專利名稱：一種生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)，特別是一種生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
應(yīng)用發(fā)酵法生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白作為飼料，在國內(nèi)外已有較多報(bào)道，部分加工工藝較為成熟，如用假絲酵母(Candida),釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等作為發(fā)酵菌種等為原料生產(chǎn)的單細(xì)胞蛋白報(bào)道較多。但以甲醇為主要碳源生產(chǎn)單細(xì)胞的報(bào)道還不多，目前國內(nèi)外生產(chǎn)甲醇蛋白的方法主要有細(xì)菌發(fā)酵法和酵母發(fā)酵法，細(xì)菌法包括英國的ICI法。德國的Hoechst-Uhde法和瑞典的Norprotein法酵母菌種生產(chǎn)法包括日本的MGC法，法國的 IFP 法和美國的 Philips Petroleum 法(Zheng GH, 2002. Methanol proteinproduction technology. M-Sized Nitrogenous Fertilizer Progress, 2:12-15)。除ICI法工業(yè)化生產(chǎn)外，我國部分研究單位公布的實(shí)驗(yàn)室小試生產(chǎn)甲醇蛋白方法多是利用酵母菌生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白。但生產(chǎn)實(shí)踐表明，利用原有蛋白配方，出現(xiàn)了蛋白產(chǎn)量低，含鹽分大，保證不了產(chǎn)品質(zhì)量的問題，因此生產(chǎn)甲醇蛋白的配方(組合物)亟待改進(jìn)和創(chuàng)新。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供創(chuàng)新的一種生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基，可有效解決蛋白產(chǎn)量低，含鹽分大，保證不了產(chǎn)品質(zhì)量的問題。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，根據(jù)生產(chǎn)蛋白質(zhì)的實(shí)踐，并經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，之所以出現(xiàn)蛋白產(chǎn)量低、含鹽分大，根本問題在于生產(chǎn)甲醇蛋白的配方(組合物)不盡合理，特別是用量的配伍上缺乏有效性，因此科學(xué)研究、分析和實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明組合物采用由以下組分質(zhì)量濃度85% 磷酸(H3PO4)24. 5-25. 5ml、硫酸鈣(CaSO4 ·2Η20)0· 85-0. 88g、硫酸鉀(K2SO4) 17-17. 8g、硫酸鎂(MgSO4 · 2H20) 15. 5-16. 08g、氫氧化鉀(KOH) 3. 5-4. Og、甘油 42_44g、1-苯基 ~5~ 巰基四氮唑(PMTl) 3. 5-3. 8ml，加水至IOOOml組成。本發(fā)明組方科學(xué)合理，使用效果好，可有效解決提高蛋白產(chǎn)量，克服甲醇蛋白鹽分含量大，質(zhì)量得不到保證的問題，是甲醇蛋白生產(chǎn)上的創(chuàng)新。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。實(shí)施例1
本發(fā)明在具體實(shí)施中，由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸25. 3ml、硫酸鈣0. 87g、硫酸鉀
17.5g、硫酸鎂15. 7g、氫氧化鉀3. 98g、甘油43g、1-苯基-5-巰基四氮唑3. 6ml，加水至IOOOrnl 組成。實(shí)施例2
本發(fā)明在具體實(shí)施中，也可由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸24. 5ml、硫酸鈣0. 85g、硫酸鉀17g、硫酸鎂15. 5g、氫氧化鉀3. 5g、甘油42g、l-苯基-5-巰基四氮唑3. 5ml，加水至IOOOml 組成。實(shí)施例3
本發(fā)明在具體實(shí)施中，還可由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸25. 5ml、硫酸鈣O. 88g、硫酸鉀17. 8g、硫酸鎂16. 08g、氫氧化鉀4g、甘油44g、l-苯基-5-巰基四氮唑3. 8ml,加水至IOOOml 組成。實(shí)施例4
本發(fā)明在具體實(shí)施中，還可由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸24. 8ml、硫酸I丐O. 86g、硫酸鉀17. lg、硫酸鎂16g、氫氧化鉀3. 7g、甘油43g、l-苯基-5-巰基四氮唑3. 7ml，加水至IOOOml 組成。實(shí)施例5
本發(fā)明在具體實(shí)施中，也可由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸25ml、硫酸鈣O. 87g、硫酸鉀17. 3g、硫酸鎂15. 9g、氫氧化鉀3. 8g、甘油43. 5g、l_苯基_5_巰基四氮唑3. 6ml，加水至IOOOml 組成。上述各組分均可從商業(yè)途徑得到，為公知技術(shù)，本發(fā)明的貢獻(xiàn)在于將它們科學(xué)合理的組合在一起，構(gòu)成新的生產(chǎn)甲醇蛋白的培養(yǎng)基組合物。本發(fā)明培養(yǎng)基用于生產(chǎn)甲醇蛋白質(zhì)量好，節(jié)約原料，有效提高甲醇蛋白的產(chǎn)量，并經(jīng)實(shí)際應(yīng)用得到了有效證明，有關(guān)資料如下(在以下的實(shí)際應(yīng)用過程中，除本發(fā)明的培養(yǎng)基是創(chuàng)新之外，其余均為現(xiàn)有技術(shù)):
一、固體斜面的制作
用電子天平稱取重量計(jì)蛋白胨(北京奧博星)2%，酵母膏(北京奧博星)1%，葡萄糖(北京奧博星)2%，瓊脂粉2%，加水至100%，攪拌均勻后，在爐子上煮沸，成蛋白胨培養(yǎng)基。用IOml移液槍取5-8ml蛋白胨培養(yǎng)基加入試管并用塞子蓋好，每7支一捆，用四層報(bào)紙包好，放入121°C的高壓滅菌鍋里滅菌20分鐘，取出冷卻至60°C左右，在無菌操作臺中擺成斜面(培養(yǎng)基傾斜后不能超過試管的1/2)，冷卻后成固體斜面培養(yǎng)基，待用；
二、活化斜面
取出放在4°C冰箱保存的巴斯德畢赤酵母(巴斯德畢赤酵母為已有菌種，如中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏號CCTCC N0:M2012342的巴斯德畢赤酵母，保藏時(shí)間2012年9月12日)，在無菌操作臺中，酒精燈旁，用取樣環(huán)刮取一環(huán)菌種，并在上述固體斜面培養(yǎng)基上輕輕地畫曲線，成活化好的菌種斜面，把活化好的菌種斜面放入30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，取出待用；
三、一級種子培養(yǎng)
在無菌操作臺中將活化好的斜面種子，用取樣環(huán)刮取幾環(huán)接種到裝有150ml YH)液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中(YPD培養(yǎng)基配方為北京奧博星的酵母膏1%，葡萄糖2%，蛋白胨2%，加水至100%組成，充分溶解后，裝瓶滅菌)，瓶口用8層紗布包好，30°C搖床振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速200rpm，培養(yǎng)24-30小時(shí)，得到一級種子。四、二級種子培養(yǎng)
一級種子利用火焰接種法通過接種口接入50升發(fā)酵罐中即為二級種子液發(fā)酵溫度% 30 0C，通風(fēng)比1:1. 5-2，罐壓 O. 05MPa，PH5. 0-5. 5，轉(zhuǎn)速 150rpm，培養(yǎng) 24 小時(shí)，(二級培養(yǎng)液BSM由二水硫酸鈣0.2-0. 4g，硫酸鉀8-10g，七水硫酸鎂6_8g，85%磷酸15_20ml，甘油36-44g，加水至IOOOml組成)，培養(yǎng)結(jié)束后即為二級種子液，必要時(shí)，按上述方法，可繼續(xù)培養(yǎng)三級種子液、四級種子液……，以滿足生產(chǎn)對種子的需要。五、五噸發(fā)酵罐生產(chǎn)甲醇蛋白
在發(fā)酵罐內(nèi)加入5噸本發(fā)明培養(yǎng)基(試劑)，每IOOOml試劑中加入微量元素溶液3-5ml(微量元素溶液配方五水硫酸銅14-18g，碘化鉀O. 07-0. lg，一水硫酸錳4-6g，二水鑰酸鈉
O.1-0. 2g，硼酸O. 1-0. 2g，六水合氯化鈷l_3g，氯化鋅36-44g，七水合硫酸亞鐵65_79g，濃硫酸4-6ml充分溶解，加水至IOOOml制成)，將上述一級種子液(或二級、三級種子液……)接入50升發(fā)酵罐中(接種量以5%為宜)罐內(nèi)甘油消耗完，溶氧以曲線形式再次持續(xù)升高時(shí)，開始向罐內(nèi)流加甲醇，甲醇流加量控制在5-6克/ (升.小時(shí))即每小時(shí)每升管內(nèi)液體量流加甲醇5-6g，調(diào)節(jié)通氣量，保持罐內(nèi)溶氧在30%以上，最大流加量達(dá)到10-12g/(L*h)，發(fā)酵過程中，每16小時(shí)補(bǔ)加微量元素溶液，每次流加2升，發(fā)酵72-84小時(shí)后，取樣測發(fā)酵液的濕重達(dá)到300g/L，發(fā)酵結(jié)束，該發(fā)酵液用常規(guī)方法生產(chǎn)甲醇蛋白，經(jīng)實(shí)際測量和計(jì)算，所生產(chǎn)的甲醇蛋白質(zhì)量好，鹽分度得到了有效降低，只是原甲醇蛋白鹽分含量的20%，蛋白產(chǎn)量增加了 10%以上，而且節(jié)約原料30-50%，在商業(yè)上取得了巨大的成功，而且大大減少了廢棄物對環(huán)境的污染，經(jīng)濟(jì)和 社會效益巨大。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸 24. 5-25. 5ml、硫酸鈣 O. 85-0. 88g、硫酸鉀 17-17. 8g、硫酸鎂 15. 5-16. 08g、氫氧化鉀3. 5-4. 0g、甘油42-44g、l-苯基-5-巰基四氮唑3. 5-3. 8ml，加水至IOOOml組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸25. 3ml、硫酸鈣O. 87g、硫酸鉀17. 5g、硫酸鎂15. 7g、氫氧化鉀3. 98g、甘油43g、l-苯基-5-巰基四氮唑3. 6ml，加水至IOOOml組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸24. 5ml、硫酸鈣O. 85g、硫酸鉀17g、硫酸鎂15. 5g、氫氧化鉀3. 5g、甘油42g、1-苯基-5-巰基四氮唑3. 5ml，加水至IOOOml組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸25. 5ml、硫酸鈣O. 88g、硫酸鉀17. 8g、硫酸鎂16. 08g、氫氧化鉀4g、甘油44g、1-苯基-5-巰基四氮唑3. 8ml，加水至IOOOml組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸24. 8ml、硫酸鈣O. 86g、硫酸鉀17. lg、硫酸鎂16g、氫氧化鉀3. 7g、甘油43g、1-苯基-5-巰基四氮唑3. 7ml，加水至IOOOml組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸25ml、硫酸鈣O. 87g、硫酸鉀17. 3g、硫酸鎂15. 9g、氫氧化鉀3. 8g、甘油43. 5g、1-苯基-5-巰基四氮唑3. 6ml，加水至IOOOml組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及生產(chǎn)甲醇蛋白的發(fā)酵培養(yǎng)基，可有效解決蛋白產(chǎn)量低，含鹽分大，保證不了產(chǎn)品質(zhì)量的問題，其解決的技術(shù)方案是，采用由以下組分質(zhì)量濃度85%磷酸24.5-25.5ml、硫酸鈣0.85-0.88g、硫酸鉀17-17.8g、硫酸鎂15.5-16.08g、氫氧化鉀3.5-4.0g、甘油42-44g、1-苯基-5-巰基四氮唑3.5-3.8ml，加水至1000ml組成，本發(fā)明組方科學(xué)合理，使用效果好，可有效解決提高蛋白產(chǎn)量，克服甲醇蛋白鹽分含量大，質(zhì)量得不到保證的問題，是甲醇蛋白生產(chǎn)上的創(chuàng)新。
文檔編號C12N1/16GK103060211SQ20131000165
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月5日
發(fā)明者喬國厚, 王蘭甫, 茍萬曉, 胡元森, 張寅 , 曹敏, 樊崇, 張國杰, 許宗浩, 衛(wèi)紅偉, 田亞鵬, 朱廣有, 王霞 申請人:義馬煤業(yè)集團(tuán)煤生化高科技工程有限公司