專利名稱：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(mrsa)疫苗重組蛋白抗原i1c及制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于人的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)疫苗重組蛋白抗原IIC及制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
耐甲氧西林金黃色葡萄球菌指的是對惡唑類青霉素如甲氧西林、苯唑西林和氟氯唑西林耐藥的金黃色葡萄球菌，是一種存在人和動(dòng)物的體表、鼻咽、會(huì)陰部及腸道的革蘭陽性菌，通常引發(fā)皮膚軟組織感染、菌血癥以及轉(zhuǎn)移并發(fā)癥，如肺炎、心內(nèi)膜炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎和骨髓炎。自1961年被英國學(xué)者Jevons首次發(fā)現(xiàn)，目前已成為全球ICU病房、燒傷、戰(zhàn)創(chuàng)傷等感染率最高的病原菌之一，其引起的局部感染經(jīng)久不愈，全身感染死亡率高達(dá)20%。因其傳播途徑廣泛，易暴發(fā)流行，又由于其致病性強(qiáng)，變異性大，且呈多重耐藥而成為臨床上治療的難點(diǎn)，被稱為“超級細(xì)菌”，這一特點(diǎn)使其極有可能作為未來軍事斗爭的細(xì)菌武器和生物恐怖戰(zhàn)劑。當(dāng)前，MRSA已與乙型肝炎、AIDS被列為世界三大最難解決的感染性疾病，并位居首位。在國外，2005年美國的MRSA感染監(jiān)控資料顯示，美國全年的嚴(yán)重感染人數(shù)為9.4萬多人，致死病例約為1.9萬人，這一數(shù)字甚至超過艾滋病致死人數(shù)。在國內(nèi)，2010年中國CHINET細(xì)菌耐藥性檢測網(wǎng)結(jié)果顯示，國內(nèi)主要地區(qū)14所教學(xué)醫(yī)院，MRSA平均檢出率為51.7%，最高為77.6% ；2008年中國CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)結(jié)果顯示，國內(nèi)主要地區(qū)12所教學(xué)醫(yī)院MRSA平均檢出率為55.9%，最高為77.5%，屬于MRSA感染的嚴(yán)重國家之一。以上海為例，2004年該地區(qū)14所醫(yī)院金黃色葡萄球菌中MRSA的平均檢出率為63.9%，最高為86.5%，而2006年MRSA的平均 檢出率為64.6%，最高達(dá)92.5%。由此可見，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌正在全球蔓延，其感染率和死亡率不斷攀升，嚴(yán)重威脅人類健康。目前，萬古霉素是治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的最后一道防線，但1997年以來耐萬古霉素的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌相繼被分離出來，可見抗生素的發(fā)展遠(yuǎn)遠(yuǎn)跟不上細(xì)菌耐藥性的發(fā)展，使得耐甲氧西林金黃色葡萄球菌即將面臨無抗生素可治的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。因此，加強(qiáng)對MRSA感染的防治研究，已迫在眉睫。目前，美國研發(fā)的MRSA疫苗已進(jìn)入III期臨床試驗(yàn)階段，因此，研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的、高效、安全、經(jīng)濟(jì)的MRSA疫苗對控制MRSA感染、耐藥性發(fā)展、生物恐怖防御和提高國際競爭力具有重要意義。由于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌致病因子包括莢膜多糖、ClfA, IsdB、腸毒素、TSST-U α-溶血素以及凝固酶等數(shù)十種，且含量較低，直接從全菌中分離純化出保護(hù)性抗原的難度較大，方法繁瑣，不利于疫苗的產(chǎn)業(yè)化制備。利用基因工程技術(shù)將菌體有效的保護(hù)性抗原進(jìn)行克隆表達(dá)使MRSA疫苗研制的可行性大大提高。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌鐵離子表面決定蛋白IsdB是一種外膜蛋白抗原，IsdB不僅是MRSA—個(gè)重要外膜錨釘?shù)鞍?，在MRSA定植粘附中期重要作用，同時(shí)它也是MRSA從宿主獲得鐵的一個(gè)主要工具。細(xì)菌外膜蛋白具有良好的抗原活性，這些外膜蛋白作為抗體和免疫細(xì)胞攻擊的主要靶標(biāo)，可以介導(dǎo)對細(xì)菌最直接有效的殺滅作用，是決定免疫反應(yīng)是否對人體具有保護(hù)性的關(guān)鍵因素。ClfA是一種調(diào)節(jié)金葡菌與纖維蛋白素的結(jié)合，促進(jìn)金葡菌同生物材料表面、血塊、血小板、內(nèi)皮表面結(jié)合的黏附素。在金葡菌與血小板的結(jié)合中ClfA也起著重要的作用，在導(dǎo)管誘導(dǎo)所致金葡菌心內(nèi)膜炎的動(dòng)物模型中，其相互作用也很關(guān)鍵。ClfA和IsdB都是MRSA的外膜蛋白成分，具有高度保守性，是MRSA疫苗重要的候選抗原。由于ClfA全蛋白具有纖維蛋白結(jié)合活性，不適宜做為疫苗候選抗原，本研究利用生物信息技術(shù)篩選到不能與纖維蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)域C。同時(shí)篩選出IsdB的結(jié)構(gòu)域II。通過理論設(shè)計(jì)及實(shí)踐優(yōu)化，選擇到能有效將兩者結(jié)合起來并使融合蛋白具有良好免疫活性的連接肽。最后形成IlC重組蛋白。目前尚未見使用ClfA、IsdB選擇一個(gè)亞單位的活性功能片段的融合蛋白作為免疫原性材料，制備MRSA雙價(jià)疫苗的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的高耐藥性的問題，本發(fā)明提供一種耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)重組融合蛋白11C，該融合蛋白純度高，表達(dá)量高，便于分離純化，高效安全。本發(fā)明所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)重組融合蛋白11C，由MRSA鐵離子表面決定蛋白IsdB的一個(gè)活性片段(Il)與ClfA抗原分子的一個(gè)活性片段(C)組成，活性片段Il與活性片段C通過連接肽融合而成。重組蛋白IIC的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，氨基酸序列如SEQ IDN0:2所示?；钚云蜪l的核苷酸序列如SEQ ID NO: 3所示，氨基酸序列如SEQ ID N0:4所示?；钚云蜟的核苷酸序列如SEQ ID NO: 5所示，氨基酸序列如SEQ ID N0:6所示。連接肽氨基酸序列結(jié)構(gòu)為-(GGGGS) η-,或-(GGSGG) η-，或(YAPVDV) η-,或-(YVPVDV) η-,所述 η 為 I。所述連接肽氨基酸序列結(jié)構(gòu)優(yōu)選-YVPVDV-。上述重組融合蛋白的制備方法包括以下步驟:I)全基因合成編碼IlC的DNA序列，交由上海捷瑞生物工程有限公司合成；2)所合成的目的基因片段克隆至表達(dá)載體，然后轉(zhuǎn)化至宿主菌；表達(dá)載體為pGex系列載體，或pET系列載體，或pQE系列載體，優(yōu)選為pGeX-6P_2。宿主菌為大腸桿菌XLl-blue、BL21系列或HMS174系列，優(yōu)選為大腸桿菌XLl-blue。3)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化后的宿主菌表達(dá)IlC重組蛋白。本發(fā)明優(yōu)選采用pGEX-6p_2載體來構(gòu)建重組表達(dá)載體，表達(dá)重組蛋白IlC，pGEX是由Smith和Johnson于1987年構(gòu)建的表達(dá)融合蛋白的載體,其主要特點(diǎn)是載體上接有一個(gè)分子量為26kDa的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)，所表達(dá)的融合蛋白中就含有一個(gè)GST標(biāo)簽，此標(biāo)簽是蛋白純化的標(biāo)記。與其他融合載體相比，PGEX系列載體具有純化條件溫和、步驟簡單、不需要變性劑的加入，從而使純化后的蛋白能最大限度保持其空間構(gòu)象和免疫原性。上述重組融合蛋白的分子量、N末端及C末端15個(gè)氨基酸檢測由上海中科新生命生物科技有限公司完成。檢測 結(jié)果:分子量為34909.6，符合理論預(yù)期(附圖2) ;N末端及C末端氨基酸序列與理論預(yù)期完全一致。本發(fā)明還提供一種重組蛋白IlC在制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的亞單位疫苗中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供一種重組蛋白IlC在制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明采用基因工程技術(shù)克隆表達(dá)此截短的保護(hù)性抗原成分IlC蛋白，表達(dá)量高，便于分離純化，而且高效安全。該重組蛋白Iic可以直接與佐劑(如Al (OH)3佐劑、MF59、A1P04、A1S03、A1S04、不完全弗氏佐齊[J、完全弗氏佐齊[J、分枝桿菌卡介苗佐劑等)配合使用，適用于注射免疫接種。本發(fā)明的基因工程重組蛋白的表達(dá)方法具有以下優(yōu)點(diǎn):I)重組蛋白表IlC達(dá)質(zhì)粒在原核表達(dá)系統(tǒng)一大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)；2)選擇pGEX載體系列時(shí),重組蛋白IlC以融合蛋白形式表達(dá)；表達(dá)載體上接有一個(gè)分子量為26kDa的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)，所表達(dá)的融合蛋白中就含有一個(gè)GST標(biāo)簽，此標(biāo)簽就成為蛋白純化的標(biāo)記，使得純化條件溫和、步驟簡單、不需要變性劑的加入，從而純化后的蛋白能最大限度保持其空間構(gòu)象和免疫原性；純化出來的重組蛋白IlC純度大于 95% ；3)重組蛋白IlC均能夠誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生特異性的抗體。本發(fā)明重組蛋白IlC的制備方法簡捷、容易放大、重復(fù)性好，所述融合蛋白輔以鋁佐劑后，可制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的亞單位疫苗以及制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的檢測試劑盒,通過動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證,可有效刺激機(jī)體產(chǎn)生較高的體液免疫應(yīng)答和良好抗MRSA感染的免疫保護(hù)作用。利用本發(fā)明重組蛋白IlC制備的亞單位疫苗可通過皮下(肌肉)注射途徑進(jìn)行免疫接種，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生高滴度IgG抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答。并經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，所述基因工程重組多價(jià)疫苗具有良好的抗MRSA感 染的免疫保護(hù)效果。為進(jìn)一步的聯(lián)合疫苗和多亞單位融合疫苗研究打下基礎(chǔ)，同時(shí)為防治疫苗和診斷試劑盒的研制及應(yīng)用具有重要的作用。為了使本發(fā)明目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下面結(jié)合附圖及實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。


圖1表示重組融合蛋白IlC純化結(jié)果，其中，泳道M:蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)(Marker)，泳道1:酶切后，在上清獲取的目的蛋白；圖2是重組融合蛋白IlC的分子量測定結(jié)果。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所使用的菌株與各種試劑如下:1.菌株、質(zhì)粒金黃色葡萄球菌MRSA-252國際標(biāo)準(zhǔn)株由美國ATCC提供；菌株XL-1blue大腸桿菌為美國安捷倫公司產(chǎn)品；BL21 (DE3)，HMS (174)質(zhì)粒pGEX-6p_2 為美國 GE Healthcare 公司產(chǎn)品；質(zhì)粒pET_22b為美國Merck公司產(chǎn)品；
2.試劑primeSTAR HS DNA Polymerase、DNA Marker、限制性內(nèi)切酶 BamH I 和 Not 1、蛋白Marker為大連TakaRa公司產(chǎn)品；質(zhì)粒提取試劑盒和凝膠回收試劑盒為美國Omega公司產(chǎn)品；細(xì)菌基因組提取試劑盒、DNA超薄回收試劑盒為天根公司產(chǎn)品；T4DNA Ligase 為 Fermentas 公司產(chǎn)品；谷胱甘妝-瓊脂糖凝膠Glutathione Sepharose4B為美國GE Healthcare公司產(chǎn)品O3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級4 6周齡，雌性BALB/C小鼠，購自北京華阜康公司。實(shí)施例1:11C的DNA序列由上海捷瑞生物技術(shù)有限公司合成并構(gòu)建至載體PGEX-6P-2 及 pET22b 上，同時(shí)分別轉(zhuǎn)化宿主菌 XL-lblue，BL21 (DE3)，HMS (174)。實(shí)施例2 =IlC多亞單位在原核表達(dá)系統(tǒng)一大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)、純化及表達(dá)形式的鑒定1.目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)I)取雙酶切鑒定正確的pGEX-6P-2-1lC/XL-lblue菌液100 μ L加入IOmLAmp抗性的TB培養(yǎng)基中，80rpm37°C過夜培養(yǎng)，分別取過夜培養(yǎng)的菌液400 μ L加入20mLAmp抗性的TB培養(yǎng)基中(余下的菌液保存在4°C 冰箱中備用)，37°C培養(yǎng)2 3h，轉(zhuǎn)速200rpm，二次活化至0D600為0.6 0.8時(shí)，加入IPTG40yL，使其終濃度為200 μ M，再置于搖床誘導(dǎo)表達(dá)16°C過夜誘導(dǎo)表達(dá)。2)將誘導(dǎo)表達(dá)后的菌液取出，以6000rpm離心15min,棄去上清,加入ImLlysisbuffer混勻，超聲裂解3min (超聲6次30s/次)，再4°C 14000rpm離心15min,分離上清和沉淀。2.處理上清取Glutathione Sepharose4B20 μ I,用PBS洗漆3次后，將準(zhǔn)備好的上清加入Glutathione Sepharose4B中，4°C旋轉(zhuǎn)過夜結(jié)合(或室溫結(jié)合lh)。在4°C下以14000rpm離心3min后，使用PBS-0.25%吐溫20洗滌2次，PBS洗滌一次。向結(jié)合后的GlutathioneSepharose4B 加入 20 μ L5X 蛋白質(zhì)上樣 buffer,煮沸 5min, 14000rpm 離心 30s。3.處理沉淀在沉淀中加入500 μ L lysis buffer重懸菌體,取80 μ L重懸菌液加入20 μ L5 X蛋白質(zhì)上樣buffer,煮沸5min, 14000rpm離心30s。4.SDS-PAGE電泳，將5%濃縮膠灌入制膠版中，在加入蒸餾水將膠壓平，室溫放置30min使其凝固，將上層的蒸餾水倒干，再灌入12%分離膠，立即插上梳子，室溫放置30min使其凝固備用。5.將處理好的上清和沉淀分別取10 μ L上樣，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。電壓先80ν電泳30min，再調(diào)至180v，電泳f 2h后，將膠取出，置于考馬斯亮藍(lán)染色液中振蕩染色，再置于脫色液中振蕩脫色后，在呈像系統(tǒng)下觀察結(jié)果。重組蛋白為可溶性蛋白，且16°C下目的蛋白的表達(dá)量最高，其純度達(dá)到95%以上。實(shí)施例3:11C抗原的制備
1.放大培養(yǎng)獲取蛋白取保存在4°C冰箱中備用的pGEX-6P-2-1lC/XL-lblue菌液400μL加入到 20mL含Amp抗性的TB培養(yǎng)基中進(jìn)行一次活化，200rpm37°C培養(yǎng)5飛h后，取8mL —次活化的菌液加入到400mL含Amp抗性的TB培養(yǎng)基中進(jìn)行二次活化，37°C培養(yǎng)3 4h至0D600為0.8時(shí)，力口入80M1 IPTG (終濃度為200uM)置于16°C搖床中過夜誘導(dǎo)后，6000rpm離心15min收集菌體，再加20mL lysis buffer重懸菌體后，將菌液進(jìn)行超聲裂解3min (200V)，收集上清與800 μ L用于結(jié)合GST融合蛋白的Glutathione Sepharose4B凝膠珠(beads)結(jié)合處理。2.使用酶切方法，將目的蛋白和GST標(biāo)簽分開，獲取IlC目的蛋白向余下約800 μ L已結(jié)合蛋白的Glutathione Sepharose4B中加入800 μ L PBS和120 μ L PreScission protease(PP酶)，室溫垂直旋轉(zhuǎn)酶切5h后，離心吸取上清后，分別用800 μ L PBS洗滌3次，各后取10 μ L樣品變性處理后，上樣5 μ L進(jìn)行蛋白電泳(方法同上)，在呈相系統(tǒng)下觀察結(jié)果，酶切前GST融合蛋白分子量在90kDa左右，酶切下來的IlC蛋白分子量在43_55kDa之間，與預(yù)期蛋白分子量35kD不符，電泳結(jié)果不于圖1。實(shí)施例4:1IC的質(zhì)量檢定將純化后的IlC送上海中科新生命生物科技有限公司進(jìn)行分子量、N端及C端15個(gè)氨基酸序列測定。分子量結(jié)果如圖2所示，為34909，與理論分子量35018是吻合的。N端及C端15個(gè)氨基酸序列與預(yù)期的完全一致。表明獲得了預(yù)期蛋白，也表明本蛋白在SDS-PAGE上表現(xiàn)出的分子量不是其真實(shí)分子量。 實(shí)施例5:感染用金黃色葡萄球菌菌株(國際標(biāo)準(zhǔn)株MRSA-252)標(biāo)準(zhǔn)定量曲線的建將菌株接種于MH平板置于37°C孵育24小時(shí)；在平板上挑取單菌落，接種于MH液體培養(yǎng)基中，置于37°C恒溫?fù)u床中震蕩培養(yǎng)6小時(shí)后6000rpm離心IOmin收集菌體，用生理鹽水洗滌菌體2次；再將菌液進(jìn)行10倍和1.25倍稀釋，并在紫外分光系統(tǒng)下測定各菌液的在600nm處的吸光度(0D600)，并取各個(gè)稀釋度的菌液100 μ L涂布于MH平板，置于37°C孵育24小時(shí)后計(jì)數(shù)菌落；根據(jù)各個(gè)平板菌落數(shù)和菌液的0D600值繪制標(biāo)準(zhǔn)定量曲線。結(jié)果:標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為Y=2.3065X+0.0051 (109CFU/ml)，相關(guān)系數(shù)為0.9999。實(shí)施例6:膿毒血癥動(dòng)物模型的構(gòu)建SPF級BALB/C4 6周齡雌性小鼠120只，分成陽性對照組、實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組、空白對照組，購于北京華阜康公司。1.將菌株接種于MH平板置于37°C孵育24小時(shí)；在平板上挑取單菌落，接種于MH液體培養(yǎng)基中，置于37°C恒溫?fù)u床中震蕩培養(yǎng)6小時(shí)后收集菌體，并利用標(biāo)準(zhǔn)曲線公式進(jìn)行定量，再將菌液稀釋(或濃縮)為 2.0X10lclCFU/mL、l.5X 1010CFU/mLU.25X 10lclCFU/mL、
1.0X 101(lCFU/mL不同濃度組，再用各組菌液通過尾靜脈注射6 8周齡、體重為18 20g的BALB/C小鼠(100 μ I/只)進(jìn)行全身感染，同時(shí)設(shè)置生理鹽水對照組，觀察7天并統(tǒng)計(jì)各組小鼠的死亡率；2、感染后計(jì)時(shí)每隔24小時(shí)(至感染后7天)采用菌落計(jì)數(shù)法對細(xì)菌定植量進(jìn)行檢測:從各感染組和對照組中隨機(jī)選取3只小鼠，利用眼球摘除法，取小鼠血樣0.5 lmL，取20 μ L血樣用180 μ L肝素稀釋10倍后用于細(xì)菌計(jì)數(shù),取50 μ L涂于平板,置于37°C, 24h后計(jì)數(shù)克隆數(shù)；取完血樣后將小鼠處死放入75%酒精中浸泡消毒后，取出將其四肢固定，將其解剖，取出脾、腎、肝臟，置于2mL無菌的PBS中，于潔凈的玻璃勻漿器中進(jìn)行勻漿，取ImL均漿按照1:10、1:100、1:1000比例進(jìn)行稀釋；每稀釋度各取100 μ L輕輕涂布于固體培LB養(yǎng)基上，置于37°C，培養(yǎng)24h，做菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示于表1:表1MRSA-252最小致死劑量與亞致死劑量的確定
權(quán)利要求
1.一種重組融合蛋白11C,其特征在于:該融合蛋白由MRSA鐵尚子表面決定蛋白IsdB的一個(gè)活性片段Il與ClfA抗原分子的一個(gè)活性片段C通過連接肽融合而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組蛋白I1C，其特征在于，該蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，核酸序列如SEQ ID NO: 2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組蛋白I1C，其特征在于，所述活性片段Il的核酸序列如SEQ ID NO:3所示，氨基酸序列如SEQ ID N0:4所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組蛋白I1C，其特征在于，所述ClfA抗原分子活性片段C的核酸序列如SEQ I D NO:5所示,氨基酸序列如SEQ ID N0:6所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組蛋白I1C，其特征在于，所述連接肽氨基酸序列結(jié)構(gòu)為-(GGGGS) n-，或-(GGSGG) η-,或(YAPVDV) η_，或-(YVPVDV) η-,所述 η 為 I。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組蛋白I1C，其特征在于，所述連接肽氨基酸序列結(jié)構(gòu)為-YVPVDV-。
7.權(quán)利要求1所述的重組融合蛋白IlC的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)全基因合成，以獲得編碼IlC的DNA序列； 2)將所獲得的IlC基因片段克隆至表達(dá)載體，然后轉(zhuǎn)化至宿主菌，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化后的宿主菌表達(dá)重組蛋白11C。
8.一種表達(dá)載體，其特征在于:包含編碼權(quán)利要求1所述重組蛋白IlC的核酸序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體是PGex系列載體，或PET系列載體，或pQE系列載體，優(yōu)選為pGeX-6P-2。
10.一種表達(dá)如權(quán)利要求8或9所述表達(dá)載體的宿主菌。
11.按權(quán)利要求10所述的宿主菌，其特征在于，所述宿主菌為大腸桿菌XLl-blue或BL21系列或HMS174系列，優(yōu)選為大腸桿菌XLl-blue。
12.權(quán)利要求1所述的重組蛋白在制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的亞單位疫苗中的應(yīng)用。
13.權(quán)利要求1所述的重組蛋白在制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測試劑盒中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)疫苗重組蛋白抗原I1C的制備方法和應(yīng)用，該融合蛋白由MRSA鐵離子表面決定蛋白IsdB的一個(gè)活性片段I1與ClfA抗原分子的一個(gè)活性片段C通過連接肽融合而成。該融合蛋白純度高，表達(dá)量高，便于分離純化，高效安全，其制備方法簡捷、容易放大、重復(fù)性好，所述融合蛋白輔以鋁佐劑后，可制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的亞單位疫苗以及制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的檢測試劑盒，通過動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證，可有效刺激機(jī)體產(chǎn)生較高的體液免疫應(yīng)答和良好抗MRSA感染的免疫保護(hù)作用。
文檔編號C12N15/62GK103087198SQ20131002121
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月21日
發(fā)明者鄒全明, 樊紹文, 曾浩, 馮強(qiáng), 吳翼, 蔡昌芝, 郭鷹 申請人:重慶原倫生物科技有限公司, 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)