專(zhuān)利名稱(chēng)：甾體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-α羥化反應(yīng)制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程轉(zhuǎn)化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法。
背景技術(shù)：
留體激素類(lèi)物質(zhì)是皮質(zhì)激素藥物的主要成分，皮質(zhì)激素藥物對(duì)機(jī)體起著非常重要的調(diào)節(jié)作用，具有很強(qiáng)的抗感染、抗過(guò)敏、抗病毒和抗休克等藥理作用。我國(guó)是皮質(zhì)激素原料藥的出口大國(guó)，其中乙酸強(qiáng)的松占總產(chǎn)量的60%，我國(guó)自20世紀(jì)50年代至今一直采用黑根霉轉(zhuǎn)化工藝，2%的投料量轉(zhuǎn)化率為40% 50%，與國(guó)外生產(chǎn)水平80% 90%差距較大，因此開(kāi)發(fā)新的高產(chǎn)菌種將有望從整體水平提高原料的利用率，產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法主要集中在化學(xué)法和生物法轉(zhuǎn)化，化學(xué)法由于涉及到環(huán)境污染、反應(yīng)過(guò)程危險(xiǎn)、轉(zhuǎn)化效率低等缺點(diǎn)，生物轉(zhuǎn)化法由于其具有轉(zhuǎn)化率較高、具有環(huán)境友好效果、反應(yīng)過(guò)程易控制等優(yōu)點(diǎn)而得到推廣。目前新型霉菌對(duì)留體羥化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率較高，但存在轉(zhuǎn)化周期長(zhǎng)、易產(chǎn)孢子、菌體細(xì)導(dǎo)致抽濾、離心困難等不足。劉玲玲、杜大慶等人研究金龜子綠僵菌對(duì)留體底物11 一 a羥化反應(yīng)的工藝，對(duì)甾體底物16a、17a-環(huán)氧黃體酮的羥化反應(yīng)工藝進(jìn)行了探索，研究工藝結(jié)果為:濃度為I
1.2 X 108個(gè)/ml的孢子液，接種量為0.8ml。培養(yǎng)基配比分別如下:一級(jí)葡萄糖3.0g/dL、玉米漿2.5g/dL、硫酸銨0.15g/dL、蠶蛹粉0.2g/dL，培養(yǎng)溫度26 28°C，228r/min培養(yǎng)36h，15%接種量，接種二級(jí)，二級(jí)葡萄糖調(diào)整為3.5g/dL，其余同一級(jí)，繼續(xù)培養(yǎng)至pH值降到最低點(diǎn)以前(20h左右)將發(fā)酵液稀釋一倍之后投料，投料濃度2g/dL (吐溫水溶液)，轉(zhuǎn)化65h后結(jié)束發(fā)酵，轉(zhuǎn)化率達(dá)70%以上。該工藝采用了天然培養(yǎng)基，生產(chǎn)成本較高，且工藝過(guò)程涉及到一級(jí)培養(yǎng)和二級(jí)培養(yǎng)，工藝復(fù)雜繁瑣，轉(zhuǎn)化率最高僅為73.2%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)以上現(xiàn)有11-a羥化反應(yīng)制備技術(shù)存在轉(zhuǎn)化率低、制備方法復(fù)雜、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、成本高等，通過(guò)研究添加生物催化劑或前體物，刺激新型霉菌更多的產(chǎn)生羥化酶，抑制別的酶產(chǎn)生，從而實(shí)現(xiàn)提 高轉(zhuǎn)化率，縮短反應(yīng)時(shí)間，減少雜質(zhì)生成，且制備方法得到簡(jiǎn)化。本發(fā)明采用各成分清晰、成本低的合成培養(yǎng)基，相對(duì)于成分過(guò)于復(fù)雜、成本高的天然培養(yǎng)基，成本得到降低。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:一種甾體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于，將留體底物I投入含有霉菌種子的發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，在霉菌和催化劑作用下發(fā)生羥化反應(yīng)，對(duì)留體底物I的11位、21位進(jìn)行改造，得到具有11-a -羥基、21羥基的甾體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體II，
權(quán)利要求
1.一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于:將甾體底物I投入含有霉菌種子的發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，在霉菌和催化劑作用下發(fā)生羥化反應(yīng)，對(duì)甾體底物I的11位、21位進(jìn)行改造，得到具有11-a-羥基、21-羥基的甾體激素類(lèi)物質(zhì) 重要中間體
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于，所述的硼酸鹽為四硼酸鈉、四硼酸鉀、硼酸鎂中的之一或它們的組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1 2任一項(xiàng)所述的一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于，所述的霉菌為綠僵霉菌、木霉菌、赭曲霉菌、黃曲霉菌中的之一或它們的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基成分(g/L):棉籽餅粉3 8，葡萄糖10 25kg，氯化鉀0.02 0.15，硝酸鉀0.5 3.0，磷酸二氫鉀0.5 2.5，磷酸氫二鉀1.0 4.0，硼酸鹽0.1 10。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于，所述的硼酸鹽為四硼酸鈉、四硼酸鉀、硼酸鎂中的之一或它們的組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于，所述留體底物I投入為發(fā)酵培養(yǎng)基中霉菌發(fā)酵生物量干重達(dá)0.5 6g/L時(shí)投入；所述留體底物I其投入量為在發(fā)酵培養(yǎng)基中初始濃度達(dá)I 8g/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 2或4 6任一項(xiàng)所述的一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于，所述的留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體II為地塞米松或倍他米松的中間體。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-a羥化反應(yīng)制備方法，其特征在于，所述的留體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體II為地塞米松或倍他米松的中間體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甾體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體的11-α羥化反應(yīng)制備方法，該反應(yīng)制備方法為將甾體底物Ⅰ投入含有霉菌種子的發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，在霉菌和催化劑作用下發(fā)生羥化反應(yīng)，對(duì)甾體底物Ⅰ的11位、21位進(jìn)行改造，得到具有11-α-羥基、21羥基的甾體激素類(lèi)物質(zhì)重要中間體Ⅱ。本發(fā)明利用硼酸鹽催化劑提高反應(yīng)速度，節(jié)省反應(yīng)時(shí)間，降低發(fā)酵過(guò)程中空氣的消耗量，同時(shí)能將轉(zhuǎn)化率提高約5%；利用合成培養(yǎng)基代替天然培養(yǎng)基，降低成本減輕后續(xù)分離工段壓力。
文檔編號(hào)C12R1/67GK103146793SQ20131008110
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月19日
發(fā)明者王遠(yuǎn)秋, 朱榮, 譚桂莉 申請(qǐng)人:廣西萬(wàn)德藥業(yè)股份有限公司