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廣譜抗菌解淀粉芽孢桿菌菌株及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:539603閱讀:355來源:國知局
專利名稱:廣譜抗菌解淀粉芽孢桿菌菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及解淀粉芽孢桿菌ifeciJrJrW1S amyloli quefaci ens NCPSJ7,還涉及該菌株在植物病害防治、果蔬采前采后病害的防治,以及食源性致病菌和腐敗菌的預(yù)防中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
植物病害、果蔬采前采后病害以及食源性致病菌和腐敗菌引起食源性疾病是全球性的問題,造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失和身體傷害。聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明,植物病害平均每年引起的減產(chǎn)損失約為總產(chǎn)量的10%-15%,其中由真菌引起的植物病害約占80%。同時(shí),食源性疾病也嚴(yán)重影響人類健康,甚至出現(xiàn)群體性的食源性中毒事件。目前主要使用化學(xué)殺菌劑和防腐劑來控制植物采前采后病害以及食源性致病菌腐敗菌,雖然化學(xué)殺菌劑或防腐劑能有效地減免植物病害、預(yù)防食源性疾病,但化學(xué)殺菌劑和防腐劑亦造成負(fù)面影響?;瘜W(xué)藥劑的殘留威脅著人畜的健康,危害著環(huán)境。因此研究開發(fā)可替代化學(xué)殺菌劑和化學(xué)防腐劑的新方法來控制植物病害和食源性腐敗菌和致病菌是目前研究的一個(gè)重要方面。隨著人們環(huán)保意識的不斷增強(qiáng)以及高新技術(shù)在農(nóng)業(yè)及農(nóng)產(chǎn)品流通領(lǐng)域中的應(yīng)用,利用有益生物來控制植物病害,預(yù)防食源性疾病越來越得到廣泛重視。我國對生物防治的研究始于50年代初期,科研工作者篩選出的有效菌株,大多將其拮抗代謝產(chǎn)物應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。截至目前為止,國外已對部分抑菌物質(zhì)完成實(shí)驗(yàn)室研究并已研發(fā)出生物制劑投入到實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用當(dāng)中,如我國目前允許添加到食品的乳酸鏈球菌素、納他霉素等。由于生物防治高效、環(huán)保,且不會(huì)引起病原物抗藥性等特點(diǎn),因此研究者越來越重視利用生物防治和生物防腐這一高效方法來控制植物病害和進(jìn)行農(nóng)產(chǎn)品防腐保鮮,生物防治和生物防腐保鮮制劑的研制和開發(fā)具有廣闊空間。芽孢桿菌是土壤微生物系統(tǒng)中的優(yōu)勢生物種群,能夠產(chǎn)生耐熱、耐旱、抗紫外、抗有機(jī)溶劑的孢子,因此可以作為理想的生防菌株。目前研究者已將部分優(yōu)良的拮抗芽孢桿菌應(yīng)用于植物病害的生物防治中,并取得顯著的成效。因此研究開發(fā)安全的廣譜拮抗芽孢桿菌具有廣闊的應(yīng)用空間。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有廣譜抗菌活性的解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用,其菌體和發(fā)酵液具有較強(qiáng)的廣譜抗植物病原真菌、食源性致病菌和腐敗菌的預(yù)防中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及解淀粉芽孢桿菌amyloli quefaci ens NCPSJ7應(yīng)用于植物病害和果蔬采前采后病害的防治,以及食源性致病菌和腐敗菌的預(yù)防,具體的說是一種具有拮抗桃根霉腐爛病、黃瓜枯萎 病、番茄灰霉病、棗炭疽病、、梨黑斑病、梨青霉病、蘋果褐腐病、蘋果斑點(diǎn)落葉病、西瓜枯萎病等植物病原真菌和金黃色葡萄球菌、甲型副傷寒沙門氏菌、副溶血性弧菌、酵母等食源性致病菌和腐敗菌的解淀粉芽孢桿菌。
—種廣譜抗菌解淀粉芽孢桿菌,系從中國山東省萊蕪市生姜大田中采集的土壤中分離得到,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心;保藏單位地址:武漢市武漢大學(xué);保藏日期為2013年3月22日;保藏編號:CCTCC NO:M 2013098,該菌命名為解淀粉芽孢桿菌amyloliquefaci ens NCPSJ7。本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)條件簡單,在大多數(shù)培養(yǎng)基上生長良好,于牛肉膏蛋白胨瓊脂平板生長時(shí)為菌落直徑0.5-1.0mm、圓形、凸起、邊緣整齊、表面光滑有光澤、乳白色、不透明的酪樣菌落。通過顯微鏡觀察,該菌大小為(0.66-0.95) μ m X (2.34-2.89)μ m,革蘭氏陽性桿菌,單個(gè)或成對排列,有芽孢,芽孢中生,橢圓形。營養(yǎng)肉湯液體靜置培養(yǎng)表面產(chǎn)生菌膜,液體澄清無渾濁無沉淀,為嚴(yán)格好氧菌,厭氧條件不能生長。發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸,淀粉水解和接觸酶陽性,能耐受2%和5%的鹽,在氯化鈉濃度7%和10%的培養(yǎng)基上不生長。通過16S rDNA同源性分析,以該菌株的基因組DNA為模版擴(kuò)增其16S rDNA序列,PCR產(chǎn)物為單一條帶,回收純化后,進(jìn)行DNA測序。該菌株的16S rDNA序列長度為1400bp,將該菌株的16S rDNA序列提交到GenBank數(shù)據(jù)庫,獲得序列號GenBank N0.KC790453。同時(shí)將該菌株的16S rDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫收錄的代表菌株的16S rDNA基因核苷酸序列進(jìn)行同源性比對。結(jié)果與NC 016784.1等解淀粉芽孢桿菌的同源性高達(dá)99%。下表為與GenBank數(shù)據(jù)庫中部分解淀粉芽孢桿菌16S rDNA的相似性比對結(jié)果:
權(quán)利要求
1.一種廣譜抗菌解淀粉芽孢桿菌,該菌種于2013年3月22日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC),保藏編號為CCTCC NO:M 2013098,命名為也&77心 amyloliquefaciensNCPSJ7ο
2.如權(quán)利要求1所述的廣譜抗菌解淀粉芽孢桿菌BaciIlusamyloliquefaciensNCPSJ7,該菌株在大多數(shù)培養(yǎng)基上生長良好,于牛肉膏蛋白胨瓊脂平板生長時(shí)為菌落直徑0.5-1.0_、圓形、凸起、邊緣整齊、表面光滑有光澤、乳白色、不透明的酪樣菌落;顯微鏡觀察下,該菌大小為(0.66-0.95) μ m X (2.34-2.89) μ m,革蘭氏陽性桿菌,單個(gè)或成對排列,有芽孢,芽孢中生,橢圓形;營養(yǎng)肉湯液體靜置培養(yǎng)表面產(chǎn)生菌膜,液體澄清無渾濁無沉淀,為嚴(yán)格好氧菌,厭氧條件不能生長;發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸,淀粉水解和接觸酶陽性,耐受2%和5%的鹽,在氯化鈉濃度7%和10%的培養(yǎng)基上不生長。
3.如權(quán)利要求1所述的廣譜抗菌解淀粉芽孢桿菌BaciIlus amyloli quefaci ensNCPSJ7,其16S rDNA序列是序列表SEQN0.1的序列。
4.如權(quán)利要求1所述的廣譜抗菌解淀粉芽孢桿菌BaciIlus amyloli quefaci ensNCPSJ7的應(yīng)用,其特征在于:所述菌株amyloli quefaci ens NCPSJ7的菌體及菌體的發(fā)酵液對抗桃根霉腐爛病、黃瓜枯萎病、番茄灰霉病、棗炭疽病、梨黑斑病、梨青霉病、蘋果褐腐病、蘋果斑點(diǎn)落葉病、西瓜枯萎病等由植物病原真菌引起的植物病害和果蔬采前采后病害以及用于抑制金黃色葡萄球菌、甲型副傷寒沙門氏菌、副溶血性弧菌、酵母等食源性致病菌和腐敗菌中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的解淀粉芽孢桿菌amyloliquefaci ens NCPSJ7的應(yīng)用,其特征在于,所述菌株amyloli· quefaci ens NCPSJ7的應(yīng)用中,所述菌體的發(fā)酵液其發(fā)酵條件為:于發(fā)酵培養(yǎng)基中按體積接種量2-5%接種解淀粉芽孢桿菌菌株,發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量為80-150mL/250mL三角瓶,離心轉(zhuǎn)速120-200轉(zhuǎn)/min,培養(yǎng)溫度30_37°C,培養(yǎng)3-8天; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:葡萄糖3-8份,酵母浸膏5-10份,蛋白胨5-10份,(NH4)2SO43-10份,NaCl 2-9份,水:900_1200份,pH5_8,以上所述的份數(shù)均為重量份數(shù)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的解淀粉芽孢桿菌amyloliquefaci ens NCPSJ7的應(yīng)用,其特征在于:所述菌株amyloli quefaci ens NCPSJ7的發(fā)酵條件為,于發(fā)酵培養(yǎng)基中按體積接種量3%接種菌株,發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量為100mL/250mL三角瓶,轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/min,培養(yǎng)溫度34°C,培養(yǎng)5_6天。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的解淀粉芽孢桿菌amyloliquefaci ens NCPSJ7的應(yīng)用,其特征在于,所述菌株amyloli quefaci ens NCPSJ7的應(yīng)用中,所述菌體的發(fā)酵液其發(fā)酵條件為:于發(fā)酵培養(yǎng)基中按體積接種量4%接種解淀粉芽孢桿菌菌株,發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量為100mL/250mL三角瓶,離心轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/min,培養(yǎng)溫度37°C,培養(yǎng)6天; 發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:葡萄糖5份,酵母浸膏7.5份,蛋白胨7.5份,(NH4)2SO4 5份,NaCl5份,水:1000份,pH7.0,以上所述的份數(shù)均為重量份數(shù)。
全文摘要
本發(fā)明涉及解淀粉芽孢桿菌BacillusamyloliquefaciensNCPSJ7,還涉及該菌株在植物病害防治、果蔬采前采后病害的防治,以及食源性致病菌和腐敗菌的預(yù)防中的應(yīng)用。該菌種于2013年3月22日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC),保藏編號為CCTCCNOM2013098,命名為Bacillusamyloliquefaciens NCPSJ7。本發(fā)明菌株的菌體及發(fā)酵液具有拮抗桃根霉腐爛病、黃瓜枯萎病、番茄灰霉病、棗炭疽病、梨黑斑病、梨青霉病、蘋果褐腐病、蘋果斑點(diǎn)落葉病、西瓜枯萎病等植物病原真菌引起的植物病害及果蔬采后病害以及拮抗金黃色葡萄球菌、甲型副傷寒沙門氏菌、副溶血性弧菌、酵母等食源性致病菌和腐敗菌的作用,廣譜抗菌并且效果穩(wěn)定持久,具有從中開發(fā)出新型、高效、天然的生物防治及生物防腐保鮮制劑的巨大潛力。
文檔編號A23L3/3571GK103173397SQ201310112580
公開日2013年6月26日 申請日期2013年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月2日
發(fā)明者陳蕾蕾, 陳相艷, 裘紀(jì)瑩, 王未名, 彭研 申請人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所
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