專利名稱：結(jié)縷草耐鹽性主效基因位點(diǎn)qLF-1的分子標(biāo)記方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)qLF-Ι的分子標(biāo)記方法，屬于分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，專用于結(jié)縷草耐鹽新品種選育和種質(zhì)資源的利用。背景技術(shù)：
土壤鹽堿化是一個(gè)世界性的問題，全世界鹽堿地面積近9.6 X 108hm2，我國(guó)有鹽潰土3.47X10Thm2，相當(dāng)于耕地面積的1/3。隨著濱海鹽堿地區(qū)的開發(fā)和園林綠化的需要，對(duì)草坪草的耐鹽性提出越來越高的要求，結(jié)縷草屬植物作為一種重要的草坪草，培育優(yōu)質(zhì)耐鹽的結(jié)縷草屬植物新品種是一項(xiàng)非常重要的任務(wù)。前期研究結(jié)果表明，與其它草坪草相比，結(jié)縷草屬植物具有較強(qiáng)的耐鹽性，但結(jié)縷草屬內(nèi)的不同種以及同一種的不同種源間的耐鹽性存在較大的遺傳變異。因此要選擇一種優(yōu)質(zhì)耐鹽的結(jié)縷草進(jìn)行鹽堿地綠化，耐鹽性鑒定是一項(xiàng)非常重要的工作。目前，關(guān)于結(jié)縷草屬植物耐鹽性的鑒定均是通過水培法或土培法進(jìn)行的，雖然這兩種方法是區(qū)試之前，最直接最有說服力的耐鹽性鑒定方法，但是通過以上兩種方法進(jìn)行耐鹽性鑒定需要非常大的工作量，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且容易受環(huán)境的影響。當(dāng)從大批量材料中篩選耐鹽材料時(shí)有相當(dāng)?shù)睦щy。使結(jié)縷草耐鹽性育種進(jìn)程受到很大影響。遺傳研究結(jié)果表明結(jié)縷草的耐鹽性存在主效基因位點(diǎn)(郭海林等.結(jié)縷草(ZoFia 耐鹽性的遺傳分析.植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2012，13 (5): 733-738.)。因此利用分子生物學(xué)的手段，通過構(gòu)建結(jié)縷草屬植物的遺傳圖譜，并對(duì)其耐鹽性的主效基因位點(diǎn)(Quantitative Trait Loci, QTL)進(jìn)行分析,找到與耐鹽性主效QTL緊密連鎖的分子標(biāo)記對(duì)品種的耐鹽性進(jìn)行鑒定，將大大地節(jié)約成本，提高育種和選擇效率。三
發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題:本發(fā)明針對(duì)上述情況，提供一種結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)qLF-Ι的分子標(biāo)記方法，通過檢測(cè)這些耐鹽性主效基因位點(diǎn)連鎖的分子標(biāo)記，可以預(yù)測(cè)結(jié)縷草的耐鹽性強(qiáng)弱，提高耐鹽結(jié)縷草的選擇效率。技術(shù)方案:
用標(biāo)記引物Mel2Eml的左端引物序列5’ -TGAGTCCAAACCGGTAG-3’和右端引物序列5’ -GACTGCGTACGAATTCAA-3’
對(duì)結(jié)縷草葉片分離的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，如果能擴(kuò)增出180bp DNA片段，則標(biāo)志著結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)qLF-Ι的存在；
或標(biāo)記引物Me5Eml的左端引物序列5 ’ -TGAGTCCAAACCGGTGC-3 ’和右端引物序列5’ -GACTGCGTACGAATTCAA-3’
對(duì)結(jié)縷草葉片分離的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，如果能擴(kuò)增出315bp的DNA片段，則標(biāo)志著結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)qLF-Ι的存在，該主效基因位點(diǎn)位于第4連鎖群的36.28cM處，利用mapQTL5.0軟件測(cè)得對(duì)結(jié)縷草耐鹽性的貢獻(xiàn)率為13.1%。有益效果:
本發(fā)明所提供的結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)的分子標(biāo)記方法，其有益效果在于:通過本發(fā)明在國(guó)際上首次公開了結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)私A-1的存在，該主效基因位點(diǎn)位于第4連鎖群的36.28cM處，利用mapQTL5.0軟件測(cè)得對(duì)結(jié)縷草耐鹽性的貢獻(xiàn)率為13.1%。通過與耐鹽主效基因位點(diǎn)相關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記Me5Eml-315，Mel2Eml-180對(duì)結(jié)縷草的耐鹽性進(jìn)行鑒定，可以克服水培法和土培法易受環(huán)境影響，工作量大等缺點(diǎn)，特別是對(duì)大批量種源材料或者雜交后代進(jìn)行耐鹽性鑒定時(shí)將表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)，大大減少人力物力的浪費(fèi)，提聞?dòng)N和選擇效率。


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圖1:結(jié)縷草耐鹽性QTL連鎖群定位分析示意圖，其中:包含QTL的連鎖區(qū)段被顯示，左側(cè)為標(biāo)記之間的距離(CM)，右側(cè)為標(biāo)記名稱。具體實(shí)施例方式 (一)結(jié)縷草Fl耐鹽分離群體的構(gòu)建與耐鹽性鑒定
對(duì)結(jié)縷草耐鹽種源材料Z105(Z.耐鹽系數(shù)為0.72)和敏鹽種源材料Z061 (Z
耐鹽系數(shù)為0.14)(均為公知公用品種,見參考文獻(xiàn):李亞，耿蕾，劉建秀.中國(guó)結(jié)縷草屬植物抗鹽性評(píng)價(jià).草地學(xué)報(bào)，2004，12(1):8-11, 16.)通過控制授粉法進(jìn)行雜交育種，獲得Fl分離群體，包括120個(gè)Fl個(gè)體。通過水培法(參考文獻(xiàn):陳靜波，閻君,姜燕琴,郭海林,張婷婷,陳宣,劉建秀.暖季型草坪草優(yōu)良選系和品種抗鹽性的 初步評(píng)價(jià).草業(yè)學(xué)報(bào)，2009，18(5):107-114.)對(duì)兩親本及其Fl群體進(jìn)行耐鹽性鑒定，實(shí)驗(yàn)在玻璃溫室進(jìn)行，具體采用鹽度逐漸增加的方法，以最終鹽濃度達(dá)到20g/L維持I個(gè)月后統(tǒng)計(jì)鹽脅迫下不同材料的葉片枯黃率，進(jìn)行耐鹽性評(píng)價(jià)。耐鹽性鑒定結(jié)果表明在鹽處理過程中，所有材料的處理和對(duì)照表現(xiàn)出明顯的差異，在鹽處理下，結(jié)縷草屬植物生長(zhǎng)速度下降，葉片出現(xiàn)枯黃現(xiàn)象，但不同材料的耐鹽性也表現(xiàn)出明顯的差異(表1)，葉片枯黃率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，F(xiàn)1群體的葉片枯黃率變異范圍為109Γ98.33%,平均為50.39%,變異系數(shù)為40.50%,母本Z105的葉片枯黃率為35%，父本Z061的葉片枯黃率為95%。表I雜交后代耐鹽性鑒定結(jié)果
權(quán)利要求
1.結(jié)縷草耐鹽性主效基因位點(diǎn)私的分子標(biāo)記方法，其特征在于: 用標(biāo)記引物Mel2Eml的左端引物序列5’ -TGAGTCCAAACCGGTAG-3’和右端引物序列5’ -GACTGCGTACGAATTCAA-3’ 對(duì)結(jié)縷草葉片分離的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，如果能擴(kuò)增出180bp DNA片段，則標(biāo)志著結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)qLF-Ι的存在； 或標(biāo)記引物Me5Eml的左端引物序列5 ’ -TGAGTCCAAACCGGTGC-3 ’和右端引物序列5’ -GACTGCGTACGAATTCAA-3’ 對(duì)結(jié)縷草葉片分離的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，如果能擴(kuò)增出315bp的DNA片段，則標(biāo)志著結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)qLF-Ι的存在，該主效基因位點(diǎn)位于第4連鎖群的36.28cM處，利用mapQTL5.0軟件測(cè)得對(duì)結(jié)縷 草耐鹽性的貢獻(xiàn)率為13.1%。
全文摘要
本發(fā)明提供了結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)qLF-1的分子標(biāo)記方法，屬于分子遺傳學(xué)領(lǐng)域。對(duì)結(jié)縷草種源Z105與Z061雜交獲得的F1家系的基因型和鹽脅迫下的葉片枯黃率進(jìn)行遺傳連鎖分析，獲得結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)qLF-1的分子標(biāo)記。通過結(jié)縷草耐鹽主效基因位點(diǎn)的分子標(biāo)記來檢測(cè)結(jié)縷草及其雜交后代中是否含有該主效基因位點(diǎn)，可預(yù)測(cè)其抗鹽性水平，大大節(jié)約成本并提高結(jié)縷草耐鹽性的選擇效率。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK103114141SQ20131003627
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月31日
發(fā)明者郭海林, 劉建秀, 丁萬文, 陳靜波, 陳宣 申請(qǐng)人:江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所