子油、月見草種子油、假鶴虱種子油、毛束草種子油、擬紫草種子油及其組合。
13. 根據權利要求1-12中任一項所述的方法，所述方法還包括任選通過使所述20-碳 脂肪酸與二氧化硅和炭的混合物混合，或使所述20-碳脂肪酸經過硅藻土濾器，使所述 20-碳脂肪酸脫臭。
14. 根據權利要求6所述的方法，所述方法還包括任選通過使所述DGLA與醇和酸接觸， 使所述DGLA、ETE和/或ETA酯化，以產生DGLA、ETE和/或ETA酯，所述酯任選選自烷基 酯、雜烷基酯、芳基酯、雜芳基酯、甲酯、乙酯、丙酯、異丙酯、丁酯、異丁酯、叔丁酯及其組合。
15. 根據權利要求1所述的方法，其中產生的20-碳脂肪酸與所述植物種子油中的 18-碳脂肪酸的摩爾比為約1:1。
16. 根據權利要求1所述的方法，其中產生的20-碳脂肪酸具有的20-碳Ω-6脂肪酸 與20-碳Ω -3脂肪酸的摩爾比大于所述植物種子油中的18-碳脂肪酸摩爾比，所述18-碳 脂肪酸摩爾比由18-碳Ω-6脂肪酸與18-碳Ω-3脂肪酸的摩爾比限定。
17. -種組合物，所述組合物包含通過根據權利要求1-16中任一項所述的方法產生的 20-碳脂肪酸。
18. 根據權利要求17所述的組合物，所述組合物包含按重量計至少30%、至少40%、至 少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %或超過90 %的DGLA、ETA和ETE中的一 種或多種。
19. 一種用于延長植物種子油中的脂肪酸的方法，所述方法包括：從植物種子油中提 取所述18-碳脂肪酸，和使所述脂肪酸延長兩個碳原子。
20. 根據權利要求2或19中任一項所述的方法，其中所述植物種子油中的兩種或更多 種所述18-碳脂肪酸同步延長。
21. -種用于產生包含DGLA、ETE和ETA的組合物的方法，所述方法包括：富集包含 SDA、ALA和GLA的植物種子油中的SDA、ALA和GLA ;使所述SDA、ALA和GLA各自同步延長 兩個碳原子，以提供DGLA、ETE和ETA ;和任選富集包含DGLA、ETE和ETA的組合物。
22. 通過根據權利要求21所述的方法產生的組合物，其中所述組合物包含至少50重 量％ 的 DGLA、ETE 和 / 或 ETA。
23. 通過根據權利要求21所述的方法產生的組合物，其中所述組合物包含約1:10至約 10:1的DGLA:ETE加上ETA的摩爾比。
24. 根據權利要求21所述的方法，其中富集所述植物種子油中的SDA、ALA和GLA的步 驟包括（i)使所述植物種子油與由丙酮、水和庚烷組成的溶劑系統(tǒng)接觸，（ii)使所得的混 合物冷卻至足以誘導晶體形成的溫度，和（iii)從所述植物種子油-溶劑系統(tǒng)混合物中分 離所述晶體，以產生富含SDA、ALA和GLA的植物種子油。
25. 根據權利要求21所述的方法，其中使所述SDA、ALA和GLA各自同步延長兩個碳原 子的步驟包括： ⑴使所述SDA、ALA和GLA酯化，以形成SDA、ALA和GLA酯； (ii) 使所述SDA、ALA和GLA酯還原，以形成SDA、ALA和GLA伯醇； (iii) 使所述SDA、ALA和GLA伯醇甲磺?；?，以形成SDA、ALA和GLA甲磺酸酯； (iv) 使所述SDA、ALA和GLA甲磺酸酯與C2延長塊接觸，其中所述C2延長塊是去質子 化的丙二酸二酯，以形成延長的SDA、ALA和GLA二酯； (v) 使所述延長的SDA、ALA和GLA二酯水解，以形成延長的SDA、ALA和GLA二酸；和 (vi) 使所述延長的SDA、ALA和GLA二酸脫羧，以形成DGLA、ETE和ETA。
26. 根據權利要求21所述的方法，其中富集DGLA、ETE和ETA的任選步驟包括（i)使 所述包含DGLA、ETE和ETA的組合物與包含庚烷的溶劑系統(tǒng)接觸，（ii)使所得的混合物冷 卻至足以誘導晶體形成的溫度，和（iii)從所述組合物-溶劑系統(tǒng)混合物中分離所述晶體， 以產生包含DGLA、ETE和ETA的富集的組合物。
27. -種用于由植物種子油產生20-碳脂肪酸的方法，所述方法包括： (a) 通過使植物種子油暴露于脂肪酶，消化所述植物種子油中的18-碳脂肪酸甘油三 酯的甘油主鏈，以形成包含18-碳游離脂肪酸的油， (b) 任選使來自所述油的一種或多種所述18-碳游離脂肪酸濃縮， (c) 用延長酶處理所述油或所述任選濃縮的18-碳游離脂肪酸，以產生20-碳脂肪酸， (d) 使至少一部分所述20-碳脂肪酸酯化，和 (e) 任選使至少一部分酯化的20-碳脂肪酸濃縮。
28. -種藥物組合物，所述藥物組合物包含具有約1:10至約10:1的DGLA與ETE加上 ETA的摩爾比的DGLA、ETE和ETA。
29. 根據權利要求28所述的藥物組合物，其中DGLA、ETE和ETA共同占按重量計至少 70 %、80 %或90 %的所述組合物中存在的所有脂肪酸。
30. -種治療有此需要的受試者中的炎性疾病、心血管疾病、呼吸性疾病、神經學疾病、 癌癥、精神病或皮膚疾病的方法，所述方法包括給所述受試者施用根據權利要求28或29所 述的藥物組合物。
【文檔編號】C12P7/64GK104114709SQ201280066370
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2012年11月29日 優(yōu)先權日:2011年11月29日
【發(fā)明者】M·曼庫, J·羅維 申請人:尊貴科學有限公司