專利名稱：一種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組方制成的酒制劑，用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體。
背景技術(shù)：
腎陽為各臟陽氣之本，對(duì)各臟腑、組織器官起著推動(dòng)、溫煦的作用，腎陽充足，則人體機(jī)能活動(dòng)旺盛，腎陽虛損則臟腑失溫，機(jī)能活動(dòng)低下，會(huì)給人們的生活帶來了諸多的不便，影響生活質(zhì)量。當(dāng)今社會(huì)，緊張的工作，繁忙的應(yīng)酬，給人們帶來無法逃避的壓力，許多人因此而出現(xiàn)腰膝酸軟、渾身疼痛、四肢乏力、精神不振等癥狀，這些都是腎陽虛損的表現(xiàn)。由于腎陽具有溫煦全身臟腑組織的作用，故腎陽虛證若失治、誤治遷延日久，即可出現(xiàn)許多變證，如免疫低下、腰膝酸軟、渾身疼痛等。該發(fā)明制劑是根據(jù)腎陽虛證研發(fā)出來的，它含有的高效分子團(tuán)能夠提高人體免疫力、改善血液循環(huán)、修復(fù)神經(jīng)組織、補(bǔ)充人體新能源、強(qiáng)腎固本、養(yǎng)顏益壽。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)上的不足，提供一種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑，不但治療效果好，而且價(jià)格低廉，服用方便。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:一種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑，其采用西洋參、桑椹、玉竹、枸杞子、菊花、茯苓、白芍、牡蠣、昆布、當(dāng)歸、蛤蚧、陳皮、50°基酒為原料，是由下述質(zhì)量配比:西洋參150 210份、桑椹80 110份、玉竹80 110份、枸杞子45 75份、菊花15 35份、茯苓15 35份、白芍15 35份、牡蠣15 35份、昆布15 35份、當(dāng)歸8 16份、蛤蚧8 16份、陳皮3 9份、50°基酒6000 7000份、水3000 4000份經(jīng)粉碎、浸潰提取、過濾、勾兌、灌裝制成酒制劑。其具體制備工藝為:將西洋參、桑椹、玉竹、枸杞子、菊花、茯苓、白芍、牡蠣、昆布、當(dāng)歸、蛤蚧、陳皮粉碎成粗粉，放入提取罐中·，加入50°基酒密封浸潰30天，每日攪拌一次，一周后，每周攪拌一次，過濾，將濾液用水勾兌成28° 35°，密封靜置7天，過濾，灌裝即得。本發(fā)明所述的份為質(zhì)量份，為本領(lǐng)域常用的微克、毫克、克、千克等質(zhì)量單位。本發(fā)明制劑建議日服有效量為50ml，分兩次，飯后服用。本發(fā)明的有益效果是:獨(dú)特的高效分子團(tuán)作用于人體，有溫補(bǔ)腎陽、提高人體免疫力、改善血液循環(huán)、修復(fù)神經(jīng)組織、補(bǔ)充人體新能源、強(qiáng)腎固本、養(yǎng)顏益壽的功能。適用于腎陽虛損、腰酸腿軟、四肢乏力、精神不振、免疫力低下等癥。配方依據(jù):西洋參，味甘、微苦，性涼。歸心、肺、腎經(jīng)。具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，清熱生津的功效。用于氣虛陰虧，內(nèi)熱，咳喘痰血，虛熱煩倦，消渴，口燥咽干等癥。主要化學(xué)成分有人參皂甙Ro、Rbl、Rb2、Re、Rd、Re、Rgl以及假人參皂甙Fl ;精氨酸、天冬氨酸等18種氨基酸；又含揮發(fā)油、樹脂等。古語云:“西洋參性涼而補(bǔ)，凡欲用人參而不受人參之溫者皆可用之”。故補(bǔ)而不燥是西洋參的特別之處?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明:西洋參具有提高體力和腦力勞動(dòng)的能力，降低疲勞度和調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)等藥理作用；對(duì)高血壓、心肌營養(yǎng)性不良、冠心病、心絞痛等心臟病均有較好的療效，尤其適用于改善心臟病引起的煩躁、悶熱、口渴，可減輕癌癥患者放射治療和化學(xué)治療引起的不良反應(yīng)，如咽干、惡心、消瘦、白細(xì)胞減少、胃口不佳、唾液腺萎縮，并能改變機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)，減輕胸腺、淋巴腺組織萎縮等作用。桑椹，味甘、酸，性微寒。歸心、肝、腎經(jīng)。有補(bǔ)血滋陰，生津止渴，潤腸燥之功效。桑椹中含糖、鞣酸、蘋果酸及維生素B1、B2、C和胡蘿卜素等，具有改善皮膚(包括頭皮)血液供應(yīng)，營養(yǎng)肌膚、使皮膚白嫩及烏發(fā)等作用，并能延緩衰老。中醫(yī)認(rèn)為，桑椹性味甘寒，具有補(bǔ)肝益腎、生津潤腸、烏發(fā)明日等功效，是中老年人健體美顏、抗衰老的佳果與良藥。玉竹，味甘，平。歸肺、胃經(jīng)。主要化學(xué)成分為玉竹粘多糖及4種玉竹果聚糖，吖丁啶-2-羧酸等。具有養(yǎng)陰，潤燥，除煩，止渴的功能。用于熱病陰傷，咳嗽煩渴，虛勞發(fā)熱，消谷易饑，小便頻數(shù)等癥。本品具有促進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗體生成，提高巨噬細(xì)胞的吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)，促進(jìn)干擾素合成，抑制結(jié)核桿菌生長，降血糖，降血脂，緩解動(dòng)脈粥樣斑塊形成，使外周血管和冠脈擴(kuò)張，延長耐缺氧時(shí)間，強(qiáng)心，抗氧化，抗衰老等作用。枸杞子，味甘，平。歸肝、腎經(jīng)。具有滋補(bǔ)肝腎，益精明目之功效。含有甜菜鹼、多糖、粗脂肪、粗蛋白、胡蘿卜素、多種維生素及鈣、磷、鐵、鋅、錳、亞油酸等營養(yǎng)成分。枸杞子具有升高外周白細(xì)胞、增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬能力，又增強(qiáng)細(xì)胞與體液免疫的作用；對(duì)造血功能有促進(jìn)的作用；還能抗衰老、抗突變、抗腫瘤、保肝及降血糖等。用于虛勞精虧，腰膝酸痛，眩暈耳鳴，內(nèi)熱消渴，血虛萎黃，目昏不明。菊花，味辛，甘，苦；性微寒。歸肺、肝經(jīng)。有散風(fēng)清熱，平肝明目之功。主要化學(xué)成分香葉木素?？捎糜陲L(fēng)熱感冒，頭痛眩暈，目赤腫痛，眼目昏花。菊花在體外對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌(金黃色葡萄球菌及溶血性鏈球菌)、人型結(jié)核桿菌有某些抑制作用；還可增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力。茯苓，味甘、淡，平。歸肝、胃經(jīng)。具有滲濕利水，益脾和胃，寧心安神的功效。菌核含β -茯苓聚糖約占干重93%和三萜類化合物乙酰茯苓酸、茯苓酸、3 β -羥基羊毛甾三烯酸。此外，尚含樹膠、甲殼質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂肪、留醇、卵磷脂、葡萄糖、腺嘌呤、組氨酸、膽堿、β_茯苓聚糖分解酶、脂肪酶、蛋白酶`等。用于小便不利，水腫脹滿，痰飲咳逆，嘔唆，泄灣，遺精，淋濁，驚悸，健忘等癥。白芍，味甘，平；歸脾、胃、大腸經(jīng)。具有養(yǎng)血柔肝，緩中止痛，斂陰收汗之功效。主要含有白藥醇，齊墩果酸，龍吉甙元和墨西哥仙人常皂甙元。用于胸腹脅肋疼痛，瀉痢腹痛，自汗盜汗，陰虛發(fā)熱，月經(jīng)不調(diào)，崩漏，帶下等癥。當(dāng)歸，甘、辛，性溫。歸肝、心、脾經(jīng)。補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便。含蒿本內(nèi)脂、正丁烯酰內(nèi)酯、阿魏酸、煙酸、蔗糖和多種氨基酸，以及倍半萜類化合物等。用于血虛萎黃，眩暈心悸，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，虛寒腹痛，腸燥便秘，風(fēng)濕痹痛，跌撲損傷，癰疽瘡瘍。酒當(dāng)歸活血通經(jīng)。用于經(jīng)閉痛經(jīng)，風(fēng)濕痹痛，跌撲損傷。由于當(dāng)歸對(duì)婦女的經(jīng)、帶、胎、產(chǎn)各種疾病都有治療效果，所以中醫(yī)稱當(dāng)歸為“女科之圣藥”。陳皮，味苦、辛，性溫。歸肺、脾經(jīng)。理氣健脾，燥濕化痰。含揮發(fā)油、橙皮甙、維生素B、C等成分。用于胸脘脹滿，食少吐瀉，咳嗽痰多。牡蠣，味咸、澀，性寒。歸肝、腎經(jīng)。具有平肝潛陽，重鎮(zhèn)安神，軟堅(jiān)散結(jié)，收斂固澀之功效。含糖元，?；撬?，10種必需氨酸，無機(jī)鹽，碘，脂類等。用于眩暈耳鳴，驚悸失眠，瘰疬癭瘤，癥瘕痞塊，自汗盜汗，遺精，崩漏，帶下等癥。昆布，味咸，性寒；入肝、胃、腎經(jīng)。消痰軟堅(jiān)，利水消腫。含藻膠素、甘露醇、半乳聚糖、海帶氨酸、海帶聚糖、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、維生素B1、C、P和磺、鉀等。用于癭瘤瘰病，水腫等癥。蛤蚧，味咸，性平。入肺、腎經(jīng)。有補(bǔ)肺益腎，納氣定喘，助陽益精的功效。含肌肽、膽堿、肉堿、鳥嘌呤、蛋白質(zhì)、脂肪等成分。用于虛喘氣促，勞嗽咳血，陽痿遺精。綜上所述，本發(fā)明制劑有如下作用:1、活血化瘀，改善循環(huán)，調(diào)節(jié)機(jī)能，提升免疫力本發(fā)明酒制劑含有的中藥分子團(tuán)能提高巨噬細(xì)胞的吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)，提高免疫力，另外特有高效分子團(tuán)能補(bǔ)血活血，促進(jìn)血液循環(huán)，雙向調(diào)節(jié)腎陰陽平衡，調(diào)節(jié)臟腑陰陽氣血平衡。2、祛病強(qiáng)體，固本守兀本發(fā)明制劑具有舒經(jīng)化瘀，活絡(luò)去風(fēng)，鎮(zhèn)痛止癢作用，對(duì)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰椎痛、頸椎痛、坐骨神經(jīng)痛、骨質(zhì)增生、肩周炎、手足麻木、痛風(fēng)跌打損傷等引起的不適具有促進(jìn)保健康復(fù)作用。3、溫補(bǔ)腎陽，益氣安神本發(fā)明酒制劑含有的高效分子團(tuán)能有效調(diào)節(jié)腎陽虛損、精血耗傷、氣血虛弱出現(xiàn)的腰酸腿軟、四肢乏力、手足不溫、精神不振、陽痿不舉、陰囊濕冷、遺精早泄、腰酸寒冷、婦女白帶清稀等癥。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述:實(shí)施例1:一種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑，由下述質(zhì)量配比:西洋參180g、桑椹96g、玉竹96g、枸杞子60g、菊花24g、獲茶24g、白茍24g、牡販24g、昆布24g、當(dāng)歸12g、蛤蚧12g、陳皮6g、50°基酒6400ml、水3600ml經(jīng)粉碎、浸潰提取、過濾、勾兌、灌裝制成酒制劑。每日服用50ml，分2次服用。實(shí)施例2:—種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑，由下述質(zhì)量配比:西洋參210g、桑椹80g、玉竹110g、枸杞子70g、菊花20g、茯苓30g、白芍20g、牡蠣35g、昆布15g、當(dāng)歸10g、蛤蚧10g、陳皮9g、50°基酒7000ml、水4000ml經(jīng)粉碎、浸潰提取、過濾、勾兌、灌裝制成酒制劑。每日服用50ml，分2次服用。實(shí)施例3:—種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑，由下述質(zhì)量配比:西洋參150g、桑椹110g、玉竹80g、枸杞子50g、菊花35g、獲茶15g、白茍30g、牡販20g、昆布35g、當(dāng)歸15g、蛤蚧12g、陳皮5g、50°基酒6000ml、水3000ml經(jīng)粉碎、浸潰提取、過濾、勾兌、灌裝制成酒制劑。每日服用50ml，分2次服用。實(shí)施例4:使用實(shí)施例1中制成的本發(fā)明制劑，對(duì)本發(fā)明增強(qiáng)免疫的功能進(jìn)行驗(yàn)證。1.材料1.1 樣品:棕紅色澄清透明酒制劑，人體推薦量50ml/60kg BW，每日50ml，室溫保存，供試驗(yàn)用。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:選用17.0 19.7g健康二級(jí)雌性ICR小鼠60只，分為4組，每組15只，作為免疫I組，進(jìn)行臟器體重比值測(cè)定、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、半數(shù)溶血值(HC5tl)的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞數(shù)的測(cè)定；16.0 17.7g健康二級(jí)雌性ICR小鼠60只，分為4組，每組15只，作為免疫II組，進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)；16.0 16.9g健康二級(jí)雌性ICR小鼠60只,分為4組,每組15只,作為免疫III組,進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測(cè)定。1.3劑量組選擇與受試物給予方式:推薦劑量每人(按60kg體重計(jì))每日50ml本發(fā)明制劑,相當(dāng)于0.83ml/kg BW。實(shí)驗(yàn)設(shè)人體推薦量的10倍即每日8.33ml/kg BW，上、下各設(shè)一個(gè)劑量組:15.00ml/kg BW和0.83ml/kg BW。0.00ml/kg BW劑量組以水代替受試物。實(shí)驗(yàn)小鼠以遠(yuǎn)交系小鼠專用料喂飼，經(jīng)口每日一次灌胃給予小鼠受試物，連續(xù)給予30d后測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。1.4主要儀器與試劑:動(dòng)物天平、分析天平、潔凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、分光光度計(jì)、恒溫水浴、酶標(biāo)儀、顯微鏡等。無菌手術(shù)器械、游標(biāo)卡尺(精密度0.0lmm)、微量注射器(25 μ L)、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、24孔和96孔平地細(xì)胞培養(yǎng)板 、96孔U型細(xì)胞培養(yǎng)板、玻璃平皿、紗布、試管、玻片架、200目網(wǎng)篩、計(jì)時(shí)器、血色素吸管、載玻片等。綿陽紅細(xì)胞(SRBC)、生理鹽水、Hank’液(PH7.2 7.4)、RPMI1640培養(yǎng)液、小牛血清、青鏈霉素、刀豆蛋白八(&)1^)、1%冰醋酸、11110171的HCl溶液、酸性異丙醇(96mL異丙醇加ImoL/L的HCl溶液4mL)、MTT、PBS緩沖液(PH7.2 7.4)、補(bǔ)體(豚鼠血清)、SA緩沖液、瓊脂糖、都氏試劑(碳酸氫鈉1.0g，高鐵氰化鉀0.2g，氰化鉀0.05g，加蒸餾水至IOOOmL)、YAC-1細(xì)胞、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶1、0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液(PH8.2),2.5% Triton、印度墨汁、0.1 % NaCO3、雞紅細(xì)胞、甲醇、Giemsa染液等。1.5實(shí)驗(yàn)方法:1.5.1臟器體重比值的測(cè)定小鼠稱重后脫白處死，取脾臟和胸腺，去盡筋膜，用濾紙吸干臟器表面血污，稱重，計(jì)算脾臟體重比值和胸腺體重比值。1.5.2遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(足跖增厚法)實(shí)驗(yàn)(DTH)取羊血，生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC(2000rpm, IOmin) 0.2mL，至敏后4d，測(cè)量左后足跖部厚度，同一部位測(cè)量3次，取平均值。然后在測(cè)量部位皮下注射20% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC20 μ L，于注射后24h測(cè)量左后足跖部厚度，以攻擊前后足跖厚度的差值(足跖腫脹度)來表示DTH的程度。所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組攻擊前后足跖厚度的差值明顯高于0.000g/kgBW組，且差異有顯著性(P < 0.05)，可判定該受試物有提高小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力的作用。1.5.3ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法)
無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank’ s液的小平皿中，制成細(xì)胞懸液。用Hank’ s液洗3次，每次離心IOmin(IOOOrpm)。然后將細(xì)胞懸浮于2mL的完全培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度2 X IO6個(gè)/mL。再將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔lmL，在其中一孔加50 μ L ConA液(相當(dāng)于5 μ g/mL)，另一孔作為對(duì)照，置5% C02，37°C培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT (5mg/mL) 50 μ L/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后將此液體移入96孔培養(yǎng)板上，每孔作3個(gè)平行孔，用酶標(biāo)儀測(cè)定，波長570nm。淋巴細(xì)胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值表示。所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組淋巴細(xì)胞的增殖能力明顯高于0.000g/kg Bff組，且差異有顯著性(P < 0.05)，可判定該受試物有提高ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的作用。1.5.4抗體生成細(xì)胞數(shù)的測(cè)定(Jerne改良玻片法)取羊血，生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC0.2mL。將SRBC免疫5d后的小鼠處死，取脾，制成細(xì)胞懸液。將瓊脂糖加熱溶解后，與等量雙倍Hank’ s液混合，分裝小試管，每管0.5mL，再向管內(nèi)加10% (v/v，用SA液配制)壓積SRBC50y L、脾細(xì)胞懸液20 μ L，迅速混勻后，傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1.5h，然后用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(I: 10)加入到玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育1.5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組的溶血空斑數(shù)明顯高于0.000g/kg Bff組，且差異有顯著性(P < 0.05)，可判定該受試物有增加小鼠的抗體生成細(xì)胞數(shù)的作用。1.5.5半數(shù)溶血值(HC5tl)的測(cè)定取羊血，生理鹽水洗滌3 次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC0.2mL進(jìn)行免疫。5d后,摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置約Ih,將凝固血與管壁剝離,使血清充分析出，2000rpm離心lOmin，收集血清。用SA緩沖液將血清稀釋為400倍，取ImL置試管內(nèi)，依次加入10 % (v/v,用SA緩沖液配制)壓積SRBC0.5mL,補(bǔ)體ImL (用SA緩沖液按1: 10稀釋)。另設(shè)不加血清的對(duì)照管(以SA緩沖液代替)。置37°C恒溫水域中保溫30min后,冰浴終止反應(yīng)。2000rpm離心IOmin,取上清ImL,加都氏試劑3mL。同時(shí)取10%(v/v，用SA緩沖液配制)壓積SRBC0.25mL，加都氏試劑至4mL于另一試管中，充分混勻，放置IOmin后，于540nm處以對(duì)照管作空白，分別測(cè)定各管光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC5tl)表示，按下式計(jì)算。樣品半數(shù)溶血值=樣品光密度值/SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值X稀釋倍數(shù)所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組的半數(shù)溶血值明顯高于0.000g/kg Bff組，且差異有顯著性(P < 0.05)，可判定該受試物有提高小鼠的半數(shù)溶血值的作用。1.5.6小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)小鼠尾靜脈注射1: 3.5稀釋的印度墨汁，待墨汁注入，立即計(jì)時(shí)。注入墨汁后2、IOmin,分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20 μ L，并將其加到2mLNa2C03溶液中。用721分光光度計(jì)在600nm波長處測(cè)光密度值(OD)，以Na2CO3溶液作空白對(duì)照。將小鼠處死，取肝臟和脾臟稱重。按下式計(jì)算a:
K = (IgOD1-1gOD2)/(Vt1) a =體重 + (肝重 + 脾重)Xk1/3所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組的吞噬指數(shù)明顯高于0.000g/kg Bff組，且差異有顯著性(P < 0.05)，可判定該受試物有提高小鼠單核-巨噬細(xì)胞的碳廓清能力的作用。1.5.7小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(滴片法)用頸椎脫臼法處死小鼠，腹腔注射加小牛血清的Hank’s液4mL/只，輕輕按揉腹部20次，以充分洗出腹腔巨噬細(xì)胞，然后將腹壁剪開一個(gè)小口，用膠頭吸管吸取腹腔洗液2mL于試管內(nèi)(或用注射器)。用ImL加樣器吸取腹腔洗液0.5mL加入盛有0.5mLl%雞血紅細(xì)胞懸液的試管內(nèi)，混勻。用注射器(裝大針頭)吸取0.5mL混合液，加入玻片的瓊脂圈內(nèi)。放置孵箱內(nèi)37°C孵育15分鐘。孵育結(jié)束后迅速用生理鹽水將未貼壁細(xì)胞沖掉，于甲醇液中固定I分鐘，Giemsa液染色15分鐘。用蒸餾水沖洗干凈，晾干，用40X顯微鏡計(jì)數(shù)吞噬率和吞噬指數(shù)。吞噬率％=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組的吞噬率或吞噬指數(shù)明顯高于0.000g/kg Bff組，且差異有顯著性(P < 0.05)，可判定該受試物有提高小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的作用。1.5.8NK細(xì)胞活性的測(cè)定(乳酸脫氫酶LDH測(cè)定法)實(shí)驗(yàn)前24h將靶細(xì)胞YAC-1進(jìn)行傳代培養(yǎng)，應(yīng)用前以Hank’s液洗3次，用含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4X IO5個(gè)/mL。受試小鼠拉頸處死，無菌取脾，制成脾細(xì)胞懸液，用Hank’ s液洗3次，1500rpm離心lOmin，再用2mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸，用臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)(活細(xì)胞數(shù)應(yīng)在95%以上)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2X IO7個(gè)/mL，使效靶比為50: I。取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100 μ L，加入U(xiǎn)形96孔培養(yǎng)板中；靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 μ L，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和I % ΝΡ40各100 μ L ;上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)平行孔，37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，將96孔板以1500rpm離心5min,每孔吸取上清100 μ L置酶標(biāo)板中，加入LDH基質(zhì)液100 μ L,反應(yīng)IOmin,然后每孔加入Imol的HCl溶液30 μ L終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀490nm處測(cè)OD值，NK細(xì)胞活性按下式計(jì)算:NK%=(反應(yīng)孔OD-自然釋放孔OD)/(最大釋放孔OD-自然釋放孔0D) X 100LDH基質(zhì)液的配制:乳酸鈉5X 10_2mol/L硝基氯化四氮唑6.6X l(T4mol/mL吩嗪二甲酯硫酸鹽2.8X 10_4mol/mL氧化型輔酶I1.3X l(T3mol/mL將上述試劑溶于0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液中(ρΗ8.2)所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組的NK細(xì)胞活性明顯高于0.000g/kg BW組，且差異有顯著性(P < 0.05)，可判定該受試物有提高小鼠NK細(xì)胞活性的能力。1.6實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Stata軟件對(duì)各實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足“方差齊”要求的數(shù)據(jù)資料用單因素 方差分析方法和多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足“正態(tài)方差齊”要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)處理。1.7結(jié)果判定:增強(qiáng)免疫力功能判定:在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性四個(gè)方面任兩個(gè)方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫力功能作用。其中細(xì)胞免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或任一實(shí)驗(yàn)的一個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定細(xì)胞免疫功能測(cè)定結(jié)果陽性。體液免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或任一實(shí)驗(yàn)的一個(gè)以上的劑量組結(jié)果陽性，可判定體液免疫功能測(cè)定結(jié)果陽性。單核-巨噬細(xì)胞功能測(cè)定實(shí)驗(yàn)一個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定單核-巨噬細(xì)胞功能測(cè)定結(jié)果陽性。NK細(xì)胞活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)的一個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定NK細(xì)胞活性結(jié)果陽性。2 結(jié)果2.1本發(fā)明制劑對(duì)小鼠體重的影響表I本發(fā)明制劑對(duì)小鼠體重的影響(又士SD)I 組
權(quán)利要求
1.一種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑，其采用的配方為:西洋參150 210份、?？?0 110份、玉竹80 110份、枸杞子45 75份、菊花15 35份、獲茶15 35份、白芍15 35份、牡蠣15 35份、昆布15 35份、當(dāng)歸8 16份、蛤蚧8 16份、陳皮3 9份、50°基酒6000 7000份、水3000 4000份；具體制備工藝為:將西洋參、桑椹、玉竹、枸杞子、菊花、茯苓、白芍、牡蠣、昆布、當(dāng)歸、蛤蚧、陳皮粉碎成粗粉，放入提取罐中，加入50°基酒密封浸潰30天，每日攪拌一次，一周后，每周攪拌一次，過濾，將濾液用水勾兌成28° 35°，密封靜置7天，過濾，灌裝即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑，其特征在于建議日服有效量為50ml， 分2次，飯后服用。
全文摘要
一種用于溫補(bǔ)腎陽、增強(qiáng)免疫、祛病強(qiáng)體的酒制劑，其采用西洋參150～210份、桑椹80～110份、玉竹80～110份、枸杞子45～75份、菊花15～35份、茯苓15～35份、白芍15～35份、牡蠣15～35份、昆布15～35份、當(dāng)歸8～16份、蛤蚧8～16份、陳皮3～9份、50°基酒6000～7000份、水3000～4000份經(jīng)粉碎、浸漬提取、過濾、勾兌、灌裝制成酒制劑。本發(fā)明的有益效果是獨(dú)特的高效分子團(tuán)作用于人體，有溫補(bǔ)腎陽、提高人體免疫力、改善血液循環(huán)、修復(fù)神經(jīng)組織、補(bǔ)充人體新能源、強(qiáng)腎固本、養(yǎng)顏益壽的功能。適用于腎陽虛損、腰酸腿軟、四肢乏力、精神不振、免疫力低下等癥。
文檔編號(hào)C12G3/04GK103239628SQ20131020654
公開日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月30日
發(fā)明者于國友, 王佃亮, 于麗萍, 鄭歆 申請(qǐng)人:威?？挡柹锼帢I(yè)有限公司, 中國人民解放軍第二炮兵總醫(yī)院