施用與人載脂蛋白 b互補的反義寡核苷酸的制作方法
【專利摘要】施用與人載脂蛋白B互補的反義寡核苷酸。本發(fā)明提供了長期降低人體脂質(zhì)水平的方法和治療與LDL-膽固醇升高以及ApoB升高相關的病癥的方法。
【專利說明】施用與人載脂蛋白B互補的反義寡核苷酸
[0001]本申請是申請日為2008年03月24日、申請?zhí)枮?00880017204.9、名稱為“施用與人載脂蛋白B互補的反義寡核苷酸”的發(fā)明申請的分案。
發(fā)明領域
[0002]本發(fā)明提供了降低LDL-膽固醇和治療與膽固醇水平升高相關的病癥的組合物和方法。更具體的，本發(fā)明涉及抑制肝臟中載脂蛋白B表達的組合物和方法。
[0003]發(fā)明背景
[0004]在美國，冠心病(CHD)已經(jīng)成為一個世紀多以來的主要死因，動脈粥樣硬化的并發(fā)癥是西方社會的最常見死因(Knopp, New Engl.J.Medicine, 1999, 341,498-511 ；Davisand Hui,Arterioscler.Thromb.Vase.Biol,2001, 21,887-898 ；Bonow,Circulation,2002,106,3140-3141)。普遍認為低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-膽固醇)升高是CHD的危險因素。然而，盡管進行了藥理學干預，但是很多個體LDL-膽固醇水平不能降低。
[0005]2001 年，國家膽固醇教育計劃(the National Cholesterol Education Program,NCEP)的成人治療III組建立了降脂療法的指導原則。2004年NCEP的協(xié)調(diào)委員會推薦了這些指導原則的改進，包括了更激進的治療目標(Grundy et al.,Circulation, 2004,110,227-239)。這些指導原則定義了重大冠狀動脈事件的3類風險并提供了理想的LDL-膽固醇目標水平。風險最高的是患CHD或CHD等同風險的個體，LDL-膽固醇應維持在低于100mg/dL。最新的NCEP指導原則推薦高CHD風險的個體使用藥物療法以達到小于70mg/dL的LDL-膽固醇水平。CHD等同風險 個體被定義為患糖尿病、外周血管疾病、腹主動脈瘤、癥狀頸動脈病的個體，和具有多種危險因素使得CHD10年風險超過20%的個體。對于第二類，那些具有多種(2種或以上)危險因素的CHD中度風險的個體，他們的CHD10年風險是20%,目標是LDL-膽固醇小于130mg/dL。新近的推薦包括中等風險類型的LDL-膽固醇水平降至小于100mg/dL的治療選擇。第三類包括具有0-1個危險因素的個體，目標LDL-膽固醇小于160mg/dL。所述危險因素包括年齡、吸煙、高血壓、低HDL-膽固醇和CHD家族史。盡管治療性生活方式有變化，藥物療法應該在三個風險組的血清LDL-膽固醇分別維持在130、160 和 190mg/dL 以上時開始(Grundy et al，Circulation, 2004，110，227-239)。
[0006]低密度脂蛋白是五大類脂蛋白之一，這五大類脂蛋白包括:乳糜微粒，負責將飲食脂質(zhì)從腸道運輸?shù)浇M織；極低密度脂蛋白(VLDL);中密度脂蛋白(IDL);低密度脂蛋白(LDL);它們都是將甘油三酯和膽固醇從肝臟運輸?shù)浇M織；和高密度脂蛋白(HDL)，將內(nèi)源膽固醇從組織運輸?shù)礁闻K。脂蛋白顆粒經(jīng)歷連續(xù)新陳代謝過程，其特性和成分可以改變。月旨蛋白的蛋白成分被稱為載脂蛋白。至少九種載脂蛋白(其中之一是載脂蛋白B)在多種人脂蛋白當中以顯著數(shù)量分布。
[0007]載脂蛋白B (亦稱ΑροΒ，載脂蛋白Β-100 ;ΑροΒ_100，載脂蛋白Β-48 ;ΑροΒ_48和Ag(X)抗原)是大的糖蛋白，參與脂質(zhì)裝配和分泌、運輸和受體介導的不同類型脂蛋白的攝取和遞送。載脂蛋白B執(zhí)行多種功能，包括對飲食脂質(zhì)的吸收和加工，以及循環(huán)脂蛋白水平的調(diào)整(Davidson and Shelness, Annu.Rev.Nutr., 2000, 20,169-193) ?[0008]哺乳動物中存在兩種形式的載脂蛋白B。ApoB-1OO代表包含4536個氨基酸殘基的全長蛋白，主要在人肝臟合成(Davidson and Shelness, Annu.Rev.Nutr., 2000, 20,169-193)。被稱為apoB-48的截短形式與2152個氨基末端殘基共線性，在所有哺乳動物的小腸中合成(Davidson and Shelness, Annu.Rev.Nutr., 2000, 20,169-193) ? 在人類中，apoB-48聯(lián)同乳糜微粒和乳糜微粒殘余物一起循環(huán)，這些顆粒由被稱為LDL-受體-相關蛋白的不同受體清除(Davidson and Shelness, Annu.Rev.Nutr., 2000, 20,169-193) ?ApoB-48可被視為飲食脂質(zhì)從小腸遞送到肝臟的調(diào)配者，而apoB-100參與膽固醇的運輸和遞送(Davidson and Shelness, Annu.Rev.Nutr., 2000, 20,169-193) ? ApoB 是 LDL 的主要蛋白成分且包含該種脂蛋白與LDL受體相互作用所需的結(jié)構(gòu)域。此外，ApoB包含未配對的半胱氨酸殘基，其介導與載脂蛋白(a)的相互作用并產(chǎn)生脂蛋白(a)或Lp(a)，這是具有致動脈粥樣化潛力的另一個不同的脂蛋白(Davidson and Shelness, Annu.Rev.Nutr.,2000，20，169-193)。含ApoB的脂蛋白Lp (a)的血漿水平升高伴隨動脈粥樣硬化及其表現(xiàn)形式的風險增加，所述表現(xiàn)形式可以包括高膽固醇血癥(Seed et al., N.Engl.J.Med, 1990,322，1494-1499)、心肌梗塞(Sandkamp et al.，Clin.Chem.，1990，36，20-23)和血栓形成(Nowak-Gottl et al.，Pediatrics,1997，PP3Ell)。
[0009]載脂蛋白B參與膽固醇體內(nèi)平衡并且它的過量伴發(fā)多種疾病，包括家族性高膽固醇血癥、家族性ApoB缺陷和家族性聯(lián)合高膽固醇血癥(Kane and Havel, The Metabolicand Molecular Bases of Inherited Diseases, 2001,8thedition, 2717-2751)。在糖尿病和肥胖中還觀察到了與CHD風險增加一致的ApoB代謝波動(Grundy,Am.J.Cardiol, 1998,81,18B-25B ；Chan et al., Diabetes,2002,51,2377-2386 ；Chan et al., Metabolism,2002,57,1041-1046)。此外，小鼠模型的遺傳學研究已經(jīng)證明載脂蛋白B升高、膽固醇水平升高和動脈粥樣硬化之間的相關性(Kim and Young, J.Lipid Res.，1998，39，703-723 ；Nishinaet al., JLipid Res.，1990，57，859-869)。
[0010]在對家族性低β脂蛋白血癥(FHBL)的個體的研究中，這些個體顯示出血清載脂蛋白B水平降低、血清LDL-膽固醇水平降低和冠狀動脈病發(fā)生率降低(Schonfeld et al.，J Lipid Res.，2003，44，878-883)。小鼠研究已經(jīng)證明載脂蛋白B雜合缺陷的小鼠顯示出血清LDL-膽固醇和載脂蛋白B水平降低，此外，不受飲食誘發(fā)的高膽固醇血癥的損害(Fareseet al.，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.，1995,92,1774-1778)。
[0011]發(fā)明概述
[0012]在第一方面，本發(fā)明提供了包括給個體施用藥物組合物的方法，所述祖合物包含與編碼人載脂蛋白B-100的核酸互補的反義寡核苷酸，其中所述施用包括誘導期，其中每周施用一次100-300mg劑量的所述反義寡核苷酸至少13周，隨后是維持期，其中只要需要、有效和/或能耐受，每周施用一次或每兩周施用一次80-200mg劑量的所述反義寡核苷酸。
[0013]在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是lOOmg，維持期施用的劑量是200mg每周施用一次。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是200mg，維持期施用的劑量是300mg每周施用一次。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是lOOmg，維持期施用的劑量是200mg每周施用一次，其中在誘導期過程 中或誘導期末評價所述反義寡核苷酸的耐受性或有效性，或在維持期的一部分每周一次進行評價。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是200mg，維持期施用的劑量是300mg每周施用一次，其中在誘導期過程中或誘導期末或誘導期的一部分評價所述反義寡核苷酸的耐受性或有效性。
[0014]在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是lOOmg，維持期施用的劑量是IOOmg每兩周施用一次，其中在誘導期過程中或誘導期末或誘導期的一部分評價所述反義寡核苷酸的耐受性或有效性，在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是200mg，維持期施用的劑量是200mg每兩周施用一次，其中在誘導期過程中或誘導期末或誘導期的一部分評價所述反義寡核苷酸的耐受性或有效性。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是IOOmg至200mg，維持期施用的劑量是200mg至300mg每周施用一次。
[0015]在某些實施方案中，所述施用包括腸胃外施用。在某些實施方案中，所述腸胃外施用包括皮下施用。在某些實施方案中，每一誘導劑量和每一維持劑量包括單次注射。在某些實施方案中，每一誘導劑量和每一維持劑量獨立地包括兩次或更多次注射。在某些實施方案中，所述方法進一步包括在誘導期過程中或誘導期末或誘導期的一部分評價所述反義寡核苷酸的耐受性或有效性。在某些實施方案中，評價所述反義寡核苷酸的耐受性和有效性。
[0016]在某些實施方案中，通過監(jiān)測所述個體血漿中ApoB濃度降低速率來評價所述反義寡核苷酸的耐受性。在某些實施方案中，通過監(jiān)測所述個體血漿中ApoB濃度來評價所述反義寡核苷酸的耐受性。在某些實施方案中，通過監(jiān)測所述個體血漿中ApoB濃度的降低速率和ApoB濃度來評價所述反義寡核苷酸的耐受性。在某些實施方案中，通過監(jiān)測個體肝臟中ALT濃度來評價所述反義寡核苷酸的耐受性。在某些實施方案中，通過監(jiān)測所述個體肝臟中ANT濃度來評價所述反義寡核苷酸的耐受性。在某些實施方案中，通過監(jiān)測個體血漿中膽紅素濃度來評價所述反義寡核苷酸的耐受性。
[0017]在某些實施方案中，ApoB濃度降低速率大于大約30mg/dL*天表明該個體不能耐受所述反義寡核苷酸的施用。在某些實施方案中，ApoB濃度小于大約60mg/dL表明該個體不能耐受所述反義寡核苷酸的施用。在某些實施方案中，ApoB濃度降低速率大于大約30mg/dL*天和ApoB濃度小于大約60mg/dL表明該個體不能耐受所述反義寡核苷酸的施用。在某些實施方案中，在出現(xiàn)不耐受所述反義寡核苷酸的施用的指征后，減少所述反義寡核苷酸的劑量。在某些實施方案中，在出現(xiàn)不耐受所述反義寡核苷酸的施用的指征后，減少所述反義寡核苷酸施用頻率。在某些實施方案中，在出現(xiàn)耐受所述反義寡核苷酸的施用的指征后，增加所述反義寡核苷酸的劑量。在某些實施方案中，在出現(xiàn)耐受所述反義寡核苷酸的施用的指征后，增加所述反義寡核苷酸施用頻率。
[0018]在某些實施方案中，通過監(jiān)測所述個體血漿中ApoB、LDL-C, VLDL-C, IDL-C、非HDL-C、血清甘油三酯、肝臟甘油三酯、Lp (a) ,Οχ-LDL-C或低密度LDL顆粒的濃度來評價所述反義寡核苷酸的有效性。在某些實施方案中，ApoB、LDL-C、VLDL-C、IDL-C、非HDL-C、血清甘油三酯、肝臟甘油三酯、Lp (a)、Ox-LDL-C或低密度LDL顆粒的濃度降低表明所述反義寡核苷酸是有效的。在某些實施方案中，在出現(xiàn)所述反義寡核苷酸的施用是有效的指征后，減少反義寡核苷酸的劑量。在某些實施方案中，在出現(xiàn)所述反義寡核苷酸的施用是無效的指征后，增加反義寡核苷酸的劑量。在某些實施方案中，在出現(xiàn)所述反義寡核苷酸的施用是有效的指征后，減少反義寡核苷 酸施用頻率。在某些實施方案中，在出現(xiàn)所述反義寡核苷酸的施用是無效的指征后，增加反義寡核苷酸施用頻率。
[0019]在某些實施方案中，所述個體在所述施用前ApoB已經(jīng)升高。在某些實施方案中，所述個體在所述施用前膽固醇已經(jīng)升高。在某些實施方案中，所述施用前所述膽固醇升高指總膽固醇升高、LDL-膽固醇升高、VLDL-膽固醇升高、IDL-膽固醇升高或非HDL膽固醇升高。在某些實施方案中，所述個體在所述施用前Lp (a)已經(jīng)升高。在某些實施方案中，所述個體在所述施用前血清甘油三酯已經(jīng)升高。在某些實施方案中，所述個體在所述施用前肝臟甘油三酯已經(jīng)升高。在某些實施方案中，所述個體在所述施用前低密度LDL顆粒已經(jīng)升聞。[0020]在某些實施方案中，所述個體有高膽固醇血癥。在某些實施方案中，所述個體有多基因高膽固醇血癥。在某些實施方案中，所述個體有家族性高膽固醇血癥。在某些實施方案中，所述個體有純合性家族性高膽固醇血癥。在某些實施方案中，所述個體有雜合性家族性高膽固醇血癥。在某些實施方案中，所述個體有混合性血脂異常。在某些實施方案中，所述個體有冠心病病史。
[0021]在某些實施方案中，所述個體具有一個或多個冠心病危險因素。在某些實施方案中，所述一個或多個危險因素選自年齡、吸煙、高血壓、低HDL-膽固醇和早期冠心病家族史。在某些實施方案中，所述個體有11型糖尿病伴血脂異常。在某些實施方案中，所述個體已用他汀類藥物(statin)治療。在某些實施方案中，所述個體不能實現(xiàn)他汀類藥物療法的LDL-膽固醇目標。在某些實施方案中，所述個體不遵守推薦的療法。在某些實施方案中，所述個體經(jīng)歷了他汀類藥物療法的副作用。在某些實施方案中，所述個體LDL-受體活性低。在某些實施方案中，所述個體在所述施用前沒有實現(xiàn)降脂療法的LDL-膽固醇目標。
[0022]在某些實施方案中，所述維持期包括將所述藥物組合物終生施用于個體。在某些實施方案中，所述維持期的持續(xù)時間是I年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年或20年。在某些實施方案中，所述維持期的持續(xù)時間是從一周到二十年。
[0023]在某些實施方案中，誘導劑量是lOOmg。在某些實施方案中，誘導劑量是200mg。在某些實施方案中，誘導劑量是300mg。在某些實施方案中，維持劑量是lOOmg。在某些實施方案中，維持劑量是200mg。
[0024]在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使得所述反義寡核苷酸的血漿低谷水平在5至lOOng/mL之間。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使得所述反義寡核苷酸的血漿低谷水平在5至50ng/mL之間。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使得所述反義寡核苷酸的血漿低谷水平在10至40ng/mL之間。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使得所述反義寡核苷酸的血漿低谷水平在15至35ng/mL之間。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使得所述反義寡核苷酸的血漿低谷水平在20至30ng/mL之間。
[0025]在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使ApoB降低至少10%。在某些實施方案中，所述ApoB降低至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%。在某些實施方案中，所述ApoB降低在10%至80%之間、20%至70%之間、30%至60%之間或30%至70%之間。
[0026]在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使LDL-膽固醇降低至少10%。在某些實施方案中，所述LDL-膽固醇降低至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %或至少100 %。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物引起VLDL-膽固醇降低至少10 %。在某些實施方案中，所述VLDL-膽固醇降低至少15 %、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少 100%。
[0027]在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使Lp (a)降低至少10%。在某些實施方案中，所述Lp (a)降低至少15 %、至少20 %、至少25 %、至少30 %、至少35 %、至少40 %、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物引起小LDL-顆粒降低至少10%。在某些實施方案中，所述小LDL-顆粒降低至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%。
[0028]在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使非HDL-膽固醇降低至少10%。在某些實施方案中，所述非HDL-膽固醇降低至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%。
[0029]在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使個體冠心病風險降低。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物延緩或終止個體動脈粥樣硬化進展。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物降低個體發(fā)展為動脈粥樣硬化的風險。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使個體心血管后果改善。在某些實施方案中，所述心血管后果改善是個體主要心血管有害事件的風險降低。在某些實施方案中，所述心血管后果改善是頸動脈內(nèi)膜中層厚度改善。在某些實施方案中，所述心血管后果改善是粥樣斑塊厚度改善。在某些實施方案中，所述心血管后果改善是HDL-膽固醇增加。
[0030]在某些實施方案中，所述施用使脂質(zhì)降低。在某些實施方案中，所述施用使LDL-膽固醇、甘油三酯或小LDL顆粒，或其組合降低。在某些實施方案中，所述施用使LDL/HDL比值改善。在某些實施方案中，所述施用使HDL-膽固醇水平增加至少10%。在某些實施方案中，所述HDL膽固醇水平增加至少15 %、至少20 %、至少25 %、至少30 %、至少35 %、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使肝臟甘油三酯水平降低至少10%。
[0031]在某些實施方案中，所述肝臟甘油三酯水平降低至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物使肝臟膽固醇酯降低至少10%。在某些實施方案中，所述肝臟膽固醇酯降低至少15 %、至少20 %、至少25 %、至少30 %、至少35 %、至少40 %、至少45 %、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%。
[0032]在某些實施方案中，所述方法進一步包括將所述藥物組合物和至少一種另外的療法共同施用。在某些實施方案中，所述共同施用是同時施用。在某些實施方案中，所述藥物組合物在施用所述另外的療法之前施用。權利要求100的方法，其中所述藥物組合物在施用所述另外的療法之后施用。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物和所述另外的療法之間的間隔是大約I小時、大約2小時、大約3小時、大約4小時、大約5小時、大約6小時、大約7小時、大約8小時、大約9小時、大約10小時、大約11小時、或大約12小時。在某些實施方案中，施用所述藥物組合物和所述另外的療法之間的間隔是大約I天、大約I周、大約2周、大約3周、大約4周、大約5周、大約6周、大約7周、大約8周、大約9周、大約10周、大約11周或大約12周。在某些實施方案中，所述藥物組合物和所述另外的療法之間的間隔是大約I個月、大約2個月、大約3個月、大約4個月、大約5個月或大約6個月。
[0033] 在某些實施方案中，所述方法進一步包括施用僅一種另外的療法。在某些實施方案中，所述方法進一步包括施用兩種或更多種另外的療法。在某些實施方案中，所述另外的療法是降脂療法。在某些實施方案中，所述另外的降脂療法是治療性生活方式改變。在某些實施方案中，所述另外的降脂療法是HMG-CoA還原酶抑制劑。在某些實施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑選自阿托伐他汀、瑞舒伐他汀或辛伐他汀。在某些實施方案中，所述另外的降脂療法是膽固醇吸收抑制劑。在某些實施方案中，所述膽固醇吸收抑制劑是依折麥布。在某些實施方案中，所述兩種或更多另外的療法包括HMG-CoA還原酶抑制劑和膽固醇吸收抑制劑。在某些實施方案中，所述HMG-CoA還原酶抑制劑是辛伐他汀，所述膽固醇吸收抑制劑是依折麥布。在某些實施方案中，所述另外的降脂療法是LDL血漿分離術(apheresis)。在某些實施方案中，施用所述另外的療法包括靜脈內(nèi)施用。在某些實施方案中，所述另外的降脂療法是MTP抑制劑。
[0034]在某些實施方案中，所述藥物組合物包含藥學上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，所述藥學上可接受的賦形劑是鹽水。在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸濃度劑量以大約 50mg/ml、大約 75mg/ml、大約 100mg/ml、大約 125mg/ml、大約 150mg/ml、大約 175mg/ml、大約200mg/ml、大約225mg/ml或大約250mg/ml的濃度施用。
[0035]在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸包含至少一個修飾的糖部分。在某些實施方案中，所述修飾的糖部分包括2'-甲氧乙基糖部分。在某些實施方案中，所述修飾的糖部分包括二環(huán)核酸糖部分。
[0036]在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸包括位于翼節(jié)段之間的2'-脫氧核苷酸缺口節(jié)段，其中所述翼節(jié)段的每個核苷酸包括修飾的糖部分。在某些實施方案中，所述翼節(jié)段的每個核苷酸包括2' -O-甲氧乙基糖部分。在某些實施方案中，所述翼節(jié)段的每個核苷酸包括二環(huán)核酸糖部分。在某些實施方案中，所述缺口節(jié)段包括十個核苷酸，每個翼節(jié)段包括五個核苷酸。
[0037]在某些實施方案中，至少一個核苷間鍵合是硫代磷酯核苷間鍵合。在某些實施方案中，每個核苷間鍵合是硫代磷酯核苷間鍵合。
[0038]在某些實施方案中，至少一個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在某些實施方案中，每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
[0039]在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸與編碼人ApoB的核酸至少90%互補。在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸與編碼人ApoB的核酸至少95%互補。在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸與編碼人ApoB的核酸100%互補。
[0040]在某些實施方案中，編碼人ApoB的核酸包括登錄號NM000384.1確認的序列。[0041]在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸包含12至30個核苷酸。在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸包含15至25個核苷酸。在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸包含17至23個核苷酸。在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸包含18至22個核苷酸。在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸包含19至21個核苷酸。在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸包含20個核苷酸。
[0042]在某些實施方案中，所述反義寡核苷酸是ISIS 301012。
[0043]在本發(fā)明的某些實施方案中，所述方法包括將藥物組合物施用于個體，所述藥物組合物包含與編碼人ApoB的核酸互補的反義寡核苷酸，其中所述施用包括誘導期(其包含至少一種誘導劑量)和維持期(其包含至少一種維持劑量)，其中所述誘導期持續(xù)時間大于五周。
[0044]在本發(fā)明的某些實施方案中，所述方法包括將藥物組合物施用于個體，所述藥物組合物包含與編碼人ApoB的核酸互補的反義寡核苷酸，其中所述施用包括誘導期(其包含至少一種誘導劑量)和維持期(其包含至少一種維持劑量)，其中所述誘導劑量小于所述維持劑量。
[0045]在本發(fā)明的某些實施方案中，所述方法包括將藥物組合物施用于個體，所述藥物組合物包含與編碼人ApoB的核酸互補的反義寡核苷酸，其中所述施用包括含至少一種誘導劑量的誘導期。
[0046]在本發(fā)明的某些實施方案中，所述方法包括將藥物組合物施用于有家族性高膽固醇血癥的個體，所述藥物組合物包含與編碼人ApoB的核酸互補的反義寡核苷酸，其中所述施用包括誘導期(其包含至少一種誘導劑量)和維持期(其包含至少一種維持劑量)，其中誘導期至少8周。
[0047]在本發(fā)明的某些實施方案中，所述方法包括將藥物組合物施用于個體，所述藥物組合物包含與編碼人載脂蛋白B-100的核酸互補的反義寡核苷酸，其中所述施用包括含至少一種維持劑量的維持期。
[0048]發(fā)明詳述
[0049]應理解上文的一般性描述和下面的詳細說明僅僅是示例和說明性的，并不限制要求保護的發(fā)明。在本文中，除非另外明確說明，單數(shù)的應用包括復數(shù)。如在本文中使用的，除非另外明確說明，“或”的意思是“和/或”。此外，術語“包括”不是限制性的。此外，除非另外明確說明，術語例如“成分”或“組分”涵蓋包含一個單元的成分和組分和包含多于一個亞單元的成分和組分。
[0050]本文使用的章節(jié)標題僅僅是為了結(jié)構(gòu)目的，不應認為限制所描述的主題。本申請引用的全部或部分文獻包括但不限于專利、專利申請、文章、書和論文，為了任何目的明確引入它們的全部內(nèi)容作為參考。美國專利申請系列號10/712，795和10/200,710的全部內(nèi)容為了任何目的而被明確引入作為參考。
[0051]A.定義
[0052]除非提供具體定義，關于在這里描述的分析化學、合成有機化學、以及醫(yī)藥化學的步驟和技術所使用的術語命 名是本領域熟知和通常使用的名稱?？梢允褂脴藴始夹g進行化學合成、化學分析、藥物制備、配方和遞送、以及治療個體。例如在"Remington' sPharmaceutical Sciences, " Mack Publishing C0.,Easton,Pa.,18th edition,1990 和[其他重要的配方和藥物遞送參考文獻]中可以找到某些這種技術和步驟，其為任何目的被引入本文作為參考。
[0053]本文使用的“藥物組合物”是適合施用于個體的物質(zhì)的混合物。例如,藥物組合物可以包含反義寡核苷酸和無菌水溶液。[0054]本文使用的“反義寡核苷酸”指具有可以與靶核酸相應區(qū)域雜交的核苷堿基序列的單鏈寡核苷酸。這種反義寡核苷酸“靶向”該核酸。
[0055]本文使用的“互補性”指第一個核酸的核苷堿基和第二個核酸的核苷堿基之間配對的能力。
[0056]本文使用的“完全互補”指寡核苷酸的每個核苷堿基能夠與靶核酸的相應核苷堿基精確配對。
[0057]本文使用的“反義抑制”指與不存在與靶核酸互補的寡核苷酸時靶核酸的水平相比，在該寡核苷酸存在下，靶核酸水平降低。
[0058]本文使用的術語“靶核酸”、“靶RNA”、“靶RNA轉(zhuǎn)錄物”和“核酸靶”都是指能夠被反義寡核苷酸靶向的任何核酸。本文使用的術語“ApoB靶核酸”和“編碼ApoB的核酸”涵蓋核酸，包括例如DNA (包括例如cDNA)、從編碼ApoB的DNA轉(zhuǎn)錄的RNA (包括例如前mRNA和mRNA)，以及由這種RNA得到的cDNA。在一個實施方案中，ApoB祀核酸是GENBANK?登錄號NM_000384.1的序列，1999年3月24日首次存入GENBANK?
[0059]本文使用的“編碼人ApoB的核酸”指編碼ApoB的DNA，或從編碼ApoB的DNA轉(zhuǎn)錄的 RNA。
[0060]本文使用的“施用”指給個體提供藥物制劑，包括但不限于由醫(yī)學專業(yè)人員施用和自己施用。
[0061]本文使用的“個體”指選擇用于治療或療法的人或非人動物。
[0062]本文使用的“誘導期”指開始施用活性藥物制劑并且實現(xiàn)該制劑在靶標組織穩(wěn)態(tài)濃度的用藥階段。例如，誘導期是實現(xiàn)反義寡核苷酸在肝臟穩(wěn)態(tài)濃度的用藥階段。
[0063]本文使用的“維持期”指在靶組織中已經(jīng)實現(xiàn)穩(wěn)態(tài)濃度之后的用藥階段。
[0064]本文使用的“持續(xù)時間”指活動或事件持續(xù)的一段時間。例如，誘導期持續(xù)時間是施用誘導劑量的一段時間。例如，維持期持續(xù)時間是施用維持劑量的一段時間。
[0065]本文使用的“腸胃外施用”指通過注射或輸液施用。腸胃外施用包括但不限于皮下施用、靜脈內(nèi)施用或肌肉內(nèi)施用。
[0066]本文使用的“皮下施用”指在皮膚下施用。本文使用的“靜脈內(nèi)施用”指將藥物給入靜脈內(nèi)。
[0067]本文使用的“維持劑量”指在維持期單次施用所用的劑量。本文使用的“誘導劑量”指在誘導期單次施用所用的劑量。
[0068]本文使用的“劑量”指單次施用所提供的藥物制劑的具體量。在某些實施方案中，劑量可以以兩個或更多大丸劑、片劑或注射劑施用。例如，在某些實施方案中，當需要皮下施用時，期望劑量所要求的體積難以通過單次注射實現(xiàn)。在這種實施方案中，可以通過兩次或更多次注射達到期望劑量。在某些實施方案中，可以通過兩次或更多次注射來施用劑量，以使個體注射部位的反應最小。
[0069]本文使用的“劑量單位”指提供藥物制劑的形式。在某些實施方案中，劑量單位是含凍干ISIS 301012的小瓶。在某些實施方案中，劑量單位是含重新配成的ISIS 301012的小瓶。
[0070]本文使用的“給藥方案(dosing regimen) ”指設計用來達到一種或多種期望效果的劑量組合。在某些實施方案中，給藥方案被設計用來快速提供治療效果。在某些實施方案中，給藥方案被設計用來減少不期望的副作用，例如肝臟毒性。
[0071]本文使用的“藥物制劑”指當施用于個體時提供治療益處的物質(zhì)。例如，在某些實施方案中，靶向ApoB的反義寡核苷酸是藥物制劑。
[0072]本文使用的“活性藥物成分”指藥物組合物中提供期望效果的物質(zhì)。例如，ISIS301012是包含ISIS 301012和鹽水的藥物組合物中的活性藥物成分。
[0073]本文使用的“ApoB”指載脂蛋白B-100蛋白。血清(或血漿)中ApoB的濃度典型地以mg/dL或nmol/L量化?！把錋poB”和“血漿ApoB”分別指血清和血漿中的ApoB。
[0074]本文使用的“低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C) ”指與低密度脂蛋白顆粒結(jié)合的膽固醇。血清(或血漿)中LDL-C的濃度典型地以mg/dL或nmol/L量化?！把錖DL-C”和“血漿LDL-C”分別指血清和血漿中的LDL-C。
[0075]本文使用的“極低密度脂蛋白-膽固醇(VLDL-C) ”指與極低密度脂蛋白顆粒結(jié)合的膽固醇。血清(或血漿)中VLDL-C的濃度典型地以mg/dL或nmol/L量化?！把錠LDL-C”或“血漿VLDL-C”分別指血清或血漿中的VLDL-C。
[0076]本文使用的“中間低密度脂蛋白-膽固醇(IDL-C) ”指與中密度脂蛋白結(jié)合的膽固醇。血清(或血漿)中IDL-C的濃度典型地以mg/mL或nmol/L量化?！把錓DL-C”或“血漿IDL-C”分別指血清或血漿中的IDL-C。
[0077]本文使用的“非高密度脂蛋白-膽固醇(非HDL-C)”指與除高密度脂蛋白之外的脂蛋白結(jié)合的膽固醇，包括但不限于LDL-C、VLDL-C和IDL-C。
[0078]本文使用的“高密度脂蛋白-C(HDL-C) ”指與高密度脂蛋白顆粒結(jié)合的膽固醇。血清(或血漿)中HDL-C的濃度典型地以mg/dL或nmol/L量化?！把錒DL-C”和“血漿HDL-C”分別指血清和血漿中的HDL-C。
[0079]本文使用的“總膽固醇”指所有類型的膽固醇，包括但不限于LDL-C、HDL-C、IDL_C和VLDL-C。血清(或血漿)中總膽固醇的濃度典型地以mg/dL或nmol/L量化。
[0080]本文使用的“脂蛋白(a) ”或“Lp(a) ”指由LDL-C、載脂蛋白(a)顆粒和載脂蛋白B-100顆粒組成的脂蛋白顆粒。
[0081]本文使用的“ApoAl”指血清中的載脂蛋白-Al蛋白。血清中ApoAl的濃度典型地以mg/dL或nmol/L量化。
[0082]本文使用的“ApoB: ApoAl比值”是ApoB濃度與ApoAl濃度的比值。
[0083]本文使用的“包含ApoB的脂蛋白”指具有載脂蛋白B作為其蛋白組分的任何脂蛋白，包括LDL、VLDL、IDL和脂蛋白 (a)。
[0084]本文使用的“小而密的LDL顆粒”指其特征為與其他LDL顆粒相比更小、更密集的LDL顆粒亞類。
[0085]本文使用的“甘油三酯”指甘油三酯物的脂質(zhì)?！把甯视腿ァ敝复嬖谟谘逯械母视腿??！案闻K甘油三酯”指存在于肝臟組織中的甘油三酯。
[0086]本文使用的“血清脂質(zhì)”包括但不限于血清膽固醇和血清甘油三酯。[0087]本文使用的“膽固醇酯含量”指存在于肝臟組織中的膽固醇酯的量。在某些實施方案中，血清膽固醇酯濃度用作肝膽固醇酯含量的指標。[0088]本文使用的“總膽固醇升高”指個體總膽固醇的濃度需要推薦降脂療法，包括但不限于“LDL-C升高”、“VLDL-C升高”、“ IDL-C升高”和“非HDL-C升高”。在某些實施方案中，總膽固醇濃度小于200mg/dL、200-239mg/dL和大于240mg/dL分別被認為是理想的、臨界高的和高的。在某些實施方案中，認為LDL-C濃度100mg/dL、100-129mg/dL、130-159mg/dL、160-189mg/dL和大于190mg/dL分別是最佳的、接近最佳/高于最佳的、臨界高的、高的和非常聞的。
[0089]本文使用的“甘油三酯升高”意思是血清或肝臟中甘油三酯的濃度需要推薦降脂療法，包括“血清甘油三酯升高”和“肝臟甘油三酯升高”。在某些實施方案中，認為血清甘油三酯濃度150-199mg/dL、200-499mg/dL和大于或等于500mg/dL分別是臨界高的、高的和
非常高的。
[0090]本文使用的“小而密的LDL顆粒升高”指個體中小而密的LDL顆粒的濃度需要推
薦降脂療法。
[0091]本文使用的“脂蛋白(a)升高”指個體脂蛋白(a)的濃度需要降脂療法。
[0092]本文使用的“低HDL-C”指個體HDL-C的濃度需要推薦降脂療法。在某些實施方案中，當?shù)虷DL-C伴非HDL-C升高和/或甘油三酯升高時，推薦降脂療法。在某些實施方案中，認為HDL-C濃度小于40mg/dL是低的。在某些實施方案中，認為HDL-C濃度小于50mg/dL是低的。
[0093]本文使用的或“血漿低谷濃度”指當血漿藥物制劑濃度與靶組織藥物制劑濃度平衡時的血漿最低濃度。例如，在某些實施方案中，當血漿ISIS 301012濃度與肝臟組織ISIS 301012濃度平衡時，達到ISIS 301012的血漿低谷濃度。
[0094]本文使用的“AUCffi#”或“血漿低谷AUC，，指當血漿藥物制劑與靶組織藥物制劑濃度平衡時的濃度-時間曲線下的面積。
[0095]本文使用的“ LDL/HDL比值”指LDL-C與HDL-C的比值。
[0096]本文使用的“氧化-LDL”或“Ox-LDL-C”指暴露于自由基后被氧化的LDL-C。
[0097]本文使用的“高膽固醇血癥”指以血清膽固醇升高為特征的病癥。在某些實施方案中，高膽固醇血癥包括但不限于多基因高膽固醇血癥、雜合家族性高膽固醇血癥和純合家族性高膽固醇血癥。
[0098]本文使用的“高脂血癥”指以血清脂質(zhì)升高為特征的病癥。
[0099]本文使用的“高甘油三酯血癥”指以甘油三酯水平升高為特征的病癥。
[0100]本文使用的“非家族性高膽固醇血癥”指以膽固醇升高為特征的病癥,所述膽固醇升高不是單基因突變的結(jié)果。
[0101]本文使用的“多基因家族性高膽固醇血癥”指以膽固醇升高為特征的病癥，所述膽固醇升高是多種遺傳因素影響的結(jié)果。在某些實施方案中，飲食攝取脂質(zhì)可以加劇多基因高膽固醇血癥。
[0102]本文使用的“家族性高膽固醇血癥(FH) ”指以LDL-受體(LDL-R)基因突變、LDL-C顯著升高和動脈粥樣硬化過早發(fā)作為特征的常染色體顯性代謝紊亂。當個體滿足下列一個或多個標準時，診斷為家族性高膽固醇血癥:基因檢測證實2個突變的LDL-受體基因；基因檢測證實一個突變的LDL-受體基因；未治療的血清LDL-膽固醇大于500mg/dL的記錄病史；10歲前腱和/或皮膚黃色瘤；或降脂療法前雙親具有與雜合家族性高膽固醇血癥一致的記錄的血清LDL-膽固醇升高。
[0103]本文使用的“純合家族性高膽固醇血癥”或“Hora”指以母親和父親LDL-R基因都突變?yōu)樘卣鞯牟“Y。
[0104]本文使用的“雜合家族性高膽固醇血癥”或“HeHT指以母親或父親之一 LDL-R基因突變?yōu)樘卣鞯牟“Y。
[0105] 本文使用的“混合血脂異常”意思是以血清膽固醇升高和血清甘油三酯升高為特征的病癥。
[0106]本文使用的“糖尿病性血脂異常”或“II型糖尿病伴血脂異?！敝敢訧I型糖尿病、HDL-C降低、血清甘油三酯升高和小而密的LDL顆粒升高為特征的病癥。
[0107]本文使用的“CHD等同風險”指導致冠心病高風險的臨床動脈粥樣硬化病的指標，包括臨床冠心病、癥狀頸動脈病、外周動脈病和/或腹主動脈瘤。
[0108]本文使用的導致冠心病高風險的“主要危險因素”包括吸煙、高血壓、低HDL-C、冠心病家族史和年齡。
[0109]本文使用的“CHD危險因素”包括CHD等同風險和主要危險因素。
[0110]本文使用的“冠心病(CHD) ”指為心臟供給血液和氧氣的小血管狹窄，其常常是動脈粥樣硬化的結(jié)果。
[0111]本文使用的“冠心病風險降低”指個體發(fā)展為冠心病的可能性降低。
[0112]本文使用的“動脈粥樣硬化”指影響大動脈和中動脈的動脈硬化，特征在于存在脂肪沉積。脂肪沉積被稱為“粥樣斑塊”或“斑塊”，其主要由膽固醇和其他脂肪、鈣和瘢痕組織組成，并損害動脈內(nèi)層。
[0113]本文使用的“冠心病史”指個體或個體家族成員病史中存在臨床上明顯的冠心病。
[0114]本文使用的“冠心病早期發(fā)作”指在50歲前診斷為冠心病。
[0115]本文使用的“不耐受他汀類藥物的個體”指由于他汀類藥物治療，導致一個或多個肌酸激酶增加、肝功能檢查異常、肌肉痛、或中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用的個體。
[0116]本文使用的“功效”指產(chǎn)生期望效果的能力。例如，降脂療法的功效可以是LDL-C、乂0^-(:、101-(:、非冊1-(:、4?08、脂蛋白(a)或甘油三酯中一個或多個的濃度降低。
[0117]本文使用的“可接受的安全性(safety profile) ”指在臨床上可接受限度內(nèi)的副作用模式。
[0118]本文使用的“副作用”指由治療引起的除期望效果之外的生理反應。在本文中，副作用包括但不限于注射部位反應、肝功能檢查異常、腎功能異常、肝臟毒性、腎毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常和肌病。例如，血清轉(zhuǎn)氨酶水平增加可以表明肝臟毒性或肝功能異常。例如，膽紅素增加可以表明肝臟毒性或肝功能異常。
[0119]本文使用的“注射部位反應”指個體注射部位的炎癥或異常發(fā)紅。
[0120]本文使用的“個體順應性”指個體對推薦或囑咐療法的遵守性。
[0121]本文使用的“降脂療法”指提供給個體以降低該個體一種或多種脂質(zhì)的治療方案。在某些實施方案中，提供降脂療法以降低個體ApoB、總膽固醇、LDL-C, VLDL-C, IDL-C、非HDL-C、甘油三酯、小而密的LDL顆粒和Lp (a)中的一個或多個。[0122]本文使用的“降脂劑”指提供給個體以降低該個體脂質(zhì)的藥物制劑。例如，在某些實施方案中，向個體提供降脂劑以降低ApoB、LDL-C、總膽固醇和甘油三酯中的一個或多個。
[0123]本文使用的“LDL-C目標”是降脂療法后期望的LDL-C水平。
[0124]本文使用的“順應”指個體對推薦療法的遵守性。
[0125]本文使用的“推薦療法”指醫(yī)學專業(yè)人員為了治療、改善或預防疾病而推薦的治療方案。
[0126]本文使用的“LDL-受體活性低”指LDL-受體活性不夠高以致不能維持臨床上可接受的血液LDL-C水平。
[0127]本文使用的“心血管后果”指主要有害心血管事件的發(fā)生。
[0128]本文使用的“改善心血管后果”指減少主要有害心血管事件的發(fā)生或其風險。主要有害心血管事件的實例包括但不限于死亡、再梗死、中風、心源性休克、肺水腫、心跳驟停和房性心律失常。
[0129]本文使用的“心血管后果的替代標志”指心血管事件或其風險的間接指標。例如，心血管后果的替代標志包括頸動脈內(nèi)膜中層厚度(CMT)。心血管后果的替代標志的另一個實例包括粥樣斑塊的大小。粥樣斑塊大小可以用血管內(nèi)超聲(IVUS)測定。
[0130]本文使用的“HDL-C增加”指隨時間推移，個體血清HDL-C增加。
[0131]本文使用的“降脂”指隨時間推移，個體一種或多種血清脂質(zhì)降低。
[0132]本文使用的“共同施用”指給個體施用兩種或更多藥物制劑。兩種或更多藥物制劑可以在單一的藥物組合物中，或可以在分開的藥物組合物中。兩種或更多藥物制劑中每一種都可以通過相同或不同施用途徑施用。共同施用包括平行或順序施用。
[0133]本文使用的“治療性生活方式改變”指意欲降低膽固醇和降低發(fā)展為心臟病風險的飲食和生活方式改變，包括推薦每日總卡路里、總脂肪、飽和脂肪、多不飽和脂肪、單不飽和脂肪、碳水化合物、蛋白、膽固醇、難溶纖維的飲食攝入量，以及推薦身體活動。
[0134]本文使用的“他汀類藥物”指抑制HMG-CoA還原酶活性的藥物制劑。
[0135]本文使用的“HMG-CoA還原酶抑制劑”指通過抑制HMG-CoA還原酶發(fā)揮作用的藥物制劑。
[0136]本文使用的“膽固醇吸收抑制劑”指抑制從飲食獲得的外源膽固醇吸收的藥物制劑。
[0137]本文使用的“LDL血漿分離術”指將LDL-C從血液中清除的血漿分離術形式。典型地，個體的血液從靜脈移出，并分成紅細胞和血漿。在血漿和紅細胞回輸給個體之前，將LDL-C從血漿濾出。
[0138]本文使用的“MTP抑制劑”指抑制酶微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白的藥物制劑。
[0139]本文使用的“核苷”指堿基-糖結(jié)合體。
[0140]本文使用的“核苷堿基”指雜環(huán)堿基部分。
[0141]本文使用的“核 苷酸”指具有與核苷的糖部分共價連接的磷酸基的核苷。
[0142]本文使用的“核苷間鍵合”指相鄰核苷之間的共價鍵。
[0143]本文使用的“天然存在的核苷間鍵合”指3'至5'磷酸二酯鍵。
[0144]本文使用的“寡核苷酸”指鍵合的核苷酸的聚合物，其中每個核苷酸可以是相互獨立地修飾的或未修飾的。[0145]本文使用的“寡核苷(oligonucleoside) ”指其中核苷間鍵合不包含磷原子的寡核苷酸。
[0146]本文使用的“未修飾的”核苷堿基指腺嘌呤堿基(A)和鳥嘌呤堿基(G)，以及胸腺嘧啶堿基(T)、胞嘧啶堿基(C)和尿嘧啶堿基(U)。
[0147]本文使用的“修飾的糖部分”指在天然糖部分基礎上具有置換和/或任何變化的糖部分。
[0148]本文使用的“天然糖部分”指在DNA(2' -H)或RNA(2' _0H)中發(fā)現(xiàn)的糖部分。
[0149]本文使用的“2' -0-甲氧乙基糖部分”指具有2’ -O-(CH2)2-OCH3C _0_甲氧乙基或2' -M0E)取代基的2'取代的呋喃糖環(huán)。
[0150]使用本文的“2' -0-甲氧乙基核苷酸”指包含2' -0-甲氧乙基修飾的糖部分的
核苷酸。
[0151]本文使用的“二環(huán)核酸糖部分”指通過兩個非偕環(huán)原子橋接而修飾的呋喃糖環(huán)。
[0152]本文使用的“翼節(jié)段”指被修飾以影響寡核苷酸特性的很多核苷，例如抑制活性提高、與靶核酸的結(jié)合親和力增加、或抵抗體內(nèi)核酶的降解。
[0153]本文使用的“缺口節(jié)段”指支持核酸內(nèi)切酶RNaseH切割的很多核苷酸。
[0154]本文使用的“ISIS 301012”指具有序列“GCCTCAGTCTGCTTCGCACC”的反義寡核苷酸降脂劑，其中每個核苷間鍵合是硫代磷酯核苷間鍵合，每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶，核苷酸6-15是2'-脫氧核苷酸，核苷酸1-5和16-20是2' _0_甲氧乙基核苷酸。ISIS301012與GENBANK登錄號NM 000384.1的序列的核苷酸3249-3268互補。
[0155]本文使用的“新陳代謝綜合征”指一聚類源于新陳代謝的脂質(zhì)和非脂質(zhì)心血管危險因素。在某些實施方案中，存在下列任何3個因素即被確定為新陳代謝綜合征:腰圍男性大于102cm或女性大于88cm ;血清甘油三酯至少150mg/dL ；HDL-C男性小于40mg/dL或女性小于50mg/dL ;血壓至少130/85mmHg ;和空腹血糖至少110/dL。
[0156]本文使用的“治療有效量”指為個體提供治療益處的藥物制劑的量。例如，與編碼人apoB的核酸互補的反義寡核苷酸的治療有效量是引起LDL-C降低的量。
[0157]B.某些藥物組合物
[0158]在某些實施方案中，本發(fā)明提供了包含一種或多種不同寡核苷酸的藥物組合物。在某些這樣的實施方案中，所述藥物組合物包含與編碼人ApoB的核酸互補的反義寡核苷酸。在某些這樣的實施方案中，所述藥物組合物包含ISIS 301012。ISIS 301012是一種藥物制劑，當施用于個體時，使ApoB、含ApoB的脂蛋白劑量依賴性減少，所述脂蛋白包括但不限于0^-(:、甘油三酯和14)(&)。ISIS 301012單獨施用時具有功效，與其他制劑一起施用時也具有功效(此處原文有遺漏)。
[0159]在某些這樣的實施方案中，所述藥物組合物包含與靶核酸互補的寡核苷酸。在某些這樣的實施方案中，足夠數(shù)量的所述寡核苷酸的核苷堿基可與靶核酸中相應的核苷堿基發(fā)生氫鍵合從而產(chǎn)生期望效果 。在某些這樣的實施方案中，所述期望效果是反義抑制靶核酸。在某些這樣的實施方案中，所述期望效果是反義抑制ApoB。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸的至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少96 %、至少97%、至少98%或至少99%的核苷堿基可與靶核酸相應的核苷堿基發(fā)生氫鍵合。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸100%的核苷堿基可與靶核酸中相應的核苷堿基發(fā)生氫鍵合。在這些實施方案中，寡核苷酸與靶核酸完全互補(即100%互補)。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸與編碼ApoB的核酸完全互補。
[0160]在某些實施方案中，編碼人ApoB的核酸是ApoB mRNA。在某些實施方案中，這種ApoB mRNA可以或可以不包括一些或全部外顯子。[0161]在某些實施方案中，寡核苷酸長度是12至30個核苷酸，即寡核苷酸是12至30個連接的核苷酸。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸長度是15至25個核苷酸。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸長度是17至23個核苷酸。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸長度是18至22個核苷酸。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸長度是19至21個核苷酸。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸長度是20個核苷酸。
[0162]在某些實施方案中，寡核苷酸與特定核苷酸序列具有百分比一致性(percentidentity)。如果一個寡核苷酸與另一個寡核苷酸的核苷堿基具有相同的核苷堿基配對能力，則它們具有一致性。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸與另一個寡核苷酸具有90% —致性。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸與另一個寡核苷酸具有95% —致性。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸與另一個寡核苷酸具有100% —致性。在某些這樣的實施方案中，在寡核苷酸全長都具有一致性。在某些這樣的實施方案中，對寡核苷酸的一部分具有一致性。
[0163]在某些實施方案中，寡核苷酸包含化學修飾。在某些這樣的實施方案中，寡核苷酸的修飾包括置換或改變核苷間鍵合、糖部分或核苷堿基。修飾的寡核苷酸通常由于具有期望的特性而優(yōu)于天然形式，例如細胞吸收提高、對于靶核酸的親和力提高、核酶存在下穩(wěn)定性增加或抑制活性增加。
[0164]在某些實施方案中，也可以使用化學修飾的核苷增加縮短或截短的反義寡核苷酸對于其靶核酸的結(jié)合親和力。
[0165]在某些實施方案中，寡核苷酸包含一個或多個修飾的(即非天然存在的)核苷間鍵合。在某些這樣的實施方案中，具有修飾的核苷間鍵合的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷間鍵合以及不具有磷原子的核苷間鍵合。代表性的含磷核苷間鍵合包括但不限于磷酸二酯、磷酸三酯、磷酸甲酯、磷酰胺脂和硫代磷酯。制備含磷和不合磷的鍵合的方法為大家所熟知。
[0166]在某些實施方案中，寡核苷酸含有包括修飾糖部分的一個或多個核苷酸。在某些這樣的實施方案中，以很多方法修飾核苷的呋喃糖環(huán)，包括但不限于添加取代基，尤其是在2'位置；兩個非偕環(huán)原子橋接形成二環(huán)核酸(BNA);和原子或基團例如-S-、-N(R)或-C(Rl) (R2)置換4'位置的環(huán)氧。在某些這樣的實施方案中，修飾的糖包括但不局限于:取代的糖，尤其是具有2' -F、2' -OCH2 (2; -OMe)或2' -0(CH2)2_0CH3(2' -0-甲氧乙基或2' -M0E)取代基的2'取代糖；和二環(huán)修飾的糖(BNA)，具有4' - (CH2)n_0_2'橋接，其中n = I或n = 2。制備修飾糖的方法為本領域技術人員所熟知。
[0167]在某些實施方案中，寡核苷酸含有包括修飾的核苷堿基的一個或多個核苷酸。在這樣的實施方案中，核苷堿基被修飾以保留氫鍵。在某些這樣的實施方案中，修飾的核苷堿基包括但不限于5-甲基胞嘧啶(5-meC)。另外的修飾核苷堿基包括5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基及其他烷基衍生物，腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基及其他烷基衍生物，2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶，5-鹵尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔(-C = C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶及嘧啶堿基的其他炔基衍生物，6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶，8-鹵、8-氨基、8-硫代、8-硫代烷基、8-羥基及其他8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤，5-鹵(尤其是5-溴)、5_三氟甲基及其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤，2-F-腺嘌呤，2-氨基-腺嘌呤，8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤，7-去氮雜鳥嘌呤和7-去氮雜腺嘌呤，以及3-去氮雜鳥嘌呤和3-去氮雜腺嘌呤。
[0168]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含一種或多種寡核苷酸以及一種或多種賦形劑。在某些這樣的實施方案中，賦形劑選自水、鹽溶液、乙醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、淀粉酶、硬脂酸鎂、滑石粉、硅酸、粘石蠟、羥甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。
[0169]在某些實施方案中，使用已知技術制備本發(fā)明的藥物組合物，包括但不限于混合、溶解、成粒、制糖衣、研磨、乳化、裝入膠囊、包封或壓片方法。
[0170]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是液體(例如懸液、酏劑和/或溶液)。在某些這樣的實施方案中，使用本領域已知成分制備液體藥物組合物，包括但不限于水、乙二醇、油類、乙醇、增香劑、防腐劑和著色劑。
[0171]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是固體(例如粉劑、片劑和/或膠囊)。在某些這樣的實施方案中，使用本領域已知成分制備包含一種或多種寡核苷酸的固體藥物組合物，包括但不限于淀粉、糖、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑和崩解劑。
[0172]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物被配制成長效制劑(depotpreparation)。某些這種長效制劑典型地比非長效制劑作用更久。在某些實施方案中，這種制劑通過植入(例如皮下或肌肉內(nèi)植入)或通過肌肉注射施用。在某些實施方案中，使用合適的聚合材料或疏水材料(例如可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂制備長效制劑，或作為微溶衍生物，例如微溶鹽。
[0173]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含遞送系統(tǒng)。遞送系統(tǒng)實例包括但不限于脂質(zhì)體和乳劑。某些遞送系統(tǒng)具有制備某些藥物組合物的用途，包括含疏水化合物的組合物。在某些實施方案中，使用某些有機溶劑例如二甲基亞砜。
[0174]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含一種或多種組織特異性遞送分子，用于將本發(fā)明的一種或多種藥物制劑遞送至特定組織或細胞類型。例如，在某些實施方案中，藥物組合物包括包被組織特異性抗體的脂質(zhì)體。
[0175]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含共溶劑系統(tǒng)。某些這種共溶劑系統(tǒng)包括例如苯甲醇、非極性表面活性劑、與水能混容的有機聚合物和水相。在某些實施方案中，這種共溶劑系統(tǒng)用于疏水化合物。這種共溶劑系統(tǒng)的非限制性實例是vro共溶劑系統(tǒng)，其是包含3% w/v苯甲醇、8% w/v非極性表面活性劑聚山梨酸酯80.TM和65% w/v聚乙二醇300的純乙醇溶液。這種共溶劑系統(tǒng)的比例可以變化很大，而不明顯改變它們的可溶性和毒性特性。此外，可以改變共溶劑成分本身:例如，可以使用其他表面活性劑代替聚山梨酸酯80.TM ;聚乙二醇的比例大小可以改變；其他生物相容聚合物可以代替聚乙二醇，例如聚乙烯基吡咯烷酮；及其他糖或聚糖可以代替右旋糖。
[0176]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含緩釋系統(tǒng)。這種緩釋系統(tǒng)的非限制性實例是固體疏水聚合物的半滲透基質(zhì)。在某些實施方案中，緩釋系統(tǒng)根據(jù)它們的化學性質(zhì)可以在數(shù)小時、數(shù)天、數(shù) 周或數(shù)月內(nèi)釋放藥物制劑。[0177]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物被制備成口服施用。在某些這樣的實施方案中，藥物組合物由一種或多種寡核苷酸與一種或多種藥學上可接受的載體組合配制而成。某些這種載體能夠?qū)⑺幬锝M合物配制成個體口服攝取的片劑、丸劑、糖衣、膠囊、液體、凝膠、糖漿、軟膏、懸液等等。在某些實施方案中，口服施用的藥物組合物通過將寡核苷酸和一種或多種固體賦形劑混合得到。合適的賦形劑包括但不限于填料，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纖維素制劑例如玉米淀粉、麥淀粉、米淀粉、馬鈴著淀粉、明膠、黃蓍樹膠、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。在某些實施方案中，任選磨碎這種混合物，任選添加輔料。在某些實施方案中，藥物組合物成形得到片劑或糖衣心。在某些實施方案中，添加崩解劑(例如交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽，例如海藻酸鈉)。
[0178] 在某些實施方案中，糖衣心具有糖衣。在某些這樣的實施方案中，可以使用濃縮糖溶液，可以任選包含阿拉伯樹膠、滑石粉、聚乙烯基吡咯烷酮、聚羧乙烯凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。片劑或糖衣中可以添加著色劑或顏料。
[0179]在某些實施方案中，口服藥物組合物是由明膠制成的推入配合膠囊(push-fitcapsule)。某些這樣的推入配合膠囊包含本發(fā)明的一種或多種藥物制劑,其與一種或多種填料例如乳糖、粘合劑例如淀粉、和/或潤滑劑例如滑石粉或硬脂酸鎂、以及任選地穩(wěn)定劑混合。在某些實施方案中，口服藥物組合物是由明膠和增塑劑(例如甘油或山梨糖醇)制成的密封軟膠囊。在某些軟膠囊中，本發(fā)明的一種或多種藥物制劑可以溶解或懸浮于合適的液體中，例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外可以添加穩(wěn)定劑。
[0180]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物被制備成含服施用。某些這種藥物組合物是以常規(guī)方法配制的片劑或錠劑。
[0181]在某些實施方案中，藥物組合物被配制成注射施用(例如靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)等等)。在某些這樣的實施方案中，藥物組合物包含載體并配制成水溶液，例如水或生理相容的緩沖液例如Hanks' s溶液、林格氏溶液或生理鹽水緩沖液。在某些實施方案中，包括其他成分(例如增加可溶性或充當防腐劑的成分)。在某些實施方案中，使用適當?shù)囊后w載體、懸浮劑等制備可注射懸液。用于注射的某些藥物組合物存在于單位劑型中，例如安瓿或多劑量容器。用于注射的某些藥物組合物是油性或水性運載體中的懸液、溶液或乳劑，并可以包含配方劑例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。適合用于注射的藥物組合物的某些溶劑包括但不限于親脂性溶劑和脂肪油類，例如芝麻油、合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯和脂質(zhì)體。水性注射懸液可以包含增加懸液粘性的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉鹽、山梨醇或右旋糖酐。任選地，這種懸液還可以包含增加藥物制劑可溶性以允許制備高濃度溶液的合適穩(wěn)定劑或試劑。
[0182]在某些實施方案中，藥物組合物被制備成經(jīng)粘膜施用。在某些這樣的實施方案中，在配制中使用適于要透過的屏障的滲透劑。這種滲透劑是本領域通常所知的。
[0183]在某些實施方案中，藥物組合物被制備成通過吸入施用。用于吸入的某些這種藥物組合物制備成加壓包裝或噴霧器內(nèi)的氣溶膠噴霧劑的形式。某些這種藥物組合物包含推進劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合適的氣體。在某些實施方案中，使用加壓噴霧器，劑量單位通過遞送計量的閥門來決定。在某些實施方案中，可以配制用于吸入器或吹入器的膠囊和藥筒。某些這種制劑包含本發(fā)明藥物制劑和合適的粉末基質(zhì)例如乳糖或淀粉的粉末混合物。[0184]在某些實施方案中，藥物組合物被制備成直腸施用，例如栓劑或保留灌腸。某些這種藥物組合物包含已知的成分，例如可可脂和/或其他甘油酯。
[0185]在某些實施方案中，藥物組合物被制備成局部施用。某些這種藥物組合物包含溫和保濕基質(zhì)，例如膏劑或乳劑。示例性的合適軟膏基質(zhì)包括但不限于礦脂、礦脂加易揮發(fā)硅樹脂、羊毛脂和油包水乳化液例如Eucerin.TM,可從Beiersdorf (Cincinnati,Ohio)得到。不例性的合適膏基質(zhì)包括但不限于Nivea.TM.乳劑,可從Beiersdorf (Cincinnati, Ohio)得到、冷膏(USP) >Purpose Cream.TM.,可從 Johnson&Johnson(New Brunswick,N.J.)得到、親水性軟膏(USP)和 Lubriderm.TM.,可從 Pfizer (Morris Plains, N.J.)得到。
[0186]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含治療有效量的寡核苷酸。在某些實施方案中，所述治療有效量足以預防、減輕或改善所治療個體的疾病癥狀或足以延長存活時間。治療有效量的確定在本領域技術人員能力范圍內(nèi)。
[0187]在某些實施方案中，本發(fā)明的一個或多個寡核苷酸被配制成前體藥物。在某些實施方案中，體內(nèi)施用時，前體藥物化學地轉(zhuǎn)變成生物學上、藥物學上或治療上更具活性的寡核苷酸形式。在某些實施方案中，前體藥物是有用的，因為它們比相應活性形式更容易施用。例如，在某些情況下，前體藥物可能比相應活性形式更容易被生物利用(例如通過口服)。在某些情況下，前體藥物與相應活性形式相比可溶性可能提高。在某些實施方案中，前體藥物比相應活性形式更難溶于水。在某些情況下，前體藥物擁有優(yōu)越的穿越細胞膜遞送性，這時水溶性對遷移率不利。在某些實施方案中，前體藥物是酯。在某些這樣的實施方案中，當施用時，所述酯被代謝水解成羧酸。在某些情況下，含羧酸化合物是相應的活性形式。在某些實施方案中，前體藥物包含與酸根結(jié)合的短肽(多氨基酸)。在某些這樣的實施方案中，施用時，肽被切開而形成相應活性形式。
[0188]在某些實施方案中，前體藥物的制備是通過修飾藥物活性化合物，使得當在活體內(nèi)施用時重新產(chǎn)生活性化合物。前體藥物可以用來改變新陳代謝穩(wěn)定性或藥物遞送特性，以遮蓋副作用或毒性，改善藥物口味或改變藥物其他特性或性能。通過對體內(nèi)藥物動力學過程和藥物代謝的認識，本領域技術人員一旦獲知了藥物活性化合物，就可以設計出該化合物的前體藥物(參見例如 Nogrady(1985)Medicinal Chemistry A BiochemicalApproach,牛津大學出版社，紐約，388-392頁)。
[0189]在某些實施方案中，包含本發(fā)明一種或多種藥物制劑的藥物組合物具有治療哺乳動物，尤其是人體的病癥或紊亂的用途。適當?shù)氖┯猛緩桨ǖ幌抻诳诜⒅蹦c、經(jīng)粘膜、腸、腸內(nèi)、局部、栓劑、通過吸入、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)和非腸道(例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、髓內(nèi)和皮下)。在某些實施方案中，鞘內(nèi)藥劑施用實現(xiàn)局部而不是全身暴露于該藥劑。例如，藥物組合物可以直接注射到期望效果的區(qū)域(例如腎或心區(qū))。
[0190]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物以劑量單位形式(例如片劑、膠囊、丸劑等等)施用。在某些實施方案中，這種藥物組合物包含選自下列劑量的寡核苷酸:25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、lOOmg、105mg、IIOmg、I15mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、270mg、280mg、285mg、290mg、295mg、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、330mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、395mg、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、430mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495mg、500mg、505mg、510mg、515mg、520mg、525mg、530mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、565mg、570mg、575mg、 580mg、585mg、590mg、595mg、600mg、605mg、610mg、615mg、620mg、625mg、630mg、635mg、640mg、645mg、650mg、655mg、660mg、665mg、670mg、675mg、680mg、685mg、690mg、695mg、700mg、705mg、710mg、715mg、720mg、725mg、730mg、735mg、740mg、745mg、750mg、755mg、760mg、765mg、770mg、775mg、780mg、785mg、790mg、795mg 和 800mg。在某些這樣的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含選自下列劑量的寡核苷酸:25mg、50mg、75mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、50Qmg、600mg、700mg 和 800mg。在某些實施方案中，所述藥物組合物包含選自下列劑量的寡核苷酸:50mg、IOOmg> 150mg、200mg、250mg、300mg和400mg。
[0191]在另一方面，藥物制劑是無菌凍干寡核苷酸，其用適當?shù)南♂寗├鐪缇⑸渌匦屡渲啤Ｖ匦屡渲频漠a(chǎn)物用鹽水稀釋后，皮下注射或靜脈內(nèi)輸液施用。凍干藥物產(chǎn)物由寡核苷酸組成，所述寡核苷酸在注射用水中制成，制備過程中用酸或堿調(diào)節(jié)至PH7.0-9.0，然后凍干。凍干寡核苷酸可以是25-800mg寡核苷酸。應理解這包括25、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775和800mg凍干寡核苷酸。凍干藥物產(chǎn)物可以包裝在2mL I型透明玻璃小瓶中(經(jīng)硫酸銨處理)，用溴化丁基橡膠封閉物塞住，并用鋁FLIP-OFF?頂封。在一個實施方案中，凍干藥物制劑包含ISIS301012。
[0192]本發(fā)明的組合物可以另外含有藥物組合物中常見的其他輔料成分，以本領域確定的使用水平存在。因此，例如，所述組合物可以含有另外的、相容的、藥物活性原料，例如止癢劑、收斂藥、局部麻醉藥或消炎藥，或可以含有對物理配制各種劑量的本發(fā)明組合物有用的其他原料，例如著色劑、調(diào)味劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、增稠劑和穩(wěn)定劑。然而，當添加這些原料時，應該不過度干擾本發(fā)明組合物組分的生物活性。該制劑可以被殺菌，如果期望，與助劑混合，例如潤滑劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、影響滲透壓的鹽、緩沖劑、著色劑、調(diào)味劑和/或芳香劑等等，它們不會有害地影響制劑的寡核苷酸。
[0193]C.某些給藥方案
[0194]在某些實施方案中，藥物組合物根據(jù)給藥方案來施用。在某些這樣的實施方案中，給藥方案包括誘導期和維持期。
[0195]在某些實施方案中，誘導期包括一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、^ 、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十或超過二十個劑量。
[0196]在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)一天到六個月。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)一周到五個月，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)一周到五個月，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)兩周到五個月，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)三周到四個月，從誘導期第一次劑量施用到維 持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)五周到三個月，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)五周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)六周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)七周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)八周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)九周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十一周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十二周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十三周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十四周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十五周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十六周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十七周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十八周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)十九周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)二十周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)二十一周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)二十二周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)二十三周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)二十四周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，所述誘導期持續(xù)二十五周，從誘導期第一次劑量施用到維持期第一次劑量施用來計算。在某些這樣的實施方案中，誘導期施用的劑量低于維持期施用的劑量。
[0197]在某些實施方案中，誘導期施用的劑量低于維持期施用的劑量，以避免不期望的副作用。在某些實施方案中，不期望的副作用是肝臟毒性。在某些這樣的實施方案中，不期望的副作用是ALT增高。在某些這樣的實施方案中，降低誘導劑量，為肝臟脂質(zhì)代謝提供時間以補償ApoB的生成減少。在某些這樣的實施方案中，ALT適度增高反映快速降脂活性。
[0198]在某些實施方案中，誘導期包括一個以上劑量，誘導期施用的多個劑量是彼此都相同的量。在某些實施方案中，誘導期施用的多個劑量不是完全相同的量。在某些這樣的實施方案中，劑量隨時間增加。在某些這樣的實施方案中，劑量隨時間降低。
[0199]在某些實施方案中，誘導劑量通過腸胃外施用。在某些這樣的實施方案中，腸胃外施用是皮下施用。在某些這樣的 實施方案中，腸胃外施用是靜脈內(nèi)輸液。
[0200]在某些實施方案中，誘導期的劑量選自25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、lOOmg、105mg、IlOmg>I15mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、270mg、280mg、285mg、290mg、295mg、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、330mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、395mg、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、430mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495mg、500mg、505mg、510mg、515mg、520 mg、525mg、530mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、565mg、570mg、575mg、580mg、585mg、590mg、595mg、600mg、605mg、610mg、615mg、620mg、625mg、630mg、635mg、640mg、645mg、650mg、655mg、660mg、665mg、670mg、675mg、680mg、685mg、690mg、695mg、700mg、705mg、710mg、715mg、720mg、725mg、730mg、735mg、740mg、745mg、750mg、755mg、760mg、765mg、770mg、775mg、780mg、785mg、790mg、795mg和800mg。在某些這樣的實施方案中，誘導期的劑量選自25mg、50mg、75mg、lOOmg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、500mg、600mg、700mg、和 800mg。在某些這樣的實施方案中，誘導期的劑量選自lOOmg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg和400mg。在某些這樣的實施方案中，誘導期的劑量選自lOOmg, 125mg、150mg、175mg、200mg、225mg和250mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是lOOmg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是125mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是150mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是175mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是200mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是225mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是250mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是300mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是325mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是350mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是375mg。在某些實施方案中，誘導期施用的劑量是400mg。
[0201]在某些實施方案中，在期望皮下施用的情況下，誘導劑量可以通過兩次或更多次皮下注射而施用。在某些這樣的實施方案中，當期望的誘導劑量需要的體積不易被單次注射容納時，可以兩次或更多次皮下注射來達到期望的誘導劑量。在某些這樣的實施方案中，可以使用兩次或更多次皮下注射施用期望的誘導劑量并減少或消除個體注射部位的反應。
[0202]在某些實施方案中，可以選擇誘導期劑量、劑量頻率和持續(xù)時間以達到期望效果。在某些實施方案中，調(diào)節(jié)這些變量，使藥物制劑在個體中達到期望濃度。例如，在某些實施方案中，調(diào)節(jié)劑量和劑量頻率，使藥物制劑的血漿濃度處于足以達到期望效果的量。在某些這樣的實施方案中，血漿濃度維持在最低有效濃度(MEC)之上。在某些實施方案中，本發(fā)明藥物組合物的施用方案被設計成在10-90 %的時間、30-90 %的時間、或50-90 %的時間內(nèi)維持超過MEC的濃度。
[0203]在某些實施方案中，可以選擇誘導期劑量、劑量頻率和持續(xù)時間以使藥物組合物達到期望的血漿低谷濃度。在某些這樣的實施方案中，藥物組合物是寡核苷酸。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是5-100mg/mL。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是5-50mg/mL。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是10_40mg/mL。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是15-35mg/mL。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是2 0-30mg/mL。
[0204]在某些實施方案中，可以選擇誘導期劑量、劑量頻率和持續(xù)時間，使五至十三周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，劑量相同，改變劑量頻率，使五至十三周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，劑量隨時間增加，劑量頻率保持恒定。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使六至十三周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使六周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使七周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使八周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使九周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十一周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十二周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十三周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，誘導期一個或多個劑量大于維持期一個或多個劑量。在某些這樣的實施方案中，誘導期每個劑量大于維持期每個劑量。
[0205]在某些實施方案中，可以選擇誘導期的劑量、劑量頻率和持續(xù)時間，使十三至二十五周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，劑量相同，改變劑量頻率，使十三至二十五周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，劑量隨時間增加，劑量頻率保持恒定。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十三周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十四周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十五周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十六周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十七周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十八周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使十九周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使二十周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使二十一周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使二十二周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使二十三周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使二十四周內(nèi)達到期望效果。在某些這樣的實施方案中，選擇劑量和劑量頻率，使二十五周內(nèi)達到期望效果。在某些實施方案中，誘導期一個或多個劑量小于維持期一個或多個劑量。在某些這樣的實施方案中，誘導期每個劑量小于維持期每個劑量。
[0206]在某些實施方案中，期望盡快達到期望效果。在這種實施方案中，誘導期高劑量和/或高劑量頻率可能是期望的。這種實施方案可以包括給膽固醇濃度非常高的個體施用。
[0207]在某些實施方案中，期望減輕不期望的副作用。在某些這樣的實施方案中，誘導期低劑量和/或低劑量頻率和/或持續(xù)時間長可能是期望的。例如，誘導期長，劑量相對低，可以更好地耐受藥物制劑。在某些這樣的實施方案中，產(chǎn)生的生理變化使總體副作用減少。在某些實施方案中，這種給藥方案與較高的初始劑量和/或頻率相比，使肝臟毒性降低。這種實施方案可以包括隨時間逐步增加劑量。
[0208]在局部施用藥物組合物的某些實施方案中，選擇施用方案以使本發(fā)明藥物制劑達到期望的局部濃度。
[0209]在某些實施方案中，可以選擇誘導期劑量、劑量頻率和持續(xù)時間以達到可接受的安全性。例如，在某些實施方案中，可以選擇這些變量以減輕藥物組合物的毒性。在某些這樣的實施方案中，選擇這些變量以減輕肝臟毒性。在某些這樣的實施方案中，選擇這些變量以減輕腎毒性。在某些這樣的實施方案中，劑量隨時間增加。在某些實施方案中，誘導期的一個或多個劑量低于維持期的一個或多個劑量。在某些這樣的實施方案中，當ALT是正常值上限的5-10倍時，安全性不可接受。在某些這樣的實施方案中，當ALT是正常值上限的5-10倍，且膽紅素高于正常值上限兩倍或更多倍時，安全性不可接受。在某些這樣的實施方案中，可接受的安全性包括ALT升高，超過正常值上限三倍，但沒有超過正常值上限五倍。在某些這樣的實施方案中，可接受的安全性包括ALT升高，超過正常值上限三倍，但沒有超過正常值上限五倍，膽紅素升高，沒有超過正常值上限兩倍。在某些這樣的實施方案中，當施用本發(fā)明藥物組合物引起ALT升高超過正常值上限三倍時，調(diào)節(jié)劑量和/或劑量頻率以減輕ALT升高。在某些這樣的實施方案中，當施用本發(fā)明藥物組合物引起ALT升高超過正常值上限三倍且膽紅素濃度超過正常值上限兩倍時，調(diào)節(jié)劑量和/或劑量頻率以減輕ALT升高和膽紅素升高。在某些這樣的實施方案中，調(diào)節(jié)劑量和/或劑量頻率以單獨減輕膽紅素升尚。
[0210]在某些實施方案中，維持期包括一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十或超過二十個劑量。
[0211]在某些實施方案中，維持期持續(xù)一天到個體終生。在某些實施方案中，維持期持續(xù)一周到二十年，從誘導期最后一次劑量施用到維持期最后一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，維持期持續(xù)兩周到十五年，從誘導期最后一次劑量施用到維持期最后一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，維持期持續(xù)三周到十年，從誘導期最后一次劑量施用到維持期最后一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，維持期持續(xù)四周到十年，從誘導期最后一次劑量施用到維持期最后一次劑量施用來計算。在某些實施方案中，只要劑量持續(xù)被需要、有效和可耐受，維持期就持續(xù)。
[0212]在某些實施方案中，維持期包括一個以上劑量，維持期施用的多個劑量是彼此都相同的量。在某些實施方案中，維持期施用的多個劑量不是完全相同。在某些這樣的實施方案中，劑量隨時間增加。在某些這樣的實施方案中，劑量隨時間降低。
[0213]在某些實施方案中，維持劑量通過腸胃外施用。在某些這樣的實施方案中，腸胃外施用是皮下施用。在某些這樣的實施方案中，腸胃外施用是靜脈內(nèi)輸液。
[0214]在某些實施方案中，維持期的劑量選自25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、lOOmg、105mg、llOmg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、270mg、280mg、285mg、290mg、295mg、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、330mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、 395mg、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、430mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495mg、500mg、505mg、510mg、515mg、520mg、525mg、530mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、565mg、5 70mg、575mg、580mg、585mg、590mg、595mg、600mg、605mg、610mg、615mg、620mg、625mg、630mg、635mg、640mg、645mg、650mg、655mg、660mg、665mg、670mg、675mg、680mg、685mg、690mg、695mg、700mg、705mg、710mg、715mg、720mg、725mg、730mg、735mg、740mg、745mg、750mg、755mg、760mg、765mg、770mg、775mg、780mg、785mg、790mg、795mg和800mg。在某些這樣的實施方案中，維持期的劑量選自25mg、50mg、75mg、lOOmg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、500mg、600mg、700mg 和 800mg。在某些這樣的實施方案中，維持期的劑量選自100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg和400mg。在某些這樣的實施方案中，維持期的劑量選自lOOmg, 125mg、150mg、175mg、200mg、225mg和250mg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是lOOmg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是125mg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是150mg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是175mg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是200mg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是225mg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是250mg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是275mg。在某些實施方案中，維持期施用的劑量是300mg。
[0215]在某些實施方案中，期望皮下施用的情況下，維持劑量可以通過兩次或更多次皮下注射而施用。在某些這樣的實施方案中，當期望的維持劑量需要的體積在單次注射中不易容納時，可以通過兩次或更多次皮下注射來達到期望的維持劑量。在某些這樣的實施方案中，可以通過兩次或更多次皮下注射施用期望的維持劑量，并減少或消除個體注射部位的反應。
[0216]在某些實施方案中，可以選擇維持期劑量、劑量頻率和持續(xù)時間以達到期望效果。在某些實施方案中，調(diào)節(jié)這些變量，使藥物制劑在個體中達到期望濃度。例如，在某些實施方案中，調(diào)節(jié)劑量和劑量頻率，使本發(fā)明的藥物制劑的血漿濃度處于足以達到期望效果的量。在某些這樣的實施方案中，血漿濃度維持在最低有效濃度(MEC)之上。在某些實施方案中，通過設計用來將濃度在10-90 %的時間、30-90 %的時間、或50-90 %的時間維持在MEC之上的施用方案施用本發(fā)明的藥物組合物。
[0217]在某些實施方案中，可以選擇維持期劑量、劑量頻率和持續(xù)時間以使藥物組合物達到期望的血漿低谷濃度。在某些這樣的實施方案中，藥物組合物是寡核苷酸。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是5-100ng/mL。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是5-50ng/mL。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是10_40ng/mL。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是15-35ng/mL。在某些這樣的實施方案中，期望的血漿低谷濃度是20-30ng/mL。
[0218]在某些實施方案中，可以選擇維持期劑量、劑量頻率和持續(xù)時間以達到期望的安全性。例如，在某些實施方案中，可以選擇這些變量以減輕藥物組合物的毒性。在某些這樣的實施方案中，選擇這些變量以減輕肝臟毒性。在某些這樣的實施方案中，選擇這些變量以減輕腎毒性。在某些這樣的實施方案中，劑量隨時間增加。
[0219]在某些實施方案中，可以經(jīng)常調(diào)節(jié)維持期劑量、劑量頻率和持續(xù)時間以達到期望效果。在某些實施方案中，監(jiān)測個體的效果(治療和/或毒性作用)并根據(jù)監(jiān)測結(jié)果，調(diào)節(jié)維持期劑量、劑量頻率和/或持續(xù)時間。
[0220]本領域技術人員會認識 到可以獨立操縱誘導期和維持期的劑量、劑量頻率和持續(xù)時間以達到期望效果。例如，在某些實施方案中，本發(fā)明提供了下面表1-6中所列的給藥方案。本領域技術人員會認識到可以選擇表中的變量并獨立組合。這些表僅用來闡明可以如何組合所述變量，但不限制本發(fā)明。此外，本發(fā)明不限于表中所列的變量。[0221]在某些實施方案中，藥物組合物施用于個體的方法包括誘導期，其中施用200-400mg的誘導劑量，每周一次，至少8周，隨后是維持期，其中每隔一段時間施用100-300mg的維持劑量，每周一次至每三個月一次，只要是維持期望效果所需的。在某些實施方案中，施用誘導劑量，每周一次，8-20周。在某些實施方案中，施用誘導劑量，每周一次，10-15周。在某些實施方案中，施用誘導劑量，每周一次，至少12周。在某些實施方案中，施用誘導劑量，每周一次，至少14周。在某些實施方案中，施用誘導劑量，每周一次，至少16周。在某些這樣的實施方案中，誘導劑量是200mg。在某些這樣的實施方案中，誘導劑量是300mg。在某些這樣的實施方案中，誘導劑量是400mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量范圍200-300mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是150mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是200mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是250mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是300mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量每周施用一次。在某些這樣的實施方案中，維持劑量每月施用一次。在某些這樣的實施方案中，維持劑量每三個月施用一次。在某些這樣的實施方案中，維持劑量施用至少6個月。在某些這樣的實施方案中，維持劑量施用至少一年。在某些這樣的實施方案中，施用維持劑量達到五年。在某些這樣的實施方案中，施用維持劑量達到十年。在某些這樣的實施方案中，只要維持期望的效果需要，就施用維持劑量。在某些實施方案中，調(diào)節(jié)維持劑量的施用頻率以達到期望的功效和/或期望的安全性。在某些這樣的實施方案中，調(diào)節(jié)維持劑量頻率以使寡核苷酸達到期望的血漿低谷濃度。在某些這樣的實施方案中，施用的反義寡核苷酸的血漿低谷濃度是15-40ng/mL。在某些這樣的實施方案中，施用的反義寡核苷酸的血漿低谷濃度是20_30ng/mL。在某些這樣的實施方案中，期望效果選自ApoB降低、LDL-C降低、VLDL-C降低、IDL-C降低、非HDL-C降低、血清甘油三酯降低、肝臟甘油三酯降低、Lp (a)降低、Ox-LDL-C降低和小而密的LDL顆粒減少。在某些這樣的實施方案中，個體有多基因高膽固醇血癥。在某些這樣的實施方案中，個體有家族性高膽固醇血癥。在某些這樣的實施方案中，個體有純合家族性高膽固醇血癥。在某些這樣的實施方案中，個體有雜合家族性高膽固醇血癥。在某些這樣的實施方案中，藥物組合物與他汀類藥物共同施用。在某些這樣的實施方案中，個體不耐受他汀類藥物。在某些這樣的實施方案中，個體未達到當前治療的LDL-C目標。某些給藥方案的非限制性實例在表1中闡明。
[0222]表1某些給藥方案
[0223]
_ 誘導期___維持期 _
劑量劑量頻率持續(xù)時間劑量劑量頻率持續(xù)時間
300m 每周一次 8-20周 150mg 每周一次至少6個月
g每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次至少五年
每兩個月一次達到五年
每三 個月一次達到十年
300m 每周一次 8-20周 200mg 每周一次至少6個月
g每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年 ____每月一次_至少五年_[0224]
每兩個月一次達到五年
每三個月一次達到十年
300m 每周一次 8-20周 250mg 每周一次至少6個月
g每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次至少五年
每兩個月一次達到五年
每三個月一次達到十年
300m 每周一次 12-16周 150mg 每周一次至少6個月
g每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次至少五年
每兩個月一次達到五年
每三個月一次達到十年
300m 每周一次 12-16周 200mg 每周一次至少6個月
g每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次至少五年
每兩個月一次達到五年
每三個月一次達到十年
300m 每周一次 12-16周 250mg 每周一次至少6個月
g每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次至少五年
每兩個月一次達到五年
每三個月一次達到十年
[0225]在某些實施方案中，藥物組合物施用個體的方法包括誘導期，其中施用200mg的誘導劑量，每周一次，13周，隨后是維持期，其中每隔一段時間施用80-200mg的劑量范圍，每周一次至每三個月一次，只要是維持期望效果所需的。在某些這樣的實施方案中，維持劑量范圍是100-150mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是lOOmg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是125mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是140mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是150mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是175mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是180mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量是200mg。在某些這樣的實施方案中，維持劑量每周施用一次。在某些這樣的實施方案中，維持劑量每月施用一次。在某些這樣的實施方案中，維持劑量每三個月施用一次。在某些這樣的實施方案中，維持劑量施用至少6個月。在某些這樣的實施方案中，維持劑量施用至少一年。在某些這樣的實施方案中，施用維持劑量達到五年。在某些這樣的實施方案中，施用維持劑量達到十年。在某些這樣的實施方案中，只要維持期望效果需要，就施用維持劑量。在某些這樣的實施方案中，調(diào)節(jié)維持期劑量的施用頻率以達到期望功效和/或期望安全性。在某些這樣的實施方案中，調(diào)節(jié)維持劑量頻率以使寡核苷酸達到期望血漿低谷濃度。在某些這樣的實施方案中，施用的反義寡核苷酸的血漿低谷濃度是15-40ng/mL。在某些這樣的實施方案中，施用的反義寡核苷酸的血漿低谷濃度是20-30ng/mL。在某些這樣的實施方案中，期望效果選自ApoB降低、LDL-C降低、VLDL-C降低、IDL-C降低、非HDL-C降低、血清甘油三酯降低、肝臟甘油三酯降低、Lp (a)降低、Ox-LDL-C降低和小而密的LDL顆粒減少。在某些這樣的實施方案中，個體有多基因高膽固醇血癥。在某些這樣的實施方案中，個體有家族性高膽固醇血癥。在某些這樣的實施方案中，藥物組合物與他汀類藥物共同施用。在某些這樣的實施方案中，個體不耐受他汀類藥物。在某些這樣的實施方案中，個體不滿足目前治療的LDL-C目標。某些給藥方案的非限制性實例在表2中闡明。
[0226]表2某些給藥方案
[0227]
_ 誘導期___維持期_
劑量劑量頻率持續(xù)時間劑量劑量頻率持續(xù)時間
200mg每周一次 13周80mg 每周一次至少6個月
每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次至少五年
每兩個月一次達到五年
每三個月一次達到十年
200mg 每周一次 13周IOOmg 每周一次至少6個月
每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次至少五年
每兩個月一次達到五年
每三個月一次達到十年
200mg 每周一次 13周125mg 每周一次至少6個月
每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次至少五年
每兩個月一次達到五年
_____每三個月一次__達到十年_
200mg 每周一次 13周140mg 每周一次至少6個月
每兩周一次至少一年
每三周一次至少兩年
每月一次 至少五年
每兩個月一次達到五年
每三個月一次達到十年
[0228]
【權利要求】
1.與編碼人載脂蛋白B-1OO的核酸互補的反義寡核苷酸在制備用于治療膽固醇升高個體的包含兩個或更多個劑量單位的藥物中的用途，其中所述兩個或更多個劑量單位包含總計210mg的所述反義寡核苷酸。
2.權利要求1的用途，其中所述藥物包含兩個劑量單位。
3.權利要求1的用途，其中所述藥物包含三個劑量單位。
4.權利要求1的用途，其中每個所述劑量單位被制備為用于腸胃外施用。
5.權利要求4的用途，其中所述腸胃外施用包括皮下施用。
6.權利要求1的用途，其中所述膽固醇升高選自施用前的總膽固醇升高、LDL-膽固醇升高、VLDL-膽固醇升高、IDL-膽固醇升高或非HDL膽固醇升高。
7.權利要求1的用途,其中其中所述個體有高膽固醇血癥。
8.權利要求7的用途，其中所述個體有多基因高膽固醇血癥。
9.權利要求7的用途，其中所述個體有家族性高膽固醇血癥。
10.權利要求9的用途，其中所述個體有純合性家族性高膽固醇血癥。
11.權利要求9的用途，其中所述個體有雜合性家族性高膽固醇血癥。
12.權利要求1-11任意一項的用途，其中所述藥物包含藥學上可接受的賦形劑。
13.權利要求12的用途，其中所述藥學上可接受的賦形劑是鹽水`
14.權利要求1-11任意一項的用途，其中所述反義寡核苷酸包括至少一個修飾的糖部分。
15.權利要求14的用途，其中所述修飾的糖部分包括2’-甲氧乙基糖部分。
16.權利要求14的用途，所述修飾的糖部分包括二環(huán)核酸糖部分。
17.權利要求1-11任意一項的用途，其中所述反義寡核苷酸包括位于翼節(jié)段之間的2，-脫氧核苷酸缺口節(jié)段，其中所述翼節(jié)段的每個核苷酸包括修飾的糖部分。
18.權利要求17的用途，其中所述翼節(jié)段的每個核苷酸包括2'-O-甲氧乙基糖部分。
19.權利要求18的用途，其中所述翼節(jié)段的每個核苷酸包括二環(huán)核酸糖部分。
20.權利要求17的用途，其中所述缺口節(jié)段包含十個核苷酸，每個所述翼節(jié)段包含五個核苷酸。
21.權利要求1-11任意一項的用途，其中至少一個核苷間鍵合是硫代磷酯核苷間鍵口 ο
22.權利要求1-11任意一項的用途，其中每個核苷間鍵合是硫代磷酯核苷間鍵合。
23.權利要求1-11任意一項的用途，其中至少一個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
24.權利要求1-11任意一項的用途，其中每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
25.權利要求1-11任意一項的用途，其中所述反義寡核苷酸與編碼人ApoB的核酸至少90%、至少95%或至少100%互補。
26.權利要求1-11任意一項的用途,其中所述反義寡核苷酸包含12至30個核苷酸、15至25個核苷酸、17至23個核苷酸、18至22個核苷酸、19至21個核苷酸或20個核苷酸。
27.權利要求1-11任意一項的用途，其中所述反義寡核苷酸是ISIS301012。
【文檔編號】C12N15/113GK103480002SQ201310283565
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2008年3月24日 優(yōu)先權日:2007年3月24日
【發(fā)明者】理查德·S·吉爾里, 于崢嶸, 馬克·K·威德爾, 黛安·崔柏 申請人:基酶有限公司