用于從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞的方法和裝置制造方法
【專利摘要】根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種用于從脂肪組織樣品分離非脂肪細(xì)胞的設(shè)備。所述設(shè)備包括第一材料片、粘結(jié)至所述第一材料片的第二材料片以及界定在所述第一材料片與所述第二材料片之間的多個(gè)室，所述多個(gè)室包括：樣品解離室，其包括入口和出口；廢物收集室，其包括與所述樣品解離室的所述出口流體連通的入口；以及細(xì)胞精制室，其包括與所述樣品解離室流體連通的入口，以及出口。
【專利說(shuō)明】用于從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞的方法和裝置
[0001]發(fā)明背景
[0002]生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中的許多技術(shù)如細(xì)胞分離、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞測(cè)定以及細(xì)胞療法依賴于解離組織來(lái)分離個(gè)別細(xì)胞。處理組織樣品經(jīng)常涉及多種動(dòng)作，如切碎、洗滌、酶消化、解離、孵育、混合、凝塊和碎片去除，以及濃縮。在研究實(shí)驗(yàn)室中，這些動(dòng)作經(jīng)常手動(dòng)進(jìn)行，并將樣品在一個(gè)開(kāi)放環(huán)境中從測(cè)試管至測(cè)試管進(jìn)行著轉(zhuǎn)移。所述手動(dòng)過(guò)程需要訓(xùn)練有素的人員并且對(duì)生物樣品的操縱會(huì)造成潛在的污染和感染風(fēng)險(xiǎn)。
[0003]最近，研究和醫(yī)學(xué)團(tuán)體一直關(guān)注于從脂肪組織分離細(xì)胞。已經(jīng)研發(fā)了數(shù)種技術(shù)來(lái)從患者或動(dòng)物安全地去除脂肪組織部分。例如，腫脹吸脂和水射流吸脂技術(shù)已經(jīng)被廣泛用來(lái)從患者去除脂肪組織。脂肪組織含有儲(chǔ)存脂肪的脂肪細(xì)胞和維持組織的其它非脂肪細(xì)胞。脂肪組織的組成細(xì)胞、其作用以及其相互作用尚未被完全了解，并且是活躍的學(xué)術(shù)和臨床研究的主題。
[0004]為了研究脂肪組織，可能需要解離組織并且分離組成細(xì)胞。所述過(guò)程可能涉及釋放組成細(xì)胞、去除碎片和不想要的細(xì)胞、濃縮并富集相關(guān)細(xì)胞，以及洗滌細(xì)胞。所述過(guò)程可為費(fèi)力的，并且可能要求訓(xùn)練有素的操作人員、昂貴的裝備設(shè)置以及具有適當(dāng)生物安全性措施的實(shí)驗(yàn)室。所述多個(gè)操縱動(dòng)作還會(huì)引起相關(guān)細(xì)胞的顯著損失，從而使得罕見(jiàn)且普遍性低的細(xì)胞的分離困難并且不可靠。此外，當(dāng)使用人樣品時(shí)，交叉污染和感染的風(fēng)險(xiǎn)可能是顯著的。
[0005]因此需要具有用于從脂肪組織有效分離相關(guān)細(xì)胞、尤其是除脂肪細(xì)胞以外的細(xì)胞的方法，并且具有使從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞變得容易且安全的裝置。
[0006]包含柔性塑料片的袋被廣泛用于收集、處理和儲(chǔ)存生物組織樣品，如外周血、臍帶血、血液組分、血漿、骨髓、脂肪抽吸物等。袋具有柔性且可膨脹優(yōu)勢(shì)，并且能夠改變其內(nèi)部體積來(lái)適應(yīng)不同體積的樣品。為了有利于樣品處理，經(jīng)常使用外部管線將許多個(gè)別袋流體連接，以形成一個(gè)系統(tǒng)。所述袋和管線系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛用于樣品處理，例如血液份化、細(xì)胞分離等。然而，由于集成了較多的處理動(dòng)作，因此袋和管線系統(tǒng)迅速變得笨重，難以使用并且很難制造。系統(tǒng)變成絕緣套管狀，且變得容易纏繞，并且許多部件彼此懸擺。為了使用所述裝置，操作人員需要高水平的訓(xùn)練和長(zhǎng)期的經(jīng)驗(yàn)來(lái)設(shè)置這種復(fù)雜的裝置。操作人員還需要另外注意按正確的順序?qū)⒏鞣N部分安裝在正確的位置。此外，這些裝置和系統(tǒng)的制造可為困難且昂貴的，因?yàn)槎鄠€(gè)袋、部件以及管線伸展段經(jīng)常必須個(gè)別地制造并且然后進(jìn)行組裝。所述裝置的組裝可能為勞動(dòng)密集型的，并且會(huì)呈現(xiàn)泄露和污染、即系統(tǒng)故障的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于臨床應(yīng)用來(lái)說(shuō)，裝置經(jīng)常是單次使用的，并且其可靠性是重要的。密集的勞力和裝置故障風(fēng)險(xiǎn)是這些常規(guī)絕緣套管狀系統(tǒng)的主要障礙。
[0007]發(fā)明概述
[0008]根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種用于從脂肪組織樣品分離非脂肪細(xì)胞的設(shè)備。所述設(shè)備包括第一材料片、粘結(jié)至第一材料片的第二材料片以及界定在第一材料片與第二材料片之間的多個(gè)室，所述多個(gè)室包括:樣品解離室，其包括入口和出口 ；廢物收集室，其包括與樣品解離室的出口流體連通的入口 ；以及細(xì)胞精制室，其包括與樣品解離室流體連通的入口，以及出口。
[0009]根據(jù)一些實(shí)施方案，樣品解離室進(jìn)一步包括網(wǎng)式過(guò)濾器，所述網(wǎng)式過(guò)濾器包括孔徑在70 μ m與300 μ m之間的孔。
[0010]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括網(wǎng)式過(guò)濾器，所述網(wǎng)式過(guò)濾器包括在細(xì)胞精制室中、包括孔徑在20 μ m與50 μ m之間的孔。
[0011]根據(jù)一些實(shí)施方案，樣品解離室進(jìn)一步包括第一網(wǎng)式過(guò)濾器，所述第一網(wǎng)式過(guò)濾器包括具有第一孔徑的孔，并且其中細(xì)胞精制室進(jìn)一步包括第二網(wǎng)式過(guò)濾器，所述第二網(wǎng)式過(guò)濾器包括具有第二孔徑的孔，其中第二孔徑小于第一孔徑。
[0012]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括控制樣品解離室、廢物收集室以及細(xì)胞精制室之間的流體連接的構(gòu)件。
[0013]根據(jù)一些實(shí)施方案，控制流體連接的構(gòu)件包括旋塞閥。
[0014]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括流量控制裝置，所述流量控制裝置被構(gòu)造來(lái)將清洗溶液和解離溶液中的至少一種引入到樣品解離室中，并且具有與樣品解離室流體連通的出口。
[0015]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括用于對(duì)樣品解離室和細(xì)胞精制室中的一個(gè)施加壓力的構(gòu)件。
[0016]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括下游處理設(shè)備，所述下游處理設(shè)備與細(xì)胞精制室的出口流體連通并且包括至少一個(gè)微流體裝置，所述微流體裝置被構(gòu)造來(lái)將從細(xì)胞精制室輸出的流體分離成第一溶液和第二溶液，所述第一溶液具有第一濃度的一種或多種相關(guān)細(xì)胞，所述第二溶液具有小于第一溶液的濃度的所述一種或多種相關(guān)細(xì)胞，其中相關(guān)細(xì)胞包括從脂肪組織樣品分離的非脂肪細(xì)胞。
[0017]根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種無(wú)菌且基本上隔離的脂肪組織處理系統(tǒng)。所述系統(tǒng)包括組織處理室，其包括入口、出口，以及至少一個(gè)網(wǎng)式過(guò)濾器，所述網(wǎng)式過(guò)濾器設(shè)置在組織處理室的入口與組織處理室的出口之間；廢物收集室，其與組織處理室包括在同一封閉空間中，所述廢物收集室包括與組織處理室的出口流體連通的入口 ；以及碎片去除室和樣品收集室中的一個(gè)，所述碎片去除室包括碎片去除機(jī)構(gòu)，所述樣品收集室與組織處理室包括在同一封閉空間中，并且與組織處理室流體連通。
[0018]根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種在組織處理系統(tǒng)中處理脂肪組織樣品的方法。所述方法包括將待處理的脂肪組織樣品通過(guò)第一室的入口端口引入到第一室中，處理第一室中的脂肪組織樣品，并且將細(xì)胞通過(guò)第一室的出口、通過(guò)第二室的入口從第一室轉(zhuǎn)移至第二室中，所述第二室與第一室包括在同一封閉空間中。
[0019]根據(jù)一些實(shí)施方案，處理脂肪組織樣品包括解離脂肪組織樣品。
[0020]根據(jù)一些實(shí)施方案，處理脂肪組織樣品包括從第一室中的脂肪組織樣品去除過(guò)量的流體。
[0021]根據(jù)一些實(shí)施方案，處理脂肪組織樣品包括使用清洗溶液洗滌第一室中的脂肪組織樣品。
[0022]根據(jù)一些實(shí)施方案，處理脂肪組織樣品包括使用清洗溶液洗滌第一室中的脂肪組織樣品，并且使用包含至少一種酶的解離溶液解離第一室中的脂肪組織樣品。
[0023]根據(jù)一些實(shí)施方案，解離溶液包含膠原酶。
[0024]根據(jù)一些實(shí)施方案，解離溶液包含膠原酶、脫氧核糖核酸酶以及透明質(zhì)酸酶。
[0025]根據(jù)一些實(shí)施方案，使用解離溶液解離脂肪組織樣品在約37°C下進(jìn)行。
[0026]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括使用包括在第二室中的網(wǎng)式過(guò)濾器去除碎片。
[0027]根據(jù)一些實(shí)施方案，網(wǎng)式過(guò)濾器的孔徑在15微米與100微米之間。
[0028]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括將樣品保留在第一室中，并且將廢物流通過(guò)包括在第一室中的網(wǎng)式過(guò)濾器和第一室的第一出口、通過(guò)第三室的入口轉(zhuǎn)移到第三室中，所述第三室與第一室包括在同一封閉空間中。
[0029]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括使用微流體裝置富集非脂肪細(xì)胞群。
[0030]根據(jù)一些實(shí)施方案，非脂肪細(xì)胞包括干細(xì)胞。
[0031]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括從組織處理系統(tǒng)收獲細(xì)胞。
[0032]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括在下游處理設(shè)備中處理細(xì)胞，所述下游處理設(shè)備與第二室的出口流體連通并且包括至少一個(gè)微流體裝置，所述微流體裝置被構(gòu)造來(lái)將細(xì)胞分離成第一溶液和第二溶液，所述第一溶液具有第一濃度的非脂肪細(xì)胞，所述第二溶液具有小于第一溶液的濃度的非脂肪細(xì)胞。
[0033]根據(jù)一些實(shí)施方案，收獲的細(xì)胞為血管基質(zhì)部分細(xì)胞。
[0034]根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種用于從脂肪組織分離細(xì)胞的設(shè)備。所述設(shè)備包括第一材料片、粘結(jié)至第一材料片的第二材料片以及界定在第一材料片與第二材料片之間的多個(gè)室，所述多個(gè)室包括:樣品解離室，其包括入口和出口 ；廢物收集室，其包括與組織解離室的出口流體連通的入口 ；以及細(xì)胞精制室，其包括與樣品解離室流體連通的入口，以及出口。
[0035]根據(jù)一些實(shí)施方案，樣品解離室進(jìn)一步包括濾網(wǎng)。
[0036]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括濾網(wǎng)，所述濾網(wǎng)包括在細(xì)胞精制室中。
[0037]根據(jù)一些實(shí)施方案，樣品解離室進(jìn)一步包括第一濾網(wǎng)，所述第一濾網(wǎng)包括具有第一孔徑的孔，并且其中細(xì)胞精制室進(jìn)一步包括第二濾網(wǎng)，所述第二濾網(wǎng)包括具有第二孔徑的孔。
[0038]根據(jù)一些實(shí)施方案，第二孔徑小于第一孔徑。
[0039]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括控制樣品解離室、廢物收集室以及細(xì)胞精制室之間的流體連接的構(gòu)件。
[0040]根據(jù)一些實(shí)施方案，控制流體連接的構(gòu)件包括旋塞閥。
[0041]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括流量控制裝置，所述流量控制裝置被構(gòu)造來(lái)將清洗溶液和解離溶液中的一種引入到樣品解離室中，并且具有與組織解離室流體連通的出口。
[0042]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括用于對(duì)樣品解離室和細(xì)胞精制室中的一個(gè)施加壓力的構(gòu)件。所述構(gòu)件可設(shè)置在第一材料片與第二材料片之間。所述構(gòu)件可設(shè)置在第一材料片和/或第二材料片周圍。
[0043]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括下游處理設(shè)備，所述下游處理設(shè)備與細(xì)胞精制室的出口流體連通并且包括至少一個(gè)微流體裝置，所述微流體裝置被構(gòu)造來(lái)將從細(xì)胞精制室輸出的流體分離成第一溶液和第二溶液，所述第一溶液具有第一濃度的一種或多種相關(guān)細(xì)胞，所述第二溶液具有小于第一溶液的濃度的所述一種或多種相關(guān)細(xì)胞。
[0044]根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種基本上隔離的脂肪組織處理系統(tǒng)。所述系統(tǒng)包括脂肪組織處理室，其包括入口、第一出口、第二出口，以及至少一個(gè)濾網(wǎng)，所述濾網(wǎng)設(shè)置在組織處理室的入口與組織處理室的第一出口之間；廢物收集室，其與組織處理室包括在同一封閉空間中，所述廢物收集室包括與組織處理室的第一出口流體連通的入口 ；以及碎片去除室和樣品收集室中的一個(gè)，所述碎片去除室包括碎片去除機(jī)構(gòu)，所述樣品收集室與組織處理室包括在同一封閉空間中，并且與組織處理室的第二出口流體連通。
[0045]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述系統(tǒng)進(jìn)一步包括流體體積測(cè)量室，其與脂肪組織處理室處于同一封閉空間中，并且包括入口和與脂肪組織處理室的入口流體連通的出口。
[0046]根據(jù)一些實(shí)施方案，流體體積測(cè)量室的入口和流體體積測(cè)量室的出口各自包括止回閥。
[0047]根據(jù)一些實(shí)施方案，第一出口和第二出口包括與脂肪組織處理室流體連通的旋塞閥出口。
[0048]根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種從脂肪組織分離細(xì)胞的方法。所述方法包括通過(guò)組織處理室的入口端口將待處理的樣品引入組織處理室中，處理組織處理室中的樣品，并且將細(xì)胞通過(guò)組織處理室的出口、通過(guò)樣品儲(chǔ)存室的入口從組織處理室釋放到樣品儲(chǔ)存室中，所述樣品儲(chǔ)存室與組織處理室包括在同一封閉空間中。
[0049]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括將細(xì)胞樣品保留在組織處理室中，并且將廢物流通過(guò)包括在組織處理室中的網(wǎng)式過(guò)濾器和組織處理室的第一出口、通過(guò)廢物收集室的入口轉(zhuǎn)移到廢物收集室中，所述廢物收集室與組織處理室包括在同一封閉空間中。
[0050]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括從組織處理系統(tǒng)提取細(xì)胞樣品。
[0051]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括在下游處理設(shè)備中處理所述提取的細(xì)胞樣品，所述下游處理設(shè)備與樣品儲(chǔ)存室的出口流體連通并且包括至少一個(gè)微流體裝置，所述微流體裝置被構(gòu)造來(lái)將提取的細(xì)胞樣品分離成第一溶液和第二溶液，所述第一溶液具有第一濃度的一種或多種相關(guān)細(xì)胞，所述第二溶液具有小于第一溶液的濃度的所述一種或多種相關(guān)細(xì)胞。
[0052]根據(jù)一些實(shí)施方案，處理組織處理室中的組織樣品包括將組織清潔溶液引入到組織處理室中。
[0053]根據(jù)一些實(shí)施方案，處理組織處理室中的組織樣品進(jìn)一步包括將組織解離溶液引入到組織處理室中。
[0054]根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種用于從脂肪組織分離細(xì)胞的方法。所述方法包括將待處理的脂肪抽吸物樣品引入到包括網(wǎng)的室中，從樣品去除過(guò)量流體，使解離的樣品通過(guò)至少一個(gè)網(wǎng)以去除脂肪細(xì)胞和碎片，以及將紅血球基本上從樣品去除，并且使用微流體裝置將樣品濃縮至少三倍。
[0055]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括使用洗滌溶液洗滌樣品。
[0056]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法進(jìn)一步包括用包含至少一種酶的解離溶液混合并且孵育樣品。
[0057]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述微流體裝置包括多個(gè)微流體通道，所述微流體通道具有基本上恒定的深度并且至少一個(gè)尺寸小于750微米，其中至少兩個(gè)微流體通道布置在基板的一個(gè)表面上。
[0058]根據(jù)一些實(shí)施方案，解離溶液包含膠原酶，并且其中樣品和解離溶液在約20°C與約40°C之間進(jìn)行孵育。
[0059]根據(jù)一些實(shí)施方案，解離溶液包含膠原酶和脫氧核糖核酸酶，并且其中樣品和解離溶液在約37 °C下孵育。
[0060]根據(jù)一些實(shí)施方案，微流體裝置進(jìn)一步包括被構(gòu)造來(lái)將樣品分離成非脂肪有核細(xì)胞部分的柱。
[0061]根據(jù)一些實(shí)施方案，微流體裝置被構(gòu)造來(lái)使用洗滌溶液洗滌非脂肪細(xì)胞并且基本上去除解離溶液中的酶。
[0062]根據(jù)本公開(kāi)的一方面，提供一種基本上隔離的脂肪組織處理系統(tǒng)。所述系統(tǒng)包括:樣品洗滌和解離室，其包括三個(gè)入口端口、第一出口端口和第二出口端口，以及設(shè)置在三個(gè)入口端口與第一出口端口和第二出口端口之間的網(wǎng)；凝塊減少室，其包括與樣品洗滌和解離室的第一出口端口流體連接的入口接頭、出口，以及設(shè)置在入口接頭與出口之間的網(wǎng)；用于分離的細(xì)胞和進(jìn)一步碎片去除的儲(chǔ)集器，其具有與凝塊減少室的出口流體連通的入口 ；廢物溶液收集室，其具有與樣品洗滌和解離室的第二出口端口流體連通的入口 ；以及微流體裝置。
[0063]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述微流體裝置包括多個(gè)微流體通道，所述微流體通道具有基本上恒定的深度并且至少一個(gè)尺寸小于750微米。
[0064]根據(jù)一些實(shí)施方案，所述多個(gè)微流體通道中的至少兩個(gè)被布置在基板的一個(gè)表面上。
[0065]根據(jù)一些實(shí)施方案，樣品洗滌和解離室、凝塊減少室、儲(chǔ)集器以及廢物溶液收集室中的每一個(gè)均包括在同一密封包裝中。
[0066]附圖簡(jiǎn)述
[0067]附圖并未旨在按比例繪制。在圖中，在不同圖中示出的各相同或近乎相同的部件由相同的數(shù)字表示。出于清晰性目的，在每一幅圖中，并非是所有的部件均標(biāo)記出。除非另外指示，否則所有圖均應(yīng)認(rèn)為是示意性的。在圖中:
[0068]圖1A為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的方法的流程圖；
[0069]圖1B為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的方法的流程圖；
[0070]圖2A為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的示意圖；
[0071]圖2B為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的流量控制裝置的示意圖；
[0072]圖2C為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的流量控制裝置的示意圖；
[0073]圖2D為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的示意圖；
[0074]圖2E為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的示意圖；
[0075]圖2F為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的示意圖；
[0076]圖2G為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的示意圖；
[0077]圖3A為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的正視圖；
[0078]圖3B為圖3A的樣品處理裝置的等距視圖；
[0079]圖3C為圖3A的裝置的室的一部分的分解視圖；
[0080]圖3D為圖3A的裝置的室的一部分的分解視圖；
[0081]圖3E為圖3A的裝置的室的一部分的側(cè)視截面視圖；
[0082]圖3F為圖3A的包括任選的夾子的樣品處理裝置的正視圖；
[0083]圖4為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的正視圖；
[0084]圖5A為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的室的正視圖；
[0085]圖5B為圖5A的室的一部分的側(cè)視截面視圖；
[0086]圖6A為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的室的正視圖；
[0087]圖6B為圖6A的室的側(cè)視截面視圖；
[0088]圖7為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的室的側(cè)視截面視圖；
[0089]圖8A為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的室的正視圖；
[0090]圖8B為圖8A的室的分解視圖；
[0091]圖9A為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的室的正視圖；
[0092]圖9B為圖9A的室的分解視圖；
[0093]圖1OA為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的一部分的正視圖；
[0094]圖1OB為圖1OA的樣品處理裝置的一部分的分解視圖；
[0095]圖11為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的正視圖；
[0096]圖12為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的正視圖；
[0097]圖13A為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的正視圖；
[0098]圖13B為圖13A的裝置的室的一部分的截面視圖；
[0099]圖13C為圖13A的裝置的室的一部分的截面視圖；
[0100]圖14為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的正視圖；
[0101]圖15A為在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中包括的微流體裝置的一部分的圖解；
[0102]圖15B為在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中包括的微流體裝置的圖解；
[0103]圖15C為在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中包括的微流體裝置的圖解；
[0104]圖15D為在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中包括的微流體裝置的圖解；
[0105]圖15E為在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中包括的微流體裝置的圖解；
[0106]圖16為根據(jù)本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案的樣品處理裝置的正視圖；
[0107]圖17為在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中包括的微流體裝置的圖解；
[0108]圖18A為在本公開(kāi)的實(shí)施方案中處理的流體的照片；以及
[0109]圖18B為在本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案中處理的流體的照片。
[0110]詳細(xì)說(shuō)明
[0111]本公開(kāi)的應(yīng)用不限于以下說(shuō)明中所闡述的或圖式中所圖解的結(jié)構(gòu)的細(xì)節(jié)和部件的布置。本公開(kāi)能夠?qū)崿F(xiàn)其它實(shí)施方案并且能夠按不同的方式實(shí)踐或進(jìn)行。而且，本文所用的措辭和術(shù)語(yǔ)是出于說(shuō)明目的并且不應(yīng)視為限制性的。本文使用“包括”、“包含”、“具有”、“含有”、“涉及”以及其變化形式來(lái)意指涵蓋后面所列出的項(xiàng)目和其對(duì)等物以及另外的項(xiàng)目。
[0112]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“樣品”、“組織樣品”、“脂肪樣品”以及“脂肪組織”可包括脂肪組織樣品，例如脂肪抽吸物，并且所述術(shù)語(yǔ)可互換使用。。
[0113]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“微流體裝置”可指具有至少一個(gè)流體通道形成在基本上一個(gè)表面上并且至少一個(gè)橫向通道尺寸小于約Imm的裝置，所述表面可為基本上平坦的或彎曲的。所述橫向通道尺寸可為例如通道的寬度或深度。
[0114]已經(jīng)發(fā)現(xiàn)需要具有一種用于從脂肪組織有效分離相關(guān)細(xì)胞的方法，并且具有使從脂肪組織分離細(xì)胞容易且安全的裝置。對(duì)于研究和臨床應(yīng)用來(lái)說(shuō)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)需要處理脂肪組織樣品的多種動(dòng)作成流線型，這樣使得人為誤差可最小化。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)重要的是，在基本上“隔離”的環(huán)境中處理脂肪組織樣品，其中提供障壁以隔離脂肪樣品免于例如通過(guò)未過(guò)濾的空氣流與外部環(huán)境和/或操作人員直接物理接觸或流體接觸，從而最小化或避免污染和感染風(fēng)險(xiǎn)。還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)需要具有用于脂肪組織處理的系統(tǒng)和裝置，其中許多部件和隔室集成為一件式，以便為樣品提供基本上隔離的環(huán)境。優(yōu)選的是，用于脂肪組織處理的系統(tǒng)和裝置易于使用、易于制造并且具有低故障風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于許多臨床和研究應(yīng)用來(lái)說(shuō)，還可能優(yōu)選的是裝置和系統(tǒng)的與脂肪組織樣品直接接觸的任何部分是無(wú)菌的和一次性的。
[0115]本公開(kāi)的多個(gè)方面和實(shí)施方案提供一種用于從脂肪組織樣品分離某些組成細(xì)胞群的方法。本公開(kāi)的其它方面和實(shí)施方案提供一種按集成的、流線型的、安全且易于使用的方式實(shí)現(xiàn)所述用于從脂肪組織樣品分離某些組成細(xì)胞群的方法的裝置。
[0116]本公開(kāi)的多個(gè)方面和實(shí)施方案提供一種集成裝置，其包括多個(gè)用于脂肪組織樣品處理的隔室，所述隔室可包括但不限于被構(gòu)造和布置來(lái)用于以下的隔室:樣品收集、洗滌、分層、混合、加熱、冷卻、過(guò)濾、消化、儲(chǔ)存、流體轉(zhuǎn)移和操縱、細(xì)胞標(biāo)記、樣品處理、解離、廢物流收集、凝塊去除、碎片去除、細(xì)胞濃縮、細(xì)胞富集、細(xì)胞分離、細(xì)胞孵育、生長(zhǎng)、培養(yǎng)、分化、擴(kuò)增等。根據(jù)本公開(kāi)的實(shí)施方案的集成裝置還可包括用于例如控制隔室之間的流體流量目的而進(jìn)行的設(shè)閥。所述裝置可適用于將脂肪組織樣品處理的多個(gè)動(dòng)作集成且使其成流線型，所述動(dòng)作例如從脂肪組織分離細(xì)胞，并且可有利于多個(gè)功能，如酶消化、脂肪組織解離、洗滌、廢液收集、碎片去除、細(xì)胞濃縮、使用抗體標(biāo)記、使用磁性珠粒標(biāo)記、細(xì)胞擴(kuò)增等。所述裝置可尤其適用于安全性、易于使用性以及易于制造性重要的應(yīng)用。本公開(kāi)的一些方面和實(shí)施方案包括使用所述裝置的方法。
[0117]本公開(kāi)的用于從脂肪組織分離細(xì)胞的方法的一個(gè)實(shí)施方案包括但不限于解離脂肪組織、釋放組成細(xì)胞、收集所釋放的細(xì)胞，并且去除組織碎片。所述方法可進(jìn)一步包括在組織解離之前脂肪組織清潔的動(dòng)作。脂肪組織清潔動(dòng)作可包括從脂肪組織樣品去除或排出不想要的或過(guò)量的流體。所述不想要的流體可包括血液、體液、以及腫脹溶液。脂肪組織清潔動(dòng)作可進(jìn)一步包括使用清洗溶液清洗或洗滌脂肪組織。所述方法可進(jìn)一步包括富集或純化所釋放的細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)動(dòng)作。另外，所述方法可進(jìn)一步包括從所述過(guò)程收集廢物流。本公開(kāi)的用于從脂肪組織分離細(xì)胞的方法的另一實(shí)施方案包括但不限于從脂肪組織去除過(guò)量的流體，解離脂肪組織和釋放組成細(xì)胞，以及去除不想要的細(xì)胞和碎片。所述方法可進(jìn)一步包括以下中的一個(gè)或多個(gè):洗滌脂肪組織樣品，濃縮相關(guān)細(xì)胞，洗滌相關(guān)細(xì)胞以及使用例如抗體進(jìn)行免疫分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，濃縮和/或洗滌相關(guān)細(xì)胞可使用至少一個(gè)微流體裝置進(jìn)行。在另一實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)動(dòng)作可采用離心。在另一實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)動(dòng)作可利用中空纖維進(jìn)行。
[0118]在本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種用于從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞群的方法。所述方法包括但不限于從脂肪組織去除過(guò)量的流體，用緩沖溶液洗滌脂肪脂肪組織，使用例如超聲波或含有酶的解離溶液解離組織，去除脂肪細(xì)胞、游離油脂、基質(zhì)纖維以及組織碎片，減少紅血球，并且富集相關(guān)細(xì)胞。細(xì)胞富集動(dòng)作可使用離心機(jī)、過(guò)濾器或微流體裝置來(lái)實(shí)現(xiàn)。所述方法可進(jìn)一步包括以下中的一個(gè)或多個(gè):淋巴細(xì)胞減少、細(xì)胞洗滌以及免疫分離。從脂肪組織去除過(guò)量的流體，用緩沖溶液洗滌脂肪組織，解離脂肪組織，去除脂肪細(xì)胞、游離油脂、基質(zhì)纖維以及組織碎片，以及細(xì)胞洗滌的動(dòng)作可使用例如重力沉降、離心和/或包括網(wǎng)式過(guò)濾器的粗濾器來(lái)進(jìn)行。
[0119]圖1A示出一般指示為100的、用于從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞群的方法的一個(gè)實(shí)施方案的流程圖。在吸脂程序過(guò)程中，腫脹流體經(jīng)常引入患者以使血液損失最小化，使組織緊致，并且提供局部麻醉。腫脹溶液可含有0.05%的利多卡因和1: 1，000，000濃度的腎上腺素。所述方法包括從脂肪抽吸脂肪組織去除過(guò)量流體的動(dòng)作(動(dòng)作110)。過(guò)量的流體可包括血液且經(jīng)常包括腫脹流體，其可干擾相關(guān)細(xì)胞的下游處理動(dòng)作和分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用重力沉降或離心去除過(guò)量流體的樣品可以分成為脂肪組織層和過(guò)量流體層，因?yàn)橹窘M織具有比過(guò)量流體低的密度。脂肪組織層和過(guò)量流體然后可分開(kāi)至不同的容器，以便從過(guò)量流體分離脂肪組織?？蓪⑾礈烊芤菏┘又林窘M織以便洗滌所述組織，所述洗滌溶液包括例如鹽溶液、乳酸林格氏溶液、漢克斯平衡鹽溶液或磷酸鹽緩沖生理食鹽水溶液，并且可重復(fù)分層過(guò)程以便更徹底地洗滌脂肪組織并去除過(guò)量流體。在另一實(shí)施方案中，可使用包括網(wǎng)的粗濾器排出過(guò)量流體?？蓪⑾礈烊芤禾砑又林窘M織并且使用粗濾器排出以便洗滌所述組織?？芍貜?fù)這一洗滌過(guò)程。在一些實(shí)施方案中，粗濾器可包括孔徑為約30微米(μ m)至約I毫米(mm)、例如約30 μ m、約50 μ m、約70 μ m、約85 μ m、約100 μ m、約120 μ m、約140 μ m、約200 μ m、約300 μ m、約500 μ m、約700 μ m或約Imm的孔。在其它實(shí)施方案中，粗濾器可包括孔徑為約70 μ m至約500 μ m、例如約70 μ m、約100 μ m、約140 μ m、約200 μ m、約300 μ m或500 μ m的孔。更確切地說(shuō)，粗濾器可包括孔徑為約70 μ m至約200 μ m、例如約80 μ m、約90 μ m、約100 μ m、約120 μ m、約140 μ m、約170 μ m或約200 μ m的網(wǎng)式過(guò)濾器。在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，粗濾器的孔徑小于所述脂肪組織以使得組織被粗濾器保留下來(lái)。為有效去除過(guò)量流體，可施加洗滌動(dòng)作約I至約10次，例如一次、兩次、三次、四次、五次、六次、八次或十次，所述洗滌動(dòng)作包括添加洗滌溶液和去除洗滌溶液。脂肪樣品的體積與添加用于每次洗滌的洗滌溶液的體積之間的比率可在約1: 0.2與約1: 10之間，例如約 1: 0.2、約 1: 0.3、約 1: 0.5、約 1: 0.7、約 1: 1、約 1: 2、約 1: 3、約1: 5或約1: 10。例如，使用腫脹吸脂術(shù)收集的10ml脂肪抽吸脂肪組織可與10ml的乳酸林格氏溶液混合，并且使用尼龍網(wǎng)排出，所述尼龍網(wǎng)具有孔徑為約140 μ m的孔。這一過(guò)程可進(jìn)行三次以便完成過(guò)量流體的去除。在另一實(shí)施方案中，各洗滌動(dòng)作包括將洗滌溶液添加至樣品并且從樣品去除，所述洗滌溶液的體積在樣品體積的0.6倍與4倍之間，例如樣品體積的0.6,0.8、1、1.2、1.5、1.8、2、2.5、3或4倍，并且洗滌動(dòng)作進(jìn)行一次、兩次、三次或四次。在另一實(shí)施方案中，過(guò)量流體去除動(dòng)作可組合使用重力分層的動(dòng)作，接著使用粗濾器排出。在另一實(shí)施方案中，可將洗滌溶液添加至并且與未處理的脂肪組織混合以便稀釋過(guò)量流體，接著分層或使用網(wǎng)式粗濾器排出流體。添加洗滌溶液可使分層或排出更有效。
[0120]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，過(guò)量流體去除動(dòng)作可通過(guò)將樣品放入具有出口的容器中并且然后在不使用粗濾器的情況下排出過(guò)量流體來(lái)進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，容器可進(jìn)一步包括用于流體控制的構(gòu)件，例如夾閥。為進(jìn)行過(guò)量流體的去除，可將過(guò)量流體通過(guò)出口排出，并且當(dāng)樣品逼近出口時(shí)，可使用流體控制構(gòu)件將出口封鎖。出口的尺寸可小于脂肪組織樣品或出口具有允許組織樣品通過(guò)的較大尺寸。所述動(dòng)作可手動(dòng)或借助于傳感器進(jìn)行，所述傳感器例如光學(xué)傳感器或紅外傳感器，其關(guān)于出口檢測(cè)樣品。可將洗滌溶液添加至脂肪組織樣品以便洗滌或清洗樣品，并且可重復(fù)過(guò)量流體去除動(dòng)作以清潔脂肪組織樣品。圖1A示出的所述方法的第二動(dòng)作(動(dòng)作120)是解離脂肪組織。脂肪組織可使用超聲波解離。脂肪組織可使用解離溶液解離。解離溶液可包含分解額外的脂肪組織細(xì)胞基質(zhì)的酶。解離溶液可包含膠原酶、蛋白酶(protease)、蛋白酶(proteinase)、中性蛋白酶、彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、脂酶、胰蛋白酶、釋放酶、DNA酶、脫氧核糖核酸酶、胃蛋白酶或其混合物。解離溶液可包含濃度在0.lmg/ml與10mg/ml之間，例如約0.lmg/ml、約0.2mg/ml、約0.3mg/ml、約 0.5mg/ml、約 0.75mg/ml、約 lmg/ml、約 1.2mg/ml、約 1.5mg/ml、約 2mg/ml、約 3mg/ml、約4mg/ml、約5mg/ml、約7mg/ml或約10mg/ml的膠原酶。解離溶液可包含胰蛋白酶。解離溶液可包含膠原酶和脫氧核糖核酸酶。解離溶液可包含膠原酶、透明質(zhì)酸酶以及脫氧核糖核酸酶。解離溶液可包含0.2mg/ml與5mg/ml之間的膠原酶、0.lmg/ml與4mg/ml之間的透明質(zhì)酸酶以及I單位與400單位之間的脫氧核糖核酸酶，其中每一單位被定義為使用DNA作為底物、在4.2mM的Mg++濃度下在pH5.0、25°C下每分鐘每ml產(chǎn)生0.001的A260變化的酶活性。解離溶液可進(jìn)一步包含鈣離子和/或鎂離子。解離溶液可包含濃度在0.1mM與1mM 之間，例如約 0.1mM、約 0.2mM、約 0.3mM、約 0.5mM、約 0.7mM、約 ImM、約 L 5mM、約 2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM或約1mM的續(xù)或|丐離子。
[0121]在添加解離溶液后，脂肪組織可在某一溫度(例如約37°C )下孵育某一段時(shí)間，例如約5分鐘至約30小時(shí)。在孵育過(guò)程中，脂肪組織和解離溶液可間歇和/或持續(xù)混合以便有利于有效的反應(yīng)。脂肪組織解離動(dòng)作或孵育動(dòng)作可在37°C下進(jìn)行，持續(xù)約10分鐘至約120分鐘，例如約10分鐘、約15分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約60分鐘、約75分鐘、約90分鐘或約120分鐘，伴隨對(duì)解離溶液中的脂肪組織樣品的連續(xù)或間歇輕輕攪拌，其中比每3分鐘更頻繁地進(jìn)行攪拌，例如每秒、每2秒、每3秒、每5秒、每10秒、每20秒、每30秒、每45秒、每60秒、每90秒、每120秒或每180秒。
[0122]在解離動(dòng)作結(jié)束時(shí)，可添加金屬離子螯合劑如乙二胺四乙酸(EDTA)來(lái)隔絕金屬離子并且中止解離溶液中的酶的活性，并且溫度可降低至約4°C與30°C之間，例如室溫、約25°C、約22°C、約18°C、約15°C、約12°C、約8°C或約4°C。孵育后，溫度可保持在大約室溫，例如大約25°C，或在18°C與28°C之間。在另一實(shí)施方案中，在解離動(dòng)作后，可添加血漿、富血小板血漿或血清來(lái)抑制解離溶液中的酶。
[0123]圖1A的方法的第三動(dòng)作(動(dòng)作130)是去除游離的油脂、基質(zhì)纖維、組織碎片，以及不想要的細(xì)胞，例如脂肪細(xì)胞。脂肪細(xì)胞、基質(zhì)纖維以及組織碎片可使用網(wǎng)式粗濾器基本上去除，所述網(wǎng)式粗濾器包括孔徑在約ΙΟμπ?與約70μπ?之間，例如約ΙΟμπκ約15μπκ約20 μ m、約 25 μ m、約 30 μ m、約 35 μ m、約 40 μ m、約 50 μ m、約 60 μ m 或約 70 μ m 的孔。在另一實(shí)施方案中，解離的脂肪組織樣品通過(guò)孔徑在約20μπι與約50μπι之間，例如約20μπκ約22 μ m、約25 μ m、約30 μ m、約35 μ m、約40 μ m以及約45 μ m和約50 μ m的網(wǎng)?？墒占ㄟ^(guò)網(wǎng)式粗濾器的濾液?；蛘?，可使用離心基本上去除脂肪細(xì)胞、基質(zhì)纖維以及組織碎片。
[0124]圖1A的方法的第四、第五以及第六動(dòng)作(動(dòng)作140、150以及160)分別包括減少紅血球(RBC)、濃縮相關(guān)細(xì)胞以及洗滌細(xì)胞。這三個(gè)動(dòng)作的順序可互換。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞可首先濃縮、洗滌，并且然后減少RBC。在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞可首先洗滌，之后對(duì)其進(jìn)行濃縮。在另一實(shí)施方案中，可同時(shí)洗滌并且濃縮細(xì)胞。濃縮動(dòng)作可有利地在需要較小體積的應(yīng)用中進(jìn)行。例如，經(jīng)常在研究中進(jìn)行培養(yǎng)從脂肪組織分離的細(xì)胞。為在細(xì)胞培養(yǎng)燒瓶中獲得較高的接種細(xì)胞密度，并且為增大培養(yǎng)效率，可濃縮細(xì)胞。分離的細(xì)胞還可用于移植到或注射到人體或動(dòng)物中，其中經(jīng)常需要高的細(xì)胞濃度來(lái)產(chǎn)生較好的結(jié)果。細(xì)胞濃縮還可具有以下優(yōu)勢(shì):基本上去除在先前動(dòng)作中所使用的試劑，例如解離溶液中的酶，所述試劑在移植到動(dòng)物或人患者中時(shí)可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或引起不利作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，可使用微流體裝置來(lái)濃縮相關(guān)細(xì)胞和/或去除紅血球。微流體裝置可被構(gòu)造來(lái)同時(shí)實(shí)現(xiàn)第四、第五和/或第六動(dòng)作。另外，微流體裝置可被構(gòu)造來(lái)去除淋巴細(xì)胞以便降低免疫反應(yīng)的潛力。在另一實(shí)施方案中，濃縮動(dòng)作可使用離心實(shí)現(xiàn)。在另一實(shí)施方案中，濃縮動(dòng)作可使用膜濾器實(shí)現(xiàn)。在另一實(shí)施方案中，濃縮動(dòng)作可使用中空纖維、例如中空纖維膜濾器實(shí)現(xiàn)。在另一實(shí)施方案中，紅血球減少動(dòng)作可使用紅血球溶解溶液、例如氯化銨實(shí)現(xiàn)，在紅血球溶解溶液中，紅血球選擇性地溶解。
[0125]圖1A中所示的實(shí)施方案的第六動(dòng)作(動(dòng)作160)是洗滌相關(guān)細(xì)胞和/或?qū)⑾嚓P(guān)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至需要的緩沖液中?？刹捎秒x心、緩沖液交換和/或透析法?；蛘?，微流體裝置還可被構(gòu)造來(lái)進(jìn)行這一動(dòng)作。這一動(dòng)作進(jìn)一步減少了在先前動(dòng)作中所使用的殘余試劑，并且在相關(guān)細(xì)胞有待用于臨床移植時(shí)可能是需要的。然而，在一些實(shí)施方案中，可略去動(dòng)作140-160。
[0126]在本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案中，一種方法包括預(yù)調(diào)節(jié)脂肪組織、解離脂肪組織以及精制所釋放的細(xì)胞。圖1B示出一般指示為200的這種方法的這個(gè)實(shí)施方案的流程圖。在一個(gè)實(shí)施方案中，脂肪組織預(yù)調(diào)節(jié)動(dòng)作(動(dòng)作210)包括排出廢物流、去除廢物流、去除過(guò)量流體、清洗脂肪組織樣品、洗滌脂肪組織樣品和/或切碎脂肪組織樣品。當(dāng)脂肪組織樣品包含難以用酶消化或解離的大塊時(shí)，切碎可為有利的。脂肪組織預(yù)調(diào)節(jié)動(dòng)作可使用本公開(kāi)中公開(kāi)的用于從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞群的方面和實(shí)施方案實(shí)現(xiàn)。例如，脂肪組織預(yù)調(diào)節(jié)動(dòng)作可包括將脂肪組織樣品保留在第一容器中，而同時(shí)使過(guò)量流體如血液、腫脹溶液或其它體液通過(guò)到達(dá)第二容器。脂肪組織樣品的保留可使用第一容器中的網(wǎng)實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，網(wǎng)的孔徑在約70 μ m與約300 μ m之間，例如約80 μ m、約90 μ m、約100 μ m、約120 μ m、約140 μ m、約170 μ m、約200 μ m或約300 μ m?；蛘撸窘M織樣品的保留可使用檢測(cè)脂肪組織樣品關(guān)于第一容器的位置的檢測(cè)器或傳感器實(shí)現(xiàn)，而不使用第一容器中的網(wǎng)。脂肪組織預(yù)調(diào)節(jié)動(dòng)作可進(jìn)一步包括一次或重復(fù)地添加并去除清洗溶液，以便洗滌脂肪組織樣品。組織預(yù)調(diào)節(jié)還可使用離心來(lái)實(shí)現(xiàn)，其中脂肪組織樣品在離心力下與過(guò)量流體和/或廢物流分離?；蛘?，如果脂肪組織處于對(duì)于解離和精制可接受的條件下，脂肪組織預(yù)調(diào)節(jié)動(dòng)作可省略。
[0127]在一個(gè)實(shí)施方案中，脂肪組織解離動(dòng)作(動(dòng)作220)包括在適于酶消化的溫度下，例如在約32°C與約38°C之間，在解離溶液中孵育脂肪組織樣品，持續(xù)時(shí)間在約3分鐘與20小時(shí)之間，所述解離溶液包含至少一種酶,例如膠原酶、蛋白酶(protease)、蛋白酶(proteinase)、中性蛋白酶、彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、脂酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、釋放酶、DNA酶、脫氧核糖核酸酶、胃蛋白酶或其組合。在另一實(shí)施方案中，脂肪組織解離動(dòng)作包括使超聲波通過(guò)脂肪組織樣品。在脂肪組織解離動(dòng)作過(guò)程中，細(xì)胞從脂肪組織樣品釋放。
[0128]所釋放的細(xì)胞的精制(動(dòng)作230)可包括使用過(guò)濾器、網(wǎng)、中空纖維、抗體、微流體裝置或離心進(jìn)行的細(xì)胞濃縮、細(xì)胞洗滌、細(xì)胞分離(cell separat1n)、細(xì)胞分離(celli so I at i on)、碎片去除、非祀細(xì)胞去除、紅血球減少或動(dòng)作的組合。對(duì)于許多應(yīng)用如護(hù)理點(diǎn)應(yīng)用和現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用來(lái)說(shuō)，可能需要在較短的一段時(shí)間內(nèi)，例如15分鐘、20分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘、90分鐘或120分鐘進(jìn)行本公開(kāi)的整個(gè)方法。
[0129]本文公開(kāi)的用于從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞群的許多動(dòng)作和實(shí)施方案還可用于研究和藥理學(xué)測(cè)試系統(tǒng)中?？蛇M(jìn)行非脂肪細(xì)胞的分離，以用于生理學(xué)、代謝以及功能性研究或用于在藥理學(xué)測(cè)試系統(tǒng)中進(jìn)行藥物測(cè)試。本文公開(kāi)的許多動(dòng)作和實(shí)施方案還可用于移植組織工程中。使用本文公開(kāi)的方法和/或裝置獲得的細(xì)胞可體外培養(yǎng)以形成體外培養(yǎng)的移植用組織?？煞蛛x脂肪來(lái)源的干細(xì)胞以產(chǎn)生功能性細(xì)胞和組織。
[0130]本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案是圖2A中示意性地示出并且一般指示為300的樣品處理裝置。樣品處理裝置300包括樣品調(diào)節(jié)室310和廢物室320。樣品調(diào)節(jié)室310包括用于接收樣品340的第一入口 305，所述樣品例如脂肪抽吸物或來(lái)自吸脂術(shù)的脂肪組織樣品；用于從清洗溶液源350接收清洗溶液的第二入口 315，所述清洗溶液例如緩沖溶液、生理食鹽水溶液等；用于收集調(diào)節(jié)后樣品360的第一出口 325 ;以及連接至廢物容器320的第二出口 335。第二出口 335可包括構(gòu)件345來(lái)打開(kāi)和關(guān)閉調(diào)節(jié)室310與廢物容器320之間的流體連接，所述構(gòu)件例如閥、夾閥、旋塞閥等。樣品調(diào)節(jié)室310允許樣品將它的過(guò)量流體排到廢物容器中，并且使用清洗溶液洗滌。調(diào)節(jié)室可進(jìn)一步包括傳感器，其優(yōu)選地接近第二出口 335，以便檢測(cè)當(dāng)過(guò)量流體或清洗溶液排到廢物容器中時(shí)樣品是否靠近出口。調(diào)節(jié)室可進(jìn)一步包括放置在第一入口 305與第二出口 335之間的粗濾器，所述粗濾器被構(gòu)造來(lái)在樣品洗滌、樣品清洗以及去除過(guò)量流體過(guò)程中保留脂肪組織。在一些實(shí)施方案中，粗濾器可包括過(guò)濾器，所述過(guò)濾器包括孔徑在約30 μ m與約Imm之間，例如約30 μ m、約50 μ m、約70 μ m、約85 μ m、約100 μ m、約 120 μ m、約 140 μ m、約 200 μ m、約 300 μ m、約 500 μ m、約 700 μ m 或約 1_ 的孔。在其它實(shí)施方案中，粗濾器可包括孔徑為約70 μ m至約500 μ m,例如約70 μ m、約100 μ m、約140 μ m、約200 μ m、約300 μ m或500 μ m的孔。粗濾器可包括孔徑為約70 μ m至約200 μ m，例如約80 μ m、約90 μ m、約100 μ m、約120 μ m、約140 μ m、約170 μ m或約200 μ m的網(wǎng)式過(guò)濾器。在另一實(shí)施方案中，粗濾器的孔徑小于脂肪組織片，這樣使得組織片被粗濾器保留下來(lái)。
[0131]清洗溶液可經(jīng)由流量控制裝置330進(jìn)入調(diào)節(jié)室，所述流量控制裝置例如蠕動(dòng)泵，其控制添加至調(diào)節(jié)室的清洗溶液的體積。流量控制裝置可包括至少一個(gè)閥和體積可改變的容器。例如，流量控制裝置可包括旋塞閥370和注射器380，如圖2B示意性地示出。為分配測(cè)量的體積，旋塞閥首先切換至入口與注射器流體連接的位置。拉動(dòng)注射器的活塞以將流體從入口抽入注射器。然后將旋塞閥切換至出口與注射器流體連接的位置。接下來(lái)，推動(dòng)注射器的活塞以經(jīng)由出口將流體分配出注射器。最后，再次切換旋塞閥以將注射器與入口流體連接，從而完成泵送循環(huán)。可重復(fù)泵送循環(huán)直到將所需體積的清洗溶液添加至調(diào)節(jié)室。流量控制裝置還可包括兩個(gè)止回閥CV1、CV2(即允許流體在一個(gè)方向上流動(dòng)的閥)和注射器，如如圖2C示意性地示出。為分配測(cè)量的體積，首先拉動(dòng)注射器的活塞并且然后推動(dòng)，以完成泵送循環(huán)。第一止回閥(CVl)被構(gòu)造來(lái)允許流體從入口流動(dòng)至注射器，并且第二止回閥(CV2)被構(gòu)造來(lái)允許流體從注射器流動(dòng)至出口?？芍貜?fù)泵送循環(huán)，包括拉動(dòng)和推動(dòng)活塞以分別將流體抽入和將流體推出注射器，直到將所需體積的清洗溶液添加至調(diào)節(jié)室。或者，圖2B或圖2C中描繪的流量控制裝置中的注射器可用一個(gè)可膨大和收縮的袋或體積可以受控方式改變的容器替代。
[0132]本公開(kāi)的另一實(shí)施方案是圖2D中示意性地示出并且一般指示為400的樣品處理裝置。樣品處理裝置400包括樣品解離室410和細(xì)胞精制裝置420。解離室包括接收樣品的第一入口 405、從解離溶液源430接收解離溶液的第二入口 415，以及與細(xì)胞精制裝置流體連接的至少一個(gè)出口 425。解離室被構(gòu)造來(lái)將樣品解離成小組成成分，例如單個(gè)細(xì)胞和小細(xì)胞凝塊。解離溶液可包含分解樣品的酶。例如，解離溶液可包含膠原酶、蛋白酶(protease)、蛋白酶(proteinase)、中性蛋白酶、彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、脂酶、胰蛋白酶、釋放酶、DNA酶、脫氧核糖核酸酶、胃蛋白酶或其混合物?？蓪囟瓤刂圃诶缂s37°C，并且解離室中的樣品和流體可混合以便有利于有效的酶反應(yīng)和均一的解離。解離室的一個(gè)實(shí)施方案為柔性袋。袋可揉擦、擠壓、卷起、搖動(dòng)、震動(dòng)、部分?jǐn)D壓并且前后釋放或以其它方式攪拌來(lái)有利于混合。解離溶液還可包含清潔劑，如吐溫20或十二烷基硫酸鈉。當(dāng)使用超聲波來(lái)解離樣品時(shí)，解離溶液可包含有效傳導(dǎo)超聲波的介質(zhì)。解離室可包括粗濾器，例如網(wǎng)或過(guò)濾器。粗濾器可用于將樣品保持在用于有效解離的位置和/或用于從解離的樣品去除大的碎片。在一些實(shí)施方案中，粗濾器可包含過(guò)濾器，所述過(guò)濾器包括孔徑為約30μπι至約1_，例如約30 μ m、約 50 μ m、約 70 μ m、約 85 μ m、約 100 μ m、約 120 μ m、約 140 μ m、約 200 μ m、約 300 μ m、約500 μ m、約700 μ m或約1_的孔。在其它實(shí)施方案中，粗濾器可包括孔徑為約70 μ m至約 500 μ m,例如約 70 μ m、約 100 μ m、約 140 μ m、約 200 μ m、約 300 μ m 或 500 μ m 的孔。粗濾器可包括孔徑為約70 μ m至約200 μ m，例如約80 μ m、約90 μ m、約100 μ m、約120 μ m、約140 μ m、約170 μ m或約200 μ m的網(wǎng)式過(guò)濾器。在另一實(shí)施方案中，粗濾器的孔徑小于脂肪組織片，這樣使得組織被粗濾器保留下來(lái)。
[0133]細(xì)胞精制裝置連接至解離室。在一些實(shí)施方案中，樣品處理裝置進(jìn)一步包括在解離室與細(xì)胞精制裝置之間的閥435。閥可關(guān)閉以用于用解離溶液孵育樣品，并且可打開(kāi)以允許所釋放的細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞精制裝置。
[0134]細(xì)胞精制裝置被構(gòu)造來(lái)從解離室接收所釋放的細(xì)胞并且精制所釋放的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞精制裝置包括經(jīng)由入口 445與解離室流體連接的室、用于收獲精制的細(xì)胞440的出口 455，以及構(gòu)造來(lái)去除解離的樣品中的大碎片的粗濾器。粗濾器可包括孔徑在約10 μ m與約100 μ m之間，例如約10 μ m、約15 μ m、約20 μ m、約25 μ m、約30 μ m、約35 μ m、約40 μ m、約50 μ m、約70 μ m或約100 μ m的過(guò)濾器。粗濾器還可包括孔徑在約20 μ m與約60 μ m之間，例如約20 μ m、約22 μ m、約25 μ m、約30 μ m、約35 μ m、約40 μ m、約50 μ m以及約60 μ m的網(wǎng)。
[0135]本公開(kāi)的另一實(shí)施方案是圖2E中示意性地示出并且一般指示為500的樣品處理裝置。樣品處理裝置500包括第一室510、廢物容器520以及細(xì)胞精制裝置530。如以上所公開(kāi)，細(xì)胞精制裝置可包括網(wǎng)。第一室可充當(dāng)預(yù)調(diào)節(jié)室和解離室，在預(yù)調(diào)節(jié)室中樣品可在解離前進(jìn)行洗滌，在解離室中，樣品可解離成較小的組成成分，例如單個(gè)細(xì)胞或小細(xì)胞聚集體。第一室包括用于接收樣品的第一入口 505和用于從清洗溶液源350接收清洗溶液的第二入口 515。在一些實(shí)施方案中，清洗溶液和解離溶液可經(jīng)由同一入口進(jìn)入第一室。在其它實(shí)施方案中，第一室包括用于從解離溶液源430接收解離溶液的第三入口 525。第一室可進(jìn)一步包括粗濾器，例如網(wǎng)或過(guò)濾器，如以上關(guān)于解離室和調(diào)節(jié)室的段落中所描述。第一室與廢物室和細(xì)胞精制裝置流體連接?？砂ɡ鐘A閥或瓣閥的閥Vl和V2可用于控制流體流量。例如，在樣品預(yù)調(diào)節(jié)過(guò)程中，閥Vl可打開(kāi)以使得過(guò)量流體和清洗溶液能夠從第一室流入廢物容器中。Vl與V2可關(guān)閉以允許在樣品解離過(guò)程中用解離溶液對(duì)樣品進(jìn)行孵育。解離后，V2可打開(kāi)以允許將解離的樣品轉(zhuǎn)移至細(xì)胞精制裝置。
[0136]在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中，在裝載到第一室510之前，將脂肪組織樣品預(yù)加溫至某一溫度，例如37°C。預(yù)加溫作為對(duì)脂肪組織樣品的處理可縮短處理組織樣品所要求的時(shí)間。在本公開(kāi)的其它實(shí)施方案中，使用平均波長(zhǎng)在300nm與700nm之間的光將脂肪組織樣品光激活，然后裝載到第一室510中。光激活可增加組織樣品中細(xì)胞的效能。在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，在裝載到第一室510之前，使用聲波處理脂肪組織樣品，即音波使組織松散，從而致使組織樣品易于解離。
[0137]樣品處理裝置可進(jìn)一步包括如以上所述用于控制進(jìn)入第一室的清洗溶液的流量的流量控制裝置330?？膳c流量控制裝置330相似的流量控制裝置330B也可用于控制注入到第一室中的解離溶液的流量。在一些實(shí)施方案中，解離溶液在注入第一室之前裝載到注射器中。
[0138]應(yīng)理解本文公開(kāi)的樣品處理裝置可具有變化和組合。例如，如圖2F所示，一般指示為500A的樣品處理裝置的一般實(shí)施方案可采用兩個(gè)閥(V1、V2)來(lái)控制第一室、廢物容器以及細(xì)胞精制裝置之間的流體流量。流量控制裝置可包括兩個(gè)止回閥(CV1、CV2)和體積測(cè)量裝置540，例如注射器。解離溶液可經(jīng)由止回閥CV3連接至第一室。
[0139]在圖2G中示意性地示出一般指示為500B的本公開(kāi)的樣品處理裝置的另一實(shí)施方案，其中使用至少3個(gè)旋塞閥(SC1、SC2、SC3)來(lái)控制流體流量。例如，在樣品預(yù)調(diào)節(jié)過(guò)程中，過(guò)量流體和清洗溶液可從第一室轉(zhuǎn)移至廢物容器中。旋塞閥(SC3)可切斷(shut off)退出第一室的流動(dòng)，以允許在樣品解離過(guò)程中用解離溶液孵育樣品。解離后，旋塞閥(SC3)可將第一室連接至細(xì)胞精制裝置，以允許將解離的樣品轉(zhuǎn)移至細(xì)胞精制裝置。
[0140]圖3A示出圖2E中示意性地示出的裝置的實(shí)施方案。所述裝置包括接合在一起以形成多個(gè)室的兩個(gè)塑料片。所述裝置可按流線型、易于使用、安全而且具有成本效益的方式來(lái)有利于本文公開(kāi)的用于脂肪組織處理的方法。室I為可膨大至某一體積的測(cè)量室。所述室包括入口(端口 I)和出口(端口 2)。室I可設(shè)計(jì)來(lái)納入流體，并且分配某一預(yù)定體積的流體，從而控制待通過(guò)入口(端口 3)分配至室2用于脂肪組織處理的流體的體積。端口2和端口 3可通過(guò)一段管線流體連接，所述管線可使用夾閥、瓣閥、旋塞閥、止回閥或一種或多種其它設(shè)閥機(jī)構(gòu)夾緊以使端口 2從端口 3斷開(kāi)流體連接。為操作室1，最開(kāi)始關(guān)掉端口 2與端口 3之間的連接。將流體經(jīng)由端口 I引入室I以完全或部分地使室膨大。然后，使用例如彈簧夾、夾閥、旋塞閥、止回閥或一種或多種其它設(shè)閥機(jī)構(gòu)切斷端口 I。接下來(lái)，打開(kāi)端口 2與端口 3之間的閥以當(dāng)室I收縮時(shí)允許室I中的流體流入室2。室I的收縮可通過(guò)使用重力、通過(guò)虹吸作用或通過(guò)本領(lǐng)域中已知的其它方法通過(guò)外部擠壓和/或壓縮所述室來(lái)完成。室I可定位在高于室2處，以有利于使用重力將流體分配至室2。這一過(guò)程將預(yù)定量的流體轉(zhuǎn)移至室2，通過(guò)室I的膨大體積與收縮體積之間的差異來(lái)確定所述量。如果需要較小體積的流體，室I可部分地壓縮、擠壓和/或夾緊來(lái)控制進(jìn)入和/或退出室I的流體的體積?；蛘?，室I可僅部分地收縮以分配其中的一部分流體。如果需要較大體積，可重復(fù)膨大-收縮過(guò)程數(shù)次直到將所需體積的流體轉(zhuǎn)移至室2。
[0141]室1、端口 I以及端口 2可為圖2B或2C中示意性地示出的流量控制裝置的實(shí)施方案。
[0142]端口 I和端口 2可包括止回閥，所述止回閥還稱為僅分別允許流體進(jìn)入和退出室I的單向閥。測(cè)量和分配設(shè)定體積的流體的動(dòng)作變得非常簡(jiǎn)單:對(duì)室I解壓縮允許流體經(jīng)由端口 I進(jìn)入并且壓縮室I來(lái)經(jīng)由端口 2將流體推出。
[0143]或者，室I可為儲(chǔ)存室，其提供樣品處理所需的預(yù)包裝的溶液。例如，乳酸林格氏溶液、平衡鹽溶液、生理食鹽水溶液、解離溶液、洗滌溶液、清洗溶液、含有乙二胺四乙酸(EDTA)的溶液和/或酶溶液可包裝在室I中作為所述裝置的一部分。
[0144]在另一實(shí)施方案中，測(cè)量室可包括包括活塞的注射器，所述注射器可通過(guò)拉動(dòng)和推動(dòng)活塞來(lái)抽入和/或分配預(yù)界定體積的流體。在另一實(shí)施方案中，測(cè)量室可包括安裝在蠕動(dòng)泵上的柔性管線，其中使用蠕動(dòng)泵控制流體流量。
[0145]室2可為圖2E中示意性地示出的第一室510的實(shí)施方案。室2可為脂肪組織洗滌室，其包括一個(gè)或多個(gè)入口和出口。室2還可充當(dāng)解離室，并且可進(jìn)一步包括至少一個(gè)網(wǎng)，例如包括篩網(wǎng)、半透膜、和/或多孔或微孔膜的過(guò)濾機(jī)構(gòu)。脂肪組織樣品，例如脂肪抽吸物或脂肪的脂肪抽吸物組織片可經(jīng)由入口(端口 4)引入或裝載到室2中。來(lái)自樣品的過(guò)量流體可經(jīng)由接頭I通過(guò)網(wǎng)排入廢物收集室(室3)中?？蓪⑾礈烊芤禾砑又潦?以洗滌和/或清洗樣品?？山?jīng)由室I測(cè)量洗滌溶液并且分配至室2中?？商砑佑靡蕴幚順悠返娜芤阂愿淖儤悠贰？蓪?duì)室2施加混合構(gòu)件以使清洗和洗滌更有效。例如，可揉擦、輕輕擠壓、搖動(dòng)、震動(dòng)、部分?jǐn)D壓并且前后釋放或以其它方式攪拌室2以有利于混合。廢物流可然后排入到廢物收集室(室3)。在混合過(guò)程中可使用設(shè)閥構(gòu)件關(guān)閉室2的出口(接頭I和2)以在排出廢物流之前允許洗滌溶液與樣品之間的徹底混合。可應(yīng)用圖3F中圖解的夾子例如夾子
1、夾子2和/或夾子3來(lái)夾緊各室并且關(guān)閉各室之間的流體連接。洗滌過(guò)程可重復(fù)數(shù)次，例如2、3、4或5次。在洗滌動(dòng)作中，脂肪組織樣品可保留在室2中。對(duì)于包含小塊的脂肪組織樣品，室2可包括網(wǎng)或膜濾器來(lái)有效地保留樣品?？刹⑷攵鄠€(gè)網(wǎng)和/或過(guò)濾器層(網(wǎng)I和網(wǎng)2)來(lái)提供希望的脂肪組織保留。
[0146]洗滌后，可將解離溶液添加至室2，以解離脂肪組織樣品并釋放細(xì)胞?？墒褂眉訜?、冷卻和/或溫度控制系統(tǒng)將室的溫度設(shè)定在某一優(yōu)化的溫度以便有利于樣品解離。例如，所述裝置可放置在孵育器、水浴中和/或放置成與恒溫板相接觸，以便將溫度保持在約37°C用于最佳酶消化。解離溶液可包含一種或多種酶來(lái)分解結(jié)締基質(zhì)、胞外基質(zhì)等。例如，可在37°C下使用膠原酶來(lái)分解膠原纖維。還可使用其它試劑來(lái)用于脂肪組織消化，包括蛋白酶(protease)、蛋白酶(proteinase)、胰蛋白酶、蛋白酶K、溶酶、酶類、溶解溶液、透明質(zhì)酸酶、脂酶、胰蛋白酶、釋放酶、DNA酶、脫氧核糖核酸酶、胃蛋白酶或其混合物。在消化過(guò)程中可關(guān)閉解離室(室2)的出口(接頭I和/或接頭2)?？扇嗖?、輕輕擠壓、搖動(dòng)、震動(dòng)、部分?jǐn)D壓并且前后釋放或以其它方式攪拌室2以有利于混合并且促進(jìn)有效的脂肪組織解離。當(dāng)消化動(dòng)作完成時(shí)，可打開(kāi)接頭2以允許所釋放的細(xì)胞退出解離室。室2中的至少一個(gè)網(wǎng)可用于去除或保留大片的碎片。可應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)包括添加洗滌溶液的連續(xù)的洗滌動(dòng)作(chase wash act),以清洗掉消化后潛在截留在室2中的細(xì)胞。
[0147]圖3A中所示的樣品處理裝置可進(jìn)一步包括碎片去除室(室4)，其可包括網(wǎng)、膜濾器、和/或另一碎片去除機(jī)構(gòu)(例如網(wǎng)3)。可將解離的樣品轉(zhuǎn)移至碎片去除室，其中可從樣品去除大塊、不需要的細(xì)胞如脂肪細(xì)胞和/或碎片。室4還可用作樣品儲(chǔ)存室，其中容納所釋放的細(xì)胞直到進(jìn)一步使用?？山?jīng)由端口 5收集所釋放的細(xì)胞。室4可為圖2E中示意性地示出的細(xì)胞精制裝置530的實(shí)施方案。
[0148]圖3B和3C示出網(wǎng)并入到室4中的實(shí)施方案。網(wǎng)可折疊、夾在兩個(gè)柔性片之間并且焊接、膠接、熱封、或以其它方式融合在一起以形成室4。類似地，網(wǎng)或膜濾器可并入在室2中。圖3D和3E分別包括室2的一部分的分解視圖和截面視圖，其示出室2中可使用一個(gè)或多個(gè)網(wǎng)。室2和/或室4中包括的網(wǎng)可包括沿著流體流動(dòng)通過(guò)室2和/或4的路徑而逐漸變小的孔。例如，網(wǎng)I (圖3D)的標(biāo)稱孔徑可為約100 μ m至約900 μ m，網(wǎng)2的標(biāo)稱孔徑可為約50至約200 μ m,并且網(wǎng)3 (圖3C)的標(biāo)稱孔徑可為約10 μ m至約60 μ m。
[0149]應(yīng)理解本公開(kāi)不限于圖3A-3F中所示的實(shí)施方案的具體構(gòu)造。本公開(kāi)的實(shí)施方案可包括比圖3A-3F中所示的更多或更少的室?？刹捎镁哂胁煌δ艿氖遥⑶疫@些室可被構(gòu)造來(lái)達(dá)成包括一系列具體動(dòng)作的具體任務(wù)。例如，所述室可具有包括但不限于以下的功能:樣品收集、洗滌、清洗、分層、混合、加熱、冷卻、過(guò)濾、消化、儲(chǔ)存、設(shè)閥、體積測(cè)量、泵送、流體轉(zhuǎn)移和操縱、細(xì)胞標(biāo)記、樣品處理、解離、廢物流收集、凝塊去除、碎片去除、溶解、濃縮、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、孵育、雜交、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞擴(kuò)增等。
[0150]使用兩個(gè)塑料片形成圖4中一般圖解為600的本公開(kāi)的樣品處理裝置的另一實(shí)施方案。室I為樣品洗滌和解離室，其包括三個(gè)入口端口(端口 1、端口 2以及端口 3)、網(wǎng)(網(wǎng)I)以及兩個(gè)出口接頭(接頭I和接頭2)。室2為凝塊減少室，其包括入口接頭(接頭2)、出口 /入口接頭(接頭3)以及網(wǎng)(網(wǎng)2)。室3任選地包括網(wǎng)(網(wǎng)3)，其可為用于分離的細(xì)胞和進(jìn)一步碎片去除的儲(chǔ)集器，或?yàn)榧?xì)胞精制室。室4為廢物溶液收集室，其包括與樣品洗滌和解離室(室I)的出口接頭流體連通的入口管線(接頭I)。
[0151]圖5A和5B示出本公開(kāi)的包括兩個(gè)網(wǎng)的室610的另一實(shí)施方案。這兩個(gè)網(wǎng)被構(gòu)造成基本上不重疊。每一個(gè)網(wǎng)折疊并夾在兩個(gè)柔性的外片之間。這個(gè)實(shí)施方案可具有較易于制造的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)橹挥袃蓪泳W(wǎng)必須融合在片之間。
[0152]圖6A和6B示出本公開(kāi)的室620的另一實(shí)施方案，其包括夾在兩個(gè)柔性外片之間的至少一個(gè)未折疊的網(wǎng)。所述網(wǎng)定位在入口端口與出口端口之間，并且被構(gòu)造成使得從入口端口進(jìn)入的流體必須通過(guò)所述網(wǎng)來(lái)到達(dá)出口端口。入口端口和出口端口處于網(wǎng)的相對(duì)偵U。這種構(gòu)型可具有易于制造的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)橹挥幸粚泳W(wǎng)必須密封在兩個(gè)片之間。
[0153]圖7示出本公開(kāi)的室630的另一實(shí)施方案，其包括夾在兩個(gè)柔性外片之間的打褶的網(wǎng)。這種構(gòu)造可具有網(wǎng)面積增加的優(yōu)勢(shì)。
[0154]圖8A和8B示出本公開(kāi)的室640的另一實(shí)施方案，其中網(wǎng)折疊并沿著密封緣密封以在并入到室之前形成囊袋?？裳刂郫B線折疊一片塑料網(wǎng)，例如聚酰胺網(wǎng)，并且使用例如加熱密封或高頻焊接沿著兩個(gè)密封線密封以形成網(wǎng)囊袋。網(wǎng)囊袋然后可定位在兩個(gè)柔性塑料片、例如聚氯乙烯(PVC)片之間，并且使用例如加熱密封或射頻焊接沿著密封緣密封，從而形成室。
[0155]圖9A和9B示出本公開(kāi)的室650的另一實(shí)施方案，其中網(wǎng)折疊、夾在兩個(gè)柔性塑料片之間，并且密封在室中。此處，室和網(wǎng)被構(gòu)造成使得經(jīng)由入口端口進(jìn)入室的樣品可經(jīng)由出口端口 I退出，而不通過(guò)網(wǎng)，而經(jīng)由出口端口 2退出的一部分樣品必須通過(guò)網(wǎng)。網(wǎng)的折疊線大致為豎直的。在另一實(shí)施方案中，折疊線可關(guān)于豎直線成一定角度。
[0156]在本文所公開(kāi)的任何樣品處理裝置的室中可利用圖5A-9B中所圖解的任一個(gè)或多個(gè)網(wǎng)構(gòu)造，例如，在樣品處理裝置500的室2或室4中的一個(gè)或多個(gè)和/或在樣品處理裝置600的室1、室2、和/或室3中的一個(gè)或多個(gè)。
[0157]圖1OA和1B示出在兩個(gè)室之間的包括至少一個(gè)管線段的接頭，所述接頭可包括在本文所公開(kāi)的任何樣品處理裝置實(shí)施方案中。將塑料片切口，并且管線穿過(guò)所述切口從一個(gè)室橋接至另一室。這種構(gòu)造可允許設(shè)閥構(gòu)件接取所述管線。例如，可采用彈簧夾或滑動(dòng)夾子來(lái)開(kāi)啟和關(guān)掉通過(guò)管線的流體連接。管線部分可進(jìn)一步包括軟的且柔性的伸展段(圖1OA和1B中的管線2)，以便有利于可靠的夾緊。這在使用夾閥時(shí)可為有利的。可手動(dòng)、氣動(dòng)或用螺線管致動(dòng)夾閥。當(dāng)需要時(shí)，柔性管線還可有利于蠕動(dòng)泵送。
[0158]本文公開(kāi)的樣品處理裝置的實(shí)施方案可進(jìn)一步包括其它部分，如圖11中圖解的那些(例如，可插入洗滌溶液袋的尖狀物、一個(gè)或多個(gè)彈簧夾、Y形插入部位、尖狀物端口和/或用于連接至注射器的魯爾接頭)，和/或可作為較大系統(tǒng)的組成部分連接至其它模塊。可采用隔膜、注入端口、尖狀物端口、閥、止回閥、管、轉(zhuǎn)接頭、魯爾接頭、陰魯爾鎖、陽(yáng)魯爾鎖、注射器、旋塞閥和/或其它連接機(jī)構(gòu)來(lái)互連本公開(kāi)的實(shí)施方案的部分與其它部分。
[0159]本公開(kāi)的另一實(shí)施方案為圖12中一般圖解為700的樣品制備裝置，其包括樣品解離室(室I)、廢物容器(室2)以及細(xì)胞精制室(室3)。室I可任選地包括第一濾網(wǎng)以有利于樣品洗滌、清洗以及預(yù)調(diào)節(jié)。網(wǎng)包括孔徑在約20μπι與約600μπι之間的孔。對(duì)于處理脂肪抽吸樣品來(lái)說(shuō)，網(wǎng)的孔徑可優(yōu)選地在約40 μ m與約200 μ m之間，例如約40 μ m、約50 μ m、約 60 μ m、約 70 μ m、約 80 μ m、約 90 μ m、約 100 μ m、約 120 μ m、約 140 μ m、約 170 μ m或約200μπι。旋塞閥控制端口 5處的流體連接，所述端口在樣品解離和孵育過(guò)程中可關(guān)閉，在樣品洗滌過(guò)程中可經(jīng)由端口 7連接至室2，并且可經(jīng)由端口 6連接至室3以用于收集所釋放的細(xì)胞。室3可包括第二濾網(wǎng)，其孔徑在約15μπι與約150μπι之間。第二網(wǎng)從解離的樣品去除碎片并且精制所釋放的細(xì)胞，所述細(xì)胞可在端口 8處收集。裝置可進(jìn)一步包括接收樣品的開(kāi)口，例如端口 4 (其可包括尖狀物端口)；接收清洗溶液的入口，例如端口 1(其可包括尖狀物)；以及至少一個(gè)用于接收解離溶液的入口，例如端口 2。
[0160]本公開(kāi)的另一實(shí)施方案為在圖13中一般圖解為800的一種樣品制備裝置,其包括以預(yù)限定模式粘結(jié)在一起以形成樣品解離室(室I)、廢物容器(室2)以及細(xì)胞精制室(室3)的兩個(gè)柔性材料片，例如塑料。室I可包括第一網(wǎng)(網(wǎng)I)以有利于樣品洗滌、清洗以及預(yù)調(diào)節(jié)。室3可包括孔徑小于第一網(wǎng)的孔徑的第二網(wǎng)(網(wǎng)2)。旋塞閥I控制室1、室2以及室3之間的流體連接。室I包括入口端口(端口 I)，其包括可有利于從注射器接收樣品的接頭，所述注射器例如具有導(dǎo)管尖端的注射器。室I進(jìn)一步包括另一端口(端口 2)，其連接至包括旋塞閥2和旋塞閥3的旋塞閥歧管。清洗溶液，例如乳酸林格氏注射液，可經(jīng)由尖狀物連接至樣品制備裝置。注射器I和旋塞閥2 —起可充當(dāng)流量控制裝置，所述流量控制裝置允許限定量的清洗溶液添加至室I。解離溶液可裝載到注射器2中，并且經(jīng)由旋塞閥3添加至樣品制備裝置。解離溶液可以濃縮形式裝載到注射器2中，并且使用清洗溶液重構(gòu)成正常工作濃度。室3包括出口端口，其中可收集所釋放的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，需要增大出口端口處的壓力。室3可以氣密性方式封閉在加壓室(室4)中。室4包括壓力端口，其中可施加加壓的流體，例如壓縮空氣，以通過(guò)室3的柔性片直接對(duì)室3中的流體進(jìn)行加壓。圖13Β圖解室3的實(shí)施方案，并且圖13C示出包括室4的加壓室的實(shí)施方案。通過(guò)在預(yù)限定的位置將兩個(gè)柔性片粘結(jié)在一起來(lái)形成室3(圖13Β)。在所述片中做切口(切口I)，以允許另一片封閉室3并且形成室4。
[0161]本公開(kāi)的另一實(shí)施方案包括下游處理單元(圖14中所圖解的DPU 1000)，其可進(jìn)一步處理、精制、培養(yǎng)、擴(kuò)增和/或分析所處理的脂肪組織和/或所分離的細(xì)胞。下游處理單元可被構(gòu)造來(lái)有利于例如一種或多種以下功能:樣品洗滌、樣品濃縮、樣品分離(sampleseparat1n)、樣品富集、樣品分離(sample isolat1n)、緩沖液交換、樣品標(biāo)記、樣品改變、過(guò)濾、磁性標(biāo)記、磁性分離、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、抗體相互作用、使用抗體進(jìn)行親和捕獲、細(xì)胞成像、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、蛋白制備、蛋白純化、蛋白富集、質(zhì)譜、高效液相色譜、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞揀選、功能測(cè)定、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞擴(kuò)增、細(xì)胞分化、免疫表型分型、橫向流測(cè)定、熒光原位雜交、脫氧核糖核酸(DNA)雜交、核糖核酸(RNA)雜交、脫氧核糖核酸(DNA)反應(yīng)、核糖核酸(RNA)反應(yīng)等。
[0162]下游處理單元可包括微流體單元，所述微流體單元包括至少一個(gè)微流體裝置。微流體裝置可包括至少一個(gè)小于約1mm，例如約0.95mm、約800 μ m、約600 μ m、約500 μ m、約400 μ m、約 300 μ m、約 200 μ m、約 150 μ m、約 100 μ m、約 80 μ m、約 60 μ m、約 50 μ m、約 40 μ m、約30μηι、約20μηι和/或約15 μ m的通道尺寸。微流體裝置還可包括具有至少一個(gè)基本上恒定的深度的通道。例如，微流體裝置可包括約1mm、約800 μ m、約600 μ m、約500 μ m、約400 μ m、約 300 μ m、約 200 μ m、約 150 μ m、約 100 μ m、約 80 μ m、約 60 μ m、約 50 μ m、約 40 μ m、約30 μ m、約20 μ m或約15 μ m深的通道。微流體裝置的通道深度可在標(biāo)稱通道深度的20%內(nèi)。微流體裝置可進(jìn)一步包括基本上在一個(gè)表面上的通道，所述表面可為基本上平坦的或彎曲的。微流體裝置還可包括形成在一個(gè)或多個(gè)平坦表面上的通道。
[0163]微流體裝置可使用微制作、納米制作和/或微加工技術(shù)形成，所述技術(shù)包括但不限于光刻、刻蝕、反應(yīng)性離子刻蝕、深反應(yīng)性離子刻蝕、濕式蝕刻、印記、注塑成型、壓花、軟壓花、立體光刻、成型、軟光刻、陽(yáng)極鍵合、超聲波鍵合、自我組裝、和/或本領(lǐng)域已知的其它制作技術(shù)。
[0164]本公開(kāi)的微流體單元的實(shí)施方案可包括以下各項(xiàng)中所公開(kāi)的裝置:國(guó)際申請(qǐng)PCT/US10/061866、國(guó)際公布 WO 2011/079217 Al、美國(guó)專利號(hào) US 7, 150, 812 B2、美國(guó)專利號(hào)US 7，735，652、美國(guó)專利號(hào)US 8，021，614、美國(guó)專利號(hào)US 8, 186,913 B2、美國(guó)專利申請(qǐng)公布號(hào)US 2012/0063664 Al、美國(guó)專利申請(qǐng)公布號(hào)US 2011/0294187 Al，其出于所有目的通過(guò)引用全部并入本文中，所述裝置采用迪安流、惰性力、離心力、確定性橫向位移、柱陣列、桿陣列、夾緊流、磁性結(jié)構(gòu)、抗體組分、細(xì)胞捕獲部分、蛋白捕獲部分、脫氧核糖核酸(DNA)部分、核糖核酸(RNA)部分、過(guò)濾、切向流過(guò)濾、超聲波聚焦、夾緊流等。
[0165]值得注意的是，本公開(kāi)的一些實(shí)施方案，特別是國(guó)際公布W02011/079217 Al中所公開(kāi)的并入微流體裝置的那些，提供抗嚴(yán)重堵塞和沾污的裝置，嚴(yán)重堵塞和沾污直到現(xiàn)在一直是阻止使用微流體裝置來(lái)用于切向流過(guò)濾消化的脂肪組織的嚴(yán)重問(wèn)題。
[0166]本公開(kāi)的另一實(shí)施方案包括空心纖維單元，以濃縮和/或洗滌分離的細(xì)胞。
[0167]在包括微流體裝置的下游處理單元的另一實(shí)施方案中，微流體裝置洗滌細(xì)胞并且去除不想要的試劑。下游處理單元可包括緩沖溶液入口，以引入緩沖溶液來(lái)洗滌細(xì)胞。細(xì)胞洗滌還可使用設(shè)計(jì)來(lái)進(jìn)行分析的微流體裝置來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0168]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括微流體裝置，所述微流體裝置將下游處理單元的輸出物中的酶濃度降低大于約10倍，例如酶濃度降低約10、約20、約30、約40、約 50、約 70、約 100、約 150、約 200、約 400、約 500、約 750、約 I, 000、約 2，000、約 5，000、約 10，000、約 20，000、約 50，000、約 100，000、約 200，000、約 500，000 或約 I, 000，000 倍。
可實(shí)現(xiàn)所述酶去除的微流體裝置的一個(gè)實(shí)施方案公開(kāi)在國(guó)際公布WO 2011/079217 Al中，其中微流體裝置包括柱，并且采用至少一個(gè)緩沖液流(例如清洗溶液流)來(lái)洗滌細(xì)胞。
[0169]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括微流體裝置，所述微流體裝置將大于89%的樣品解離過(guò)程中引入的酶去除，例如去除了樣品解離過(guò)程中引入的酶的約90 %、約 95 %、約 97 %、約 98 %、約 99 %、約 99.5 %、約 99.8 %、約 99.9 %、約 99.95 %、約 99.98 %、約 99.99 %、約 99.995 %、約 99.998 %、約 99.999 %、約 99.9995 % 或約99.9999% ο
[0170]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括微流體裝置，所述微流體裝置將約100%的樣品解離過(guò)程中引入的酶去除。
[0171]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括微流體裝置，所述微流體裝置提供膠原酶濃度小于約0.lmg/ml,例如為約0.09mg/ml、約0.05mg/ml、約0.03mg/ml、約0.02mg/ml、約 0.0 lmg/ml、約 0.007mg/ml、約 0.005mg/ml、約 0.003mg/ml、約 0.002mg/ml、約 0.00lmg/ml、約 0.0005mg/ml、約 0.0002mg/ml、約 0.000lmg/ml、約 0.00005mg/ml、約0.00002mg/ml、約 0.0000lmg/ml、約 0.00000lmg/ml 或約 0.000000lmg/ml 的輸出物。
[0172]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括微流體裝置，所述微流體裝置提供基本上不含在樣品解離過(guò)程中引入的酶的輸出物。在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括微流體裝置，所述微流體裝置提供不含在樣品解離過(guò)程中引入的酶的輸出物。
[0173]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括微流體裝置，所述微流體裝置提供基本上不含在樣品解離過(guò)程中引入的膠原酶的輸出物。在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括微流體裝置，所述微流體裝置提供不含在樣品解離過(guò)程中引入的膠原酶的輸出物。
[0174]圖15A、15B、15C、15D以及15E中示意性地圖解出一般分別指示為910、920、930、
940以及950的、可在本文公開(kāi)的任一個(gè)或多個(gè)樣品處理裝置中使用的微流體裝置的實(shí)例。
[0175]圖15A示出微流體通道910，其具有細(xì)胞入口、緩沖液入口、細(xì)胞出口以及緩沖液出口。微流體通道的寬度和/或深度如此小(例如約100 μ m)，以使得樣品和緩沖液形成彼此并排流動(dòng)、而無(wú)顯著對(duì)流混合的兩個(gè)層流流動(dòng)流。流動(dòng)速度被配置來(lái)對(duì)不需要的顆粒(例如酶)給予足夠的時(shí)間來(lái)從細(xì)胞流動(dòng)流擴(kuò)散至緩沖液流動(dòng)流。因?yàn)榧?xì)胞遠(yuǎn)大于不需要的顆粒，因此其擴(kuò)散是如此的慢以致它們保留在細(xì)胞流動(dòng)流中。細(xì)胞流和緩沖液流經(jīng)由不同的退出口退出微流體通道，從而基本上去除不需要的顆粒。
[0176]圖15B示出另一微流體通道920，其具有細(xì)胞入口、兩個(gè)緩沖液入口、細(xì)胞出口以及兩個(gè)緩沖液出口。通道和流速被配置來(lái)允許不需要的顆粒從細(xì)胞流擴(kuò)散至緩沖液流，從而基本上去除不需要的顆粒。這種構(gòu)型可具有高的去除效率，因?yàn)橥ㄟ^(guò)兩個(gè)緩沖液流去除不需要的顆粒。
[0177]桿或柱可定位在微流體通道中，例如，如圖15C中所圖解的微流體通道930中所圖解，以便使細(xì)胞和緩沖液流穩(wěn)定、促進(jìn)細(xì)胞擴(kuò)散和/或支撐微流體通道。
[0178]用于透析的微流體裝置可串聯(lián)構(gòu)造以形成一個(gè)級(jí)聯(lián)。圖15D中示出一個(gè)實(shí)例，其中將攜帶不需要的顆粒的緩沖溶液從緩沖液出口 I去除，并且可經(jīng)由緩沖液入口 2引入新鮮的緩沖溶液，以基本上去除殘余的不需要的顆粒。
[0179]圖15E示出微流體裝置950的另一實(shí)施方案，其包括通道和在通道中的桿陣列。引入通道中的流體的流速和通道尺寸設(shè)計(jì)成使得流體流是層流的。通常，在微流體裝置中流體的雷諾數(shù)小于約I時(shí)，出現(xiàn)層流流動(dòng)和層流液體流。桿陣列增加緩沖液流中顆粒的有效擴(kuò)散系數(shù)，并且提高不想要的顆粒(例如酶)從細(xì)胞流的去除效率。
[0180]在一些實(shí)施方案中，用于形成微流體裝置中的緩沖液流的緩沖液是清洗溶液。
[0181]在另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括透析膜。
[0182]圖16中示意性地示出的下游處理單元1000的另一實(shí)施方案包括微流體裝置單元，所述微流體裝置單元包括至少一個(gè)微流體裝置，其濃縮所分離的細(xì)胞；和至少一個(gè)收集儲(chǔ)集器，例如收集袋，其被構(gòu)造來(lái)接收分離的細(xì)胞作為微流體裝置的輸出物。下游處理單元可進(jìn)一步包括連接至所述收集儲(chǔ)集器的注射器。在樣品已經(jīng)使用微流體裝置進(jìn)行處理之后，將輸出物從收集儲(chǔ)集器抽入注射器中。下游處理單元可進(jìn)一步包括廢物儲(chǔ)集器，例如廢物袋。
[0183]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括多個(gè)微流體裝置來(lái)實(shí)現(xiàn)處理大體積的輸出樣品所需要的容量、生產(chǎn)量以及功能。
[0184]流體的轉(zhuǎn)移可使用重力、外部壓力、真空、正壓、負(fù)壓、頭高、泵(例如蠕動(dòng)泵)、構(gòu)造來(lái)擠壓袋的機(jī)構(gòu)、擠壓袋的輥、擠壓袋的板、和/或本領(lǐng)域中已知的其它液體轉(zhuǎn)移機(jī)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，流體可使用注射器來(lái)轉(zhuǎn)移。在另一實(shí)施方案中，流體可使用施加至室的外部空氣壓力來(lái)轉(zhuǎn)移，所述室例如封閉含有細(xì)胞的袋(室3)的室4，如圖13所示。
[0185]在本公開(kāi)的另一實(shí)施方案中，下游處理單元包括用于培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)室。細(xì)胞培養(yǎng)室可使用接頭來(lái)連接，所述接頭允許拆卸細(xì)胞培養(yǎng)室。細(xì)胞培養(yǎng)室可置于孵育器中，其中可優(yōu)化細(xì)胞生長(zhǎng)的溫度和條件，例如在約37°C的溫度下和約5%二氧化碳濃度下。細(xì)胞培養(yǎng)室可進(jìn)一步包含空氣可滲透性材料，例如濾膜或硅酮橡膠膜，從而在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中允許氣體交換。
[0186]如本文公開(kāi)的樣品處理裝置的一個(gè)或多個(gè)室可包括一個(gè)網(wǎng)、多層網(wǎng)、和或一系列網(wǎng)(圖5B)。在一些實(shí)施方案中，用于脂肪組織處理的網(wǎng)的孔徑(例如孔的開(kāi)口的中值或平均尺寸)可在約Iym與約1mm之間,例如約I μ m、約3 μ m、約6 μ m、約10 μ m、約15 μ m、約25 μ m、約 40 μ m、約 70 μ m、約 100 μ m、約 140 μ m、約 300 μ m、約 700 μ m、約 1mm、約 2mm 或約3_。為從脂肪抽吸組織分離非脂肪細(xì)胞，網(wǎng)孔徑可在約ΙΟμπ?與約2mm之間。在一些實(shí)施方案中，可采用約40 μ m、約70μπκ約100 μ m、約140 μ m、約250 μ m和/或約700 μ m孔徑的網(wǎng)，例如聚酰胺(尼龍)網(wǎng)。
[0187]本公開(kāi)的樣品處理裝置的另一實(shí)施方案包括一個(gè)或多個(gè)室，所述一個(gè)或多個(gè)室包括兩個(gè)網(wǎng)，第二網(wǎng)在第一網(wǎng)的下游流體連通，其中第二網(wǎng)的孔顯著小于第一網(wǎng)的孔。
[0188]本公開(kāi)的樣品處理裝置的另一實(shí)施方案包括一個(gè)或多個(gè)室，所述一個(gè)或多個(gè)室包括兩個(gè)膜濾器。第二膜濾器可在第一膜濾器的下游流體連通。第二膜濾器的孔可顯著小于第一膜濾器的孔。
[0189]本公開(kāi)的樣品處理裝置的另一實(shí)施方案包括一個(gè)或多個(gè)室，所述一個(gè)或多個(gè)室包括徑跡蝕刻膜濾器。
[0190]如本文公開(kāi)的樣品處理裝置或其子部件的實(shí)施方案可使用包括但不限于以下的材料來(lái)構(gòu)建:熱塑性塑料、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、丙烯酸塑料(PMMA)、賽璐珞、醋酸纖維素、環(huán)烯烴共聚物(COC)、環(huán)烯烴共聚物(COP)、乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)、乙烯-乙烯醇(EVOH)、氟塑料(PTFE，以及FEP、PFA、CTFE、ECTFE、ETFE)、離聚物、液晶聚合物(LCP)、聚甲醛(Ρ0Μ或乙縮醛)、聚丙烯酸酯(丙烯酸塑料)、聚丙烯腈(PAN或丙烯腈)、聚酰胺(PA或尼龍)、聚酰胺-酰亞胺(PAI)、聚芳基醚酮(PAEK或酮)、聚丁二烯(PBD)、聚丁烯(PB)、聚對(duì)苯二甲酸丁二酯(PBT)、聚已內(nèi)酯(PCL)、聚氯三氟乙烯(PCTFE)、聚對(duì)苯二甲酸乙二酯(PET)、聚對(duì)苯二甲酸亞環(huán)己基二亞甲基酯(PCT)、聚碳酸酯(PC)、聚羥基烷酸酯(PHA)、聚酮、聚酯、聚乙烯(PE)、聚醚醚酮(PEEK)、聚醚酮酮(PEKK)、聚醚酰亞胺(PEI)、聚醚砜(PES)、氯化聚乙烯(CPE)、聚酰亞胺(PI)、聚乳酸(PLA)、聚甲基戊烯(PMP)、聚苯醚(PPO)、聚苯硫醚(PPS)、聚鄰苯二甲酰胺(PPA)、聚丙烯(PP)、聚苯乙烯(PS)、聚砜(PSU)、聚對(duì)苯二甲酸三亞甲基酯(PTT)、聚氨酯(TO)、聚醋酸乙烯酯(PVA)、聚氯乙烯(PVC)、聚偏二氯乙烯(PVDC)、苯乙烯-丙烯腈(SAN)和/或丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)。對(duì)于醫(yī)學(xué)應(yīng)用，柔性塑料片如聚氯乙烯(PVC)、聚氨酯(TO)、乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)、聚酰胺(PA或尼龍)可用作片材料。在一些實(shí)施方案中，如本文公開(kāi)的品處理裝置可包括粘結(jié)在一起并在之間界定一個(gè)或多個(gè)室的兩個(gè)柔性片。在其它實(shí)施方案中，如本文公開(kāi)的樣品處理裝置可包括柔性片，所述柔性片粘結(jié)至剛性或半剛性材料(例如厚塑料片和/或以上所公開(kāi)的材料中的任一種或多種)并且在柔性片與剛性或半剛性材料之間界定一個(gè)或多個(gè)室。
[0191]在一些實(shí)施方案中，片材料的厚度可在約0.1mm與約0.8mm之間，例如約0.1mm、約
0.15_、約 0.2_、約 0.25_、約 0.3_、約 0.35_、約 0.4_、約 0.5_、約 0.6_、約 0.7mm 或約0.8mm。在其它實(shí)施方案中，片材料的厚度可在約0.2mm與約0.4mm之間，例如約0.2mm、約 0.25_、約 0.3_、約 0.35mm 或約 0.4_。
[0192]膜濾器和/或網(wǎng)的材料可包括但不限于醋酸纖維素(CA)、玻璃微纖維(GMF)、聚醚砜(PES)、聚丙烯(PP)、再生纖維素(RC)、聚酰胺(PA或尼龍)、聚四氟乙烯(PTFE)和/或聚偏二氟乙烯(PVDF)。
[0193]在一些實(shí)施方案中，網(wǎng)材料的厚度可在約10 μ m與約1,000 μ m之間，例如約10 μ m、約 15 μ m、約 20 μ m、約 25 μ m、約 30 μ m、約 40 μ m、約 50 μ m、約 60 μ m、約 70 μ m、約 80 μ m、約 90 μ m、約 100 μ m、約 120 μ m、約 150 μ m、約 175 μ m、約 200 μ m、約 250 μ m、約300 μ m、約 400 μ m、約 500 μ m、約 600 μ m、約 700 μ m、約 800 μ m、約 900 μ m 或約 1mm。在其它實(shí)施方案中，網(wǎng)材料的厚度可在約50 μ m與約300 μ m之間，例如約50 μ m、約60 μ m、
70 μ m、80 μ m、取 90 μ m、取 100 μ m> 110 μ m、取 125 μ m、取 140 μ m、取 160 μ m、取180 μ m、約 200 μ m、約 220 μ m、約 250 μ m、約 275 μ m 或約 300 μ m。
[0194]可使用標(biāo)準(zhǔn)塑料制造技術(shù)構(gòu)建本公開(kāi)的實(shí)施方案，所述技術(shù)包括但不限于塑料焊接、熱封、注塑成型、壓花、膠水粘結(jié)、紫外光(UV)固化的粘合劑粘結(jié)、溶劑粘結(jié)、熱氣體焊接、徒手焊接、速度尖端焊接、擠出焊接、接觸焊接、熱板焊接、高頻焊接、射頻焊接、注塑焊接、超聲波焊接、摩擦焊接、旋轉(zhuǎn)焊接、激光焊接和/或溶劑焊接。
[0195]本公開(kāi)的實(shí)施方案，例如圖2A-2G中任一圖示意性地示出的樣品處理裝置，可使用熱塑性片的高頻焊接來(lái)構(gòu)建。焊接模可由金屬制成，例如鋁、黃銅或不銹鋼?？烧郫B的網(wǎng)片和管線件放置在焊接模上的兩個(gè)熱塑性片之間。然后使用另一焊接模夾住所述熱塑性片。當(dāng)對(duì)焊接模施加壓力、溫度以及射頻電力時(shí)，形成室。為用聚酰胺網(wǎng)密封聚氯乙烯(PVC)片，可施加在約25°C與約120°C之間，例如約25°C、約50°C、約60°C、約70°C、約80°C、約90。。、約100。。、約110°C或約120°C的溫度，在約1psi與約600psi之間，例如約lOps1、約20ps1、約 30ps1、約 40ps1、約 50ps1、約 60ps1、約 80ps1、約 10ps1、約 150ps1、約 200ps1、約300ps1、約400ps1、約500psi或約600psi的壓力，以及在約300W與1kW之間，例如約 300W、約 500W、約 600W、約 700W、約 800W、約 900W、約 lkW、約 1.2kW、約 1.5kW、約 2kW、約
2.5kW、約3kW、約4kW、約5kW、約6kW、約7kW、約8kW、約9kW或約1kW的射頻電力。射頻電力可施加的持續(xù)時(shí)間在約0.5秒與約I分鐘之間，例如約0.5秒、約I秒、約2秒、約3秒、約4秒、約5秒、約6秒、約7秒、約8秒、約10秒、約12秒、約15秒、約20秒、約30秒、約40秒、約50秒以及約60秒。可以按相同或不同的強(qiáng)度將射頻電力施加數(shù)次，以形成可靠的密封。對(duì)于醫(yī)學(xué)應(yīng)用，可在受控清潔的環(huán)境中制造所述裝置，并且使用標(biāo)準(zhǔn)滅菌技術(shù)進(jìn)行滅菌，所述技術(shù)包括但不限于Y輻照、環(huán)氧乙烷(EO)滅菌以及紫外線(UV)輻照。
[0196]在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中，樣品制備裝置是無(wú)菌的。在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中，樣品制備裝置是單次使用的。另外，在本公開(kāi)的一些實(shí)施方案中，樣品制備裝置是提供隔離的環(huán)境的實(shí)質(zhì)上保護(hù)性障壁，其中樣品被保護(hù)免于例如通過(guò)未過(guò)濾的空氣流與外部環(huán)境和/或操作人員直接物理接觸或流體接觸，從而最小化或避免污染和感染風(fēng)險(xiǎn)。
[0197]應(yīng)理解，本公開(kāi)的實(shí)施方案可充當(dāng)保護(hù)性障壁，所述保護(hù)性障壁基本上減少或消除脂肪組織樣品與周圍環(huán)境之間的任何直接物理接觸、流體連接和/或空氣流連接。可與樣品直接物理接觸、流體連接和/或未過(guò)濾的空氣流連接的本文公開(kāi)的裝置的實(shí)施方案的任何部分可以是無(wú)菌的和/或單次使用的。應(yīng)理解，本文公開(kāi)的裝置的實(shí)施方案可基本上保護(hù)樣品免于污染風(fēng)險(xiǎn)并且保護(hù)操作人員免于感染風(fēng)險(xiǎn)。
[0198]應(yīng)理解，本公開(kāi)實(shí)現(xiàn)極易于使用的脂肪組織處理裝置的設(shè)計(jì)。還應(yīng)理解，本公開(kāi)可顯著簡(jiǎn)化制造工藝并且降低所述脂肪組織處理裝置的制造成本。應(yīng)進(jìn)一步理解，本公開(kāi)的實(shí)施方案使得脂肪組織樣品能夠使用基本上將樣品與周圍實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院環(huán)境隔離的裝置，基本上無(wú)污染和感染風(fēng)險(xiǎn)安全地進(jìn)行處理。
實(shí)施例
[0199]實(shí)施例1.從人脂肪抽吸組織分離非脂肪細(xì)胞
[0200]使用包括圖1中所描繪的動(dòng)作的方法和如圖3A和11所示的裝置處理人脂肪抽吸物。所述裝置約25cm寬且約40cm長(zhǎng)。柔性塑料片由聚氯乙烯(PVC)制成，且網(wǎng)由聚酰胺(尼龍)制成。網(wǎng)1、2以及3分別具有約140 μ m、約70 μ m以及約35 μ m的標(biāo)稱孔徑。使用腫脹吸脂術(shù)從許可的供體收集約40ml的人脂肪抽吸物，并且在從收集開(kāi)始24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行處理。運(yùn)送樣品并且在處理之前儲(chǔ)存在4°C下。
[0201]首先，應(yīng)用夾子I和2來(lái)關(guān)閉接頭I和2(圖3F)。將約10ml的脂肪抽吸物經(jīng)由尖狀物端口(圖11)添加至所述裝置。打開(kāi)夾子2以允許包含血液和腫脹溶液的過(guò)量流體在重力下排出至室3中。在基本上去除過(guò)量流體后，關(guān)閉夾子2并且打開(kāi)彈簧夾I以允許約50ml的乳酸林格氏溶液進(jìn)入測(cè)量室(室I)。關(guān)閉彈簧夾I并且打開(kāi)彈簧夾2。使用兩個(gè)平板擠壓室I以將乳酸林格氏溶液轉(zhuǎn)移至室2。重復(fù)這個(gè)流體測(cè)量和轉(zhuǎn)移過(guò)程直到將約10ml的乳酸林格氏溶液添加至室2。對(duì)室2使用輕輕揉擦來(lái)混合乳酸林格氏溶液與脂肪抽吸物樣品，從而洗滌樣品。打開(kāi)夾子2以允許廢物流排出。此處的這個(gè)洗滌動(dòng)作進(jìn)行三次。
[0202]通過(guò)關(guān)閉夾子I和2并且將解離溶液從Y形插入部位(圖11)添加至室I中來(lái)開(kāi)始組織解離動(dòng)作。解離溶液包含溶解在20ml乳酸林格氏溶液中的200mg的膠原酶和50mg的DNA酶I。將更多的乳酸林格氏溶液引入室I以稀釋解離溶液。然后，將解離溶液轉(zhuǎn)移至室2。再次將乳酸林格氏溶液引入室I以洗滌室1，并且將殘余解離溶液轉(zhuǎn)移至室2。在組織解離動(dòng)作過(guò)程中，將約10ml的乳酸林格氏溶液添加至室2。將裝置置于37°C的孵育器中并且頻繁揉擦，以有效混合組織樣品與解離溶液。組織解離動(dòng)作進(jìn)行約45分鐘至60分鐘。
[0203]解離后，打開(kāi)夾子I以允許所釋放的細(xì)胞進(jìn)入碎片去除室(圖3A的室4)。隨后打開(kāi)夾子2以允許樣品通過(guò)網(wǎng)3。在這一動(dòng)作過(guò)程中，基本上去除組織碎片和脂肪細(xì)胞。
[0204]然后，在重力下將出自室4的溶液進(jìn)料至圖17中所圖解并且公開(kāi)在國(guó)際申請(qǐng)PCT/US10/061866中的微流體裝置1100，所述國(guó)際申請(qǐng)出于所有目的通過(guò)引用全部并入本文中。所述微流體裝置包括布置在基板的平坦表面上的約110個(gè)模塊。各模塊包括約900個(gè)構(gòu)造成四排的柱。微流體通道的深度為約30 μ m。
[0205]圖18A和18B中示出微流體裝置的輸出物。濃縮的非脂肪細(xì)胞基本上收集在有核細(xì)胞產(chǎn)物部分中(圖18A)。與輸入物相比，有核細(xì)胞產(chǎn)物部分的體積減少約8倍。然后用吖啶橙(2mg/l)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，并且使用熒光顯微鏡成像。圖像示出脂肪細(xì)胞基本上不存在于微流體裝置的產(chǎn)品輸出物中，并且非脂肪有核細(xì)胞基本上收集在有核細(xì)胞部分中。圖像還示出細(xì)胞處于良好形態(tài)并且產(chǎn)物輸出物基本上不含破壞的細(xì)胞。
[0206]進(jìn)一步表征使用公開(kāi)的方法和裝置分離的細(xì)胞，用于使用ADAM MC自動(dòng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行總核細(xì)胞計(jì)數(shù)和附著的活的核細(xì)胞計(jì)數(shù)。室4的輸出物具有每ml處理的脂肪抽吸物約6.0X 15個(gè)總核細(xì)胞。使用補(bǔ)充有10%胎牛血清(FBS)的a-MEM作為用于附著的活的核細(xì)胞計(jì)數(shù)的培養(yǎng)基。對(duì)室4的輸出物進(jìn)行取樣并在37°C下、在培養(yǎng)基中、在細(xì)胞培養(yǎng)室(例如細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)燒瓶)培養(yǎng)3天。3天后，棄去培養(yǎng)基，并且使用達(dá)爾勃克磷酸鹽緩沖生理食鹽水溶液洗滌細(xì)胞培養(yǎng)室。然后，使用胰蛋白酶使附著至培養(yǎng)室的細(xì)胞從室表面釋放，持續(xù)3分鐘。附著的活的核細(xì)胞計(jì)數(shù)為每ml處理的脂肪抽吸物約
1.5X105 個(gè)。
[0207]實(shí)施例2.—種用于使用樣品處理袋裝置來(lái)從人脂肪抽吸組織分離非脂肪細(xì)胞的方法
[0208]使用如圖13所描繪的樣品處理袋裝置來(lái)處理人脂肪抽吸物。所述裝置包括樣品解離室(室I)、廢物室(室2)以及細(xì)胞精制室(室3)。裝置約24cm寬、約36cm長(zhǎng)，并且由兩塊各約0.3_厚的聚氯乙烯(PVC)片制成。樣品解離室和細(xì)胞精制室包括第一尼龍網(wǎng)(網(wǎng)I)和第二尼龍網(wǎng)(網(wǎng)2)。第一網(wǎng)的孔徑為約125 μ m，并且第二網(wǎng)的孔徑為約25 μ m。第一網(wǎng)的孔徑或者可在約70 μ m與約160 μ m之間，例如約70μπκ約80μπκ約90μπκ約100 μ m、約 110 μ m、約 120 μ m、約 130 μ m、約 140 μ m、約 150 μ m 或約 160 μ m。第二網(wǎng)的孔徑或者可在約20 μ m與約50 μ m之間，例如約20μπκ約22μπκ約25μπκ約30μπκ約35 μ m、約40 μ m或約50 μ m。
[0209]使用腫脹吸脂術(shù)從許可的供體收集人脂肪抽吸物，并且在從收集開(kāi)始6小時(shí)內(nèi)進(jìn)行處理。運(yùn)送樣品并且在處理之前儲(chǔ)存在4°C下。
[0210]首先，將旋塞閥I設(shè)定在連接室I和室2的位置處。將包含10mg膠原酶、10mg透明質(zhì)酸酶以及20，000U脫氧核糖核酸酶的解離溶液裝載至注射器2中。使用尖狀物將樣品處理袋裝置連接至包含乳酸林格氏注射液的清洗溶液袋。
[0211]使用具有導(dǎo)管尖端的注射器將約75ml的脂肪抽吸物樣品從端口 I注入室I。
[0212]應(yīng)用動(dòng)作來(lái)清潔脂肪抽吸物樣品。為開(kāi)始洗滌循環(huán)，將旋塞閥I設(shè)定在關(guān)閉位置，以將室I從室2和3斷開(kāi)流體連接。使用注射器I和旋塞閥2作為流量控制裝置將約10ml的乳酸林格氏注射液注入室I，所述流量控制裝置使用以下系列的動(dòng)作來(lái)進(jìn)行工作:(a)切換旋塞閥2以將清洗溶液連接至注射器I ; (b)將清洗溶液抽入注射器I ; (c)切換旋塞閥2以將注射器I連接至室I ; (d)將清洗溶液從注射器I注入室I?？芍貜?fù)所述序列直到將所需體積的溶液添加至解離室。
[0213]然后，揉擦室I以便混合清洗溶液與樣品，并且切換旋塞閥I以將過(guò)量流體(即廢物溶液)排出至室2中。排出后，第一洗滌循環(huán)完成。洗滌循環(huán)重復(fù)兩次。
[0214]洗滌動(dòng)作可包括一個(gè)或多個(gè)洗滌循環(huán)，例如一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)循環(huán)。
[0215]洗滌后，將解離溶液添加至室I。還將約10ml的清洗溶液添加至室I。然后在37°C下孵育樣品處理袋裝置，持續(xù)約60分鐘的孵育時(shí)間。在此時(shí)間過(guò)程中揉擦室I以混合樣品與解離溶液。在一些實(shí)施方案中，還可使用其它孵育時(shí)間，例如約15分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約40分鐘、約50分鐘、約75分鐘、約90分鐘或約120分鐘。
[0216]孵育后，從樣品釋放的個(gè)別細(xì)胞通過(guò)旋塞閥I進(jìn)入室3，而大的組織碎片由網(wǎng)I捕獲并留在室I中。室3中的網(wǎng)2進(jìn)一步將大的脂肪細(xì)胞和碎片從解離的樣品去除。然后，在室3的出口端口收集非脂肪細(xì)胞，包括周細(xì)胞、脂肪衍生的干細(xì)胞和祖細(xì)胞。
[0217]為濃縮所釋放的細(xì)胞和去除的殘余紅細(xì)胞和碎片，然后，使在樣品處理袋裝置的室3的出口端口收集的釋放的細(xì)胞運(yùn)行通過(guò)如國(guó)際公布WO 2011/079217 Al中所公開(kāi)的第一微流體裝置。所述微流體裝置包括布置在基板的表面上的73個(gè)模塊。各模塊包括約1，300個(gè)構(gòu)造成四排的柱。微流體裝置包括基本上相同深度(介于約35 μ m與約50 μ m之間)的通道。在另一實(shí)施方案中，微流體裝置了包括深度在約30 μ m與約80 μ m之間，例如約 30 μ m、約 35 μ m、約 40 μ m、約 45 μ m、約 50 μ m、約 60 μ m、約 70 μ m 或約 80 μ m 的通道。將在微流體裝置的輸出端處的細(xì)胞濃縮約3倍。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，微流體裝置可用于將細(xì)胞濃縮大于約2.5倍，例如約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約8倍、約10倍、約12倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約40倍、約50倍、約60倍、約80倍、約100倍或約125倍。
[0218]為去除酶，通過(guò)國(guó)際公布WO 2011/079217 Al中公開(kāi)的第二微流體裝置處理細(xì)胞。第二微流體裝置包括布置在基板的表面上的83個(gè)模塊。各模塊包括約900個(gè)構(gòu)造成四排的柱。將清洗溶液流引入各模塊，并且將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至清洗溶液流中，與酶分離。
[0219]應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)來(lái)測(cè)量第二微流體裝置后膠原酶的殘余量。結(jié)果示出膠原酶濃度減少1，000倍，并且精制的細(xì)胞含有小于0.00lmg/ml的膠原酶。
[0220]因此雖然已描述了至少一個(gè)實(shí)施方案的多個(gè)方面，應(yīng)理解本領(lǐng)域的技術(shù)人員可容易想到各種改變、修改、組合以及改進(jìn)。此類改變、修改、組合以及改進(jìn)旨在為本公開(kāi)的一部分，并且旨在處于本公開(kāi)的精神和范圍內(nèi)。因此，前述說(shuō)明和圖僅為示例性的。
【權(quán)利要求】
1.一種用于從脂肪組織樣品中分離非脂肪細(xì)胞的設(shè)備，所述設(shè)備包括: 第一材料片； 粘結(jié)至所述第一材料片的第二材料片；以及 界定在所述第一材料片與所述第二材料片之間的多個(gè)室，所述多個(gè)室包括: 樣品解離室，其包括入口和出口 ； 廢物收集室，其包括與所述樣品解離室的所述出口流體連通的入口 ；以及 細(xì)胞精制室，其包括與所述樣品解離室流體連通的入口，以及出口。
2.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述樣品解離室進(jìn)一步包括網(wǎng)式過(guò)濾器，所述網(wǎng)式過(guò)濾器包括孔徑在70 μ m與300 μ m之間的孔。
3.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其進(jìn)一步包括網(wǎng)式過(guò)濾器，所述網(wǎng)式過(guò)濾器包括在所述細(xì)胞精制室中、包括孔徑在20μπ?與50μπ?之間的孔。
4.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述樣品解離室進(jìn)一步包括第一網(wǎng)式過(guò)濾器，所述網(wǎng)式過(guò)濾器包括具有第一孔徑的孔，并且其中所述細(xì)胞精制室進(jìn)一步包括第二網(wǎng)式過(guò)濾器，所述第二網(wǎng)式過(guò)濾器包括具有第二孔徑的孔，其中所述第二孔徑小于所述第一孔徑。
5.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其進(jìn)一步包括控制所述樣品解離室、所述廢物收集室以及所述細(xì)胞精制室之間的流體連接的構(gòu)件。
6.如權(quán)利要求5所述的設(shè)備，其中控制流體連接的所述構(gòu)件包括旋塞閥。
7.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其進(jìn)一步包括流量控制裝置，所述流量控制裝置被構(gòu)造來(lái)將清洗溶液和解離溶液中的至少一種引入到所述樣品解離室中，并且具有與所述樣品解離室流體連通的出口。
8.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其進(jìn)一步包括用于對(duì)所述樣品解離室和所述細(xì)胞精制室中的一個(gè)施加壓力的構(gòu)件。
9.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其進(jìn)一步包括下游處理設(shè)備，所述下游處理設(shè)備與所述細(xì)胞精制室的所述出口流體連通并且包括至少一個(gè)微流體裝置，所述微流體裝置被構(gòu)造來(lái)將從所述細(xì)胞精制室輸出的流體分成第一溶液和第二溶液，所述第一溶液具有第一濃度的一種或多種相關(guān)細(xì)胞，所述第二溶液具有小于所述第一溶液的濃度的所述一種或多種相關(guān)細(xì)胞，其中所述相關(guān)細(xì)胞包括從脂肪組織樣品分離的非脂肪細(xì)胞。
10.一種無(wú)菌且基本上隔離的脂肪組織處理系統(tǒng)，其包括: 組織處理室，其包括入口、出口，以及至少一個(gè)網(wǎng)式過(guò)濾器，所述網(wǎng)式過(guò)濾器設(shè)置在所述組織處理室的所述入口與所述組織處理室的所述出口之間； 廢物收集室，其與所述組織處理室包括在同一封閉空間中，所述廢物收集室包括與所述組織處理室的所述出口流體連通的入口 ；以及 碎片去除室和樣品收集室中的一個(gè)，所述碎片去除室包括碎片去除機(jī)構(gòu)，所述樣品收集室與所述組織處理室包括在同一封閉空間中，并且與所述組織處理室流體連通。
11.一種在組織處理系統(tǒng)中處理脂肪組織樣品的方法，所述方法包括: 將待處理的脂肪組織樣品通過(guò)第一室的入口端口引入到第一室中； 處理所述第一室中的所述脂肪組織樣品；以及 將細(xì)胞通過(guò)所述第一室的出口、通過(guò)第二室的入口從所述第一室轉(zhuǎn)移至所述第二室中，所述第二室與所述第一室包括在同一封閉空間中。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中處理所述脂肪組織樣品包括解離所述脂肪組織樣品O
13.如權(quán)利要求11所述的方法，其中處理所述脂肪組織樣品包括從所述第一室中的所述脂肪組織樣品去除過(guò)量流體。
14.如權(quán)利要求11所述的方法，其中處理所述脂肪組織樣品包括使用清洗溶液洗滌所述第一室中的所述脂肪組織樣品。
15.如權(quán)利要求11所述的方法，其中處理所述脂肪組織樣品包括使用清洗溶液洗滌所述第一室中的所述脂肪組織樣品，并且使用包含至少一種酶的解離溶液解離所述第一室中的所述脂肪組織樣品。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述解離溶液包含膠原酶。
17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述解離溶液包含膠原酶、脫氧核糖核酸酶以及透明質(zhì)酸酶。
18.如權(quán)利要求15所述的方法，其中使用解離溶液解離所述脂肪組織樣品在約37°C下進(jìn)行。
19.如權(quán)利要求11所述的方法，其進(jìn)一步包括使用包括在所述第二室中的網(wǎng)式過(guò)濾器去除碎片。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述網(wǎng)式過(guò)濾器的孔徑在15微米與100微米之間。
21.如權(quán)利要求11所述的方法，其進(jìn)一步包括將所述樣品保留在所述第一室中，并且將廢物流轉(zhuǎn)移通過(guò)包括在所述第一室中的網(wǎng)式過(guò)濾器和所述第一室的第一出口、通過(guò)第三室的入口進(jìn)入所述第三室中，所述第三室與所述第一室包括在同一封閉空間中。
22.如權(quán)利要求11所述的方法，其進(jìn)一步包括使用微流體裝置富集非脂肪細(xì)胞群。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述非脂肪細(xì)胞包括干細(xì)胞。
24.如權(quán)利要求11所述的方法，其進(jìn)一步包括從所述組織處理系統(tǒng)收獲細(xì)胞。
25.如權(quán)利要求11所述的方法，其進(jìn)一步包括在下游處理設(shè)備中處理所述細(xì)胞，所述下游處理設(shè)備與所述第二室的出口流體連通并且包括至少一個(gè)微流體裝置，所述微流體裝置被構(gòu)造來(lái)將所述細(xì)胞分成第一溶液和第二溶液，所述第一溶液具有第一濃度的非脂肪細(xì)胞，所述第二溶液具有小于所述第一溶液的濃度的非脂肪細(xì)胞。
26.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述收獲的細(xì)胞為血管基質(zhì)部分細(xì)胞。
【文檔編號(hào)】C12N5/07GK104302760SQ201280068472
【公開(kāi)日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2012年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月7日
【發(fā)明者】L·R·黃, 施冰如, 廖智菁 申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人工業(yè)技術(shù)研究院, 妍芳生技開(kāi)發(fā)股份有限公司