專利名稱：一種淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學與臨床醫(yī)學技術領域，涉及一個與淋巴細胞白血病發(fā)生、診斷和治療相關的分子的應用方法。
背景技術：
STIP (septin and tuftelin interacting proteins),又名 TFIPll(Tufte I in-1nteracting Proteinll),位于人類染色體 22ql2.1,是一種具有 G-patch 結構域，卷曲螺旋和幾個短的色氨酸-色氨酸重復序列，該蛋白的基因序列在Genebank中的登錄號為NM—01121143 (Tvll) \NM—0011008697 (IV2)，在多細胞動物中高度保守的核磷酸化蛋白，與剪接體相關。STIP位于小鼠牙齒成釉細胞(8111160131&^8)的頂尖分泌池，在HEK293細胞中發(fā)現(xiàn)其定位于靠近SC35核斑點的亞核結構。STIP為線蟲的胚胎發(fā)育所必需分子。STIP在惡性血液腫瘤中的作用國內(nèi)外尚未見報道。我們首次研究發(fā)現(xiàn)，STIP的mRNA和蛋白質(zhì)水平在淋巴細 胞白血病細胞株和患者中高表達。在B淋巴細胞白血病ARH-77中STIP主要定位在細胞核中。在B淋巴細胞白血病ARH-77細胞中采用siRNA下調(diào)STIP表達后可抑制ARH-77細胞增殖，增加ARH-77細胞的死亡率，減少ARH-77細胞的惡性增殖潛能，阻滯細胞周期在S期。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)下調(diào)STIP的表達后，pERKl/2活性顯著降低，P21的表達下調(diào)?；谝陨涎芯砍晒?，表明STIP與淋巴細胞白血病的發(fā)生和惡性增殖密切相關，STIP是一個可用于淋巴細胞白血病診斷和治療的新分子。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對淋巴細胞白血病的發(fā)生機制非常復雜，涉及多個癌基因的激活和抑癌基因的失活；且目前，已發(fā)現(xiàn)的與這些疾病發(fā)病相關的分子較少的現(xiàn)狀，提供一種作為淋巴細胞白血病診斷的分子標志物STIP的應用方法，該分子的發(fā)現(xiàn)將進一步推動惡性血液腫瘤的診斷和治療。一種淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，該分子標志物用于制備診斷淋巴細胞白血病的制劑，所述的分子標志物為STIP，氨基酸序列為SEQ ID N0.1 ;基因轉(zhuǎn)錄本序列為 SEQ ID N0.2 或 3。所述的診斷淋巴細胞白血病的制劑包括PCR、Real Time RT-PCR或者Westernblot檢測試劑。所述的PCR或Real Time RT-PCR試劑包括:STIP 正向引物 CGCATTGATGATGATGATGA ；STIP 負向引物 GGCTTCTTCCTTGGTCTG。本發(fā)明的主要優(yōu)點和有益效果:STIP的表達在淋巴細胞白血病中明顯增高，表明STIP與淋巴細胞白血病發(fā)生密切相關，有望成為新的淋巴細胞白血病診斷分子標志物，在淋巴細胞白血病ARH-77細胞中，干擾STIP表達可抑制腫瘤增殖，增加細胞死亡率，顯著降低腫瘤細胞的惡性增殖潛能，阻滯細胞周期于S期，表明STIP是一個淋巴細胞白血病治療的潛在新靶標。該發(fā)明對研究白血病的發(fā)生、診斷和治療具有重大意義。


圖1為采用Real time RT-PCR方法檢測淋巴細胞白血病患者和單純性貧血患者骨髓單個核細胞中STIP的表達情況；圖2為采用Western blot方法檢測不同白血病細胞株及其正常人永生化的B淋巴細胞中STIP蛋白的表達情況；圖3為采用Western blot檢測淋巴細胞白血病患者和單純性貧血患者骨髓單個核細胞中STIP蛋白的表達情況；圖4為采用細胞免疫熒光染色(紅色為STIP，藍色顯示細胞核)和Western Blot分析STIP在ARH77細胞中的定位和表達；圖5為在ARH-77細胞中采用siRNA干擾STIP蛋白的表達；圖6為在ARH-77細胞中采用siRNA干擾STIP表達后細胞死亡率(FL2-M1百分率)明顯增加的圖片(三次獨立實驗的代表性結果)；圖7為在ARH-77細胞中采用siRNA干擾STIP的表達后細胞增殖速率明顯減慢(a)及細胞惡性增殖能力明顯減弱的圖片(b)；圖8為在ARH-77細胞中采用siRNA干擾STIP表達后，S期細胞的百分比例明顯上升，表明STIP低表達后，影響細胞周期的運行，使細胞周期阻滯在S期的圖片(三次獨立實驗的代表性結果);圖9為siRNA干擾ARH77細胞中STIP的表達后p-ERKl/2的活性降低，p21表達減少的圖片。
具體實施例方式以下結合實施例旨在進一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。實施例1收集臨床血液系統(tǒng)疾病患者骨髓標本，用淋巴細胞分離液分離出單個核細胞，提取mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用PCR或Real Time RT-PCR方法檢測淋巴細胞樣品和單純性貧血骨髓樣品中STIP的mRNA表達，以GAPDH作為內(nèi)對照，數(shù)據(jù)經(jīng)2- Δ Ct進行換算后做圖(ACt=Ct (STIP)-Ct (GAPDH))ο采用合成的STIP和GAPDH引物序列(見表I )，并按照相應的反應體系(見表2)和反應條件(見表3)進行PCR或Real-time PCR，檢測淋巴細胞白血病患者和對照樣本的STIP基因表達情況。表1、STIP和GAPDH弓丨物序列
權利要求
1.一種淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，其特征在于，該分子標志物用于制備診斷淋巴細胞白血病的制劑，所述的分子標志物為STIP，氨基酸序列為SEQ ID N0.1。
2.根據(jù)權利要求1所述的淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，其特征在于，所述的分子標志物為STIP，基因轉(zhuǎn)錄本序列為SEQ ID N0.2或3。
3.根據(jù)權利要求1所述的淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，其特征在于，所述的診斷淋巴細胞白血病的制劑包括PCR、Real Time RT-PCR或者Western blot檢測試劑。
4.根據(jù)權利要求1所述的淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，其特征在于，所述的PCR或Real Time RT-PCR試劑包括: STIP 正向引物 CGCATTGATGATGATGATGA STIP 負向引物 G GCTTCTTCCTTGGTCTG。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種淋巴細胞白血病分子標志物的應用方法，該分子標志物為STIP(又名TFIP11)，位于人類染色體22q12.1，是一種具有G-patch結構域，卷曲螺旋和幾個短的色氨酸-色氨酸重復序列，本發(fā)明是針對淋巴細胞白血病的發(fā)生機制非常復雜，涉及多個癌基因的激活和抑癌基因的失活，而目前，已知的與上述疾病診斷和治療相關的分子較少的現(xiàn)狀，提供一種作為淋巴細胞白血病的診斷的分子標志物STIP的應用方法，該分子的發(fā)現(xiàn)將推動淋巴細胞白血病的診斷和治療。
文檔編號C12Q1/68GK103215363SQ20131014034
公開日2013年7月24日 申請日期2013年4月22日 優(yōu)先權日2013年4月22日
發(fā)明者劉靜, 葉茂, 方琳, 陳慧勇, 王梓 申請人:中南大學