專利名稱：皺紋盤鮑微衛(wèi)星分子標記及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及分子標記技術，具體涉及一種可分析皺紋盤鮑野生群體的遺傳多樣性，鑒定養(yǎng)殖群體之間的親緣關系的皺紋盤鮑微衛(wèi)星分子標記及制備方法。
背景技術：
微衛(wèi)星(Microsatellite)又稱作短重復序列(ShortTandem Repeats, STRs)或者簡單重復序列(Simple Sequence Repeat, SSRs),是一類遍布于真核生物基因組中的由幾個核苷酸對(稱為核心序列，一般為l_6bp)為重復單位組成的簡單串聯(lián)重復。其重復序列長短在同一物種不同遺傳型間高度可變，但重復序列兩端一般高度保守。根據(jù)此保守序列設計引物，即可通過PCR技術分析核心序列重復次數(shù)的變異，在不同遺傳型之間檢測到多態(tài)。由于微衛(wèi)星DNA具有共顯性、選擇中性和多態(tài)信息含量高等特點，它已經(jīng)成為目前應用最廣泛的一種分子標記。目前微衛(wèi)星分子標記的應用主要有動植物遺傳連鎖圖譜的構建、QTL定位、品種資料鑒定、遺傳多樣性分析和親子鑒定等方面?，F(xiàn)有微衛(wèi)星分子標記的制備方法基本是依次按如下步驟進行:皺紋盤鮑基因組DNA的制備、基因組酶切及目的大小片段的回收、DNA片段與接頭的連接、連接產(chǎn)物的預擴增、生物素探針雜交、磁珠法富集微衛(wèi)星DNA片段、微衛(wèi)星富集文庫的構建、微衛(wèi)星陽性克隆的篩選及測序、微衛(wèi)星引物的設計、PCR擴增及篩選等步驟。皺紋盤鮑(Haliotisdiscus hannai)屬于軟體動物門腹足綱、前鰓亞綱、原始腹足目，是鮑科貝類分布于我國北方的唯一種，也是遼寧和山東沿海海水養(yǎng)殖的重要對象。20世紀90年代開始，皺紋盤鮑的工廠化養(yǎng)殖規(guī)模增長迅速，已經(jīng)成為沿海地區(qū)經(jīng)濟發(fā)展新的增長點。但是，迄今為止，還沒有關于皺紋盤鮑微衛(wèi)星DNA分子標記的相關報道，無法對野生鮑的遺傳資源狀況進行調查并開展育種工作，以至于皺紋盤鮑的養(yǎng)殖業(yè)因遺傳背景不清晰和野生種質資源的衰退，而受到了一定程度的影響。

發(fā)明內容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術所存在的上述技術問題，提供一種可分析皺紋盤鮑野生群體的遺傳多樣性，鑒定養(yǎng)殖群體之間的親緣關系的皺紋盤鮑微衛(wèi)星分子標記及制備方法。本發(fā)明的技術技術解決方案是:一種皺紋盤鮑微衛(wèi)星分子標記，其特征在于:所述微衛(wèi)星分子標記的標號分別為Hdl、Hd2、Hd3、Hd4、Hd5、Hd6、Hd7、Hd8、Hd9、HdlO ;各標號微衛(wèi)星DNA分子標記的核苷酸序列分別為:
Hdl:
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Hd7:
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Hd9:
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一種上述皺紋盤鮑微衛(wèi)星分子標記的制備方法，包括微衛(wèi)星引物的設計、PCR擴增及篩選等步驟，其特征在于:所述微衛(wèi)星引物的設計及PCR擴增按下表進行:
權利要求
1.一種皺紋盤鮑微衛(wèi)星分子標記，其特征在于:所述微衛(wèi)星分子標記的標號分別為Hdl、Hd2、Hd3、Hd4、Hd5、Hd6、Hd7、Hd8、Hd9、Hdl0 ;各標號微衛(wèi)星DNA分子標記的核苷酸序列分別為: Hdl:ATACATCATATATATGCATCATTCAGTATGAAAGTCGAGTGTGTGTATATCGGACACGTTACATACATCATTCAGAATGAAAGGCGAGTGTGTGTATATGGGAAATGTATCATACATCATTCAGAATGAAAGACGATTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGAGTGTTTGTTTTGTGTGGTGTGTGATATTTGACATATTTTATGTGATATGTGCCATTATATTTCACATATGTAAGATATGTCATGTAATATGTGTCATGCGTCACGAGTCATGTAATATTGGAAATGTGACATGAGCCGTGTGATATGTGTCATCTAATATGTAATATGTGCGATGTGATATATGATATGTGTTGTGTGATGTGTCATATGATATGTGTGTGATGTGTATTGTGTTTTTTTGTCATAGTTCATGCGATATTTTATGTTTGCAATTCATCAAGTGCAATGTGATATGTGTCATGTGTCATGCTATTTGTATAATGTGATAAACGACGGGTAATAGGTGATATATATGTGTAATGTGATATGTGACATGTGACATGTGATATATGTCATGAGACGTTTTATGCGCCAAG Hd2:GGCCTATATTGGATGATTCATAGGTTTGATTACTGGTTGGGTTTTTGGGTTGTGCTTGCTTGGGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTAATGTCTGTAGGGGTGGGGGTGTCTGGTGTTGATGATATCTGTCTGCGTCTTCTCTGACTTTCTGAATGGACAGGAGTGTGCCTGTGCGGGCCTGTGTGTGTTGTGACCGTTCTTCTGTGTGTGAGTGTGTGTGTGGGAGGGTGTGATATATTTATGTGTGGAATGAAGGATAGAATGAGTGAGGGTGAGTGCTTGTGTTGTGATGTGAAATGAGTCTTCCTGTGTAGGTACATATGAGGAGGTTGACTGCTTGTGTTGTGTTG Hd3:CACCTAACGCTGTAGAGTCCGATCTTCACACACAAAGGCTGGACTGTGTGTCTTCACAATTGCACATAAATTCTGGAAAGTCACATCTACACACACACACACTGACACGCCCGGGGTGATCATCACCTTCACCACCTCCACATCCACGCCTTGCCACACCTGCCCACTTAAAAGGACCGGTCCCTATAATGCGGGTGTTCTAATTTCAACTACCGTAGAATGTCGATATGCATTTCGCHd4: TGGATTGTGTGTCGTTTGTGTTCCATTTCTGTTATGGATTATTTGTCGTTTGTGTTGCATTACATAGATCGTATGTTGTTTGTGTTGCATTACTTGGATTGTTTGTTGTTTGTGTTCCTTTACAATAATGGATTGTATGTCGTTTGTGTTGCATTACTGTCATGGATTGTATGTCGTTTGTGTTGCATTACTTAGATTGTATGTCGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTAGCAGAATGTAAGATGGTATGTATTHd5:GTAGATTGTGTAATGTGTAAAGTAGATTGTGTAATGTGTAAAATAGATTGTGTAATGTGTTATGCTATTGATGATGAGTCCTGAGTAAGTTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGAAATCATATTGTTACAAAATACATTTTCCTGTTTTCAACAGATATATAGCTCCTTCGTGATTTTTCTTTAGACAGGCTGTGATATGAATTTCTGAAATGCAGTAHd6:GTATGCAATGTCATCTTGCAAGTAAGAATCCAGAGAATTTGCTTAGCTGTGTGTCCACATCTCTCTGTATGTATTGTGTGTGCAACTTCTGAGTGTCCACATCTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTACGTATGTATAAACAAGTAAACCTTTGAGGTGTATATGCGAGGCACAATAACTGTATTTGTGTCGCCATAATGCCTACGACGTATATATGCATACATCTATATGAGTACGGATTATTTCAGGAAACATGATATTTGAACTATGATGAATAAACGCAGCTGTTGTTCACTCGTGATTCATTCCATGTATGATCAAACATGTCAGATGACATATAAATTCACGTTTCCTACCTGTGGAGCAGTTGTCTCCCACCCAGCCTGGGCGGCAGTCACCAGGACACACCCCTGTCACGTGGTCGCATGTTGAATTCAGACAGTGACAGAACTCGCTGCAATTTGGGCCGAAAGTCCCATTTGAACATACTGTGATGGAAAATAAAATATGGTATTACAATGCAGTACACATTGGTTTCAAATGAAAATGACATCAGTTCACAGTTATCAATCACTCTTGCTTTTGACTTCCTAGGATHd7:TGATGATGAGTCCTGAGTAAGTGGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTATGTTGAAGAATGCCTCTGTACAGTGTGTGTGTGTGTGTAAGTTGTGTGTAACTTGAAGTCATTGTACTGGAACAGCATGTGACATCTCAACAAACCAGTTTCCTCATTTTCTTCGTCTTCTGTCTACCCAAGTCTACCATGGATTTGTTTGTTTGTTTGATGTHd8:CGCTTATTGAATAATATAAGTAGTTGTCAGCAGGACTCTGGGACCGCTCCTGGCTTCTGATTGGCCTAGAGGATCACGTGACCTCTGTGACGTTATTTTTTAGATAGACGGTCGTCTGAATGCTAAAGGTGGACCTTCATAGGTAGGCATGAACGTGATGTGATGTACGTGATGTACGTTGTGTCACCCCCATGCAAATCGGGATGTCATGTGTGTGTGTGTCTTCAAACAGACGTTGACGTTGATCAATAGAATTGTTATGCCATGCCTACGTGATGTACGTCATGTTGACAGACACACGTGGTGTTTCACGCGTGTCTTTGTGCAAAACGTGGTGTCATGTGTGTGTGTGTGTGTGTGACTACAAACATTTATTTATTATTTACAGAAAGAAAGATCGATACACATACGTGACGTTTGCACACGTGATGTACTTCGTGTCGCGATGCGAACGTAGTGTTTCATCCGTGTCHd9:TGTGGGGTGAGTGTGTGTGTGTGTGGGTATATGTGACGTAAAAGAAGTGTCCTTCTGTGTGTGTGTCTGTGCGTGTGCGTGTGTGTGAGTGTGAGTGTGTGTGTGTGTTGTGCATGTCCTCTCCACCGCCTACCTTAGATTATTGTACATTCTAAGACAATTCAGTCTACTCAACGTTGGATTGTCGGTGGAAATCTAGTTGTTTGGTTTGTCATCACAAGTCGATGGGGATTACCTTTATAATTGTHdlO:TATAGTTCTACCTGAATTTATATATATATATATATATGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTATGAGAGTGCTTGTGGCGTCCCTGTGTGAAAGCGTGTAAATGGTGTTTGTATGAGAAGTGTGAATGGCTGTTGTTTTTATGATAAAAAAAAGGGGACTCCATCATGTAATACATATATATTATGTA 。
2.一種如權利要求1所述皺紋盤鮑微衛(wèi)星分子標記的制備方法，包括微衛(wèi)星引物的設計、PCR擴增及篩選等步驟，其特征在于:所述微衛(wèi)星引物的設計及PCR擴增按下表進行:
全文摘要
本發(fā)明公開一種可分析皺紋盤鮑野生群體的遺傳多樣性，鑒定養(yǎng)殖群體之間的親緣關系的皺紋盤鮑微衛(wèi)星分子標記及制備方法，通過皺紋盤鮑微衛(wèi)星(AC)n文庫的構建，微衛(wèi)星序列陽性克隆的篩選、微衛(wèi)星引物的設計、PCR擴增及篩選等步驟，得到了10個高度多態(tài)的微衛(wèi)星分子標記Hd1、Hd2、Hd3、Hd4、Hd5、Hd6、Hd7、Hd8、Hd9、Hd10，通過多態(tài)性檢測證實，本發(fā)明的微衛(wèi)星分子標記有重復性好的特點，是一種有效可靠的分子標記，可以建立皺紋盤鮑微衛(wèi)星DNA標記技術體系，用于皺紋盤鮑的遺傳多樣性評估、遺傳結構分析以及鑒定養(yǎng)殖群體之間的親緣關系等。
文檔編號C12Q1/68GK103103182SQ20131002436
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月23日 優(yōu)先權日2013年1月23日
發(fā)明者劉小林, 李楊, 劉明泰, 李丹, 許淑芬, 李旭光, 張艷 申請人:大連海寶漁業(yè)有限公司