水稻轉(zhuǎn)錄因子Os03g42290.1基因CDS序列的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子Os03g42290.1基因CDS序列的應(yīng)用，其是利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64與水稻轉(zhuǎn)錄因子Os03g42290.1融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的基因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻中，從而改良水稻籽粒性狀，例如增加水稻籽粒寬度。對于詳細(xì)闡明調(diào)控種子發(fā)育機(jī)理具有重要的理論價值，并且可以通過轉(zhuǎn)基因手段，改良水稻的粒型，因此在生產(chǎn)實(shí)踐中也具有重要意義。
【專利說明】水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因CDS序列的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地說，涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因⑶S 序列的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 水稻（OryzasativaL.)是我國和全世界最重要的三大糧食作物之一，是世界一 半以上人口的主食，也是一個重要的功能基因研究的模式植物。與其相關(guān)的遺傳學(xué)和分子 生物學(xué)研究一直倍受研究者的重視，轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是基因表達(dá)調(diào)控的重要方式。當(dāng)前水 稻增產(chǎn)的研究較依賴于有限的水稻種質(zhì)資源，傳統(tǒng)的雜交育種優(yōu)勢正在逐漸減弱，而水稻 轉(zhuǎn)基因技術(shù)有可能發(fā)掘水稻進(jìn)一步增產(chǎn)的潛力。
[0003] 在植物界中，能形成種子的植物約占植物總數(shù)的三分之二以上，作為重要的繁殖 器官，種子同時也為人們提供食物來源，水稻就是其中的重要代表，種子來源于受精后的胚 珠。從分子生物學(xué)的角度來說，種子的發(fā)育和萌發(fā)是一個有次序的、選擇性的基因表達(dá)過 程。而轉(zhuǎn)錄因子在基因表達(dá)的精確調(diào)控中起到了關(guān)鍵性的作用。
[0004] 近些年，有關(guān)籽粒大小性狀的分子遺傳調(diào)控機(jī)制研究，已取得了一定進(jìn)展，例如研 究人員利用QTL定位了一些籽粒大小相關(guān)基因，其中GS3編碼一個膜蛋白，是籽粒大小和器 官大小的負(fù)調(diào)控因子；張啟發(fā)（YiboLi,ChuchuanFan,QIfaZhang,etal. (2011)Natural variationinGS5playsanimportantroleinregulatinggrainsizeandyieldin rice.NatureGennetics)等研究發(fā)現(xiàn)GS5編碼一個調(diào)節(jié)籽粒大小的絲氨酸羧肽酶，是控制 籽粒大小的正調(diào)節(jié)因子，過表達(dá)GS5可使水稻籽粒明顯變大；轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控籽粒大小方 面起著非常重要的作用，0sWRKY78可以調(diào)節(jié)水稻莖的伸長和種子的發(fā)育，0sWRKY78突變體 可使莖桿變矮化影響籽粒發(fā)育；螺旋-環(huán)-螺旋蛋白（bHLH)類轉(zhuǎn)錄因子能通過調(diào)控外稃和 內(nèi)稃細(xì)胞的長度影響谷粒的大?。籔GLl堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白（bHLH)異源二聚體作為 結(jié)合DNA的bHLH的抑制子過表達(dá)后可增加籽粒長度和重量。
[0005] 穗發(fā)芽是種子在收獲前遇到陰雨潮濕環(huán)境時，在田間母體植株上發(fā)芽的現(xiàn) 象，是水稻生產(chǎn)中的一個重要限制因素。水稻穗發(fā)芽的表現(xiàn)性狀和玉米種子特異的 viviparousl(vpl)突變體表型非常相似。因此ABI3VP1家族對種子的形狀可能具有重要的 作用，但是目前對ABI3VP1家族的轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1對種子大小形狀調(diào)控機(jī)制的研究 及認(rèn)識很少，因此該轉(zhuǎn)錄因子的研究在理論上為進(jìn)一步理解植物種子和器官發(fā)育調(diào)控的分 子機(jī)理提供了新的線索；在實(shí)踐上也將為作物高產(chǎn)育種提供理論基礎(chǔ)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因⑶S序列的應(yīng)用。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供一種組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子，即融合蛋白 (VP16)4-Linker-0s03g42290. 1。
[0008] 其中，VP16為來自單純皰疹病毒的VP16蛋白，將4個VP16功能域基序融合在一起 可構(gòu)成一類增強(qiáng)子，增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子的功能，從而在轉(zhuǎn)基因植株中出現(xiàn)更明顯的表型變化。上 述融合蛋白中涉及的（VP16)4，即VP64是由4個VP16蛋白的氨基酸序列以Gly-Ser為間隔 形成的融合蛋白，其氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQIDNo. 10和SEQIDNo. 4所示。
[0009] 上述融合蛋白中涉及的Linker由39個柔性氨基酸串聯(lián)而成，其氨基酸序列如SEQ IDNo. 9所示，編碼該Linker的核苷酸序列如SEQIDNo. 3所示。
[0010] 上述融合蛋白中涉及的0s03g42290. 1為水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1，其氨基酸 序列如SEQIDNo. 2所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等 功能的氣基酸序列；水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因的CDS序列為：SEQIDNo. 1所不的 核苷酸序列。
[0011] 本發(fā)明還提供編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因，以及在嚴(yán)格條件下，可與該 基因的核苷酸序列發(fā)生雜交的核苷酸序列。
[0012] 本發(fā)明還提供含有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因的載體、工程菌及細(xì)胞 系。
[0013] 所述載體的構(gòu)建方法如下：
[0014] (1)在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫（http://rice,plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml)中找到0s03g42290. 1基因，根據(jù)其序列設(shè)計PCR擴(kuò)增引物對， 其為正向引物F:5'-CAAAAAAGCAGGCTTCATGCCTGGTTATGTCTTGTCG-3' 和反向引物R: 5'-CAAGAAAGCTGGGTCGCTCCTCTCGTTGTGACGAA-3' 。
[0015] (2)以野生日本晴'kitaake'水稻總cDNA為模板，利用上述引物F和R進(jìn)行PCR， 獲得0s03g42290. 1基因完整的CDS序列。
[0016] (3)將上述PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體上，經(jīng)測序鑒定得到與目的基因完全 相同的序列。
[0017] (4)以植物雙元表達(dá)載體pCambial301_UbiN(圖6)左右邊界包含的序列為骨架 序列，通過體外重組，將ubipromoter-VP64-Gateway表達(dá)單兀、35Spromoter-asRED表達(dá) 單元和35Spromoter-hyg表達(dá)單元與之融合構(gòu)建，得到載體nVP64-hyg-asRED的全序列如 SEQIDNo. 5 所示。
[0018] (5)通過LR反應(yīng)將0s03g42290. 1基因的CDS序列構(gòu)建到其目的基因的5'端連 有VP64編碼基因的植物表達(dá)載體nVP64-hyg-asRED上，獲得攜帶有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn) 錄因子VP64-Linker-0s03g42290. 1 基因的表達(dá)載體ubi:VP64-0s03g42290. 1，其全序列如 SEQIDNo. 6 所示。
[0019] 上述表達(dá)載體可通過使用Ti質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、微注射、電穿 孔等常規(guī)生物技術(shù)方法導(dǎo)入植物細(xì)胞中（Weissbach，1998,MethodforPlantMolecular BiologyVIII，AcademyPress，NewYork，第 411-463 頁；Geiserson和Corey，1998,Plant MolecularBiology,2ndEdition)。
[0020] 本發(fā)明還提供一種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法，具體為：采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法， 將上述表達(dá)載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進(jìn)行轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化 后的材料經(jīng)過共培養(yǎng)-篩選-分化-生根-轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽，篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。
[0021] 本發(fā)明還提供編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因在改良水稻籽粒性狀(例如增 加水稻粒長、粒寬及千粒重）中的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明還提供了用于擴(kuò)增水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因⑶S序列的引物 對，包括正向引物F:5'-CAAAAAAGCAGGCTTCATGCCTGGTTATGTCTTGTCG-3' 和反向引物R: 5'-CAAGAAAGCTGGGTCGCTCCTCTCGTTGTGACGAA-3' 。
[0023] 本發(fā)明進(jìn)一步提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因⑶S序列在調(diào)控水稻籽粒性 狀中的應(yīng)用。利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64(SEQIDNo. 10)與水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1 融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的基因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻 中，從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀。
[0024] 前述的應(yīng)用，是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因的⑶S序列構(gòu)建到轉(zhuǎn)錄因子激 活基序VP64編碼基因（SEQIDNo. 4)的下游，轉(zhuǎn)化水稻，從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀。 優(yōu)選將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因的⑶S序列通過Gateway系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄因子激活基序 VP64編碼基因的下游。
[0025] 本發(fā)明首次利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64 (即4個轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16)與水稻 轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的 基因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻中，從而改良水稻籽粒性狀，例如水稻籽粒長度和寬度增加。對于 詳細(xì)闡明調(diào)控種子發(fā)育機(jī)理具有重要的理論價值，并且可以通過轉(zhuǎn)基因手段，改良水稻的 粒型，因此在生產(chǎn)實(shí)踐中也具有重要意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中nVP64-hyg_asRED載體圖譜。
[0027] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中ubi:VP64-0s03g42290. 1載體圖譜。
[0028] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例3中PCR檢測VP64-0s03g42290. 1轉(zhuǎn)基因陽性株系，其中WT 為野生型水稻 'kitaake'，V1480H-18、V1480H-26 為VP64-0s03g42290. 1 轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0029] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例4中轉(zhuǎn)基因水稻籽粒性狀的表型寬度的比較；其中WT為野生 型水稻 'kitaake'，V1480H-18、V1480H-26 為VP64-0s03g42290. 1 轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0030] 圖5為本發(fā)明實(shí)施例4中轉(zhuǎn)基因水稻籽粒性狀的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果；其中WT為野 生型水稻 'kitaake'，V1480H-18、V1480H-26 為VP64-0s03g42290. 1 轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0031] 圖6為本發(fā)明實(shí)施例1中pCambial301_UbiN載體圖譜。
[0032] 圖7為本發(fā)明實(shí)施例1中
[0033] GCS-2*FLAG+en35s-AsRed-pCambial301-UbiN載體圖譜。

【具體實(shí)施方式】
[0034] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例 中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0035] 實(shí)施例1
[0036] 0s03g42290. 1基因CDS序列的獲得及植物表達(dá)載體的構(gòu)建
[0037] 10s03g42290. 1 基因CDS序列的獲得
[0038] 在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫（http://rice.plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml)中找到0s03g42290. 1基因，根據(jù)其序列設(shè)計PCR擴(kuò)增引物，正向引物 F:5'-CAAAAAAGCAGGCTTCATGCCTGGTTATGTCTTGTCG-3' 和反向引物R:5'-CAAGAAAGCTGGGTC GCTCCTCTCGTTGTGACGAA-3'）。以野生型日本晴'kitaake'水稻總cDNA為模板，利用引物F和R進(jìn)行PCR，獲得0s03g42290. 1基因完整的CDS序列（如SEQIDNo. 1所示）。
[0039] 2植物表達(dá)載體的構(gòu)建
[0040] 將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因的CDS序列通過Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到4個轉(zhuǎn) 錄因子激活基序VP16編碼基因（如SEQIDNo. 4所示）的下游。
[0041] 2. 1將上述PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體上
[0042] 按照PrimeSTAR聚合酶擴(kuò)增體系和反應(yīng)程序進(jìn)行PCR。此過程中包含兩輪 PCR，第一輪PCR的引物用加部分adaptorattB接頭的基因引物（F和R)，而第二輪的 模板用第一輪的PCR產(chǎn)物，并且引物用完整的adaptorattB引物（attB5'adaptor: 5'-GTGGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTC-3'，attB3'adaptor:5'-GTGGGGACCAC TTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3'）。將PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體(購自Invitrogen)上， 經(jīng)測序鑒定得到與目的基因完全相同的序列。
[0043] 2. 2植物表達(dá)載體的構(gòu)建
[0044] 以植物雙元表達(dá)載體pCambial301_UbiN(圖6)左右邊界包含的序列為骨架序列， 通過體外重組，將ubipromoter-VP64-Gateway表達(dá)單兀、35Spromoter-asRED表達(dá)單兀和 35Spromoter-hyg表達(dá)單元與之融合構(gòu)建，得到載體nVP64_hyg_asRED的全序列如SEQID No. 5所示，載體圖譜見圖1。
[0045] 通過LR反應(yīng)將0s03g42290. 1基因的CDS序列構(gòu)建到其目的基因的5'端連有VP64 編碼基因的植物表達(dá)載體nVP64-hyg-asRED上，獲得攜帶有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子 VP64-Linker-0s03g42290. 1 基因的表達(dá)載體ubi:VP64-0s03g42290. 1，其全序列如SEQID No. 6所示，載體圖譜見圖2。
[0046] 以載體pCambial301_UbiN為骨架（圖6),SpeI和PstI之間的序列換成了 GCS-2*FLAG，將HindIII和BstEII之間的序列換成了 35senhancer+P35s-AsRed，完成GCS-2*FLAG+en35s-AsRed-pCambial301-UbiN的構(gòu)建（圖 7)。合成 5' 和 3' 端均帶有KpnI酶切 位點(diǎn)的雙鏈DNA序列VP64-2*HA。通過KpnI位點(diǎn)將片段VP64-2*HA插入到載體（圖1)，最 終獲得表達(dá)載體nVP64-HYG-AsRed-pCambiall301-Ubi。目的基因通過LR反應(yīng)構(gòu)建到植物 表達(dá)載體上。
[0047] 表達(dá)載體均含有Gateway重組系統(tǒng)，pDONR帶有目的基因的質(zhì)粒作為入門載體 (Enteryvector),通過LR反應(yīng)可完成目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建。
[0048] LR反應(yīng)體系：
[0049] 表達(dá)載體 Ιμ[ OO-SOng ) 入門載體（pDONR-gene ) ΙμΙ ( 30-50ng ) LR (.Ionase Enzyme Mix ΙμΙ ddlf：0 2μ1 Total 5μ1
[0050]25°C反應(yīng)過夜。反應(yīng)液轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，篩選陽性克隆。
[0051] 實(shí)施例2轉(zhuǎn)基因水稻植株的獲得
[0052] 取水稻'kitaake'成熟種子，人工或機(jī)械脫殼，挑選飽滿光潔無菌斑的種子經(jīng)消毒 之后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。選擇外觀良好，生長力好的水稻愈傷組織為受體 材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ubi:VP64-0s03g42290. 1轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含有ΙΟΟμΜ 的乙酰丁香酮和OD值為0. 7的農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進(jìn)行轉(zhuǎn)化，將轉(zhuǎn)化液浸泡過的愈傷組織 置于共培養(yǎng)基上進(jìn)行共培養(yǎng)，25°C暗培養(yǎng)3d后置于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)約30d，每IOd繼代一 次。然后將篩出的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上分化約20d，每IOd繼代一次。將分化出綠 色小苗的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上生根，待約7d長出發(fā)達(dá)根系后煉苗，并計算轉(zhuǎn)化所 獲轉(zhuǎn)基因苗數(shù)。煉苗7d后轉(zhuǎn)移至大田生長。獲得30株轉(zhuǎn)基因苗。
[0053] 本實(shí)施例中涉及的培養(yǎng)基配方如下：
[0054] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基：N6大量+B5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+銅鈷母液+2. 5mg/L2, 4D+0. 6g/L 酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酰胺+30g/L鹿糖，以水配制，調(diào)pH至5. 8? 5. 9后加入植物凝膠4g/L。
[0055] 共培養(yǎng)基：N6大量+B5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+2. 5mg/L2, 4D+0. 5g/L谷氨酰胺 +0. 6g/L酸水解酪蛋白+10g/L葡萄糖+30g/L鹿糖，以水配制，調(diào)pH至5. 2后加入植物凝膠 4g/L。滅菌后，50°C左右加入AS(乙酰丁香酮）100?200μg/mL。
[0056] 篩選培養(yǎng)基：N6大量+B5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+銅鈷母液+2. 5mg/L2, 4D+0. 6g/L 酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酰胺+30g/L鹿糖，以水配制，調(diào)pH至5. 8? 5. 9后加入植物凝膠4g/L。滅菌后加入35mg/L潮霉素(購自上海紐津生物技術(shù)有限公司）。
[0057] 分化培養(yǎng)基：MS無機(jī)+MS-B5微量+MS有機(jī)+鐵鹽+MS-銅鈷母液+0. 05mg/L NAA+2.Omg/LKinetin(激動素）+30g/L山梨醇+2g/L水解酪蛋白+30g/L鹿糖，以水配制， 調(diào)pH至5. 8?5. 9后加入植物凝膠4g/L。
[0058] 實(shí)施例3轉(zhuǎn)基因陽性株系的鑒定
[0059] 為檢測實(shí)施例2獲得的VP64_0s03g42290. 1轉(zhuǎn)基因水稻株系中ubi: VP64-0s03g42290. 1基因在T2代轉(zhuǎn)基因水稻（V1480H-18、V1480H-26)中的過表達(dá)情況，本 實(shí)施例在載體與目的基因接頭處設(shè)計引物（正向引物：5'-GTGGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAG GCTTC-3' 和反向引物：5'-GTGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3'）進(jìn)行PCR檢測，得到了 明顯的特異性條帶。由圖3可見，擴(kuò)增出的條帶大小在IOOObp以上，且引物是在載體與目 的基因接頭處設(shè)計的，擴(kuò)增出的片段大小與目的基因（1050bp)基本一致。因此可以說明， 實(shí)施例2獲得的轉(zhuǎn)基因水稻株系V1480H-18、V1480H-26中含有VP64-0s03g42290. 1融合基 因。
[0060] 實(shí)施例4轉(zhuǎn)基因水稻表型分析和考種分析
[0061] 將實(shí)施例2獲得的轉(zhuǎn)基因水稻株系V1480H-18、V1480H-26和野生型水稻種子進(jìn)行 比較，從表型上可以明顯的看出，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因材料的籽粒明顯變寬（圖4)。考種數(shù)據(jù)分析表 明（圖5)，本發(fā)明獲得的VP64-0s03g42290. 1轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的寬顯著大于野生型水稻籽 粒。
[0062] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子，其特征在于，其為融合蛋白（VP16)4-Linker-0s03g42290. 1 ； 其中，VP16為來自單純皰疹病毒的VP16蛋白，（VP16)4是由4個VP16蛋白的氨基酸 序列以Gly-Ser為間隔形成的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No. 10所示；Linker由39 個柔性氨基酸串聯(lián)而成，其氨基酸序列如SEQ ID No. 9所示；0s03g42290. 1為水稻轉(zhuǎn)錄因 子0s03g42290. 1，其氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或 幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
2. 編碼權(quán)利要求1所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因。
3. 含有權(quán)利要求2所述基因的載體。
4. 含有權(quán)利要求2所述基因的工程菌。
5. -種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法，其特征在于，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將權(quán)利要求 3所述的載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進(jìn)行轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的 材料經(jīng)過共培養(yǎng)-篩選-分化-生根-轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽，篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。
6. 權(quán)利要求2所述的基因在改良水稻籽粒性狀中的應(yīng)用。
7. 用于擴(kuò)增水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因⑶S序列的引物對，其特征在于， 包括正向引物 F :5' -CAAAAAAGCAGGCTTC ATGCC TGGTTATGTCTTGTCG-3' 和反向引物 R : 5'-CAAGAAAGCTGGGT C GCTCCTCTCGTTGTGACGAA-3' ； 其中，水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因的⑶S序列為： SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
8. 水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因⑶S序列在調(diào)控水稻籽粒性狀中的應(yīng)用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，其是利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64與水稻 轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的 基因轉(zhuǎn)化水稻，從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀； 其中，所述轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64的氨基酸序列如SEQ ID No. 10所示。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g42290. 1基因 的⑶S序列通過Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的下游，轉(zhuǎn)化水稻， 從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀； 其中，所述轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 4所示。
【文檔編號】C12N15/62GK104341515SQ201310329879
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月31日
【發(fā)明者】趙濤, 劉軍, 劉斌, 李宏宇, 林辰濤 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所