一種高純度丹酚酸a的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種以丹酚酸B或丹參多酚酸鹽為原料制備丹酚酸A的方法，包括在特定的pH值范圍內(nèi)轉(zhuǎn)化、精制、干燥等步驟，本發(fā)明所述方法具有工藝流程簡(jiǎn)單、操作方便、成本低、產(chǎn)品純度高等特點(diǎn)，更適宜產(chǎn)業(yè)化。
【專利說(shuō)明】一種高純度丹酚酸A的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地涉及一種高純度丹酚酸A的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 丹酚酸A (Salvianic acid A)是丹參中所含的一種水溶性酚酸類化合物，最早是 由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所黎蓮娘教授于1984年從丹參中分離得到（Li Lian-Niang， et al.Planta Medica. 1984,50:227)。近年來(lái)，大量的藥理試驗(yàn)表明丹酚酸A具有較強(qiáng) 的心肌缺血保護(hù)（杜冠華，等·藥學(xué)學(xué)報(bào).1995,30(10) :731;1&叩311〇11-1^〇，6丨3^111·· J. Pharmacol. 2009,615:125)、抗血栓（劉穎琳，等.藥學(xué)學(xué)報(bào).2002, 37(2) :81;Fan Hu a-Ying, et al. Thromb. Res. 2010,126 ：el7 ；Huang Z S, et al. J. Thromb. Haemost. 2010, 8:1383)、神經(jīng)保護(hù)（杜冠華，等.藥學(xué)學(xué)報(bào).1995,30(3):184;13叩乂】，6丨&1.他111'〇8(3；[· Res. 2005,51 :129)、抗肝纖維化(劉成，等.世界華人消化雜志.1999,7(7) :570 ;Lin Yun-Lian，et al.J.Pharm. Pharmacol.2006,58 :933)和防治糖尿病及并發(fā)癥（杜冠華， 等.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1995, 30(8) :561)等藥理活性。
[0003] 相比較丹參中其它水溶性酚酸類成份，如丹參素、迷迭香酸、丹酚酸B等在藥材中 有較高含量和提取分離相對(duì)容易等特點(diǎn)，不同產(chǎn)地的丹參藥材中丹酚酸A的含量?jī)H約為萬(wàn) 分子一到萬(wàn)分之三，且提取分離步驟復(fù)雜，生產(chǎn)得率低，故多年以來(lái)科研工作者一直致力 于找到一種高效的制備高純度丹酚酸A的方法。如中國(guó)專利申請(qǐng)CN1397276、CN1513848、 CN1830947A、CN1887849A、CN101480423A中均涉及丹酚酸A的制備，但上述這些專利中的制 備方法，存在工藝流程復(fù)雜，生產(chǎn)成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)或制備純度達(dá)不到原料藥的要 求等不足。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本 申請(qǐng)人:對(duì)丹酚酸A的制備工藝進(jìn)行了大量的 研究，同時(shí)對(duì)不同制備工藝做了細(xì)致的分析和詳盡的比較，從而提供了一種高純度丹酚酸A 的制備工藝，利用該工藝制備得到的丹酚酸A的純度可以達(dá)到95.0%以上，可直接作為注射 用原料藥。
[0005] 本發(fā)明提供了一種高純度丹酚酸A的制備方法，包括以下步驟：
[0006] 以丹酚酸B提取物或丹參多酚酸鹽為原料，加水溶解，加檸檬酸調(diào)節(jié)pH值至 3. 0-3. 4 ;置于密閉容器內(nèi)，135-140°C溫度，加熱4-5小時(shí)或加入酶促反應(yīng)劑鞣酶、苦杏仁 酶，30-80°C溫度，加熱5-48小時(shí)得到丹酚酸A溶液，冷卻后溶液調(diào)pH值至2-3,經(jīng)非極性或 弱極性大孔樹脂柱層析分離，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥；再經(jīng)硅膠柱層析，收集含量 大于95. 0%的丹酚酸A部分，回收溶劑，干燥，即得。
[0007] 在推薦的實(shí)施例中，所述的丹酚酸B提取物的含量為80-100%。
[0008] 在推薦的實(shí)施例中，所述的非極性或弱極性大孔樹脂選自D101、HPD826、CG161中 的一種。所述的非極性或弱極性大孔樹脂進(jìn)一步優(yōu)選CG161。
[0009] 在推薦的實(shí)施例中，所述的低極性有機(jī)溶劑體系選自正己烷-乙酸乙酯、石油 醚-乙酸乙酯、環(huán)己烷-乙酸乙酯、正己烷-叔丁基甲基醚、石油醚-叔丁基甲基醚體系中 的一種。所述的低極性有機(jī)溶劑體系進(jìn)一步優(yōu)選正己烷-乙酸乙酯。
[0010] 在推薦的實(shí)施例中，所述的干燥方法為50°C減壓干燥。
[0011] 丹參多酚酸鹽是從丹參中提取的有效部位，含丹參乙酸鎂80-90%，用于制備注射 用丹參多酚酸鹽。
[0012] 本發(fā)明取得的有益技術(shù)效果有：
[0013] 1.丹酚酸A是有機(jī)酸，電離常數(shù)pKa=3. 14,其分子狀態(tài)隨溶液的pH變化而變化； 當(dāng)溶液的pH〈3. 14時(shí)，丹酚酸A主要以分子形式存在，在水中的溶解度低；當(dāng)pH>3. 14時(shí)，丹 酚酸A主要以離子狀態(tài)存在，在水中的溶解度大；試驗(yàn)證明：丹酚酸A在pH值1. 5?3. 5穩(wěn) 定。當(dāng)PH值在1. 5?3. 5時(shí)溶液渾濁，此時(shí)，丹酚酸A以分子狀態(tài)存在（電離常數(shù)pKa=3. 14) 而致使溶解度降低析出，這有助于降解反應(yīng)向正方向進(jìn)行；同時(shí)丹酚酸A形成分子以固態(tài) 存在后穩(wěn)定性會(huì)增加，丹酚酸A的轉(zhuǎn)化率提高。
[0014] 2.試驗(yàn)證明：鞣酶、苦杏仁酶可以催化丹酚酸B向丹酚酸A的轉(zhuǎn)化，相比于加熱轉(zhuǎn) 化方法，本法溫度低、常壓下即可進(jìn)行反應(yīng)，但反應(yīng)時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。
[0015] 3.本發(fā)明的制備工藝流程簡(jiǎn)單、操作方便，而且生產(chǎn)成本低、便于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0016] 4.本發(fā)明的方法制備得到的丹酚酸A的純度在95. 0%以上，可直接作為原料藥使 用。
[0017] 本發(fā)明是在以下試驗(yàn)的基礎(chǔ)上完成的，通過(guò)降解關(guān)鍵因素的選擇，確定了本發(fā)明 的技術(shù)方案。
[0018] 試驗(yàn)例1、丹酚酸A溶液在不同pH值的穩(wěn)定性情況 [0019] 實(shí)驗(yàn)方法：
[0020] 色譜柱：C18反相色譜柱，250 X 4. 6_，5 μ m ;
[0021] 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流速1. 〇ml/min ;柱 溫30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)286nm ;理論塔板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于5000,以乙腈-Η3Ρ04水溶液 (0. 5%)為流動(dòng)相梯度洗脫，運(yùn)行80分鐘，梯度見表1。
[0022] 表1.梯度洗脫條件
[0023]

【權(quán)利要求】
1. 一種高純度丹酚酸A的制備方法，其特征在于以丹酚酸B提取物或丹參多酚酸鹽為 原料，加水溶解，加檸檬酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0-3. 4后，通過(guò)如下步驟制備丹酚酸A :置于密閉 容器內(nèi)，135-140°C溫度，加熱4-5小時(shí)或加入酶促反應(yīng)劑鞣酶、苦杏仁酶，30-80°C溫度，力口 熱5-48小時(shí)得到丹酚酸A溶液，冷卻后溶液調(diào)pH值至2-3,經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱 層析分離，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥；再經(jīng)硅膠柱層析，收集含量大于95. 0%的丹酚 酸A部分，回收溶劑，干燥，即得。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的丹酚酸B提取物的含量為 80-100%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述的非極性或弱極性大孔樹脂 選自 D101、CG161、HPD826 中的一種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的非極性或弱極性大孔樹脂為 CG161樹脂。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述的硅膠柱層析步驟為：加乙 酸乙酯溶解后硅膠伴樣，然后過(guò)硅膠柱以低極性有機(jī)溶劑體系梯度洗脫。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述的低極性有機(jī)溶劑體系選自正己 烷-乙酸乙酯、石油醚-乙酸乙酯、環(huán)己烷-乙酸乙酯、正己烷-叔丁基甲基醚、石油醚-叔 丁基甲基醚體系中的一種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的低極性有機(jī)溶劑體系為正己 烷-乙酸乙酯。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述的干燥方法為50°C減壓干 燥。
【文檔編號(hào)】C12P7/62GK104250212SQ201310258565
【公開日】2014年12月31日 申請(qǐng)日期:2013年6月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月26日
【發(fā)明者】劉珂, 韓飛, 郎躍武 申請(qǐng)人:無(wú)錫靶點(diǎn)藥物研究有限公司