一種厭氧增菌培養(yǎng)基及其配制方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于微生物培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種厭氧增菌培養(yǎng)基及其配置方法，該培養(yǎng)基包含蛋白胨、酵母浸粉、腦心浸液肉湯、葡萄糖、硫代乙醇酸鈉、氯化血紅素、維生素K1、抗凝劑、厭氧指示劑、蒸餾水；根據(jù)其特殊的配比，可制備出能夠能促進(jìn)厭氧細(xì)菌大量繁殖的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基應(yīng)用在臨床上厭氧病原菌的培養(yǎng)，可提高厭氧病原菌的陽性檢出率。
【專利說明】一種厭氧增菌培養(yǎng)基及其配制方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種厭氧增菌培養(yǎng)基及其配制方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 厭氧菌引起的菌血癥近年呈上升趨勢(shì)且造成的死亡率較高。20世紀(jì)70年代血培 養(yǎng)厭氧菌分離率高達(dá)20%?30%，其中脆弱擬桿菌群占78%，在革蘭陰性菌中僅次于大腸 埃希菌占第二。近年厭氧菌耐藥性的出現(xiàn)使經(jīng)驗(yàn)治療面臨挑戰(zhàn)，厭氧菌引起的臨床感染及 臨床后果重新受到重視。厭氧血培養(yǎng)是為臨床提供快速、準(zhǔn)確診斷厭氧菌血癥的金標(biāo)準(zhǔn)方 法。
[0003] 對(duì)厭氧菌血癥回顧性研究表明，厭氧菌血癥因診斷錯(cuò)誤導(dǎo)致的死亡率可高達(dá) 55%?63%，但在明確病原菌后采用針對(duì)性治療，死亡率可降至14%?17%。因此，厭氧血培 養(yǎng)結(jié)果對(duì)臨床治療的指導(dǎo)作用顯而易見，漏檢血培養(yǎng)中的厭氧菌將導(dǎo)致嚴(yán)重后果。準(zhǔn)確、及 時(shí)的厭氧血培養(yǎng)結(jié)果對(duì)針對(duì)性抗菌治療即為重要，厭氧增菌培養(yǎng)基的質(zhì)量決定了血培養(yǎng)的 厭氧菌的陽性檢出率和檢出時(shí)間。由于厭氧菌對(duì)環(huán)境條件的要求苛刻，生長速度慢，實(shí)驗(yàn)室 報(bào)告結(jié)果時(shí)間較長，不能對(duì)臨床及時(shí)指導(dǎo)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種厭氧增菌培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基能促進(jìn) 臨床標(biāo)本中厭氧細(xì)菌的繁殖，提高厭氧病原菌的陽性檢出率。
[0005] 按照本發(fā)明的厭氧增菌培養(yǎng)基，其包含：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1. 5-4. 0份， 腦心浸液肉湯〇. 5-1. 5份，葡萄糖0. 6-2. 5份，硫代乙醇酸鈉2. 5-4. 0份，氯化血紅素 0. 003-0. 008份，維生素 K1為0. 0003-0. 0008份，抗凝劑0. 3-0. 5份，厭氧指示劑0. 00005- 0. 0003 份，蒸餾水 900-1100 份。
[0006] 上述方案中優(yōu)選的是，還包含含量為0. 05-0. 15份的L-半胱氨酸或維生素 C。
[0007] 上述任一方案中優(yōu)選的是，還包含碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣、碳酸氫銨中的 任一種或幾種混合物，含量為〇. 3-0. 6份。
[0008] 上述任一方案中優(yōu)選的是，蛋白胨25份，酵母浸粉2份，腦心浸液肉湯1份，葡萄 糖2份，硫代乙醇酸鈉3份，氯化血紅素0. 005份，維生素 K1為0. 0005份，抗凝劑0. 35份， 厭氧指示劑〇. 0001份，蒸餾水1000份。
[0009] 上述任一方案中優(yōu)選的是，還包含含量為0. 1份的L-半胱氨酸或維生素 C。
[0010] 上述任一方案中優(yōu)選的是，還包含碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣和碳酸氫銨中的 任一種或幾種混合物，含量為0. 4份。
[0011] 上述任一方案中優(yōu)選的是，所述蛋白胨為多價(jià)胨，所述多價(jià)胨是胰化酪蛋白和胃 蛋白的等重量混合蛋白胨。
[0012] 上述任一方案中優(yōu)選的是，所述蛋白胨為胰蛋白胨、大豆蛋白胨等中的任一種或 幾種的混合。
[0013] 上述任一方案中優(yōu)選的是，所述抗凝劑為聚茴香腦磺酸鈉、對(duì)氨基苯甲酸、硫酸 鎂、吸附抗生素復(fù)合樹脂等中的任一種或幾種混合。
[0014] 上述任一方案中優(yōu)選的是，所述厭氧指示劑為刃天青和/或亞甲基藍(lán)(美蘭)。
[0015] 上述厭氧增菌培養(yǎng)基的配置方法，包括以下步驟： (1) 準(zhǔn)備原料：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1. 5-4. 0份，腦心浸液肉湯0. 5-1. 5份，葡萄 糖0. 6-2. 5份，硫代乙醇酸鈉2. 5-4. 0份，氯化血紅素0. 003-0. 008份，抗凝劑0. 3-0. 5份， 厭氧指示劑〇· 00005- 0· 0003份； (2) 將步驟（1)中的原料放入燒杯中，加入蒸餾水900-1100份，攪拌混均，調(diào)節(jié)pH值 6. 8-7. 0 ;然后加熱煮沸，以驅(qū)逐液體中的氧氣； (3 )將步驟（2 )中煮沸后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到充有氮?dú)獾膮捬跗炕騾捬豕苤校诉^程應(yīng)避免 引入氧氣；轉(zhuǎn)移完成后，還應(yīng)繼續(xù)通入氮?dú)?0-20秒；然后封閉厭氧瓶或厭氧管,使其避免 進(jìn)入氧氣； (4) 將步驟（3)中裝有培養(yǎng)基的厭氧瓶或厭氧管進(jìn)行滅菌處理； (5) 在步驟（4)中滅菌后的培養(yǎng)基中加入0.0003-0. 0008份的維生素 K1，該培養(yǎng)基即 可使用。
[0016] 上述方案中優(yōu)選的是，步驟（1)中的原料還包含含量為0. 05-0. 15份的L-半胱氨 酸或維生素。
[0017] 上述方案中優(yōu)選的是，步驟（1)中的原料還包含碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣、碳 酸氫銨中的任一種或幾種混合物，含量為0. 3-0. 6份。
[0018] 上述方案中優(yōu)選的是，步驟（2)中所述調(diào)節(jié)pH值是使用lmol/L的NaOH溶液進(jìn)行 調(diào)整。
[0019] 上述方案中優(yōu)選的是，步驟（2)中所述煮沸時(shí)間為8-13分鐘。
[0020] 上述方案中優(yōu)選的是，所述煮沸時(shí)間為10分鐘。
[0021] 上述方案中優(yōu)選的是，步驟（4)中所述滅菌處理是在110-125°c下，進(jìn)行濕熱滅 菌18-25分鐘。
[0022] 上述方案中優(yōu)選的是，所述濕熱滅菌為20分鐘。
[0023] 本發(fā)明厭氧增菌培養(yǎng)基營養(yǎng)成分充足，蛋白胨、腦心浸液等能為厭氧菌的生長提 供豐富的營養(yǎng)，氯化血紅素、維生素 K1作為細(xì)菌生長刺激因子，硫代乙醇酸鈉作為除氧劑， 抗凝劑聚茴香腦磺酸鈉可有效中和溶菌酶、抑制吞噬細(xì)胞以及使某些氨基糖苷類抗生素失 活，使細(xì)菌更好地生長。提供的適宜的環(huán)境條件能促進(jìn)臨床標(biāo)本中厭氧細(xì)菌的繁殖，提高厭 氧病原菌的陽性檢出率。

【具體實(shí)施方式】
[0024] 為了進(jìn)一步了解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容進(jìn) 行詳細(xì)闡述；實(shí)施例只對(duì)本發(fā)明起示例性的作用，而不具有任何限制性的作用，本領(lǐng)域的技 術(shù)人員在本發(fā)明的基礎(chǔ)上做出的任何非實(shí)質(zhì)性修改，都應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0025] 實(shí)施例1 一種厭氧增菌培養(yǎng)基，其包含：蛋白胨25克，酵母浸粉2克，腦心浸液肉湯1克，葡萄糖 2克，硫代乙醇酸鈉3克，氯化血紅素0. 005克，維生素 K1為0. 0005克，抗凝劑0. 35克，厭 氧指示劑0. OOOl克，蒸餾水1000ml，L-半胱氨酸0. 1克，碳酸氫鈉0. 4克。
[0026] 在本實(shí)施例中，所述蛋白胨為胰蛋白胨；所述抗凝劑為聚茴香腦磺酸鈉；所述厭 氧指示劑為刃天青。
[0027] 上述厭氧增菌培養(yǎng)基的配置方法，包括以下步驟： (1)準(zhǔn)備原料：蛋白胨25克，酵母浸粉2克，腦心浸液肉湯1克，葡萄糖2克，硫代乙醇 酸鈉3克，氯化血紅素0. 005克，抗凝劑0. 35克，厭氧指示劑0. 0001克，L-半胱氨酸0. 1 克，碳酸氫鈉0.4克。
[0028] (2)將步驟（1)中的原料放入燒杯中，加入蒸餾水1000ml，攪拌混均，調(diào)節(jié)pH值 6. 8 ;然后加熱煮沸，以驅(qū)逐液體中的氧氣；通入氮?dú)庵僚囵B(yǎng)基冷卻； (3) 將步驟（2)中冷卻后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到厭氧瓶中，此過程應(yīng)避免引入氧氣；轉(zhuǎn)移完成 后,還應(yīng)繼續(xù)通入氮?dú)?5秒；然后封閉厭氧瓶，使其避免進(jìn)入氧氣； (4) 將步驟（3)中裝有培養(yǎng)基的厭氧瓶進(jìn)行滅菌處理； (5) 在步驟（4)中滅菌后的培養(yǎng)基中加入0. 0005克的維生素 K1，該培養(yǎng)基即可使用。
[0029] 在本實(shí)施例中，步驟（2)中所述調(diào)節(jié)pH值是使用lmol/L的NaOH溶液進(jìn)行調(diào)整； 所述煮沸時(shí)間為1 〇分鐘。
[0030] 在本實(shí)施例中，步驟（4)中所述滅菌處理是在121°C下，進(jìn)行濕熱滅菌20分鐘。
[0031] 下面結(jié)合試驗(yàn)，對(duì)本實(shí)施例中的厭氧增菌培養(yǎng)基與其他現(xiàn)有的培養(yǎng)基進(jìn)行比較。
[0032] 本實(shí)施例中的厭氧增菌培養(yǎng)基和現(xiàn)有技術(shù)中的液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、牛腦心 浸液培養(yǎng)基分別培養(yǎng)大腸埃希菌（ATCC25922)、銅綠假單胞菌（ATCC27853)、溶組織梭菌 (ATCC19401)和產(chǎn)氣莢膜梭菌，并對(duì)其各自的生長情況進(jìn)行分析。
[0033] 具體試驗(yàn)方法：將大腸埃希菌（ATCC25922)、銅綠假單胞菌（ATCC27853)、溶組織 梭菌（ATCC19401)和產(chǎn)氣莢膜梭菌各自的菌懸液1.0 X 108cfu/ml，分別稀釋100倍，并分 別取0. Iml接種在厭氧增菌培養(yǎng)基、液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基和牛腦心浸液培養(yǎng)基中，置于 厭氧罐內(nèi)，37°C培養(yǎng)48小時(shí)后，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如下表1 :

【權(quán)利要求】
1. 一種厭氧增菌培養(yǎng)基，其包含：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1.5-4.0份，腦心浸液肉 湯0. 5-1. 5份，葡萄糖0. 6-2. 5份，硫代乙醇酸鈉2. 5-4. 0份，氯化血紅素0. 003-0. 008份， 維生素 I為0. 0003-0. 0008份，抗凝劑0. 3-0. 5份，厭氧指示劑0. 00005- 0. 0003份，蒸餾 水 900-1100 份。
2. 如權(quán)利要求1所述的厭氧增菌培養(yǎng)基，其特征在于，還包含含量為0. 05-0. 15份的 L-半胱氨酸或維生素 C。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的厭氧增菌培養(yǎng)基，其特征在于，還包含碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、 碳酸氫鈣、碳酸氫銨中的任一種或幾種混合物，含量為〇. 3-0. 6份。
4. 如權(quán)利要求1所述的厭氧增菌培養(yǎng)基，其特征在于，包含蛋白胨25份，酵母浸粉2 份，腦心浸液肉湯1份，葡萄糖2份，硫代乙醇酸鈉3份，氯化血紅素0. 005份，維生素&為 0. 0005份，抗凝劑0. 35份，厭氧指示劑0. 0001份，蒸餾水1000份。
5. 如權(quán)利要求4所述的厭氧增菌培養(yǎng)基，其特征在于，還包含含量為0. 1份的L-半胱 氨酸或維生素 C。
6. 如權(quán)利要求4或5所述的厭氧增菌培養(yǎng)基，其特征在于，還包含碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、 碳酸氫鈣和碳酸氫銨中的任一種或幾種混合物，含量為〇. 4份。
7. 如權(quán)利要求1或4所述的厭氧增菌培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛋白胨為多價(jià)胨。
8. 如權(quán)利要求1或4所述的厭氧增菌培養(yǎng)基，其特征在于，所述蛋白胨為胰蛋白胨和/ 或大豆蛋白胨。
9. 如權(quán)利要求1或4所述的厭氧增菌培養(yǎng)基，其特征在于，所述抗凝劑為聚茴香腦磺酸 鈉、對(duì)氨基苯甲酸、硫酸鎂、吸附抗生素復(fù)合樹脂中的任一種或幾種混合。
10. -種如權(quán)利要求1所述的厭氧增菌培養(yǎng)基的配置方法，包括以下步驟： (1) 準(zhǔn)備原料：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1. 5-4. 0份，腦心浸液肉湯0. 5-1. 5份，葡萄 糖0. 6-2. 5份，硫代乙醇酸鈉2. 5-4. 0份，氯化血紅素0. 003-0. 008份，抗凝劑0. 3-0. 5份， 厭氧指示劑〇? 00005- 0? 0003份； (2) 將步驟（1)中的原料放入燒杯中，加入蒸餾水900-1100份，攪拌混均，調(diào)節(jié)pH值 6. 8-7. 0 ;然后加熱煮沸，通入氮?dú)庵僚囵B(yǎng)基冷卻； (3) 將步驟（2)中冷卻后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到厭氧瓶或厭氧管中，轉(zhuǎn)移完成后，還應(yīng)繼續(xù)通 入氮?dú)?0-20秒；然后封閉厭氧瓶或厭氧管； (4) 將步驟（3)中裝有培養(yǎng)基的厭氧瓶或厭氧管進(jìn)行滅菌處理； (5) 在步驟（4)中滅菌后的培養(yǎng)基中加入0. 0003-0. 0008份的維生素 K1。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK104419744SQ201310368942
【公開日】2015年3月18日 申請(qǐng)日期:2013年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月22日
【發(fā)明者】張敏, 王娜, 楊偉偉 申請(qǐng)人:山東鑫科生物科技股份有限公司