Slc24a5基因突變體及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及分離的編碼SLC24A5突變體的核酸、分離的多肽、篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法、篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)以及用于篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的試劑盒。其中，分離的編碼SLC24A5突變體的核酸，與SEQ?ID?NO：1相比，具有選自下列的至少一種突變：c.591G>A和c.1361insT。通過(guò)檢測(cè)這些突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測(cè)生物樣品是否易感眼皮膚白化病。
【專利說(shuō)明】SLC24A5基因突變體及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及SLC24A5基因突變體及其應(yīng)用。具體地，本發(fā)明涉及分離的編碼SLC24A5突變體的核酸、分離的多肽、篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法、篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)以及用于篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]眼皮膚白化病(OCA)是一種異質(zhì)的常染色體隱性遺傳病，在全世界的流行率約為1:17000。此病表現(xiàn)為皮膚、頭發(fā)和眼的黑色素減少或完全喪失，通常伴隨著畏光、斜視、中毒或嚴(yán)重的視覺(jué)缺陷、眼球震顫等眼科癥狀。目前，已知的人類OCA的致病基因有非綜合征型 OCA 基因(TYR, 0CA2, TYRPl 和 SLC45A2)和綜合征型 OCA 基因(HPSl, AP3B1, HPS3, HPS4, HPS5, HPS6, DTNBPI, BL0C1S3, PLDN, LYST, MY05A, RAB27A 和 MLPH)，但仍有多個(gè)眼皮膚白化病患者可能由其他的未知基因致病。
[0003]因而，目前對(duì)眼皮膚白化病的研究仍有待深入。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出人類眼皮膚白化病的新的致病基因及其突變。
[0005]本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列工作而完成的:發(fā)明人通過(guò)全外顯子組測(cè)序結(jié)合Sanger驗(yàn)證的方法確定了眼皮膚白化病的新的致病基因及致病突變。
[0006]根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的編碼SLC24A5突變體的核酸。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，與SEQ ID NO:1相比，該核酸具有選自下列的至少一種突變:c.591G>A和c.1361insT。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，發(fā)明人確定了多個(gè)SLC24A5基因的突變體，這些突變體與眼皮膚白化病的發(fā)病密切相關(guān)，從而通過(guò)檢測(cè)這些突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測(cè)生物樣品是否易感眼皮膚白化病。
[0007]根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種分離的多肽。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，與SEQ ID N0:2相比，該分離的多肽具有選自下列的至少一種突變:P.W197X和p.L454Ffs31X。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，該多肽是由前述分離的編碼SLC24A5突變體的核酸編碼的。通過(guò)檢測(cè)生物樣品中是否表達(dá)該多肽，可以有效地檢測(cè)生物樣品是否易感眼皮膚白化病。
[0008]根據(jù)本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提出了一種篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法包括以下步驟:從生物樣品提取核酸樣本；確定核酸樣本的核酸序列；該核酸樣本的核酸序列或其互補(bǔ)序列與SEQ ID NO:1相比，具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變是生物樣品易感眼皮膚白化病的指示。通過(guò)根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法，可以有效地篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品。
[0009]根據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提出了一種篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)包括:核酸提取裝置，該核酸提取裝置用于從生物樣品提取核酸樣本；核酸序列確定裝置，該核酸序列確定裝置與核酸提取裝置相連，用于對(duì)核酸樣本進(jìn)行分析，以便確定核酸樣本的核酸序列；判斷裝置，該判斷裝置與核酸序列確定裝置相連，以便基于核酸樣本的核酸序列或其互補(bǔ)序列與SEQ ID NO:1相比，是否具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變，判斷生物樣品是否易感眼皮膚白化病。利用該系統(tǒng)，能夠有效地實(shí)施前述篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法，從而可以有效地篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提出了一種用于篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該用于篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的試劑盒包括:適于檢測(cè)SLC24A5基因突變體的試劑，其中與SEQ ID NO:1相比，SLC24A5基因突變體具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變。利用根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例的試劑盒，能夠有效地篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品。
[0011]本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過(guò)本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012]本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中:
[0013]圖1:顯示了根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)及其組成部分的示意圖，其中，A為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)的示意圖，B為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的核酸提取裝置的示意圖，C為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的核酸序列確定裝置的示意圖；
[0014]圖2:顯示了根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的一個(gè)非綜合征型OCA (0CA6)患者家系的家系圖譜；
[0015]圖3:顯示了圖2所示的非綜合征型OCA (0CA6)患者家系中先證者及其哥哥的臨床診斷結(jié)果圖；
[0016]圖4:顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，對(duì)圖2所示的非綜合征型OCA (0CA6)患者家系中先證者及其父母和哥哥的SLC24A5基因突變位點(diǎn)c.1361insT和c.591G>A的Sanger測(cè)序驗(yàn)證峰圖；
[0017]圖5:顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，圖2所示的非綜合征型OCA (0CA6)患者家系中先證者及其父母和哥哥，以及家系外正常人的頭發(fā)真黑素測(cè)定結(jié)果；
[0018]圖6:顯示了免疫印跡法測(cè)定的HPS突變體小鼠模型pa、ru、印和pe，以及野生對(duì)照B6的SLC24A5蛋白穩(wěn)態(tài)水平結(jié)果；
[0019]圖7:顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，圖2所示的非綜合征型OCA (0CA6)患者家系中先證者及其哥哥的皮膚組織病理學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號(hào)表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過(guò)參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0021]SLC24A5基因突變體
[0022]根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的編碼SLC24A5突變體的核酸。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，與SEQ ID NO:1相比，該核酸具有選自下列的至少一種突變:c.591G>A和c.1361insT，優(yōu)選地，該核酸同時(shí)具有c.591G>A和c.1361insT突變。在本文中所使用的表達(dá)方式“編碼SLC24A5突變體的核酸”，是指與編碼SLC24A5突變體的基因相對(duì)應(yīng)的核酸物質(zhì)，即核酸的類型不受特別限制，可以是任何包含與SLC24A5突變體的編碼基因相對(duì)應(yīng)的脫氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。此外，需要說(shuō)明的是，“c.591G>A”表示cDNA序列的第591位堿基由G突變?yōu)锳 ;“c.1361insT”表示在cDNA序列的第1361位堿基后插入T，而cDNA序列的第1354位堿基至第1361位堿基均為T，因此該突變也可以被表示為c.1354insT、c.1355insT….或c.1360insT,由此，在本文中，c.1361insT 突變可以表示 c.1354insT、c.1355insT…..或 c.1361insT 突變。
[0023]根據(jù)本發(fā)明 的一個(gè)具體示例，前面所述的編碼SLC24A5突變體的核酸為DNA。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，發(fā)明人確了多個(gè)SLC24A5基因的突變體，這些突變體與眼皮膚白化病的發(fā)病密切相關(guān)，從而通過(guò)檢測(cè)這些突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測(cè)生物樣品是否易感眼皮膚白化病，也可以通過(guò)檢測(cè)這些突變體在生物體中是否存在，可以有效地預(yù)測(cè)生物體是否易感眼皮膚白化病。
[0024]這些編碼SLC24A5突變體的核酸，是本申請(qǐng)的發(fā)明人通過(guò)全外顯子組測(cè)序結(jié)合Sanger驗(yàn)證的方法，針對(duì)患者樣本進(jìn)行測(cè)序，確定的眼皮膚白化病的新的致病基因。
[0025]需要說(shuō)明的是，野生型SLC24A5基因的cDNA序列如下所示:
[0026]ATGCAGACAAAAGGGGGCCAAACATGGGCGAGAAGGGCTCTGTTGCTCGGCATC CTGTGGGCCACTGCACATCTGCCTCTCTCAGGGACCTCCCTGCCCCAACGTCTCCCAA GGGCCACAGGAAATAGCACCCAATGTGTTATTTCTCCATCATCGGAGTTTCCCGAAGG GTTTTTCACGAGACAGGAGCGCAGAGATGGAGGCATCATAATCTATTTCCTAATTATC GTTTACATGTTCATGGCCATATCTATTGTCTGTGATGAATACTTCCTACCCTCCCTGGA AATCATCAGTGAATCCCTTGGATTGTCTCAGGATGTTGCAGGCACAACTTTCATGGCA GCGGGCAGTTCAGCTCCTGAATTAGTTACTGCTTTCCTAGGTGTATTTATCACAAAGG GAGATATTGGCATTAGCACCATCCTTGGATCTGCAATTTATAATCTCCTTGGCATCTGT GCTGCCTGTGGTTTGCTATCTAATACGGTCTCAACACTATCATGTTGGCCCCTATTCAG AGACTGTGCAGCGTACACAATTAGTGCAGCAGCAGTTCTTGGTATAATATATGACAAC CAAGTTTACTGGTATGAAGGGGCTTTACTGCTTTTGATATATGGATTGTATGTTTTGGT GCTGTGTTTTGACATTAAAATTAACCAATATATTATAAAGAAATGCAGTCCTTGCTGC GCCTGTCTTGCCAAAGCTATGGAGAGAAGTGAACAACAGCCACTGATGGGCTGGGAA GATGAAGGTCAACCATTCATTCGTCGGCAATCAAGAACTGATAGTGGAATATTTTATG AAGATTCTGGCTACTCTCAGCTCTCTATAAGTTTACATGGCCTTAGTCAGGTTTCTGAA GATCCACCAAGTGTTTTCAACATGCCTGAAGCAGACTTAAAAAGAATTTTTTGGGTAT TATCCCTTCCTATTATTACATTACTTTTTCTAACCACACCAGATTGTAGAAAAAAGTTT TGGAAAAACTACTTTGTGATAACCTTTTTCATGTCTGCAATATGGATATCCGCATTTAC ATATATCCTGGTTTGGATGGTCACAATAACTGGGGAAACACTAGAAATTCCCGATACA GTAATGGGCCTTACTTTATTAGCAGCAGGAACAAGCATACCAGACACAATTGCAAGT GTGTTGGTTGCAAGAAAAGGGAAAGGAGATATGGCTATGTCTAACATCGTGGGATCC AATGTGTTTGATATGTTGTGCCTTGGTATTCCATGGTTTATTAAAACTGCATTTATAAA TGGATCAGCTCCTGCAGAAGTAAACAGCAGAGGACTAACTTACATAACCATCTCTCTC AACATTTCAATTATTTTTCTTTTTTTAGCAGTTCACTTCAATGGCTGGAAACTAGACAG AAAGTTGGGAATAGTCTGCCTATTATCATACTTGGGGCTTGCTACATTATCAGTTCTAT ATGAACTTGGAATTATTGGAAATAATAAAATAAGGGGCTGTGGAGGTTGA (SEQID NO:1),
[0027]其編碼的氨基酸序列如下所示:
[0028]MQTKGGQTWARRALLLGILWATAHLPLSGTSLPQRLPRATGNSTQCVISPSSEFPEGFF TRQERRDGGIIIYFLIIVYMFMAISIVCDEYFLPSLEIISESLGLSQDVAGTTFMAAGSSAPEL VTAFLGVFITKOHGISTILGSAIYNLLGICAACGLLSNTVSTLSCWPLFRDCAAYTISAAAV LGllYDNQVYffYEGALLLLIYGLYVLVLCFDIKINQYIIKKCSPCCACLAKAMERSEQQPL MGWEDEGQPFIRRQSRTDSGIFYEDSGYSQLSISLHGLSQVSEDPPSVFNMPEADLKRIFff VLSLPIITLLFLTTPDCRKKFffKNYFVITFFMSAIffISAFTYILVWMVTITGETLEIPDTVMGLTLLAAGTSIPDTIASVLVARKGKGDMAMSNIVGSNVFDMLCLGIPWFIKTAFINGSAPAEV NSRGLTYITISLNISIIFLFLAVHFNGWKLDRKLGIVCLLSYLGLATLSVLYELGIIGNNKIRG CGG (SEQ ID NO:2)。
[0029]發(fā)明人通過(guò)對(duì)一名OCA患者進(jìn)行外顯子組測(cè)序和Sanger驗(yàn)證，鑒定出SLC24A5是非綜合征型OCA的一個(gè)新的致病基因，并從該患者身上鑒定出兩個(gè)致病突變:c.591G>A和c.1361insT。需要說(shuō)明的是，在該患者的皮膚黑色素細(xì)胞中，可發(fā)現(xiàn)不成熟黑素體的明顯增多和成熟黑素體數(shù)目的偏低，但由于沒(méi)有觀察到血小板致密顆粒的缺損，故可將該患者的病癥排除在Hermansky-Pudlak綜合征(HPS)-—種著名的綜合征型OCA之外。此外,在帶有BL0C-1和BL0C-2缺陷型的HPS突變小鼠身上，SLC24A5蛋白穩(wěn)態(tài)水平下降，表明SLC24A5是一個(gè)新的非綜合征型OCA基因，而且SLC24A5轉(zhuǎn)運(yùn)體是由HPS蛋白復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)至成熟黑素體中。因此，發(fā)明人確定SLC24A5是非綜合征型眼皮膚白化病(在本中有時(shí)也稱為“0CA6”)的新的致病基因。
[0030]進(jìn)一步，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在SLC24A5基因突變體中同時(shí)出現(xiàn)c.591G>A和c.1361insT突變時(shí)，則眼皮膚白化病的易感性更高。通過(guò)檢測(cè)這些具有多個(gè)突變位點(diǎn)的SLC24A5基因突變體在生物樣品中是否存在，可以進(jìn)一步有效地檢測(cè)生物樣品是否易感眼皮膚白化病，也可以通過(guò)檢測(cè)這些突變體在生物體中是否存在，可以有效地預(yù)測(cè)生物體是否易感眼皮膚白化病。
[0031]根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種分離的多肽。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，與SEQ ID N0:2相比，該分離的多肽具有選自下列的至少一種突變:P.W197X和p.L454Ffs31X，優(yōu)選地，該多肽同時(shí)具有p.W197X和p.L454Ffs31X突變。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，該多肽是由前述分離的編碼SLC24A5突變體的核酸編碼的。其中，需要說(shuō)明的是，發(fā)生在第6號(hào)外顯子上的c.591G>A突變被預(yù)測(cè)為無(wú)義突變(p.W197X)，突變體的氨基酸序列為:
[0032]MQTKGGQTWARRALLLGILWATAHLPLSGTSLPQRLPRATGNSTQCVISPSSEFPEGFF TRQERRDGGIIIYFLIIVYMFMAISIVCDEYFLPSLEIISESLGLSQDVAGTTFMAAGSSAPEL VTAFLGVFITKGDIGISTILGSAIYNLLGICAACGLLSNTVSTLSCWPLFRDCAAYTISAAAV LGIIYDNQVY*(SEQ ID NO:3);而發(fā)生在第9號(hào)外顯子上的插入突變c.1361insT導(dǎo)致生成截?cái)嗟鞍?p.L454Ffs31X),突變體的氨基酸序列為:
[0033]MQTKGGQTWARRALLLGILWATAHLPLSGTSLPQRLPRATGNSTQCVISPSSEFPEGFF TRQERRDGGIIIYFLIIVYMFMAISIVCDEYFLPSLEIISESLGLSQDVAGTTFMAAGSSAPEL VTAFLGVFITKOHGISTILGSAIYNLLGICAACGLLSNTVSTLSCWPLFRDCAAYTISAAAV LGllYDNQVYffYEGALLLLIYGLYVLVLCFDIKINQYIIKKCSPCCACLAKAMERSEQQPL MGWEDEGQPFIRRQSRTDSGIFYEDSGYSQLSISLHGLSQVSEDPPSVFNMPEADLKRIFff VLSLPIITLLFLTTPDCRKKFffKNYFVITFFMSAIffISAFTYILVWMVTITGETLEIPDTVMGLTLLAAGTSIPDTIASVLVARKGKGDMAMSNIVGSNVFDMLCLGIPWFIKTAFINGSAPAEV NSRGLTYITISLNISIIFLFFSSSLQWLETRQKVGNSLPIIILGACYIISSI*(SEQ ID NO:4)，并且，利用 PROVEAN 算法(可參見http://provean.jcv1.0rg,通過(guò)參照將其全文并入本文)計(jì)算可知，上述兩個(gè)截短體蛋白都被預(yù)測(cè)為對(duì)SLC24A5轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能有害。通過(guò)檢測(cè)生物樣品中是否表達(dá)該多肽，可以有效地檢測(cè)生物樣品是否易感眼皮膚白化病，也可以通過(guò)檢測(cè)這些多肽在生物體中是否存在，可以有效地預(yù)測(cè)生物體是否易感眼皮膚白化病。
[0034]篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法
[0035]根據(jù)本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提出了一種篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法可以包括以下步驟:[0036]首先，從生物樣品提取核酸樣本。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，生物樣品的類型并不受特別限制，只要從該生物樣品中能夠提取到反映生物樣品SLC24A5基因是否存在突變的核酸樣本即可。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，生物樣品可以為人體的任何組織。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，優(yōu)選地，生物樣品為選自人體血液、皮膚、毛發(fā)和肌肉的至少一種。由此，可以方便地進(jìn)行取樣和檢測(cè)，從而能夠進(jìn)一步提高篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的效率。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，這里所使用的術(shù)語(yǔ)“核酸樣本”應(yīng)做廣義理解，其可以是任何能夠反映生物樣品中SLC24A5基因是否存在突變的樣本，例如可以是從生物樣品中直接提取的全基因組DNA，也可以是該全基因組中包含SLC24A5基因編碼序列的一部分，可以是從生物樣品中提取的總RNA，也可以是從生物樣品中提取的mRNA。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述核酸樣本為全基因組DNA。由此，可以擴(kuò)大生物樣品的來(lái)源范圍，并且可以同時(shí)對(duì)生物樣品的多種信息進(jìn)行確定，從而能夠提高篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的效率。另外，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，針對(duì)采用RNA作為核酸樣本，從生物樣品提取核酸樣本可以進(jìn)一步包括:從生物樣品提取RNA樣本，優(yōu)選RNA樣本為mRNA ；以及基于所得到的RNA樣本，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得cDNA樣本，所得到的cDNA樣本構(gòu)成核酸樣本。由此，可以進(jìn)一步提高利用RNA作為核酸樣本篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的效率。
[0037]接下來(lái)，在得到核酸樣本之后，可以對(duì)核酸樣本進(jìn)行分析，從而能夠確定所得到核酸樣本的核酸序列。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，確定所得到核酸樣本的核酸序列的方法和設(shè)備并不受特別限制。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，可以通過(guò)測(cè)序方法，確定核酸樣本的核酸序列。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，可以用于進(jìn)行測(cè)序的方法和設(shè)備并不受特別限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，可以采用第二代測(cè)序技術(shù)，也可以采用第三代以及第四代或者更先進(jìn)的測(cè)序技術(shù)。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，可以利用選自Hiseq2000、S0LiD、454和單分子測(cè)序裝置的至少一種對(duì)核酸序列進(jìn)行測(cè)序。由此，結(jié)合最新的測(cè)序技術(shù),針對(duì)單個(gè)位點(diǎn)可以達(dá)到較高的測(cè)序深度，檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性大大提高，因而能夠利用這些測(cè)序裝置的高通量、深度測(cè)序的特點(diǎn)，進(jìn)一步提高對(duì)核酸樣本進(jìn)行檢測(cè)分析的效率。從而，能夠提高后續(xù)對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí)的精確性和準(zhǔn)確度。由此，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，確定核酸樣本的核酸序列可以進(jìn)一步包括:首先，針對(duì)所得到的核酸樣本，構(gòu)建核酸測(cè)序文庫(kù)；以及對(duì)所得到的核酸測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序，以便獲得由多個(gè)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測(cè)序結(jié)果。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，可以采用選自HiSeq2000、S0LiD、454和單分子測(cè)序裝置的至少一種對(duì)所得到的核酸測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序。另外，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，可以對(duì)核酸樣本進(jìn)行篩選，富集目標(biāo)區(qū)域序列即SLC24A5基因的c.591G>A和c.1361insT突變位點(diǎn)所在區(qū)域，該篩選富集可以在構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)之前，構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)過(guò)程中，或者構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)之后進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，針對(duì)核酸樣本，構(gòu)建核酸測(cè)序文庫(kù)進(jìn)一步包括:利用SLC24A5基因突變位點(diǎn)特異性引物，對(duì)核酸樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增；以及針對(duì)所得到的擴(kuò)增產(chǎn)物，構(gòu)建核酸測(cè)序文庫(kù)。由此，可以通過(guò)PCR擴(kuò)增，富集SLC24A5基因的c.591G>A和c.1361insT突變位點(diǎn)所在區(qū)域，從而能夠進(jìn)一步提高篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的效率
[0038]關(guān)于針對(duì)核酸樣本，構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)的方法和流程，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)不同的測(cè)序技術(shù)進(jìn)行適當(dāng)選擇，關(guān)于流程的細(xì)節(jié)，可以參見測(cè)序儀器的廠商例如Illumina公司所提供的規(guī)程，例如參見 Illumina 公司 Multiplexing Sample Preparation Guide(Part#1005361;Feb2010)或 Paired-End SamplePrep Guide (Part#1005063 ;Feb2010)，通過(guò)參照將其并入本文。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，從生物樣品提取核酸樣本的方法和設(shè)備，也不受特別限制，可以采用商品化的核酸提取試劑盒進(jìn)行。
[0039]需要說(shuō)明的是，在這里所使用的術(shù)語(yǔ)“核酸序列”應(yīng)作廣義理解，其可以是在對(duì)核酸樣本進(jìn)行測(cè)序得到的測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行組裝后，得到的完整的核酸序列信息，也可以是直接采用通過(guò)對(duì)核酸樣本進(jìn)行測(cè)序所得到的測(cè)序數(shù)據(jù)(Reads)作為核酸序列，只要這些核酸序列中含有對(duì)應(yīng)SLC24A5的編碼序列即可。[0040]最后，在確定核酸樣本的核酸序列之后，將所得到的核酸樣本的核酸序列與SEQID NO:1的序列相比對(duì)。如果在所得到的核酸序列中具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變，則指示生物樣品易感眼皮膚白化病。由此，通過(guò)根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法，可以有效地篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)核酸序列與SEQ ID NO:1進(jìn)行比對(duì)的方法和設(shè)備并不受特別限制，可以采用任意常規(guī)的軟件進(jìn)行操作，根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)例，可以采用SOAP軟件進(jìn)行比對(duì)。
[0041]需要說(shuō)明的是，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的“篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法”的用途不受特別限制，例如可以用作非診斷目的的篩選方法。
[0042]篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)和試劑盒
[0043]根據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提出了一種能夠有效實(shí)施上述篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法的系統(tǒng)。
[0044]參考圖1，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)1000包括核酸提取裝置100、核酸序列確定裝置200以及判斷裝置300。
[0045]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，核酸提取裝置100用于從生物樣品提取核酸樣本。如前所述，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，核酸樣本的類型并不受特別限制，對(duì)于采用RNA作為核酸樣本，則核酸提取裝置進(jìn)一步包括RNA提取單元101和反轉(zhuǎn)錄單元102，其中，提取單元101用于從生物樣品提取RNA樣本，反轉(zhuǎn)錄單元102與RNA提取單元101相連，用于對(duì)RNA樣本進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，以便獲得cDNA樣本,所得到的cDNA樣本構(gòu)成核酸樣本。
[0046]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，核酸序列確定裝置200與核酸提取裝置100相連，用于對(duì)核酸樣本進(jìn)行分析，以便確定核酸樣本的核酸序列。如前所示，可以采用測(cè)序的方法確定核酸樣本的核酸序列。由此，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述核酸序列確定裝置200可以進(jìn)一步包括:文庫(kù)構(gòu)建單元201以及測(cè)序單元202。文庫(kù)構(gòu)建單元201用于針對(duì)核酸樣本，構(gòu)建核酸測(cè)序文庫(kù)；測(cè)序單元202與文庫(kù)構(gòu)建單元201相連，用于對(duì)核酸測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序，以便獲得由多個(gè)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測(cè)序結(jié)果。如前所述，可以通過(guò)PCR擴(kuò)增，富集SLC24A5基因的c.591G>A和c.1361insT突變位點(diǎn)所在區(qū)域，進(jìn)一步提高篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的效率。由此，文庫(kù)構(gòu)建單元201可以進(jìn)一步包括PCR擴(kuò)增模塊(圖中未示出)，在該P(yáng)CR擴(kuò)增模塊中設(shè)置有SLC24A5基因突變位點(diǎn)特異性引物，以便利用SLC24A5基因突變位點(diǎn)特異性引物，對(duì)所述核酸樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，測(cè)序單元202可以包括選自HISEQ2000、S0LiD、454和單分子測(cè)序裝置的至少一種。由此，結(jié)合最新的測(cè)序技術(shù)，針對(duì)單個(gè)位點(diǎn)可以達(dá)到較高的測(cè)序深度，檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性大大提高，因而能夠利用這些測(cè)序裝置的高通量、深度測(cè)序的特點(diǎn)，進(jìn)一步提高對(duì)核酸樣本進(jìn)行檢測(cè)分析的效率。從而，提高后續(xù)對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí)的精確性和準(zhǔn)確度。
[0047]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，判斷裝置300與核酸序列確定裝置200相連，適于將核酸樣本的核酸序列進(jìn)行比對(duì)，以便基于核酸樣本的核酸序列與SEQ ID NO:1的區(qū)別判斷生物樣品是否易感眼皮膚白化病。具體地，基于核酸樣本的核酸序列或其互補(bǔ)序列與SEQ ID NO:1相比，是否具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變，判斷生物樣品是否易感眼皮膚白化病。如前所述，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，核酸樣本的核酸序列或其互補(bǔ)序列與SEQID NO:1相比，具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變，是生物樣品易感眼皮膚白化病的指示。如前所述，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)核酸序列或其互補(bǔ)序列與SEQ ID NO:1進(jìn)行比對(duì)的設(shè)備并不受特別限制，可以采用任意常規(guī)的軟件進(jìn)行操作，根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)例，可以采用SOAP軟件進(jìn)行比對(duì)。
[0048]由此，利用該系統(tǒng)，能夠有效地實(shí)施前述篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法，從而可以有效地篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品。
[0049]根據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提出了一種用于篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該用于篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的試劑盒包括:適于檢測(cè)SLC24A5基因突變體的試劑，其中與SEQ ID NO:1相比，該SLC24A5基因突變體具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變。利用根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例的試劑盒，能夠有效地篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品。在本文中，所使用的術(shù)語(yǔ)“適于檢測(cè)SLC24A5基因突變體的試劑”應(yīng)做廣義理解，即可以是檢測(cè)SLC24A5突變體編碼基因的試劑，也可以是檢測(cè)SLC24A5突變體多肽的試劑，例如可以采用識(shí)別特異性位點(diǎn)的抗體。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述試劑為核酸探針或引物。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該引物可以具有SEQ ID NO:5-20所示的核苷酸序列，優(yōu)選具有SEQ ID NO:13-14和SEQ ID NO:19-20所示的核苷酸序列，由此，可以高效地篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品。
[0050]需要說(shuō)明的是，在本文前面篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法部分中所描述的特征和優(yōu)點(diǎn)，同樣適用于篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)或者試劑盒，在此不再贅述。
[0051]下面參考具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，需要說(shuō)明的是，這些實(shí)施例僅僅是說(shuō)明性的，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0052]若未特別指明，實(shí)施例中所采用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，可以參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》第三版或者相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)行，所采用的試劑和產(chǎn)品也均為可商業(yè)獲得的 。未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公職的常規(guī)方法，所用試劑的來(lái)源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時(shí)標(biāo)明，其后所用相同試劑如無(wú)特殊說(shuō)明，均以首次標(biāo)明的內(nèi)容相同。
[0053]實(shí)施例1OCA致病新基因確定及驗(yàn)證
[0054]首先，需要說(shuō)明的是，本研究由中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所(IGDB)和首都醫(yī)科大學(xué)北京同仁醫(yī)院的生物倫理內(nèi)部審查委員會(huì)(IRB)批準(zhǔn)，并按照赫爾辛基宣言的原則開展。
[0055]一、外顯子測(cè)序
[0056]樣本采集:
[0057]首先，發(fā)明人從Chinese Albinism Registry 中(Wei et al., 2010;ffei etal.，2011，通過(guò)參 照將其全文并入本文)的179個(gè)不相關(guān)的OCA病人里篩選出I個(gè)分子機(jī)制未知的OCA患者。需要說(shuō)明的是，目前在臨床確診的OCAl患者中，典型癥狀是患者的白色頭發(fā)不隨年紀(jì)改變；而OCAlB的表征是患者在出生時(shí)頭發(fā)是白色的，而隨后變?yōu)榱咙S色或暗色。0CA2的表征是患者頭發(fā)在出生時(shí)是黃色、棕色或金黃底色，隨年齡增長(zhǎng)顏色可能變得更深(Oetting et al.，2003，通過(guò)參照將其全文并入本文)。而由上述篩選獲得的分子機(jī)制未知的OCA患者的診斷結(jié)果中可知，其能觀察到白色皮膚、藍(lán)色或棕色虹膜，以及溫和或嚴(yán)重的眼球震顫。
[0058]發(fā)明人采集到上述篩選獲得的分子機(jī)制未知的OCA患者及其父母和哥哥的外周血，并以收集到的120個(gè)中國(guó)漢族正常人為對(duì)照，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。其中，在本文中，該患者也被稱為“先證者”，其所在家系的家系圖譜見圖2。如圖2所示，先證者為IV2。圖3則顯示了該非綜合征型OCA (0CA6)患者家系中先證者及其哥哥的臨床診斷結(jié)果圖，其中左側(cè)為先證者的診斷結(jié)果，右側(cè)為其哥哥的臨床診斷結(jié)果。參照?qǐng)D3，先證者(IV2)在3歲時(shí)被診斷為患有0CA2:出生時(shí)頭發(fā)金黃，隨著年齡增長(zhǎng)發(fā)色變深成褐色(見圖3A的左圖)；其皮膚白化，虹膜透明且呈褐色(見圖3B的左圖)。此外，先證者還有輕微的眼球震顫和恐光癥，其視敏度為20/100，且彩色眼底成像術(shù)結(jié)果表明其黃斑色素缺乏和發(fā)育不全(見圖3C的左圖)，進(jìn)一步的光學(xué)相干斷層成像術(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)該黃斑中心凹缺失(見圖3D的左圖)。而先證者的哥哥則表現(xiàn)正常。此外，先證者病史調(diào)查發(fā)現(xiàn)無(wú)易出血傾向或者伴有紫癜的出血性特質(zhì)；患者血小板、紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)目在正常范圍；其粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞所占百分比亦在正常范圍；患者血清中的IgG、IgA、IgM、C3和C4含量均正常，包括活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)、D- 二聚體和纖維蛋白原檢測(cè)在內(nèi)的凝血測(cè)驗(yàn)均無(wú)發(fā)現(xiàn)異常；外周血中的微量金屬元素(Cu、Zn、Ca、Mg和Fe)含量正常；其他血清和尿中的代謝物含量正常；體檢中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其他明顯畸形。胸透和頭部計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)和腹部B超檢查均都表現(xiàn)正常；沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有神經(jīng)學(xué)的異常癥狀。并且，患者父母聲稱非近親結(jié)婚，其雙親和同胞兄弟無(wú)任何OCA相關(guān)癥狀。綜合上述信息，可判斷先證者表現(xiàn)為非綜合征型OCA。
[0059]首先，發(fā)明人利用常規(guī)蛋白酶K/SDS，從先證者及其父母和哥哥，以及120個(gè)中國(guó)漢族正常人對(duì)照的外周血中提取基因組DNA，作為樣本。各樣本的DNA濃度均在200ng/ μ I以上，總量均超過(guò)15 μ g，并質(zhì)控為0D260/280均在1.8-2.0之間。
[0060]接著，按照Agilent SureSelect Human All Exon Kits 的程序?qū)Ω鳂颖具M(jìn)行外顯子捕獲，并按照Illumina的操作規(guī)范(可參見:http://www.1llumina.com/提供的Illumina/Solexa標(biāo)準(zhǔn)建庫(kù)說(shuō)明書,通過(guò)參照將其全文并入本文),利用Illumina SolexaHiSeq2000對(duì)捕獲產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。其中，各樣本的目標(biāo)區(qū)域均大于50Mb，目標(biāo)區(qū)域的平均深度超過(guò)50X，平均讀長(zhǎng)約IOObp。
[0061]然后，利用Burrows-Wheeler Aligner(BWA)程序,將測(cè)序數(shù)據(jù)與 UCSC Santa Cruzhgl8，build36.1的人參考基因組序列進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，捕獲特異性超過(guò)95%。接下來(lái)，發(fā)明人采用基于常染色體隱性突變模式的數(shù)據(jù)分析框架對(duì)測(cè)序比對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果見表2。如表2所示，檢出的變異包括SNP和Indel。其中，SNP和Indel的檢測(cè)軟件分別為SOAPsnp (Li et al.，2009，通過(guò)參照將其全文并入本文)和基因組分析軟件包(GATK)(McKenna et al.，2010，通過(guò)參照將其全文并入本文)。接下來(lái)，針對(duì)檢出的SNP和Indel變異，過(guò)濾掉功能不太重要的同義突變和位于3’ -UTR、5’ -UTR、內(nèi)含子區(qū)和基因間區(qū)的變異，并將剩下的SNP和Indel與3個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)，即dbSNP130、1000基因組數(shù)據(jù)庫(kù)和HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行比較，去掉數(shù)據(jù)庫(kù)中的高頻突變，然后將剩下的SNP和Indel根據(jù)基因型進(jìn)行分類，用于后續(xù)分析。分析結(jié)果總結(jié)于表1和表2。
[0062]表1上述0CA6患者家系中先證者及其父母經(jīng)檢測(cè)及過(guò)濾的變異統(tǒng)計(jì)
[0063]
【權(quán)利要求】
1.一種分離的編碼SLC24A5突變體的核酸，其特征在于，與SEQ ID NO:1相比，所述核酸具有選自下列的至少一種突變:c.591G>A和c.1361insT， 優(yōu)選地，所述核酸同時(shí)具有c.591G>A和c.1361insT突變， 任選地，所述核酸為DNA。
2.一種分離的多肽，其特征在于，與SEQ ID NO:2相比，所述分離的多肽具有選自下列的至少一種突變:p.W197X 和 p.L454Ffs31X, 優(yōu)選地，所述多肽同時(shí)具有P.W197X和p.L454Ffs31X突變， 任選地，所述多肽是由權(quán)利要求1所述的核酸編碼的。
3.一種篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的方法，其特征在于，包括以下步驟: 從所述生物樣品提取核酸樣本； 確定所述核酸樣本的核酸序列； 所述核酸樣本的核酸序列或其互補(bǔ)序列與SEQ ID NO:1相比，具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突 變是所述生物樣品易感眼皮膚白化病的指示， 任選地，所述生物樣品為選自人體血液、皮膚、毛發(fā)和肌肉的至少一種， 任選地，所述核酸樣本為全基因組DNA。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，從所述生物樣品提取核酸樣本進(jìn)一步包括: 從所述生物樣品提取RNA樣本，優(yōu)選所述RNA樣本為mRNA ；以及 基于所述RNA樣本，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得cDNA樣本，所述cDNA樣本構(gòu)成所述核酸樣本。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，確定所述核酸樣本的核酸序列進(jìn)一步包括: 針對(duì)所述核酸樣本，構(gòu)建核酸測(cè)序文庫(kù)；以及 對(duì)所述核酸測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序，以便獲得由多個(gè)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測(cè)序結(jié)果，任選地，采用選自Hiseq2000、S0LiD、454和單分子測(cè)序裝置的至少一種對(duì)所述核酸測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序， 任選地,針對(duì)所述核酸樣本,構(gòu)建核酸測(cè)序文庫(kù)進(jìn)一步包括: 利用SLC24A5基因突變位點(diǎn)特異性引物，對(duì)所述核酸樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增；以及 針對(duì)所得到的擴(kuò)增產(chǎn)物，構(gòu)建所述核酸測(cè)序文庫(kù)。
6.一種篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的系統(tǒng)，其特征在于，包括: 核酸提取裝置，所述核酸提取裝置用于從所述生物樣品提取核酸樣本； 核酸序列確定裝置，所述核酸序列確定裝置與所述核酸提取裝置相連，用于對(duì)所述核酸樣本進(jìn)行分析，以便確定所述核酸樣本的核酸序列； 判斷裝置，所述判斷裝置與所述核酸序列確定裝置相連，以便基于所述核酸樣本的核酸序列或其互補(bǔ)序列與SEQ ID NO:1相比，是否具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變，判斷所述生物樣品是否易感眼皮膚白化病。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述核酸提取裝置進(jìn)一步包括: RNA提取單元，所述RNA提取單元用于從所述生物樣品提取RNA樣本；以及 反轉(zhuǎn)錄單元，所述反轉(zhuǎn)錄單元與所述RNA提取單元相連,用于對(duì)所述RNA樣本進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，以便獲得cDNA樣本，所述cDNA樣本構(gòu)成所述核酸樣本。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述核酸序列確定裝置進(jìn)一步包括: 文庫(kù)構(gòu)建單元，所述文庫(kù)構(gòu)建單元用于針對(duì)所述核酸樣本，構(gòu)建核酸測(cè)序文庫(kù)；以及 測(cè)序單元，所述測(cè)序單元與所述文庫(kù)構(gòu)建單元相連，用于對(duì)所述核酸測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序，以便獲得由多個(gè)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)成的測(cè)序結(jié)果， 任選地,所述文庫(kù)構(gòu)建單元進(jìn)一步包括: PCR擴(kuò)增模塊，所述PCR擴(kuò)增模塊中設(shè)置有SLC24A5基因突變位點(diǎn)特異性引物，以便利用SLC24A5基因突變位點(diǎn)特異性引物，對(duì)所述核酸樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增， 任選地，所述測(cè)序單元包括選自HISEQ2000、SOLiD,454和單分子測(cè)序裝置的至少一種。
9.一種用于篩選易感眼皮膚白化病的生物樣品的試劑盒，其特征在于，含有: 適于檢測(cè)SLC24A5基因突變體的試劑，其中與SEQ ID NO:1相比，所述SLC24A5基因突變體具有選自c.591G>A和c.1361insT的至少一種突變。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑為核酸探針或引物， 任選地，所述引物 具有SEQ ID NO:5-20所示的核苷酸序列，
優(yōu)選地，所述引物具有SEQ ID NO:13-14和SEQ ID NO: 19-20所示的核苷酸序列。
【文檔編號(hào)】C12M1/00GK103923926SQ201310016429
【公開日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2013年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月16日
【發(fā)明者】戴蘭蘭, 劉軒竹, 李巍, 魏愛(ài)華 申請(qǐng)人:深圳華大基因研究院