專利名稱：一種金屬配合物核酸熒光探針的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種核酸熒光探針，可以用于核酸等磷酸衍生物的熒光檢測，屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
核酸是生命的遺傳物質(zhì)，在生命活動中起重要作用。核酸的檢測在疾病診斷、環(huán)境微生物鑒定、適配體等領(lǐng)域有重要應(yīng)用。因此，發(fā)展核酸的熒光檢測探針意義重大。傳統(tǒng)的核酸熒光探針有EB、YOYO, Τ0Τ0、Sybr Green、DAPI及Hoechst染料，用于雙鏈的DNA的檢測，靈敏度很高，但是對于單鏈DNA，特別是短鏈單鏈DNA的檢測效果很差。目前文獻中有一些單鏈DNA熒光探針的報道，主要是帶有季銨鹽基團的分子，這類分子通過靜電作用結(jié)合DNA，從而使熒光增強。這類分子有兩個主要不足:首先靜電作用是比較弱的分子間作用，這直接導(dǎo)致探針的靈敏度很低，難以與傳統(tǒng)雙鏈探針相比；其次，探針分子容易受其他電解質(zhì)的干擾，例如帶負電荷的蛋白質(zhì)也可以以靜電作用結(jié)合探針，從而干擾了 DNA的檢測。這兩個缺點限制了這些探針分子的實際應(yīng)用，因而目前對于單鏈DNA還沒有足夠靈敏的熒光染料以取代熒光標(biāo)記或同位素標(biāo)記的DNA探針，特別是在核酸電泳的應(yīng)用中，熒光標(biāo)記或者同位素標(biāo)記的核酸探針成本高，操作復(fù)雜，而傳統(tǒng)的核酸熒光染料難以有效對單鏈核酸顯色，因而發(fā)展單鏈核酸的熒光染料可以大大降低核酸的檢測成本，意義重大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一類高靈敏度的核酸探針，無論是對雙鏈DNA，還是單鏈DNA都有較好的熒光響應(yīng)。本發(fā)明設(shè)計的探針分子，以配位鍵結(jié)合單鏈核酸，結(jié)合后使探針分子的構(gòu)象錨定在核酸上，進而引起熒光增強，從而起到檢測的作用。由于核酸是磷酸二酯聚合物，每個單元含有一個磷氧四面體的結(jié)構(gòu)，所以我們選擇能夠跟其以配位方式結(jié)合的基團:二(2-吡啶甲基)胺基-鋅(II)(簡稱DPA-Zn (II))，我們將這個基團接在一些熒光分子上，通過與DNA特異配位，限制分子的構(gòu)象，抑制分子的非輻射躍遷，從而使發(fā)色團的熒光增強。本發(fā)明所提供的核酸熒光探針，這類化合物的結(jié)構(gòu)通式如下所示:
權(quán)利要求
1.一類化合物，結(jié)構(gòu)式如下:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，其結(jié)構(gòu)是:
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，其結(jié)構(gòu)是:
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，其結(jié)構(gòu)是:
5.權(quán)利要求1所述的化合物用作磷酸及磷酸衍生物的檢測試劑。
6.權(quán)利要求1所述的化合物用作核酸的檢測試劑。
7.權(quán)利要求1所述的化合物用作核酸凝膠電泳或細胞成像的顯色劑。
8.權(quán)利要求1所述的化合物的中間體，結(jié)構(gòu)式如下:
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新型核酸熒光探針，結(jié)構(gòu)為將DPA或DPA-Zn(II)基團與四苯乙烯相連。DPA-Zn(II)在溶液中可以與核酸等磷酸衍生物結(jié)合，抑制分子的非輻射躍遷，從而發(fā)熒光。該熒光探針可用于核酸的檢測，無論是對雙鏈DNA，還是單鏈DNA檢測都有較高靈敏度。將此類探針應(yīng)用于凝膠電泳或生物樣品中核酸的檢測和顯色具有較好的應(yīng)用前景。
文檔編號C12Q1/68GK103214501SQ20131012717
公開日2013年7月24日 申請日期2013年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月12日
發(fā)明者楊楚羅, 朱策澤 申請人:武漢大學(xué)