一種日溝維腸桿菌及其在麻瘋樹餅粕發(fā)酵脫毒中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種日溝維腸桿菌，它是由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的保藏號：CCTCC?NO:M2013184的日溝維腸桿菌Enterobacter?gergoviae?zxy-15。本發(fā)明還公開了日溝維腸桿菌在麻瘋樹餅粕的發(fā)酵脫毒中的應用。本發(fā)明保藏號為CCTCC?NO:M2013184的日溝維腸桿菌Enterobacter?gergoviae?zxy-15，可以有效降低麻瘋樹餅粕有毒成分，提高麻瘋樹餅粕的實用價值。
【專利說明】一種日溝維腸桿菌及其在麻瘋樹餅粕發(fā)酵脫毒中的應用
【技術領域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一株日溝維腸桿菌及其在麻瘋樹餅柏發(fā)酵脫毒中的應用，屬于發(fā)酵領域。
【背景技術】
[0002]麻瘋樹(Jatropha curcas L.)是世界公認的最有可能成為未來替代化石能源的具有巨大開發(fā)潛力的樹種，利用麻瘋樹油加工生產的生物柴油在各項性能指標上接近甚至超過國家“O”號柴油以及國家生物柴油標準，因此以麻瘋樹果生產生物柴油已經成為現(xiàn)在研究生產生物柴油的一個活躍方向。麻瘋樹餅柏(Jatropha curcas seed cake, JCSC)是生物柴油生產過程中的副產物，具有很高的蛋白含量和較高的營養(yǎng)價值，但是因其毒性大，主要被作為肥料用或直接排放于自然環(huán)境中，不但嚴重地浪費了大量的優(yōu)質蛋白資源，而且還造成了嚴重的環(huán)境污染，若能降低其毒性，則可作為飼用蛋白使用。
[0003]麻瘋樹餅柏的主要毒性物質是佛波酯及其衍生物、胰蛋白酶抑制劑和Curcin。其中，胰蛋白酶抑制劑和Curcin是熱不穩(wěn)定性成分，簡單的加熱處理就可以使它們的分子構型發(fā)生變化，從而失去活性通過熱處理可以使其大量減少，至幾乎完全消失。但是，佛波酯(Phorbol-ester, PE)為熱穩(wěn)定性成分,毒性強,可以在160°C下耐受30min而不受影響,其結構屬于四環(huán)二萜型，巴豆 烷是佛波醇酯的基本結構部分，因此，脫除佛波酯的是麻瘋樹餅柏利用的關鍵因素。
[0004]目前，國內外多采用物理化學方法除去麻瘋樹油柏中的佛波酯，但是化學脫毒操作復雜過程繁瑣、易導致化學物殘留，而且脫毒范圍小、成本高；而酶解只能降解某種毒素，針對性較強，鈍化效果不一致；物理脫毒效率低，且對餅柏中的營養(yǎng)成分造成一定的破壞。
[0005]微生物具有繁殖快、數(shù)量大、產酶系復雜等特點，利用微生物發(fā)酵工程技術脫毒是一種較為有效的方法，文獻報道采用銅綠假單胞菌(P.aeruginosa PseA)發(fā)酵能夠降解麻瘋樹籽柏中的佛波酯。但是，銅綠假單胞菌是醫(yī)院內感染的主要病原菌之一，經常引起術后傷口感染，也可引起褥瘡、膿腫、化膿性中耳炎等，還是尿路感染的常見病原菌。因而用銅綠假單胞菌處理的麻瘋樹餅柏作為飼料使用，存在潛在的安全隱患。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明提供了一種新的日溝維腸桿菌及其在麻瘋樹餅柏發(fā)酵脫毒中的應用。
[0007]日溝維腸桿菌，其標準菌株為日溝維腸桿菌Enterobacter gergoviae Brenner etal.，保藏號為ATCC33028，分離自化妝品中，通常用于化妝品中抗菌防腐劑含量的檢測，極少引起人體或動物體發(fā)病。
[0008]本發(fā)明日溝維腸桿菌，它是由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的保藏號=CCTCCN0:M2013184 的日溝維腸桿菌 Enterobacter gergoviae zxy-15。
[0009]本發(fā)明還提供了日溝維腸桿菌在麻瘋樹餅柏的發(fā)酵脫毒中的用途。
[0010]其中，所述日溝維腸桿菌是保藏號:CCTCC N0:M2013184的日溝維腸桿菌Enterobacter gergoviae zxy-15。
[0011]本發(fā)明麻瘋樹餅柏的發(fā)酵脫毒方法，包括如下步驟:
[0012](I)取日溝維腸桿菌，復蘇制備種子液；
[0013](2)取麻瘋樹餅柏，加水混勻，接種步驟(1)制備的種子液，其中，料水比為1:
0.8~1.2 (w/v)，種子液的接種量為麻瘋樹餅柏的10~30% (v/w)；
[0014](3)在溫度為30~37°C的條件下發(fā)酵2~8天，即可。
[0015]步驟(1)中，所述日溝維腸桿菌是保藏號:CCTCC N0:M2013184的日溝維腸桿菌Enterobacter gergoviae zxy-15。
[0016]步驟(1)中，所述種子液由如下方法制備:在20ml牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種2-3環(huán)日溝維腸桿菌，37°C、200r/min下振蕩培養(yǎng)10~14h，即可。
[0017]步驟(2)中，本發(fā)明方法的處理對象可以是未脫油的麻瘋樹餅柏，也可以是脫油后的餅柏。未脫油餅柏可按照如下方法制備:取麻瘋樹種仁，粉碎，過40目篩，即可；脫油餅柏可按照如下兩種方法制備:1、將干燥麻瘋樹種仁粉碎過40目篩，按照索氏脫油方法脫油，即得；2、將干燥麻瘋樹種仁粉碎過40目篩，采取榨油機榨取的方法脫油，即得。
[0018]步驟(2)中，所述料水比為1:0.8 (w/v);所述種子液的接種量為麻瘋樹餅柏的25%(v/w)。
[0019]步驟(2)中，所述 麻瘋樹餅柏中添加有碳源，碳源的添加量為麻瘋樹餅柏的10~20% (w/w)，所述碳源為葡萄糖、蔗糖或可溶性淀粉。
[0020]步驟(3)中，所述溫度為36~37°C ;所述發(fā)酵的時間為8天。
[0021]本發(fā)明菌株可以有效降低麻瘋樹餅柏有毒成分，操作簡便，成本低廉，應用前景良好。
[0022]顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0023]以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
[0024]本發(fā)明日溝維腸桿菌zxy - 15 (Enterobactergergoviae zxy - 15),于 2013 年 5月8日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCC:M2013184，保藏地址為中國.武漢.武漢大學。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖lzxy-15菌株16~24h的讀數(shù)結果
[0026]圖2zxy_15菌株的16S rDNAPCR擴增電泳圖譜以及進化樹
[0027]圖3zxy_15生長曲線測定
[0028]圖4zxy_15接種量對脫毒效果的影響
[0029]圖5料水比對zxy-15脫毒效果的影響
[0030]圖6添加碳源對zxy-15脫毒效果的影響
[0031]圖7添加不同碳源對zxy-15脫毒效果的影響
[0032]圖8發(fā)酵溫度對zxy-15脫毒效果的影響[0033]圖9發(fā)酵時間對zxy-15脫毒效果的影響【具體實施方式】
[0034]實施例1本發(fā)明日溝維腸桿菌的鑒定特征
[0035](I)生理生化特征
[0036]對本發(fā)明分離菌株在NB和結晶紫平板上培養(yǎng)24h后，取NB平板上單個菌落進行革蘭氏染色觀察，結合菌株在結晶紫平板上的生長情況判斷其革蘭氏陰陽性，并進行氧化酶實驗和二糖鐵實驗，結果見表1:
[0037]表1生理生化特征
[0038]
【權利要求】
1.一種日溝維腸桿菌，其特征在于:它是由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的保藏號:CCTCC N0:M2013184 的日溝維腸桿菌 Enterobacter gergoviae zxy-15。
2.日溝維腸桿菌在麻瘋樹餅柏的發(fā)酵脫毒中的用途。
3.根據(jù)權利要求2所述的用途，其特征在于:所述日溝維腸桿菌是保藏號=CCTCCN0:M2013184 的日溝維腸桿菌 Enterobacter gergoviae zxy-15。
4.一種麻瘋樹餅柏的發(fā)酵脫毒方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)取日溝維腸桿菌，復蘇制備種子液； (2)取麻瘋樹餅柏，加水混勻，接種步驟(1)制備的種子液，其中，料水比為1:0.8~1.2(w/v)，種子液的接種量為麻瘋樹餅柏的10~30% (v/w)； (3)在溫度為30~37°C的條件下發(fā)酵2~8天，即可。
5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(1)中，所述日溝維腸桿菌是保藏號:CCTCC N0:M2013184 的日溝維腸桿菌 Enterobacter gergoviae zxy-15。
6.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(1)中，所述種子液由如下方法制備:在20ml牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種2-3環(huán)日溝維腸桿菌，37°C、200r/min下振蕩培養(yǎng)10~14h,即可。
7.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所述麻瘋樹餅柏按照如下方法制備:取麻瘋樹種仁，粉碎，過40目篩，即可。
8.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所述麻瘋樹餅柏中添加有碳源，碳源的添加量為麻瘋樹餅柏的10~20%(w/w)，所述碳源為葡萄糖、蔗糖或可溶性淀粉。
9.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所述料水比為1:0.8(w/v)；所述種子液的接種量為麻瘋樹餅柏的25% (v/w)。
10.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(3)中，所述溫度為36~37°C;所述發(fā)酵的時間為8天。
【文檔編號】C12N1/20GK103509738SQ201310296422
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年7月15日 優(yōu)先權日:2013年7月15日
【發(fā)明者】陳放, 張曉喻, 唐琳, 劉瑩, 尹利 申請人:四川大學