欧美在线观看视频网站,亚洲熟妇色自偷自拍另类,啪啪伊人网,中文字幕第13亚洲另类,中文成人久久久久影院免费观看 ,精品人妻人人做人人爽,亚洲a视频

水稻轉(zhuǎn)錄因子Os04g55590.1基因CDS序列的應(yīng)用的制作方法

文檔序號:515016閱讀:291來源:國知局
水稻轉(zhuǎn)錄因子Os04g55590.1基因CDS序列的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子Os04g55590.1基因CDS序列的應(yīng)用,其是利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64與水稻轉(zhuǎn)錄因子Os04g55590.1融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子,并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的基因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻中,從而改良水稻籽粒性狀,例如增加水稻籽粒寬度。對于詳細(xì)闡明調(diào)控種子發(fā)育機理具有重要的理論價值,并且可以通過轉(zhuǎn)基因手段,改良水稻的粒型,因此在生產(chǎn)實踐中也具有重要意義。
【專利說明】水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因CDS序列的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域,具體地說,涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因⑶S 序列的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 水稻(OryzasativaL.)是我國和全世界最重要的三大糧食作物之一,是世界一 半以上人口的主食,也是一個重要的功能基因研究的模式植物。與其相關(guān)的遺傳學(xué)和分子 生物學(xué)研究一直倍受研究者的重視,轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是基因表達調(diào)控的重要方式。當(dāng)前水 稻增產(chǎn)的研究較依賴于有限的水稻種質(zhì)資源,傳統(tǒng)的雜交育種優(yōu)勢正在逐漸減弱,而水稻 轉(zhuǎn)基因技術(shù)有可能發(fā)掘水稻進一步增產(chǎn)的潛力。
[0003] 在植物界中,能形成種子的植物約占植物總數(shù)的三分之二以上,作為重要的繁殖 器官,種子同時也為人們提供食物來源,水稻就是其中的重要代表,種子來源于受精后的胚 珠。從分子生物學(xué)的角度來說,種子的發(fā)育和萌發(fā)是一個有次序的、選擇性的基因表達過 程。而轉(zhuǎn)錄因子在基因表達的精確調(diào)控中起到了關(guān)鍵性的作用。
[0004] 近些年,有關(guān)籽粒大小性狀的分子遺傳調(diào)控機制研究,已取得了一定進展,例如 研究人員利用QTL定位了一些籽粒大小相關(guān)基因,其中GS3編碼一個膜蛋白,是籽粒大小 和器官大小的負(fù)調(diào)控因子;張啟發(fā)等(YiboLi,ChuchuanFan,QIfaZhang,etal. (2011) NaturalvariationinGS5playsanimportantroleinregulatinggrainsizeand yieldinrice.NatureGennetics)研究發(fā)現(xiàn)GS5編碼一個調(diào)節(jié)籽粒大小的絲氨酸羧肽酶, 是控制籽粒大小的正調(diào)節(jié)因子,過表達GS5可使水稻籽粒明顯變大;轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控籽粒 大小方面起著非常重要的作用,0sWRKY78可以調(diào)節(jié)水稻莖的伸長和種子的發(fā)育,0sWRKY78 突變體可使莖桿變矮化影響籽粒發(fā)育;螺旋-環(huán)-螺旋蛋白(bHLH)類轉(zhuǎn)錄因子能通過調(diào)控 外稃和內(nèi)稃細(xì)胞的長度影響谷粒的大?。籔GLl堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白(bHLH)異源二聚 體作為結(jié)合DNA的bHLH的抑制子過表達后可增加籽粒長度和重量。
[0005] Homeoboxes(同源結(jié)構(gòu)域蛋白)HB家族轉(zhuǎn)錄因子在動物界首先在果蠅中,植物在 擬南芥中首次被發(fā)現(xiàn)。HB家族有300多個成員,參與了生物的生長發(fā)育多個方面。從結(jié)構(gòu) 上分析,Homeoboxes擁有DNA識別位點,包括TATA等一系列和DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。目前HB 家族轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1對種子大小形狀調(diào)控機制的研究及認(rèn)識很少,因此該轉(zhuǎn)錄因 子的研究在理論上為進一步理解植物種子和器官發(fā)育調(diào)控的分子機理提供了新的線索;在 實踐上也將為作物高產(chǎn)育種提供理論基礎(chǔ)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因⑶S序列的應(yīng)用。
[0007] 為了實現(xiàn)本發(fā)明目的,本發(fā)明首先提供一種組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子,即融合蛋白 (VP16)4-Linker-0s04g55590. 1。
[0008] 其中,VP16為來自單純皰疹病毒的VP16蛋白,將4個VP16功能域基序融合在一起 可構(gòu)成一類增強子,增強轉(zhuǎn)錄因子的功能,從而在轉(zhuǎn)基因植株中出現(xiàn)更明顯的表型變化。上 述融合蛋白中涉及的(VP16)4,即VP64是由4個VP16蛋白的氨基酸序列以Gly-Ser為間隔 形成的融合蛋白,其氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQIDNo. 10和SEQIDNo. 4所示。
[0009] 上述融合蛋白中涉及的Linker由39個柔性氨基酸串聯(lián)而成,其氨基酸序列如SEQ IDNo. 9所示,編碼該Linker的核苷酸序列如SEQIDNo. 3所示。
[0010] 上述融合蛋白中涉及的0s04g55590. 1為水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1,其氨基酸 序列如SEQIDNo. 2所示,或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等 功能的氣基酸序列;水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因的CDS序列為:SEQIDNo. 1所不的 核苷酸序列。
[0011] 本發(fā)明還提供編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因,以及在嚴(yán)格條件下,可與該 基因的核苷酸序列發(fā)生雜交的核苷酸序列。
[0012] 本發(fā)明還提供含有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因的載體、工程菌及細(xì)胞 系。
[0013] 所述載體的構(gòu)建方法如下:
[0014] (1)在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫(http://rice,plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml)中找到0s04g55590. 1基因,根據(jù)其序列設(shè)計PCR擴增引物對,其為正 向引物F: 5,-CAAAAAAGCAGGCTTCATGAGGCTTCACCATCTGC-3'和反向引物R: 5,-CAAGAAAGC TGGGTCAGCTTTTCCCTGGGGATGC-3 ^。
[0015] (2)以野生日本晴'kitaake'水稻總cDNA為模板,利用上述引物F和R進行PCR, 獲得0s04g55590. 1基因完整的CDS序列。
[0016] (3)將上述PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體上,經(jīng)測序鑒定得到與目的基因完全 相同的序列。
[0017] (4)以植物雙元表達載體pCambial301_UbiN(圖6)左右邊界包含的序列為骨架 序列,通過體外重組,將ubipromoter-VP64-Gateway表達單兀、35Spromoter-asRED表達 單元和35Spromoter-hyg表達單元與之融合構(gòu)建,得到載體nVP64-hyg-asRED的全序列如 SEQIDNo. 5 所示。
[0018] (5)通過LR反應(yīng)將0s04g55590. 1基因的CDS序列構(gòu)建到其目的基因的5'端連 有VP64編碼基因的植物表達載體nVP64-hyg-asRED上,獲得攜帶有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn) 錄因子VP64-Linker-0s04g55590. 1 基因的表達載體ubi:VP64-0s04g55590. 1,其全序列如 SEQIDNo. 6 所示。
[0019] 上述表達載體可通過使用Ti質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、微注射、電穿 孔等常規(guī)生物技術(shù)方法導(dǎo)入植物細(xì)胞中(Weissbach,1998,MethodforPlantMolecular BiologyVIII,AcademyPress,NewYork,第 411-463 頁;Geiserson和Corey,1998,Plant MolecularBiology,2ndEdition)。
[0020] 本發(fā)明還提供一種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法,具體為:采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法, 將上述表達載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中,用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進行轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化 后的材料經(jīng)過共培養(yǎng)-篩選-分化-生根-轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽,篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。
[0021] 本發(fā)明還提供編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因在改良水稻籽粒性狀(例如增 加水稻粒寬及千粒重)中的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明還提供了用于擴增水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因⑶S序列的引物對,包 括正向引物F:5 ' -CAAAAAAGCAGGCTTCATGAGGCTTCACCATCTGC-3'和反向引物R: 5 '-CAAGA AAGCTGGGTCAGCTTTTCCCTGGGGATGC-3 ^。
[0023] 本發(fā)明進一步提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因⑶S序列在調(diào)控水稻籽粒性 狀中的應(yīng)用。利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64(SEQIDNo. 10)與水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1 融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子,并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的基因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻 中,從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀。
[0024] 前述的應(yīng)用,是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因的⑶S序列構(gòu)建到轉(zhuǎn)錄因子激 活基序VP64編碼基因(SEQIDNo. 4)的下游,轉(zhuǎn)化水稻,從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀。 優(yōu)選將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因的⑶S序列通過Gateway系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄因子激活基序 VP64編碼基因的下游。
[0025] 本發(fā)明首次利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64 (即4個轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16)與水稻 轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子,并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的 基因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻中,從而改良水稻籽粒性狀,例如水稻籽粒寬度增加。對于詳細(xì)闡 明調(diào)控種子發(fā)育機理具有重要的理論價值,并且可以通過轉(zhuǎn)基因手段,改良水稻的粒型,因 此在生產(chǎn)實踐中也具有重要意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明實施例1中nVP64-hyg_asRED載體圖譜。
[0027] 圖2為本發(fā)明實施例1中ubi:VP64-0s04g55590. 1載體圖譜。
[0028] 圖3為本發(fā)明實施例3中PCR檢測VP64-0s04g55590. 1轉(zhuǎn)基因水稻陽性株系;其 中,WT為野生型水稻 'kitaake',V2478H-42、V2478H-43 為VP64-0s04g55590. 1 轉(zhuǎn)基因水稻 株系。
[0029] 圖4為本發(fā)明實施例4中轉(zhuǎn)基因水稻籽粒性狀的表型寬度的比較;其中WT為野生 型水稻 'kitaake',V2478H-42、V2478H-43 為VP64-0s04g55590. 1 轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0030] 圖5為本發(fā)明實施例4中轉(zhuǎn)基因水稻籽粒性狀的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果;其中WT為野 生型水稻 'kitaake',V2478H-42、V2478H-43 為VP64-0s04g55590. 1 轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0031] 圖6為本發(fā)明實施例1中pCambial301_UbiN載體圖譜。
[0032] 圖7為本發(fā)明實施例1中
[0033] GCS-2*FLAG+en35s-AsRed-pCambial301-UbiN載體圖譜。

【具體實施方式】
[0034] 以下實施例用于說明本發(fā)明,但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明,實施例 中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段,所用原料均為市售商品。
[0035] 實施例10s04g55590. 1基因⑶S序列的獲得及植物表達載體的構(gòu)建
[0036] 10s04g55590. 1 基因CDS序列的獲得
[0037] 在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫(http://rice.plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml)中找到0s04g55590. 1基因,根據(jù)其序列設(shè)計PCR擴增引物,正向引 物F: 5,-CAAAAAAGCAGGCTTCATGAGGCTTCACCATCTGC-3 ' 和反向引物R: 5,-CAAGAAAGCTGGG TCAGCTTTTCCCTGGGGATGCHV)。以野生型日本晴'kitaake'水稻總cDNA為模板,利用引物F和R進行PCR,獲得0s04g55590. 1基因完整的CDS序列(如SEQIDNo. 1所示)。
[0038] 2植物表達載體的構(gòu)建
[0039] 將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因的CDS序列通過Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到4個轉(zhuǎn) 錄因子激活基序VP16編碼基因(如SEQIDNo. 4所示)的下游。
[0040] 2. 1將上述PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體上
[0041] 按照PrimeSTAR聚合酶擴增體系和反應(yīng)程序進行PCR。此過程中包含兩輪PCR,第 一輪PCR的引物用加部分adaptorattB接頭的基因引物(F和R),而第二輪的模板用第一 輪的PCR產(chǎn)物,并且引物用完整的adaptorattB引物(attB5'adaptor:5'-GTGGGGACAAG TTTGTACAAAAAAGCAGGCTTC-3/ ,BttBSiadaptor-GTGGGGACCACTTTGTACAAGMAGCTGGGT CHV)。將PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體(購自Invitrogen)上,經(jīng)測序鑒定得到與目的 基因完全相同的序列。
[0042] 2. 2植物表達載體的構(gòu)建
[0043] 以植物雙元表達載體pCambial301_UbiN(圖6)左右邊界包含的序列為骨架序列, 通過體外重組,將ubipromoter-VP64-Gateway表達單兀、35Spromoter-asRED表達單兀和 35Spromoter-hyg表達單元與之融合構(gòu)建,得到載體nVP64_hyg_asRED的全序列如SEQID No. 5所示,載體圖譜見圖1。
[0044] 通過LR反應(yīng)將0s04g55590. 1基因的CDS序列構(gòu)建到其目的基因的5'端連有VP64 編碼基因的植物表達載體nVP64-hyg-asRED上,獲得攜帶有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子 VP64-Linker-0s04g55590. 1 基因的表達載體ubi:VP64-0s04g55590. 1,其全序列如SEQID No. 6所示,載體圖譜見圖2。
[0045] 以載體pCambial301_UbiN為骨架(圖6),SpeI和PstI之間的序列換成了 GCS-2*FLAG,將HindIII和BstEII之間的序列換成了 35senhancer+P35s-AsRed,完成GCS-2*FLAG+en35s-AsRed-pCambial301-UbiN的構(gòu)建(圖 7)。合成 5' 和 3' 端均帶有KpnI酶切 位點的雙鏈DNA序列VP64-2*HA。通過KpnI位點將片段VP64-2*HA插入到載體(圖1),最 終獲得表達載體nVP64-HYG-AsRed-pCambiall301-Ubi。目的基因通過LR反應(yīng)構(gòu)建到植物 表達載體上。
[0046] 表達載體均含有Gateway重組系統(tǒng),pDONR帶有目的基因的質(zhì)粒作為入門載體 (Entery vector),通過LR反應(yīng)可完成目的基因表達載體的構(gòu)建。
[0047] LR反應(yīng)體系:
[0048] 表達載體 Ιμ? ( 30-5Ong ) 入Π載體(pDON;R-gene) Ιμ? ( 30-50ng ) LR Clonase Enzyme Mix I μ! CldH2O 2μ1 Total 5μ1
[0049]25°C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,篩選陽性克隆。
[0050] 實施例2轉(zhuǎn)基因水稻植株的獲得
[0051] 取水稻'kitaake'成熟種子,人工或機械脫殼,挑選飽滿光潔無菌斑的種子經(jīng)消毒 之后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo)培養(yǎng)。選擇外觀良好,生長力好的水稻愈傷組織為受體 材料,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ubi:VP64-0s04g55590. 1轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中,用含有ΙΟΟμΜ 的乙酰丁香酮和OD值為0. 7的農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進行轉(zhuǎn)化,將轉(zhuǎn)化液浸泡過的愈傷組織 置于共培養(yǎng)基上進行共培養(yǎng),25°C暗培養(yǎng)3d后置于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)約30d,每IOd繼代一 次。然后將篩出的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上分化約20d,每IOd繼代一次。將分化出綠 色小苗的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上生根,待約7d長出發(fā)達根系后煉苗,并計算轉(zhuǎn)化所 獲轉(zhuǎn)基因苗數(shù)。煉苗7d后轉(zhuǎn)移至大田生長。獲得50株轉(zhuǎn)基因苗。
[0052] 本實施例中涉及的培養(yǎng)基配方如下:
[0053] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基:N6大量+B5微量+NB有機+鐵鹽+銅鈷母液+2. 5mg/L2, 4D+0. 6g/L 酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酰胺+30g/L鹿糖,以水配制,調(diào)pH至5. 8? 5. 9后加入植物凝膠4g/L。
[0054] 共培養(yǎng)基:N6大量+B5微量+NB有機+鐵鹽+2. 5mg/L2, 4D+0. 5g/L谷氨酰胺 +0. 6g/L酸水解酪蛋白+10g/L葡萄糖+30g/L鹿糖,以水配制,調(diào)pH至5. 2后加入植物凝膠 4g/L。滅菌后,50°C左右加入AS(乙酰丁香酮)100?200μg/mL。
[0055] 篩選培養(yǎng)基:N6大量+B5微量+NB有機+鐵鹽+銅鈷母液+2. 5mg/L2, 4D+0. 6g/L 酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酰胺+30g/L鹿糖,以水配制,調(diào)pH至5. 8? 5. 9后加入植物凝膠4g/L。滅菌后加入35mg/L潮霉素(購自上海紐津生物技術(shù)有限公司)。
[0056] 分化培養(yǎng)基:MS無機+MS-B5微量+MS有機+鐵鹽+MS-銅鈷母液+0. 05mg/L NAA+2.Omg/LKinetin(激動素)+30g/L山梨醇+2g/L水解酪蛋白+30g/L鹿糖,以水配制, 調(diào)pH至5. 8?5. 9后加入植物凝膠4g/L。
[0057] 實施例3轉(zhuǎn)基因陽性株系的鑒定
[0058] 為檢測實施例2獲得的VP64-0s04g55590. 1轉(zhuǎn)基因水稻株系中ubi: VP64-0s04g55590. 1基因在T2代轉(zhuǎn)基因水稻(V2478H-42、V2478H-43)中的過表達情況,本 實施例在載體與目的基因接頭處設(shè)計引物(正向引物#-GTGGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCA GGCTTC-3'和反向引物:5' -GTGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3')進行PCR檢測,得 到了明顯的特異性條帶。由圖3可見,擴增出的條帶大小為小于750bp,且引物是在載體與 目的基因接頭處設(shè)計的,擴增出的片段大小與目的基因(711bp)基本一致。因此可以說明, 實施例2獲得的轉(zhuǎn)基因水稻株系V2478H-42、V2478H-43中含有VP64-0s04g55590. 1融合基 因。
[0059] 實施例4轉(zhuǎn)基因水稻表型分析和考種分析
[0060] 將實施例2獲得的轉(zhuǎn)基因水稻株系V2478H-42、V2478H-43和野生型水稻種子進行 比較,從表型上可以明顯的看出,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因材料的籽粒明顯變寬(圖4)??挤N數(shù)據(jù)分析表 明(圖5),本發(fā)明獲得的VP64-0s04g55590. 1轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的寬顯著大于野生型水稻籽 粒。
[0061] 雖然,上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述,但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上,可以對之作一些修改或改進,這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此,在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進,均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子,其特征在于,其為融合蛋白(VP16)4~Linker-〇s04g55590. 1 ; 其中,VP16為來自單純皰疹病毒的VP16蛋白,(VP16)4是由4個VP16蛋白的氨基酸 序列以Gly-Ser為間隔形成的融合蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID No. 10所示;Linker由39 個柔性氨基酸串聯(lián)而成,其氨基酸序列如SEQ ID No. 9所示;0s04g55590. 1為水稻轉(zhuǎn)錄因 子0s04g55590. 1,其氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示,或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或 幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
2. 編碼權(quán)利要求1所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因。
3. 含有權(quán)利要求2所述基因的載體。
4. 含有權(quán)利要求2所述基因的工程菌。
5. -種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法,其特征在于,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法,將權(quán)利要求 3所述的載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中,用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進行轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化后的 材料經(jīng)過共培養(yǎng)-篩選-分化-生根-轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽,篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。
6. 權(quán)利要求2所述的基因在改良水稻籽粒性狀中的應(yīng)用。
7. 用于擴增水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因⑶S序列的引物對,其特征在于,包括正 向引物 F : 5,-CAAAAAAGCAGGCTTCATGAGGCTTCACCATCTGC-3'和反向引物 R : 5,-CAAGAAAGC TGGGTCAGCTTTTCCCTGGGGATGC-3'; 其中,水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因的⑶S序列為: SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
8. 水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因⑶S序列在調(diào)控水稻籽粒性狀中的應(yīng)用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用,其特征在于,其是利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64與水稻 轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子,并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的 基因轉(zhuǎn)化水稻,從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀; 其中,所述轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64的氨基酸序列如SEQ ID No. 10所示。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用,其特征在于,其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s04g55590. 1基因 的⑶S序列通過Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的下游,轉(zhuǎn)化水稻, 從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀; 其中,所述轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 4所示。
【文檔編號】C12N15/82GK104341510SQ201310329814
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月31日
【發(fā)明者】趙濤, 李宏宇, 劉斌, 劉軍, 林辰濤 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
东丰县| 平舆县| 宁阳县| 嵩明县| 班玛县| 淄博市| 金华市| 韩城市| 洞口县| 宝鸡市| 福鼎市| 岳西县| 蓬溪县| 白河县| 开化县| 襄垣县| 嘉鱼县| 休宁县| 革吉县| 龙游县| 江西省| 融水| 井研县| 诏安县| 治多县| 通榆县| 柞水县| 漠河县| 石狮市| 扎兰屯市| 合肥市| 乌拉特中旗| 宜君县| 靖安县| 堆龙德庆县| 长沙市| 板桥市| 湘潭县| 忻城县| 彰化县| 缙云县|